第六章兽药残留检测技术磺胺类
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述
磺胺类药物在畜产品中残留的原因及检测方法
将拭子插入待检测样品中，20min 后去除，放 入有枯草芽孢杆菌的培养基中，经过 18~24h 的培养后，如果 拭子周围有 2mm 以上的抑菌圈，则说明该组织中有抗菌药物 的存在。这一方法是美国农业部规定使用的方法，但该方法时 间成本较高，且容易发生交叉反应，不能进行定量检测。 4小结
使用磺胺类药物后应当经过一 段时间的休药后方可屠宰，但有时养殖场的管理人员因畜禽 已经达到出栏体重，继续饲养会增加成本，没有按照休药期 休药，而直接屠宰，造成了畜产品中有磺胺类药物的残留。 2危害
作者简介：杨磊（1970～），河北平泉人，高级兽医师，本科，主 要从事农畜产品质量安全检测方面骨 髓造血功能障碍，从而引发溶血性贫血和再生障碍性贫血 等。怀孕动物使用磺胺类药物后会造成胎儿黄疸、核黄疸，严 重的还会引起胎儿畸形。成年动物长时间使用磺胺类药物还 会引起消化系统、神经系统、泌尿系统等多系统多器官的紊 乱，最终表现为少尿、无尿或血尿，贫血、白细胞减少等症状。
指导养殖场管理人员合理使用兽药、提高其养殖技术水 平，是保障畜产品质量安全的重要措施，屠宰环节作为畜产 品进入市场前的最后环节，应当严格进行把控，积极进行各 项药物残留的检测，降低畜产品中药物残留的风险。
参考文献 [1] 蔡文金，等.动物源性食品中磺胺类药物残留检测技术研究进展
[J].畜禽业，2015(5):64-67. [2] 刘庆堂，等.磺胺类药物在饲料和畜产品中的残留、危害与检测
[J].饲料工业，2007，28(17):33-35.
202 2021 年第 04 期
畜牧兽医科技信息
磺胺类药物兽药残留检测方法概述.
作者简介:戚凤霞(1965-,高级兽医师,从事动物卫生监督工作。
收稿日期:
2009-07-05
磺胺类药物(Sulfonamides ,SAs属于化学合成抗菌药,均含有氨苯磺酰胺的基本结构(图1,在医学和多种动物的许多感染性疾病防治中具有重要的地位。磺胺类药物具有抗菌谱广、可以口服或注射、吸收迅速,有的能通过血脑屏障渗入脑脊液、较为稳定、不易变质等优点。但是目前磺胺类抗生素的残留在食品抗生素残留检测中经常发现,因其具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点,农业生产中常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生,提高饲料的转化率和促进动物生长,其中常用的就有十几种。但不合理的使用很容易造成耐药菌增加,而且动物性食品中残留的药物可能对人们的健康造成潜在的危害,如磺胺二甲嘧啶是动物性食品中主要的残留药物,可诱发癌症[1-2]磺胺类药物在体内乙酰化率高,在体内主要经肝脏代谢为乙酰化磺胺,后者无抗菌活力却保持其毒性作用,在泌尿道析出结晶,损害肾脏。出现结晶尿、血尿、管型尿、尿痛以至尿闭等症状。还可破坏人
理化法检测结果准确,分辨率高,可以做单个药物的残留检测,但是理化设备往往价格昂贵,成本高,并且需要专门的技术人员,不适合现场快速检测。
免疫法目前越来越受到重视,因其检测限低,单个样品检测成本低(如ELISA法,并且适合现场快速检测,尤其是免疫层析法,检测速度快,灵敏度高,样品分析时间短,而且成本低,无需大型仪器,人员要求低,适用于现场检测。
gaudin等16建立了测定牛奶中sm2残留的生物传感器方法将sm2与经改良的甲基葡聚糖表面共价连接其多克隆抗体以不同流速经过检测限可达170ngg17建立了单克隆抗体21c7为基础的检测鸡血浆中8种磺胺类药物的生物传感器免疫方法血浆稀释10倍的情况下最低检测限70200ngml免疫法免疫法主要有放射性免疫法酶联免疫吸附法生物传感器法胶体金免疫层41放射性免疫法ria放射性免疫法是最早建立的经典的免疫分析方法此法样处理提取方法简便可以检测磺胺类总残留量已经为欧盟和美国fda认可并且应用于初筛分析18o但ria有缺陷1放射性核素半衰期短
磺胺类药物残留的检测
磺胺类药物残留的检测一、实验原理磺胺类药物是对氨基本磺酰胺及其脱胺官能团上的氢原子被其他集团取代的一系列衍生物的总称，绝大多数的磺胺药物都含有芳伯胺基，芳伯胺基可与多种芳醛（如对二甲基苯甲醛）在酸性溶液中缩合成有色的锡夫氏碱改锡夫氏碱的吸光值（该锡夫氏碱溶液最大吸收波长为450nm ）再一定浓度范围内符合朗伯比尔定律，因而可用分光光度计测其含量.二、实验原料：鲜牛奶三、实验仪器与试剂：对二甲基氨基苯甲醛、显色剂、亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、磺胺二甲基标准应用液。
容量瓶。
分光光度计等四、实验方法：1. 磺胺二甲基嘧啶标准应用液的配制：分别准确称取磺胺二甲基嘧啶标准品30mg 溶于100ml 水中，充分摇匀后分别各取20ml 于100ml 容量瓶中。
再加入20ml ，摇匀，各加入50ml 亚铁氰化钾，摇匀后再加入50ml 乙酸锌溶液，然后各用水稀释至100ml ，用定量滤纸过滤，得磺胺二甲基嘧啶标准应用液备用（各取5ml 标液于25ml 容量瓶定容）。
2. 标准曲线制作：分别取上述标准液0 、0.5、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5ml 于25ml 容量瓶中加入1.5ml 显色剂显色，然后用水定容，以空白为参比调零，再450nm 处测定其吸光度，绘制标准曲线，以磺胺二甲基嘧啶为横标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3. 样品检测：准确取10ml 样品于（盛有10ml 水的小烧杯中，摇匀后取1ml ）于100ml容量瓶中（加入9ml 水）摇匀加入1ml 亚铁氰化钾溶液，摇匀后再加入1ml 乙酸锌溶液，然后用水定容，用定量滤纸过滤至另一个小烧杯中，准确取5ml 于25ml 容量瓶中，加入1.5ml 显色剂显色，用水定容，以空白为参比调零，再450nm 侧吸吸光度，再标准曲线上查出待测样品的微克数m4. 计算：含量（μg/ml ）=1051000⨯⨯V m ）（ 五、实验结果记录。
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第六章 兽药残留检测技术
第二节 样品前处理
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行 提取、净化、浓缩的过程。
样品前处理的目的是消除基质干扰、保护仪器、提高检 测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
一、常见兽药
按用途分类
抗微生物药
抗寄生虫药 激素类药物
抗生素：青霉素、链霉素、氯霉素 抗菌药：磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类 抗病毒药：干扰素 抗蠕虫药 抗原虫药 杀虫药
生长促进剂
1、抗微生物药
抗微生物药是指对病原微生物(细菌、真 菌、支原体、病毒等)具抑制或杀灭作用, 主要有用于全身感染的抗生素、磺胺药及 其他化学合成抗菌药。
3. 硝基呋喃类药物
主用于抗菌消炎, 如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。
4. 抗寄生虫类药物
主要用于驱虫或杀虫, 如苯并咪唑、左旋咪 唑、克球酚、吡喹酮等。
而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫 苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、 丁苯咪唑等。
5. 激素类药物
主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育 速度, 使用于动物的激素有性激素和皮质激 素。而以性激素(包括多种内源性性激素、 人工合成的类似性激素的类固醇化合物、 人工合成的具有性激素某些特性的非类固 醇化合物) 最常用, 如孕酮、睾酮、雌二醇、 甲基睾酮, 丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯 孕酮等。
兽药的危害
引起过敏、致畸、致突变及致癌等不良反 应。
立法
为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健 康,1984年在CAC的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世 界卫生组织(WHO)联合发起组织了食品中兽药残留立法 委员会(CCRVDF)。
教学案例库——兽药残留检测
教学案例库——兽药残留检测教学案例一磺胺类药物代谢产物残留的检测技术教学案例名称：猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测教学案例描述：该案例主要讲解水产品中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法，适用于进行该项目检测的食品企业，以及进行兽药残留检测项目教学的高职学校。
主要内容：1）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测意义2）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法3）高效液相色谱的使用4）检测报告的出具教学目标：1、知识目标1）熟悉磺胺类药物代谢产物的检测方法2）熟悉高效液相色谱的原理3）磺胺类药物代谢产物检测报告构成4）内标法及外标法定量2、能力目标1）正确进行溶液的配制和稀释2）熟练进行样品的制备3）熟练使用高效液相4）标准曲线的绘制5）独立完成磺胺类药物代谢产物的检测工作6）正确书写检测报告适用对象：高职学生知识准备：（一）磺胺类药物代谢产物的危害磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。
但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积，许多国家和组织规定了其最高残留限量(MRL)为0.1μg/g,甚至不得检出。
在摄食残留有磺胺类药物的肉品是一个长期低剂量吸收磺胺类药物的过程，而细菌对磺胺药较易产生抗药性，当剂量、疗程不足时更易发生。
其中以葡萄球菌最易产生，其次为痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌和链球菌，同时各种磺胺药间有交叉抗药性。
人体内蓄积到一定程度时，有严重的毒副作用，会破坏人的正常免疫机能和造血系统。
损害人体泌尿系统，容易在肾小管内析出结晶，损伤肾小管引起结晶尿、血尿、蛋白尿，重者可发生尿少、尿闭甚至尿毒症。
多数磺胺类药抗菌谱广，易抑制肠道正常寄生细菌的生长，造成某些维生素的缺乏。
此外，磺胺药还可抑制骨髓的造血功能，引起溶血性贫血和再生障碍性贫血等严重反应，还影响中枢神经系统，引起头晕、头痛、全身乏力等，并可引起恶心、呕吐等消化道症状，磺胺药也是较多引起药物过敏的药，严重者引起甚至可引起剥脱性皮炎。
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法食品安全检验手册108本方法可以检验畜禽肉、鸡蛋中磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）的残留。
1. 原理样品中磺胺类药物经乙腈+三氯甲烷（10V+1V）提取后，又经过液—液分配转入水层进行净化后，用具紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。
2. 试剂和材料以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。
(1) 乙腈（优级纯，作流动相用）。
(2) 甲醇（优级纯）。
(3) 正己烷。
(4) 三氯甲烷。
(5) 乙腈+三氯甲烷（10V+1V）。
(6) 乙腈+三氯甲烷（2V+1V）。
(7) 硫酸钠。
(8) 硫酸钠溶液：2%水溶液（m/V）。
(9) 标准溶液①标准储备液：准确称取磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）各10.0mg，分别用乙腈溶解，并用乙腈定容至10.0mL。
摇匀。
即得各1.0mg/mL的标准溶液。
②混合标准工作液：分别吸取上述溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，并用流动相稀释，摇匀。
然后吸取此液0，0.05，0.10，0.25，0.50，1.0mL各放入10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，摇匀，即得含6种磺胺的标准系列溶液。
3. 仪器和设备(1) 高效液相色谱仪，具紫外检测器。
(2) 超声波发生器。
(3) 涡流混匀器。
(4) 离心机。
(5) 旋转蒸发仪。
4. 测定步骤(1)试样处理：称取5.0g绞碎后的试样，置于塑料管中，加入约1g硫酸钠，乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤取滤液于蒸发瓶中，残渣再加乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤合并滤液于蒸发瓶中，于<40℃水浴旋转蒸发仪上蒸发至干（如果量大，可分两次蒸）。
兽药残留检测技术磺胺类
溶剂提取
溶剂提取时,应尽可能使组织中结合态的残留物溶解,并 且除去大部分的蛋白质。 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯 甲烷、丙酮或混合溶剂等极性溶剂进行提取。(pH10),对鱼肉和动 物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率 很高。 另外,提取过程中加入无水硫酸钠可脱去组织样品中的水 分,有助于样品的充分提取。
固相萃取
由于甲氧苄啶常和其他磺胺药物同时使用,而它们具有不 同的pKa和溶剂亲和力,难以在给定的pH值和溶剂系统 中同时提取,宜采用固相萃取法(SPE)。 常用的SPE柱,如C18和C8、硅胶柱、离子交换柱、 Florisil柱和碱性氧化铝柱等。 该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化” 能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小 柱串联应用,可获得更高的净化效果。 基质固相分散法目前只使用C18吸附剂,该方法简便、提 取率和净化能力均高,已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶 样品的预处理。
一、概述
磺胺类(Sµ lfonamides)药物是兽医上较常用的一 类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学 性质稳定、使用方便、易于生产等优点。
磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。 磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性,与抗菌增 效剂如TMP(甲氧苄啶)等联用,抗菌范围扩大,疗 效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、 肺炎等疾病。 同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥 犊牛 和猪。
排泄
内服难吸收的磺胺药,主要由粪便排出; 内服易吸收的磺胺药主要通过肾脏排泄,通过肾小球滤过 或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管 重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中 浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌, 重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时 间较长,多属长效如SMZ、SMM等。
第六章兽药残留检测技术磺胺类
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磺胺二甲嘧啶
近年来细菌对本品的耐药性增高,尤其是链球菌属、奈瑟菌 属以及肠杆菌科细菌。主要用于巴氏杆菌病、乳腺炎、子 宫炎、呼吸道及消化道感染,亦用以防治兔、禽球虫病和猪 弓形虫病。
内服后吸收迅速而完全,维持有效血药浓度时间较长。
磺胺二甲嘧啶在牛体内的代谢方式有乙酰化、羟基化、结 合等,其中以羟基化为主,其次为乙酰化,代谢物为6-羟甲基 磺胺二甲嘧啶和N-乙酰磺胺二甲嘧啶。
血液和奶中药物浓度最高,肌肉、肾和肝次之。
肌肉、肾和肝中的N-乙酰磺胺二甲嘧啶浓度比母药浓度低, 但肾中的6-羟甲基磺胺二甲嘧啶浓度超过母药浓度。
5
体内分布、代谢
磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。 以血液中含量最高,肝、肾次之,胸水、腹水、滑膜液、房 水中浓度也较高,并能透过胎盘进入胎儿体内。
磺胺药在神经、肌肉及脂肪组织中的含量则较低。
磺胺药主要在肝脏代谢,代谢方式有乙酰化、羟基化、结 合等,其中以乙酰化为主。
磺胺药乙酰化后失去抗菌作用,且在尿中的溶解度降低,易 在肾小管析出结晶,造成对泌尿道的损害。应注意同服碳 酸氢钠,并增加饮水,可减少或避免其对泌尿道的损害。
家禽内服后吸收迅速,但排泄缓慢,残留在组织器官及鸡 蛋中时间长。
兔饲喂100mg/kg,一日两次、连喂5日,肝和肾中残留量较 高,第4天达峰值。休药7~8天,肝、肾和血浆中的残留量 降到0.1mg/kg。
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磺胺噻唑
抗菌作用比磺胺嘧啶强,能抑制细菌的二氢叶酸合 成酶,阻碍细菌的叶酸合成,抑制细菌生长和繁殖。
农牧发[2001]38号动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法
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农牧发[2001]38号动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法动物性食品中磺胺类药物残留的检测方法----高效液相色谱法1 范围本标准规定了动物性食品中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于各种动物性食品（鸡肌肉和鸡肝脏）中磺胺嘧啶（SD）、磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺地索辛（SDM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺甲氧嗪（SMP）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物残留量检验。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
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GB/T 1.1-20001 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)GB/T 2000 1.4-88 标准编写规则第4部分：化学分析方法 (ISO 78-2, Chemistry-Layout for standards-Part2: Methods of chemical analysis, MOD)GB/T 8170-87 数值修约规则GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法3 制样3.1 样品的制备将组织样品解冻，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。
3.2 样品的保存- 20℃冰箱中贮存备用。
4 测定方法4.1方法提要组织样品经乙腈提取，正己烷分配，再经碱性氧化铝SPE柱净化后，用反相高效液相色谱-紫外检测法在270nm处检测。
鸡蛋兽药残留检测项目
鸡蛋兽药残留检测项目
鸡蛋兽药残留检测项目主要包括以下内容：
1. 鸡蛋中磺胺类药物的检测：磺胺类药物是一类广泛应用于牲畜、家禽养殖业中的抗生素，在排泄物和鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的磺胺类药物进行检测。
2. 鸡蛋中喹诺酮类药物的检测：喹诺酮类药物是一种广泛使用于畜禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的喹诺酮类药物进行检测。
3. 鸡蛋中氯霉素的检测：氯霉素是一种广泛使用于畜禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中也容易留下残留。
这类药物对人体有很大危害，因此需要对鸡蛋中的氯霉素进行检测。
4. 鸡蛋中瘦肉精的检测：瘦肉精是一种药用增肥剂，其在鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的瘦肉精进行检测。
5. 鸡蛋中红霉素的检测：红霉素是一种广泛使用于家禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中也容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的红霉素进行检测。
六、兽药残留
一、兽药对食品的污染
兽药残留主要包括抗生素类、合成抗菌 素类、激素类、β -兴奋剂 （一)兽药进入动物体的主要途径 1．预防和治疗畜禽疾病用药 2．饲料添加剂中兽药的使用 3．食品保鲜中引入药物 4、人为无意带入的污染
(二)兽药残留污染的主要原因
1．不遵守休药期有关规定 2．不正确使用兽药和滥用兽药，使用未经批 准的药物 3．饲料加工过程受到兽药污染或运送出现错 误 4．按错误的用药方法用药，或未做用药记录 5．屠宰前使用兽药
亮点三：制定统一的食品安全标准。
亮点四：强化了食品添加剂的管理。 亮点五：明星代言问题食品要负连带责任。 亮点六：保健食品管理有说法。 亮点七：明确食品生产经营者是第一责任人。
亮点八：对食品违法行为加大了处理力度。
国务院发布中华人民共和国食品安全法实施 条例，2009年7月20日起实施。
我国兽药残留监管存在问题
扰消费者的激素机能，比如甲状腺素、肾上腺， 能引起人体内分泌系统的不正常。
四、兽药残留检测过程
1. 选择分析对象 掌握药物新陈代谢机理， 明确以何种组织作为分析对象。 2. 样品预处理 3. 检测步骤 ① 筛选分析 成本低廉，分析速度快 定性或 半定量结果 ② 确证分析 检测限低，精密度和准确度较 高，样品处理和分析过程较复杂 定性和定 量结果
(四)菌群失调
在正常条件下，人体肠道内的菌群由于在多年共同
进化过程中与人体能相互适应，如某些菌群能抑制其他
菌群的过度繁殖，某些菌群能合成 B族维生求和维生素 K以供机体使用。过多应用药物会使这种平衡发生紊乱， 造成一些非致病菌的死亡，使菌群的平衡失调，从而导 致长期的腹泻或引起维生素的缺乏等反应，造成对人体
五、我国近年来兽药残留状况
红心鸭蛋事件
兽药残留检测技术磺胺类课件
研究和发展能够同时检测多种磺胺类药物残留的检测方法，提高检测 效率，满足大规模筛查和监控的需求。
加强现场快速检测
开发便携式、快速、准确的磺胺类药物残留检测设备和方法，满足现 场快速检测的需求，提高食品安全监管的效率。
提高检测方法的标准化程度
加强磺胺类药物残留检测方法的标准化建设，制定统一的检测标准和 方法，促进不同实验室之间的数据可比性和互认性。
高灵敏度和高选择性。
气相色谱法
适用于具有挥发性的磺胺类药 物残留的检测，具有高分离效
能和灵敏度。
磺胺类药物残留的检测标准
01
02
03
国际标准
如欧盟、美国、日本等国 家和地区均制定了相应的 磺胺类药物残留检测标准 。
国内标准
我国也制定了相应的兽药 残留检测标准，规定了不 同动物组织中磺胺类药物 残留的限量值。
某地区禽蛋中磺胺类药物残留检测案例
检测方法
采用高效液相色谱法，对禽蛋样 本中的磺胺类药物残留进行检测
。
检测结果
在检测的50份禽蛋样本中，有8 份样本检出磺胺类药物残留，其 中4份样本的残留量超过国家标
准。
结论
该地区禽蛋中存在磺胺类药物残 留问题，需要加强养殖环节的监
管和检测，确保食品安全。
某地区水产品中磺胺类药物残留检测案例
05
实际应用案例分析
某地区猪肉中磺胺类药物残留检测案例
检测方法
采用高效液相色谱法，对 猪肉样本中的磺胺类药物 残留进行检测。
检测结果
在检测的100份猪肉样本 中，有15份样本检出磺胺 类药物残留，其中10份样 本的残留量超过国家标准 。
结论
该地区猪肉中存在磺胺类 药物残留问题，需要加强 养殖环节的监管和检测， 确保食品安全。
磺胺类药物在动物性食品中的残留与检测
磺胺类药物在动物性食品中的残留与检测核心提示：摘要：磺胺类药物是一类广谱抗菌药，临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病，还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用。
然而，磺胺药会引起人过敏性反应，且可能有致癌性。
因此，磺胺类药物的不合理使用，使其在摘要：磺胺类药物是一类广谱抗菌药，临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病，还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用。
然而，磺胺药会引起人过敏性反应，且可能有致癌性。
因此，磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注。
因此，研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留检测方法，对于畜产品的安全具有实际意义。
酶联免疫吸附法(ELISA)作为一种免疫学检测技术不仅具有上述优点，而且准确性好、特异性强、检测成本低，还可用于大批量样品的检测。
而单抗在试剂的标准化及抗体的大量供应上明显优于多抗，所以单克隆抗体技术的应用在药残检测上是主要的发展方向。
关键词：磺胺；动物性食品；残留；免疫学；检测磺胺类药物(sulfnaides ，SAs)是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的化学治疗药物，是畜禽抗感染治疗中使用的重要药物之一。
SAs的作用机理是干扰细菌酶系统对氨基苯甲酸(PABA)的利用，影响细胞核蛋白质的合成，抑制细菌的繁殖。
其抗菌谱广，能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌。
因具有性质稳定、价格低廉、使用方便，联合抗菌增效剂效果可提高数倍，常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生，提高饲料的转化率，促进动物生长，常用的SAs有十几种。
但不合理的使用会造成过敏、脑神经损害，耐药菌株增加等危害。
为了保证食品安全，欧盟对牛奶和肉类食品中的磺胺类药物制定了最高允许量，即单个磺胺类药物的浓度不得超过25 μg/kg，磺胺类药物总量不得超过100 μg/kg[1]。
1 SAs性质概述1.1 理化性质磺胺类药物的母核结构式如图1，N1含有磺酰胺基，有弱酸性。
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述摘要:动物性食品中的兽药残留问题已成为人们普遍关注的社会热点问题。
本文主要介绍了磺胺类兽药在动物性食品中的残留现状、原因及危害，概述了磺胺类兽药的常用分析方法。
关键词:磺胺;兽药残留;危害;检测方法随着全球食品贸易国际化，食品安全已成为全球关注的公共卫生问题。
其中动物性食品中的兽药残留问题已成为关注的焦点。
磺胺类兽药是畜禽抗感染治疗中的重要药物，是畜牧养殖业中应用最广泛的药物之一【1】，磺胺类药物经各种给药途径进入动物体内后，可转移到肉、禽、蛋和乳等动物性食品中，使用不合理很容易在动物组织中造成残留。
近儿十年来，磺胺类兽药残留现象非常严重，经常在畜禽和水产品中出现。
食用磺胺类药物残留超过限量的动物性食品，对人体健康会产生多种危害。
因此，作为动物性食品安全监测技术支撑的各种检测技术的研究已引起国内的高度重视。
一、磺胺类兽药残留原因与危害1、引起残留的原因(1)养殖业使用标有停药期的动物用药品及含药饲料添加剂后，未遵守停药期就将禽畜、水产品类及乳蛋品等出售，这是造成药物残留最主要的原因。
(2)在治疗动物疾病时错误用药，如用药量、给药途径、用药部位以及用药种类等不符合用药指标，有可能延长药物在体内残留时间，从而增加休药天数。
2、对人体的危害人类经常食用磺胺类药物残留的动物性食品，就可能引起磺胺类药物在人体内蓄积，对人类的身体健康产生很大危害。
主要表现为肾脏损伤，过敬反应，抑制造血系统，细菌抗药性。
有资料表明，磺胺二中喘唳在连续给药中能够诱发啮齿动物屮状腺增生及屮状腺滤细胞腺癌，具有潜在的致癌性【2】。
实验发现，在胎儿器官形成期和哺乳期接触磺胺二屮喘唳]o使子代大鼠呈现先天性中状腺功能低下的表现【3二、动物源性食品中磺胺类药物的最高残留限量各国政府对磺胺类药物在动物性食品中使用严格规定了最高残留限量(MRL)。
LI前中国、欧盟、美国、日本等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制使用的药物。
磺胺类药物在猪肉中的残留检测——样品前处理改善方法
磺胺类药物在猪肉中的残留检测——样品前处理改善方法1、合作实验单位：浙江省兽药饲料监察所、浙江省畜产品质量安全检测中心2、依照方法：国家农业行业标准 NY5029—20013、样品：猪肉4、国标规定的提取和纯化过程如下：称取组织样品5g(精确到0.1g)，加入乙腈25ml，无水硫酸钠少许（血清除外），匀浆后，以3000r/min 的速度离心5min。
分离后的残渣再用25ml 乙腈处理，振荡10min 后，以3000r/min 的速度离心5min。
合并两次的上清液，加入正己烷30ml，振荡10min 后，以3000r/min 的速度离心5min，取下层液体，加入正丙醇10ml，50 摄氏度下减压干燥（1），残留物用95%乙腈3ml 溶解，过Sep Pak 氧化铝B 柱。
用95%乙腈5ml 过柱，不收集，再用70%乙腈10ml 洗脱后，洗脱液中加入5ml 正丙醇，50C 下减压干燥（2）后，残留物用2.0ml流动相溶解，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。
5、目前使用的仪器：BUCHI 旋转蒸发仪R-200+VACCUMBRAND 真空隔膜泵 2 套6、实验过程中碰到的问题：1) 处理的样品数量大，平均每天处理60 个样品，每次20～30ml样品量；每天同时用 2 套旋转蒸发仪处理，2 个人平均每人每天处理30 次，每次蒸发大概需要8～10min(不含中间转换时间)。
操作过程繁琐、时间长。
2) 无法进行真空度控制，样品在蒸发过程中容易暴沸。
并且溶液来不及冷凝全部被带到真空泵中。
7、解决方案：使用的仪器：BUCHI 12 位快速蒸发仪（Multivapor12）+BUCHI 真空隔膜泵（V-700）带真空控制器（V-855）选择的实验：因为第二步减压干燥是含有30％的水较难蒸馏，所以我们直接选择了第二步来做实验。
蒸发的溶液：样品＋10ml 70%乙腈（30％水）＋5ml 正丙醇，大概20ml处理的样品数量：一次12 个操作过程：1) 仪器连接、准备完毕，Multivapor12 预热到50C。
磺胺类药物残留的检测方法概述
2020年第02期磺胺类药物具有抗菌谱广、方便安全、疗效确定等优势，由于基层养殖人员受文化水平、专业技能、食品安全和信息传递不畅等原因影响，磺胺类药物被滥用现象十分严重，不仅影响养殖业的发展，因其残留随动物性食品进入人们的食物链，对人类健康也构成了严重威胁。
因此在我国动物性食品检测中，磺胺类兽药残留量监测为常规项目，需要采用科学方法进行检测。
1磺胺类药物残留前处理动物性食品拥有复杂基质，同时磺胺类药物呈酸碱两性，极性较高，通常采用有机溶剂进行提取，目前有多种前处理方法可采用。
在猪肉中提取磺胺类药物，可采用液液萃取法，利用不相溶的溶剂将化合物多次转移萃取，回收率能够达70.1%~90.4%。
采用固相萃取法，只需要少量溶剂就可以获得较高回收率，可使用碱性氧化铝柱、HLB 柱等，拥有良好净化效果。
采用固相微萃取方法，能够从样品中直接萃取富集目标化合物，高效、简单，与LC-MS 技术联用能够取得良好效果。
存在大量纯化特异性抗体，可以采用免疫亲和色谱法实现目标物质富集和净化，对多种磺胺类药物平均回收率能够达到62%~104%。
2磺胺类药物残留检测方法在磺胺类药物兽药残留检测方面，根据检测时间、精确性和方便性等方面的要求，可分为实验室检测和现场快速检测两类。
2.1.1高效液相色谱法实验室检测通常采用高效液相色谱法，能够在高压条件下使被检测物在流动相内与固定相实现反复交换，根据排阻差异对物质进行分离检测。
在磺胺类药物检测上，通常采用荧光检测器、二极管列阵检测器等，分别需要在405~420nm 和263nm 、267nm 或268nm 波长下开展检测工作，荧光检测灵敏度和选择性较高，但样品需要经过衍生化处理，操作复杂，后一种灵敏度较低，但可以获得任意波长色谱图。
在肉类、水产品、奶类中的磺胺类药物残留检测上，多采用液相色谱法实现高通量筛查，灵敏度高，如采用荧光检测器对鸡肉中16种磺胺类药物进行检测，药物质量度在0.13~67.89μg/mL 范围内。
第六章兽药残留检测技术磺胺类1
l 该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化” 能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小 柱串联应用,可获得更高的净化效果。
l 基质固相分散法目前只使用C18吸附剂,该方法简便、提 取率和净化能力均高,已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶 样品的预处理。
l 溶剂提取时,应尽可能使组织中结合态的残留物溶解,并 且除去大部分的蛋白质。
l 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯 甲烷、丙酮或混合溶剂等极性溶剂进行提取。
l 二氯甲烷中加入离子对试剂四丁基铵(pH10),对鱼肉和动 物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率 很高。
l 另外,提取过程中加入无水硫酸钠可脱去组织样品中的水 分,有助于样品的充分提取。
l 磺胺药尚可经肠液、胆汁分泌排出,也可由乳汁排泄,但 量较少。
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第六章兽药残留检测技术磺胺类1
常见磺胺药
l 磺胺嘧啶 l 三甲氧苄啶 l 磺胺二甲嘧啶 l 磺胺二甲氧嘧啶 l 磺胺喹恶啉 l 磺胺噻唑 l 巴喹普林
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第六章兽药残留检测技术磺胺类1
二、样品处理
l 常用的磺胺类药物,除少数外,一般具有以下的基本结构:
第六章兽药残留检测技 术磺胺类1
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2020/11/27
第六章兽药残留检测技术磺胺类1
一、概述
l 磺胺类(Sµlfonamides)药物是兽医上较常用的一 类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学 性质稳定、使用方便、易于生产等优点。
l 磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。
l 但与实际相比,测得值尚低5%~15%。结果偏低的主要原 因是薄层色谱条件不稳定,吸附剂可能部分损失。板上洗 脱后重氮化-偶合法如下:
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第五节 磺胺类药物残留的危害分 析与检测方法
一、概述
磺胺类(Sµlfonamides)药物是兽医上较常用的一 类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学 性质稳定、使用方便、易于生产等优点。
磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。
磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性,与抗菌增 效剂如TMP(甲氧苄啶)等联用,抗菌范围扩大,疗 效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、 肺炎等疾病。
家禽饲服后吸收快而排泄慢,作用维持时间长。肝和肾中 有较高的药物浓度,血浆蛋白结合率为80%~85%。
除肾脏外,其他组织中药物浓度降低至0.1mg/kg或以下需 休药8天。蛋鸡或火鸡内服后,蛋鸡休药6天、火鸡休药8 天,这样组织残留可低于允许限量值(0.1mg/kg)。
体内乙酰化率低,代谢物N4-乙酰磺胺二甲嘧啶主要存在 于血浆、组织和粪中,消除期约7天。
其可溶性钠盐肌肉注射后迅速吸收。吸收后排泄迅 速,单胃动物内服后,在12h内经肾排出约50%,24h约 90%。其半衰期短,不易维持有效血浓度。
在体内与血浆蛋白的结合率和乙酰化程度均较高,其 乙酰化物溶解度比原药低,易产生结晶尿而损害肾脏。
巴喹普林
巴喹普林(BQP)是一种新型动物专用的磺胺类药物,最早 由美国Wellcome Foundation 公司于1989年创制,1991年 美国Malhnd Rrodt公司将其与磺胺类药物配成复方制剂 上市。
三文鱼饲喂30mg/(kg·d),连喂10日,休药7~10天血浆中残 留量约12mg/kg,肌肉在喂服后立刻采样测定,测得平均残 留量10740µg/kg,停药30天和40天肌肉中平均残留量为 100µg/kg和10µg/kg。
磺胺二甲嘧啶
近年来细菌对本品的耐药性增高,尤其是链球菌属、奈瑟菌 属以及肠杆菌科细菌。主要用于巴氏杆菌病、乳腺炎、子 宫炎、呼吸道及消化道感染,亦用以防治兔、禽球虫病和猪 弓形虫病。
家禽内服后吸收迅速,但排泄缓慢,残留在组织器官及鸡 蛋中时间长。
兔饲喂100mg/kg,一日两次、连喂5日,肝和肾中残留量较 高,第4天达峰值。休药7~8天,肝、肾和血浆中的残留量 降到0.1mg/kg。
磺胺噻唑
抗菌作用比磺胺嘧啶强,能抑制细菌的二氢叶酸合 成酶,阻碍细菌的叶酸合成,抑制细菌生长和繁殖。
磺胺二甲嘧啶
奶牛内服或肌注后,奶中母药残留量内服较肌注高,但残留消 除期基本相同。例如,休药3天奶中的乳糖结合物和乙酰化 代谢物均低于10µg/kg,休药4天奶中母药残留量均低于 10µg/kg。
猪体内代谢主要以乙酰化为主,血浆和组织中N-乙酰磺胺二 甲嘧啶代谢物浓度最高,其他代谢物(如磺胺二甲嘧啶-寡糖 缀和物、脱氨基磺胺二甲嘧啶等)则次之。组织消除半衰期 10~14h,血浆消除半衰期3~9天。休药18天血浆中残留量接 近允许限量值(0.1mg/kg)。
磺胺药高,因此是磺胺类药中治疗脑部细菌性感染的首选 药。 鳗胺嘧啶/甲氧苄啶
猪内服磺胺嘧啶/甲氧苄啶后,胃肠道吸收甲氧苄啶较磺 胺嘧啶快,但甲氧苄啶消除期较磺胺嘧啶消除期缓慢。休 药1天甲氧苄啶残留最高的靶组织为肝脏(0.29µg/kg),但 磺胺嘧啶残留最高的靶组织为肾脏(0.23mg/kg)。休药8 天所有组织均检测不出磺胺嘧啶和甲氧苄啶的残留量。
体内分布、代谢
磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。 以血液中含量最高,肝、肾次之,胸水、腹水、滑膜液、房 水中浓度也较高,并能透过胎盘进入胎儿体内。
磺胺药在神经、肌肉及脂肪组织中的含量则较低。
磺胺药主要在肝脏代谢,代谢方式有乙酰化、羟基化、结 合等,其中以乙酰化为主。
磺胺药乙酰化后失去抗菌作用,且在尿中的溶解度降低,易 在肾小管析出结晶,造成对泌尿道的损害。应注意同服碳 酸氢钠,并增加饮水,可减少或避免其对泌尿道的损害。
吸收后存在形式
磺胺药吸收后,一部分在血浆中保持游离状态(游 离型),一部分与血浆蛋白相结合(结合型),另一部 分在肝脏中高度乙酰化变成乙酰磺胺。
游离型具抗菌作用,且能透过毛细血管进入各种 体液和组织。
结合型无抗菌活性,也不能透入体液或组织中,但 结合较疏松,能不断分解出游离型磺胺。
乙酰化是磺胺的主要代谢产物,无抗菌活性。
(R′=H),两性化合物,可溶于酸或碱溶液。
其化学性质可从四部分结构上表现出来, 即:磺酰胺基(— SO2NHR)、 芳伯氨基(— NH2)、芳环、N1及N4上的取代基。
磺酰胺基
化学性质
本类药物水溶性较低,易溶于极性有机溶剂如乙醇、丙酮、 乙腈、氯仿和二氯甲烷,难溶于非极性有机溶剂。
由于磺胺药具有酸碱两性,通过调节溶液的pH值(pH7~9), 可以使磺胺药呈不同状态,即中性分子还是离子分子,从 而改变水相和有机相的分配系数。
对溶血性链球菌、肺炎杆菌、淋球菌、葡萄球菌、 脑膜炎球菌、大肠杆菌及痢疾杆菌等有抗菌作用。
用于敏感菌所致的肺炎、出血性败血症、子宫内 膜炎及禽霍乱、雏白痢等。对感染创可外用其软 膏剂。同时也被用作饲料添加剂,增肥犊牛和猪。
磺胺噻唑
内服吸收不完全,马、牛、猪、羊一次内服0.1mg/kg, 其血药峰浓度仅为20mg/L。
在8℃ 的水温,海水鳟鱼投喂混合鱼料(添加磺胺嘧啶和 甲氧苄啶)后,开始时药物消除很快,但到达某一残留量时 基本不再下降,即使休药90天鱼体内的残留量仍可被检出。 因此,在10℃以上的水温,鳟鱼用药(磺胺嘧啶/甲氧苄啶) 后的休药期应为60天,在10℃ 以下的水温不得使用。
三甲氧苄啶
属化学合成抗菌药,曾称“磺胺增效剂”。
部分磺胺药及代谢产物在肝内成为水溶性的葡萄糖醛酸结 合物而失去活性。
排泄
内服难吸收的磺胺药,主要由粪便排出;
内服易吸收的磺胺药主要通过肾脏排泄,通过肾小球滤过 或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管 重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中 浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌, 重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时 间较长,多属长效如SMZ、SMM等。
同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥 犊牛 和猪。
危害
这种药物可以残留在动物的体内,人食用后对人体产生耐 药性等副作用,尤其是致癌性物质磺胺二甲嘧啶,能引起 人的再生障碍性贫血,粒细胞缺乏症等疾病。
再生障碍性贫血:骨髓造血干细胞和/或造血微环境损伤 性血液病。
粒细胞缺乏症又叫白细胞减少症,本病多起病缓慢，慢性 经过，少数可无症状。患者可有头晕、乏力、头痛、四 肢无力、食欲不振、低热、失眠等；可有易感染倾向， 如易患疖痈、肺炎、尿路感染，甚至发生败血症等。
抗菌谱与磺胺相近,它能抑制二氢叶酸还原酶,而磺胺药 则抑制二氢叶酸合成酶。两者合用,可使细菌的叶酸代谢 受到双重阻断,因而可大幅度提高抗菌活性(可增效数倍 至数十倍),并可减少抗菌菌株的出现。
内服吸收快而完全,体内分布广,组织中浓度一般比血中 浓度高,肺、肾中浓度分别比血中浓度高17倍和10倍,胆 汁中浓度分别比血中浓度高2.5倍和2倍。
羊一次静注107mg/kg后,体内残留消除很快,休药5天组织(肉、 肝、肾、脂肪)中残留量低于0.1mg/kg。
鱼体内的代谢物主要为N-乙酰磺胺二甲嘧啶,少量为羟基化 衍生物和酰基化衍生物。
磺胺二甲氧嘧啶
主要用于防治犊牛、鸡、兔球虫病,亦用于防治鸡传染性 鼻炎、禽霍乱、卡氏住白细胞原虫病、猪狗的弓形体病 及诺卡菌病。
奥美普林的最高平均残留量:血浆1.5mg/kg、肌肉 3.7mg/kg、肝9.1mg/kg、肾166.0mg/kg;消除半衰期:血浆 63h、肌肉143h、肝95h、肾410h。
磺胺喹恶啉
别名磺胺喹沙啉,为类白色或淡黄色粉末,无臭,不溶于水, 溶于甲醇、乙醇,易溶于碱性溶液。
磺胺喹恶啉属磺胺类药兼有抗球虫作用,广泛用于养禽业, 治疗鸡鸭的家禽霍乱及球虫病。
猪按规定剂量肌注后3~10天,组织中未检出残留量。连续 饲喂10日剂量5mg/(kg·d),休药3天只有一个肌肉样品能检 测到残留量34µg//kg(方法检测限15µ酽kg),休药5天有两个 皮/脂肪样品的残留量为31µg/kg,休药10天为27µg/kg。
三甲氧苄啶
鱼体内吸收和消除取决于水温。鳟鱼喂服20mg/kg,15℃ 水温、用药后6h内血浆中可以检测到残留量,但7℃水温、 血浆中检测不到残留量,即使延长到12h也是如此。鱼体 内肾中残留量最高,皮和血液次之。血药浓度是肌肉浓度 的2~3倍。消除半衰期约24h。主要通过胆汁排泄。
磺胺二甲氧嘧啶
蛋鸡饮服1.0g/L/日或0.5g/L/日,连续5日,蛋中有较高的残留, 蛋清和蛋黄的最高残留可达30mg/kg和9mg/kg;残留降至 0.1mg/kg,蛋清需体药4~6天,蛋黄需休药7天。
与奥美普林(ormethoprim)联用,三文鱼用药后3~8天,两种 药物在血浆和组织中达到一个相对稳定的残留量。磺胺二 甲氧嘧啶的最高平均残留量:血浆14.3mg/kg、肌肉 17.7mg/kg、肝7.4mg/kg、肾6.8mg/kg;消除半衰期:血浆⒛ h、肌肉19h、肝62h、肾45h。
根据肠道吸收的程度和临床用途,分为内服难吸收用于肠 道感染的磺胺药、外用磺胺药、内服易吸收用于全身感 染的磺胺药三大类。
除磺胺脒(琥磺胺噻唑、酞磺胺噻唑现已少用)用于肠道 感染、磺胺嘧啶银局部外用外,其他均用于全身性细菌感 染,某些品种亦用于弓形体病、球虫病和住白细胞原虫病 的治疗。
不同的磺胺药抗菌作用强度不同,一般依次为磺胺-6-甲 氧嘧啶(SMM)>磺胺甲基异恶唑(SMZ) >磺胺异恶唑 (SIZ)>磺胺嘧啶(SD) >磺胺二甲氧嘧啶(SDM)>磺胺对甲 氧嘧啶(SMD) >磺胺二甲嘧啶(SM2′) >磺胺邻二甲氧嘧 啶(SDM′)。
BQP抗菌谱与其他磺胺类药相近,同时又是磺胺等抗菌 药物的增效剂。主要用于牛的肺炎及肠炎、腐蹄病、脐 部感染、感染性外伤、感染性角膜结膜炎、非泌乳期牛 的木舌病和放线菌下颌肿块;猪胃及肠道感染、胸膜肺 炎、乳腺炎、子宫炎、无乳综合症等;狗的泌尿系、呼 吸系、胃肠道及皮肤感染。