葡萄糖标准曲线图
生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线马铃薯总糖含量测定实验目的1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。
实验原理1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。
葡萄糖标准曲线 曲线
葡萄糖标准曲线曲线
葡萄糖标准曲线通常是在实验室中用于测量葡萄糖浓度的一种方法。
曲线是通过将已知浓度的葡萄糖溶液与对应的测量值进行实验生成的。
通常，曲线是通过制备一系列已知浓度的葡萄糖溶液，然后测量这些溶液的吸光度或电信号来生成的。
测量可以使用光谱仪、分光光度计或其他相关设备进行。
根据测量的数据，可以使用回归分析等统计方法生成标准曲线。
标准曲线通常是一个二次函数或对数函数的形式，将已知浓度的葡萄糖与对应测量值之间的关系进行描述。
生成标准曲线后，可以使用同样的方法测量未知浓度的葡萄糖溶液，并使用标准曲线来推算其浓度。
这种方法通常是一种相对简单、准确的测量葡萄糖浓度的方法，常用于实验室中的化学分析或生物医学研究中。
葡萄糖色谱标准曲线
葡萄糖色谱标准曲线一、葡萄糖浓度与峰面积的关系在色谱分析中，峰面积是物质浓度的直接反映。
随着葡萄糖浓度的增加，峰面积也逐渐增大。
在一定浓度范围内，葡萄糖浓度与峰面积呈线性关系。
通过标准曲线，可以定量计算出样品中葡萄糖的浓度。
二、葡萄糖保留时间与峰高的关系保留时间是物质在色谱柱上停留时间的体现。
随着葡萄糖浓度的增加，保留时间也逐渐延长。
在一定浓度范围内，葡萄糖浓度与保留时间呈线性关系。
通过标准曲线，可以确定样品中葡萄糖的保留时间，进而计算出峰高。
三、内标物浓度与峰面积的关系内标物是一种已知浓度的物质，用于校正色谱柱效和定量计算。
内标物浓度与峰面积呈线性关系。
通过标准曲线，可以确定样品中内标物的浓度和峰面积，进而计算出内标物的峰高。
四、内标保留时间与峰高的关系内标保留时间是内标物在色谱柱上停留时间的体现。
随着内标物浓度的增加，保留时间也逐渐延长。
在一定浓度范围内，内标物浓度与保留时间呈线性关系。
通过标准曲线，可以确定样品中内标物的保留时间，进而计算出峰高。
五、不同色谱条件下的分离效果在不同的色谱条件下，物质的分离效果也会有所不同。
为了得到准确的定量结果，需要选择合适的色谱条件。
通过比较不同色谱条件下的分离效果，可以确定最佳的色谱条件。
六、柱效和选择性评价柱效是色谱柱对物质的分离效能的体现。
选择性是色谱柱对不同物质的分辨能力的体现。
通过评价柱效和选择性，可以评估色谱柱的性能和适用范围。
七、定量限和检测限的测定定量限是能够准确定量的最低浓度，检测限是能够检测到的最低浓度。
通过测定定量限和检测限，可以评估色谱方法的灵敏度和定量准确性。
八、精密度和准确度评价精密度是测量结果的重复性程度，准确度是测量结果与真实值的接近程度。
通过评价精密度和准确度，可以评估色谱方法的可靠性。
九、线性范围和范围外响应的考察线性范围是标准曲线上的线性区间，范围外响应是标准曲线外的响应值。
通过考察线性范围和范围外响应，可以评估色谱方法的适用范围和预测能力。
葡萄糖标准曲线
硫酸－苯酚法测定多糖含量标准曲线实验1、葡萄糖标准液（0.1mg/mL）:精密称取无水葡萄糖10 mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。
2、5%苯酚：精密称取重结晶苯酚10 g，用蒸馏水定容到200mL，混匀棕色瓶保存。
硫酸－蒽酮法测定多糖含量标准曲线实验1、葡萄糖标准液（0.1mg/mL）:精密称取无水葡萄糖10 mg，用蒸馏水定容到100mL，混匀。
2、蒽酮试剂：称取蒽酮0.2g，用浓H2SO4定容到100mL，混匀。
临用时现配。
3、苯酚－硫酸法测定葡萄糖标准曲线4、试剂：5、1、标准G（0.1mg/mL）:精确称取105℃干燥恒重的葡萄糖10 mg，加水定容到100mL。
6、2、5%苯酚：精确称取10重结晶苯酚5g，加水定容到100mL7、8、10、1、芦丁对照品溶液精密称取1 2 0℃干燥至恒重的芦丁20m g，加入60 %乙醇（提取剂浓度一至）溶解，定容至1 0 0 ml 容量瓶中，摇匀，制成0 .2 m g /ml 的芦丁对照品溶液。
11、12、13、多酚测定14、 1.1.3 试剂及溶液没食子酸、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、石油醚、乙醇等均为国产分析纯。
本试验用水均为双蒸水。
15、各种溶液的配制：16、（1）没食子酸母液：精确称取没食子酸500 mg，溶于蒸馏水中，定容至100 mL作为母液，分别吸取2.5、17、5、7.5、10、12.5、15 mL于25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，制备成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mg/mL的标准液。
18、（2）pH 7.5磷酸缓冲液1/15 mol/L的磷酸氢二钠溶液（A液）：称取磷酸氢二钠（GB1263）23.877 g，加水溶解并定容至1 L。
1/15 mol/L 的磷酸二氢钾溶液（B 液）：称取经110℃烘干2 h的磷酸二氢钾（GB1274）9.073 g，加水溶解并定容至1 L。
19、取A液85 mL和B液15 mL混匀，即得pH 7.5的缓冲液。
葡萄糖含量测定标准曲线绘制方法
还原性糖（葡萄糖）标准曲线的制作
选取7支含有木塞且具有刻度的试管，分别编上号码，按照下表所示，分别加入相应的葡萄糖标准溶液及3,5-二硝基水杨酸溶液。
附表1 3,5-二硝基水杨酸法测定还原性糖绘制葡萄糖标准曲线的试剂量项目管号
0123456
1 g/L葡萄糖标准液/mL00.20.40.60.8 1.0 1.2
蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.00.8 3,5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
相当于葡萄糖量/mg00.20.40.60.8 1.0 1.2将各管摇匀，在沸水浴中加热5 min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温。
再以蒸馏水定容至25 mL刻度处，混匀。
在540 nm波长下，用0号管作为参比调零，测定显色液的吸光度值。
以吸光度值为纵坐标，葡萄糖质量为横坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程即为还原性糖的标准曲线。
制得标准曲线方程为y = 0.093x - 0.1136（R2= 0.9963）。
葡萄糖标准曲线
葡萄糖标准曲线1 DNSDNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。
2 试剂制备将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。
3 标准曲线分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。
在540nm波长下测定吸光度。
4 样品测定样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。
从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。
求出样品中糖含量。
pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.211.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.312.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.413.6 3.6 14.9 5.1 5.6 5.514.5 3.8 14.0 6.0 5.8 4.715.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.816.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.817.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.018.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.418.6 4.8 9.2 10.8 C6H8O7・H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7・2H2O分子量＝294.120.1M溶液含29.41g/L感谢您的阅读，祝您生活愉快。
葡萄糖标准曲线 曲线
葡萄糖标准曲线曲线
葡萄糖标准曲线是用来定量测量葡萄糖浓度的标准方法。
曲线是由一系列已知浓度的葡萄糖溶液制备的，然后使用特定的试剂或仪器进行测量。
测量结果可以得到一个葡萄糖浓度与信号强度（如吸光度或荧光强度）之间的关系曲线。
为了绘制葡萄糖标准曲线，首先制备一系列已知浓度的葡萄糖溶液，例如0、10、20、50、100、200毫克/升等。
然后，将这些溶液依次测量并记录其信号强度。
最后，使用测量结果绘制曲线，其中横轴表示葡萄糖浓度，纵轴表示信号强度。
通常采用线性回归方法将数据拟合为一条直线或使用其他数学模型拟合数据，得到一个最佳拟合曲线。
通过绘制葡萄糖标准曲线，可以根据样品的信号强度来推断其葡萄糖浓度。
在实际分析中，需要测量样品信号强度并使用标准曲线进行插值或外推，以确定其葡萄糖浓度。
这种方法广泛应用于临床、生物化学和食品等领域中对葡萄糖浓度进行定量分析的实验中。