微生物实验四放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
实验四放线菌、霉菌、酵母菌形态及大小观察
气生菌丝发育到一定阶段，其上可 气生菌丝发育到一定阶段， 分化出形成孢子的菌丝，即孢子丝， 分化出形成孢子的菌丝，即孢子丝， 又称产孢丝或繁殖菌丝。 又称产孢丝或繁殖菌丝。其形状和 排列方式因种而异， 排列方式因种而异，常被作为对放 线菌进行分类的依据。 线菌进行分类的依据。 营养菌丝发育到一定阶段， 营养菌丝发育到一定阶段，伸向空 间形成气生菌丝， 间形成气生菌丝，叠生于营养菌丝 可覆盖整个菌落表面。 上，可覆盖整个菌落表面。在光学 显微镜下观察，颜色较深， 显微镜下观察，颜色较深，直径较 ），有的产色素 粗（1-1.4 µm），有的产色素。 ），有的产色素。 营养菌丝生长于培养基内或紧贴表 吸收营养，也称基内菌丝。 面，吸收营养，也称基内菌丝。一 般无隔膜，直径0.2-0.8 µm，长度差 般无隔膜，直径 ， 别很大，有的可产生色素。 别很大，有的可产生色素。
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌 放线菌、霉菌、 形态（及大小） 形态（及大小）观察
一、实验目的
• • 观察了解放线菌、 观察了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态 特征 掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方 法
二、实验原理
• （一）放线菌 • 单细胞、多核区、丝状的革兰氏阳性细菌。 单细胞、多核区、丝状的革兰氏阳性细菌。 在形态上具有分枝状菌丝， 在形态上具有分枝状菌丝，以孢子进行繁 殖。放线菌实际上是属于细菌范畴内的原 核微生物
四、实验内容及操作
• • • • （一）放线菌形态观察（插片法） 放线菌形态观察（插片法） （二）霉菌形态观察 （三）酵母菌形态观察 （四）微生物大小测定
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融合
子囊孢子
酵母菌菌落特征
与细菌菌落类似，但一般较细菌菌落大且厚， 与细菌菌落类似，但一般较细菌菌落大且厚，表面 湿润，粘稠，易被挑起，多为乳白色，少数呈红色。 湿润，粘稠，易被挑起，多为乳白色，少数呈红色。
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.
实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
微生物实验思考题参考标准答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二.细菌的简单染色和革兰氏染色1.革兰氏染色中那一步是关键？为什么？你是如何操作的?革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间）。
如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s)。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同?自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
３. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4．涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1．镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。
细菌、酵母菌、放线菌、霉菌四大菌落形态观察
一、实验目的
1.熟悉各大类微生物群体类微生物
二、基本原理
区分和鉴别各大类微生物通常不外乎包括群体形 态和个体形态两方面的观察，而在一般条件下，特别 是在菌种筛选和菌种辨别等方面，多半首先采用观察 群体形态基本特征的方法来区分各大类微生物。这种 方法简便快速，应用非常广泛。
四、实验结果
微生物 菌落 特性
大肠 杆菌
干湿
啤酒 酵母
放线菌
曲霉
根霉
青霉
厚薄
松紧
大小 结果
微生物
菌落 特征
细菌
酵母
霉菌
放线菌
干湿 厚薄 松紧 大小
很湿或较湿 较湿
干燥
干燥或较干燥
透明或 稍透明
稍透明
不透明
不透明
松
松
小而突起或 大而平坦
大而突起
很紧 小而紧密
较紧
大而疏松或 大而致密
青霉（Penicillium Sp.）
菌丝较粗壮，形成的 菌落较疏松，呈绒毛 状、絮状或蜘蛛状， 菌落大。
曲霉（Aspergillus Sp.）
曲霉菌是一种典型的丝状 菌，菌落生长较快，结构 疏松，表面灰绿色，背面 无色或略呈褐色。菌体有 许多复杂的分枝菌丝构成。
根霉（Phizopus Sp.）
大肠杆菌（Escherichia coli）
啤酒酵母 （Saccharomyces cereuisiae）
大多数酵母菌的 菌落特征与细菌 相似，但比细菌 菌落大而厚，菌 落表面光滑、湿 润、粘稠，容易 挑起，菌落质地 均匀，正反面和 边缘、中央部位 的颜色均一，菌 落多为乳白色。
放线菌5406 （Streptomyces microflavus）
实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。
观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。
4实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察
一、实验目的要求
• 1.学习掌握观察放线菌、霉菌和酵母菌形 态的基本方法。
• 2.加深理解放线菌、霉菌和酵母菌的形态 特征。
二、实验原理
放线菌、霉菌和酵母菌分类地位
原核类：细菌、古生菌、放线菌、蓝细菌、支原体 、立克次氏体、衣原体等。 真核类：真菌（酵母菌、霉菌、蕈菌）、原生动物 、 显微藻类。 非细胞类：病毒、亚病毒（类病毒、朊病毒等）
• 注意：染色水洗时水流要缓，以免破坏孢子丝形态。
放线菌 10092436俞佩枫拍摄
放线菌
四、实验步骤
• 2. 酵母菌形态观察及死活细胞鉴别： • 美蓝浸片的观察: （1）滴一小滴0.05％吕氏碱性美蓝染色液于载玻片
中央，按无菌操作取少量酵母菌与其混合均匀。 • 用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌体接触，
取少量已经产孢子的霉菌菌丝； （3）放在载玻片上的染液中，用解剖针小心
将菌丝分开； （4）盖上盖玻片，置于10X低倍镜下观察，
必要时换40X高倍镜.(不用油镜!)
黑曲霉 10092436俞佩枫拍摄
四、实验步骤
3. 霉菌的形态观察 注意： • 用镊子取菌和用解剖针分散菌丝时要细心，
尽量减少菌丝断裂及形态被破坏，盖盖玻 片时避免气泡产生。
• 1. 放线菌孢子丝形态观察(插片法) （1） 融化高氏1号培养基，冷却至50度倒平板，平
板要厚一些，以利于插片。接种、插片、培养。 （2）染色：用镊子小心取出盖玻片，并将其背面附
着的菌丝体擦干净，用0.05%美蓝染色约1min后 水洗。然后将盖玻片无菌丝体的面放在载玻片上。 （3）1．放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁 殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布 于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。
微生物学实验10 放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察
南京大学生物技术系实验报告题目放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察【一、实验目的】1、通过菌落及细胞形态的观察和比较，掌握区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的要点。
2、掌握观察放线菌孢子的方法。
3、掌握观察霉菌孢子及根霉假根的方法。
4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。
【二、实验原理】1、三类微生物菌落形态特征：霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。
营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。
营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。
霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。
在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。
放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。
酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。
酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。
2、三点接种法与霉菌菌落形态的观察霉菌的菌落形态是分类鉴定的重要依据。
为便于观察，通常用接种针挑取极少量霉菌孢子点接于平板中央，使其形成单个菌落；或在平板上接三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。
后一方法称为三点接种法。
04 实验四 放线菌、酵母和霉菌形态的观察
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
形态观察技术实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉光学显微镜的使用方法和操作技巧。
2. 掌握微生物、细胞等生物样本的形态观察技术。
3. 了解不同类型显微镜的原理和适用范围。
4. 培养实验操作规范和数据分析能力。
二、实验原理形态观察技术是生物学研究中的重要手段，通过观察生物样本的形态、结构和功能，可以了解生物体的生长发育、生理功能和病理变化等。
光学显微镜是常用的形态观察工具，利用光学原理放大生物样本，使其在显微镜下呈现出清晰的图像。
三、实验材料与仪器材料：1. 细菌培养物2. 酵母菌培养物3. 霉菌培养物4. 细胞培养物仪器：1. 光学显微镜2. 显微镜载物台3. 显微镜目镜和物镜4. 显微镜照明系统5. 显微镜成像系统（可选）6. 载玻片7. 盖玻片8. 吸水纸9. 美蓝染液10. 碘液11. 滴管12. 镊子四、实验步骤1. 显微镜使用培训：首先，对实验人员进行显微镜使用培训，包括显微镜的结构、操作方法、注意事项等。
2. 样本制备：- 将细菌、酵母菌、霉菌和细胞培养物分别接种于琼脂平板，培养至适当生长阶段。
- 用无菌操作将菌落或细胞刮取，制成悬液。
- 将悬液滴于载玻片中央，盖上盖玻片。
3. 染色：- 根据样本类型，选择合适的染色方法，如美蓝染色法、碘液染色法等。
- 将染色液滴于盖玻片边缘，使染色液慢慢渗入样本中。
4. 显微镜观察：- 将载玻片放置于显微镜载物台上，调整焦距，观察样本形态。
- 观察不同样本的形态、大小、结构等特征，并记录观察结果。
5. 数据记录与分析：- 将观察结果记录于实验记录表中，包括样本类型、观察部位、形态特征、数据等。
- 对观察结果进行分析，总结不同样本的形态特点。
6. 显微镜成像（可选）：- 使用显微镜成像系统，将观察结果拍摄成图像，以便于后续分析和分享。
五、实验结果与分析1. 细菌：细菌为单细胞生物，呈球状、杆状或螺旋状。
观察结果显示，细菌菌体大小不一，形态各异。
2. 酵母菌：酵母菌为单细胞真菌，呈卵圆形、椭圆形或球形。
放线菌和霉菌的形态结构观察(共26张PPT)
、乳酸石
炭酸溶液
、载片及盖
片、显
微
示(一无)霉隔菌菌菌丝落、特假征根的、观匍察匐枝镜、孢、子囊接梗、种孢子环囊 、接种针、酒精灯、蒸馏水等。
实验内容（放线菌）
(一)菌落形态的观察
观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、边缘，以及 有无色素分泌到培养基内等；
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情 况。
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情况。
(二)其他物品 (三)孢子形状的观察（印片染色法）
并用接种环挑取菌落，注意菌丝在培养基上着生的紧密情况。 高倍镜(400×)下观察灰色链霉菌和淡紫灰链霉菌的孢子及孢子丝。
图2-100为根霉属的接合孢子
％美蓝染液 实 验 二
孢子囊破裂后能观察到囊托及囊轴。
灰色 链霉菌
印片法或 直接观察法
个体形态及生殖方式图
(三)描述产黄青霉、黄曲霉、黑根霉的菌落 的颜色及特征
与培养
微生物 名称
大小
表面 形状
菌丝 颜色
孢子 颜色
菌丝 高矮
生长 密度
基 结合程
嗅 味
度
黑根霉
产黄青霉
黄曲霉
(四) 绘制产黄青霉、黄曲霉、黑根霉的个体 形态及生殖方式图
微生物名称
菌丝结构（及分化结构）
无性孢子
黑根霉(糖化酶、 示无隔菌丝、假根、匍匐枝、
酿酒)
孢子囊梗、孢子囊
产黄青霉(青霉素 示有隔菌丝、分生孢子梗及其
)
分枝方式、小梗
黄曲霉(蛋白酶、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ示有隔菌丝、足细胞、顶囊、
制酱油)
分生孢子梗及小梗
孢囊孢子 分生孢子 分生孢子
微生物菌落的观察实验
一、 实验目的和内容 目的：识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四
大类微生物的菌落特征 内容： 根据菌落的形态特征判断未知菌落的类别
二、 实验材料和用具
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、热带 假丝酵母、黑曲霉等
培养基：牛肉膏蛋白胨、马铃薯培养基、 高氏1号培养基、无菌备已知菌落的单菌落 制备未知菌落 可以直接用纯培养的实验的结果进行观察
四、 注意事项
选择分离的很开的单个菌落或较大的菌落 进行观察；不可随意开盖以免将菌搞混淆。
五、 实验报告
将未知菌落的辨别结果记录于表中
微生物的菌落形态
细菌、酵母菌、霉菌和放线菌接种方法和形态观察
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
微生物实验-放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
毛霉与根霉的比较
①两者皆有假根，但根霉属有匍匐枝，毛霉属无。 ②根霉属有囊托，毛霉属无。③两者皆具囊轴④ 毛霉属孢子囊梗单株从菌丝上发生，分枝或不分 枝，根霉无分支。
二、实验原理
酵母
酵母菌是单细胞真核微生物。
酵母菌细胞的形态通常有球形、
卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬
形或藕节形等。比细菌的单细胞 个体要大得多，一般为1~5微米 ′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不 能游动。
毛霉
毛霉又叫黑霉、长毛霉。
菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能 广泛蔓延，有假根，无匍匐菌丝。
毛霉
毛霉显微结构
根霉
根霉(Rhizopus)属于毛霉目 根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，
是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉 （即阿明诺法）生产酒精。
根霉显微形态
实验四 放线菌、霉菌、 酵母菌的形态观察
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察
一、实验目的
1、学习掌握观察放线菌、霉菌标本片形态特征。
2、学习掌握观察酵母菌标本片形态特征。
二、实验原理---放线菌
放线菌 因菌落呈放线状而的得名
二、实验原理
放线菌
放线菌的形态比细菌复杂些， 但仍属于单细胞。在显微镜 下，放线菌呈分枝丝状
七、下一个实验
实验五 微生物数量的测定
酵母菌具有典型的真核细胞
结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、
细胞质、液泡、线粒体等，有的
还具有微体。
啤酒酵母的菌落
红酵母的菌落
各种酵母菌的菌落
酵母菌和霉菌的培养对比
电镜下的酵母
三、实验器材
1、菌种：根霉、青霉、曲霉、放线菌、酵 母等标本片
简述细菌放线菌酵母菌霉菌的菌落特点
一、细菌的菌落特点1. 大小：细菌的菌落通常较小，直径一般在1-2mm左右。
2. 形状：菌落形态多样，有圆形、半球形、充满波浪状等。
3. 色泽：细菌菌落颜色各异，常见的有白色、黄色、红色等。
4. 表面质地：细菌菌落通常平整、光滑，有时带有浑浊或粘滑感。
二、放线菌的菌落特点1. 大小：放线菌的菌落一般较大，直径可达数毫米至几厘米。
2. 形状：放线菌菌落呈现出放射状、分枝状或纺锤状。
3. 色泽：放线菌菌落颜色多样，通常为灰色、白色、黄色等。
4. 表面质地：放线菌菌落表面常呈粗糙状，有时带有蜡质光泽。
三、酵母菌的菌落特点1. 大小：酵母菌的菌落大小较小，直径通常在1-5mm。
2. 形状：酵母菌菌落呈现出乳状、粉末状、浑浊或渗透状。
3. 色泽：酵母菌菌落颜色多样，有白色、黄色、棕色等。
4. 表面质地：酵母菌菌落表面光滑、湿润，带有一定程度的粘稠感。
四、霉菌的菌落特点1. 大小：霉菌的菌落通常较大，直径可达数毫米至数厘米。
2. 形状：霉菌菌落呈现出丝状、分叉状、菌床状等。
3. 色泽：霉菌菌落颜色多样，通常为绿色、灰色、黑色等。
4. 表面质地：霉菌菌落表面多为蓬松、绒毛状，有时带有一定的粘稠感。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落特点在大小、形状、色泽和表面质地上表现出明显的差异。
通过对菌落特点的观察，可以帮助我们初步判断和鉴别不同微生物的种类和特性。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌是我们生活中常见的微生物，它们在自然界中扮演着重要的角色，有些对人类有益，有些则对人类健康和环境造成危害。
对于这些微生物，了解它们的菌落特点不仅可以帮助我们对它们进行初步的鉴别和判断，同时也有助于我们更全面地了解它们的生长特性和生物学特点。
细菌是一类微小的单细胞生物，它们的菌落呈现出多样的形态和色泽。
细菌菌落大小一般较小，形态多样，通常是圆形或不规则形状，其颜色也各异，有些呈白色、黄色、红色或绿色等。
细菌菌落表面通常平整光滑，当观察时常有一定程度的粘滑感。
微生物学实验10 放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察
南京大学生物技术系实验报告题目放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察姓名年05 月24 日【一、实验目的】1、通过菌落及细胞形态的观察和比较，掌握区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的要点。
2、掌握观察放线菌孢子的方法。
3、掌握观察霉菌孢子及根霉假根的方法。
4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。
【二、实验原理】1、三类微生物菌落形态特征：霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。
营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。
营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。
霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。
在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。
放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。
酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。
酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。
2、三点接种法与霉菌菌落形态的观察霉菌的菌落形态是分类鉴定的重要依据。
为便于观察，通常用接种针挑取极少量霉菌孢子点接于平板中央，使其形成单个菌落；或在平板上接三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。
放线菌和霉菌的形态观察
实验4 放线菌和霉菌的形态观察实验时间：20 18年4月18日星期三第789节实验地点：13- 1331. 实验目的学习并掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征学习并掌握观察四类常见霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征2. 实验原理放线菌原理放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞的菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝(或称基内菌丝，简称基丝)和生长在培养基以上的气生菌丝。
有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。
能否产生气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落形态特征为: 形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。
菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。
霉菌原理霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。
霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。
霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
霉菌菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，而且孢子很容易飞散、所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。
此染色液制成的霉菌标本片特点是: (a) 细胞不变形: (b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间; (c) 溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。
霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。
3. 材料仪器1、菌种: 放线菌划线平板28C,3-5 天后培养物;产黄青霉，黑曲霉，黑根霉，等斜面或平板划线菌种28C培养2~3 天。
实验四-微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏(张理珉)
十分多样
相同
一般不同
可见球状，卵圆状或假 丝状细胞
有时可见细丝状细胞
较快
慢
多带酒香味
常有泥腥味或抗生素气 味
不透明 较牢因结合
十分多样 一般不同 可见粗丝状细胞 一般较快 往往有霉味
二、细菌菌落形态的多样性（示意图）
延展性较强的一些霉菌菌丝（松散）
平板中菌落形态
Hale Waihona Puke 三、菌落特征描写方法说明：检测方法建立的基础——可 测、稳定、重现、可行、简便
浊度与微生物生物量测定
原理：
①细胞的存在会 造成光的散射， 降低光线的透过；
②在一定范围内 细胞浓度与吸光 度成正比
二、平板菌落计数的优缺点
▪ 优点：反映的是微生物活菌数量，可获 得活菌的信息，所以被广泛用于生物制 品检验（如活菌制剂），以及食品、饮 料和水（包括水源水）等的含菌指数或 污染程度的检测。
适用具有特殊生理功能的类群——存在但 不能人工培养形成单菌落，可以利用生化手段 检测出；利用统计学原理计算，结果粗放，只 能得到数量级（近似数）。
（3）菌体浊度的测定（只针对单细胞微 生物）；
利用分光光度计在600nm测定吸光度 值。
（4）细胞干重和湿重的测定（有时湿重 以体积计量）；
（5）各种细胞物质含量的测定（蛋白质、 核酸、 ATP、磷、叶绿素等定量测 定）——建立了多种快速检测方法；
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度(倍数)最高的平均菌落数 乘以稀释倍数（见下表，例4）。
5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应按稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以 稀释倍数（见下表，例5）。
6、若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最近300或30的平均菌落 数乘以稀释倍数（见下表，例6）。
放线菌和霉菌的形态观察
实验四放线菌和霉菌的形态观察实验报告一．实验目的1.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术。
2.初步了解细菌﹑放线菌﹑酵母菌及霉菌的形态特征和相互区别。
3．巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
二．实验原理对个体较小的细菌进行制片时采取涂片法，通过涂抹使细胞个体在载玻片上均匀分布，避免菌体堆积面无法观察个体形态，通过加热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌面且不破坏细胞形态。
放线菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采取涂片法，以免破坏细胞及菌丝体形态。
通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察。
在插片法中，首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基交接处生长面附着在盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。
在玻璃纸法中，采用的玻璃纸是一种透明的半透膜，将放线菌菌种接种在覆盖在固体培养基表面的玻璃纸上，水分及小分子营养物质可透过玻璃纸被菌体吸收利用，而菌丝不能穿过玻璃纸而与培养基分离，观察时只要揭下玻璃纸转移到载玻片上，即可镜检观察。
由于孢子丝形态，孢子排列及形状是放线菌重要的分类学指标，可采用印片法将放线菌菌落或菌苔表面的孢子丝印在载玻片上，经简单染色后观察。
单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。
由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水–碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。
同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。
由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞胞内还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
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根霉显微形态
毛霉与根霉的比较
①两者皆有假根，但根霉属有匍匐枝，毛霉属无。 ②根霉属有囊托，毛霉属无。③两者皆具囊轴④ 毛霉属孢子囊梗单株从菌丝上发生，分枝或不分 枝，根霉无分支。
二、实验原理
酵母
酵母菌是单细胞真核微生物。 酵母菌是单细胞真核微生物。 酵母菌细胞的形态通常有球形、 酵母菌细胞的形态通常有球形、 卵圆形、腊肠形、椭圆形、 卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬 形或藕节形等。 形或藕节形等。比细菌的单细胞 个体要大得多，一般为1~5微米 个体要大得多，一般为1~5微米 ′5~30微米 酵母菌无鞭毛， ′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不 微米。 能游动。 能游动。 酵母菌具有典型的真核细胞 结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、 结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、 细胞质、液泡、线粒体等， 细胞质、液泡、线粒体等，有的 还具有微体。 还具有微体gillus)是发酵工业和食品加工业的重要菌种， 曲霉 已被利用的近60种。2，000多年前，我国就用于制酱，也 是酿酒、制醋曲的主要菌种。现代工业利用曲霉生产各种 酶制剂(淀粉酶、蛋白酶、果胶酶等)、有机酸(柠檬酸、葡 萄糖酸、五倍子酸等)，农业上用作糖化饲料菌种。例如黑 曲霉、米曲霉等。
放线菌
放线菌的形态比细菌复杂些， 放线菌的形态比细菌复杂些， 但仍属于单细胞。 但仍属于单细胞。在显微镜 下，放线菌呈分枝丝状
根据菌丝形态 和功能的不同， 和功能的不同， 放线菌菌丝可分 为基内菌丝、气 基内菌丝、 生菌丝和孢子丝 三种。 三种。
革兰染色
二、实验原理
霉菌 霉菌是形成分枝菌丝的真菌的 霉菌是形成分枝菌丝的真菌的 统称。不是分类学的名词 统称。不是分类学的名词 霉菌是丝状真菌的俗称，意即 霉菌是丝状真菌的俗称，意即 “发霉的真菌”， 发霉的真菌”
五、实验结果
酵母 放大倍数 —×—
六、思考题
1. 比较毛霉和根霉、青霉和曲霉的形态异 比较毛霉和根霉、 同
七、下一个实验
实验五 微生物数量的测定
曲霉
红曲霉 黑曲霉 米曲霉
曲霉
曲霉的显微的显微结构
曲霉和青霉的异同
两者同属于曲霉科的 两者同属于曲霉科的，主要鉴别特征就是 曲霉科的，主要鉴别特征就是 孢子。曲霉成的是放射状的孢子 青梅成的 是扫把状的孢子 。 他们都属于半知菌，基本结构特征相同即 菌丝有隔，分生孢子，无有性世代等等。 显微镜下最容易观察到的是青霉扫帚状排 列的分生孢子小梗和曲霉膨大的分生孢子 头（顶囊），另曲霉的分生孢子梗直立于 菌丝独特厚壁的足细胞上。
啤酒酵母的菌落
红酵母的菌落
各种酵母菌的菌落
酵母菌和霉菌的培养对比
电镜下的酵母
三、实验器材
1、菌种：根霉、青霉、曲霉、放线菌、酵 母等标本片 2、显微镜、蒸馏水、插镜纸、香泊油、二 甲苯
四、实验方法和步骤
1. 寻找放线菌、霉菌、酵母菌的标本片，注意 寻找放线菌、霉菌、酵母菌的标本片，注意 各类型标本片的菌株名称。 各类型标本片的菌株名称。 2. 在显微镜下寻找观察各标本的最适合倍数， 从低倍镜、高倍镜再到油镜。 3. 在最适合倍数下画出所观察标本的形态 4. 实验完毕，注意镜头的清洗，特别是油镜 实验完毕，注意镜头的清洗，特别是油镜
实验四 放线菌、霉菌、 放线菌、霉菌、 酵母菌的形态观察
林标声
实验四 放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察 放线菌、霉菌、 一、实验目的
1、学习掌握观察放线菌、霉菌标本片形态特征。 2、学习掌握观察酵母菌标本片形态特征。
二、实验原理---放线菌 实验原理---放线菌
放线菌 因菌落呈放线状而的得名
二、实验原理
毛霉
毛霉又叫黑霉、长毛霉。 菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能 菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能 广泛蔓延，有假根，无匍匐菌丝。 广泛蔓延，有假根，无匍匐菌丝。
毛霉
毛霉显微结构
根霉
根霉(Rhizopus)属于毛霉目 属于毛霉目 根霉 根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强， 是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉 （即阿明诺法）生产酒精。