植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC比色法)
脱氢酶测定方法
脱氢酶测定（比色法）（关松荫）试剂1）1% TTC2）CaCO33) 甲醇4）甲臢（TPF）的标准溶液：用TTC还原配制。
TTC标准溶液：称取50mg已烘干的TTC于50ml的容量瓶中，加水定容，得1mgTTC/ml的标液（1000ug/ml）。
标准曲线的绘制：将TTC标准溶液配制成2、4、6、8、10、20、30 ug/ml还原，显色后在分光光度计上于的三苯基四唑氯化物溶液，分别加10mg NaHSO3460nm处比色测定并绘制标准曲线。
操作步骤取20g土壤于50ml三角瓶中，加0.2g碳酸钙。
混匀后加2ml1%三苯基四唑氯化物，再加水至最大持水量的90%（5d），在恒温恒湿培养箱中（30℃，相对湿度70%）培养24h。
培养结束后，加25ml甲醇，振荡5min，过滤。
再用甲醇多次洗涤漏斗上的土壤，直至获得无色滤液。
合并滤液和洗液并定容50ml或100ml，在分光光度计上于460nm处比色（以甲醇做空白）。
不加土及TTC做一个空白对照。
结果计算酶活性表示：根据减去空白对照的光密度值查标准曲线即可求出产生的三苯基甲臢的量，该量（ug/g干土）即表示脱氢酶的活性。
土壤脱氢酶活性（ugTPF/g干土）=C*V/dwt 或根据形成1mg三苯基甲臢需要150.35ul氢，也可以转移氢的体积表示。
X=av*150.35式中：C——滤液中TPF的量（ug/ml）（由标曲查知）a——1ml滤液中TPF的毫克数（查标准曲线）V——滤液体积（ml）dwt——烘干土的质量（g）150.35——将TPF量换算成氢的体积（ul）的系数。
植物根系活力实验报告
一、实验目的通过本次实验，我们旨在探究植物根系活力的影响因素，并运用TTC法测定根系活力，以了解根系对外界环境的适应能力及对不同环境因素的响应。
二、实验原理植物根系活力是指根系吸收水分和养分的能力，它是植物生长和发育的重要指标。
TTC法（氯化三苯基四氮唑法）是一种常用的测定根系活力的方法。
该法基于根系活力与细胞呼吸作用的关系，通过测定根系在特定条件下对TTC的还原程度来评估其活力。
三、实验材料与方法1. 实验材料- 植物材料：小麦、玉米、大豆等- 实验试剂：TTC溶液、蒸馏水、盐酸、氢氧化钠等- 仪器设备：分光光度计、烘箱、天平等2. 实验方法（1）根系活力测定- 将植物根系洗净、烘干，称重后剪成1-2厘米的小段。
- 将根系放入装有适量TTC溶液的试管中，在25℃下避光培养24小时。
- 用蒸馏水冲洗根系，去除多余的TTC，然后用盐酸和氢氧化钠调节pH值至中性。
- 将根系放入烘箱中，在80℃下烘干至恒重。
- 称量烘干后的根系重量，计算根系活力。
（2）不同环境因素对根系活力的影响- 将植物根系分别置于不同温度、光照、土壤水分等条件下培养，然后按照上述方法测定根系活力。
四、实验结果与分析1. 不同植物根系活力的比较实验结果显示，小麦、玉米、大豆等植物的根系活力存在差异。
其中，小麦的根系活力最高，玉米次之，大豆最低。
2. 不同环境因素对根系活力的影响（1）温度：在一定范围内，随着温度的升高，根系活力逐渐增强。
但当温度过高时，根系活力会下降。
（2）光照：光照强度对根系活力有显著影响。
在一定光照强度范围内，根系活力随光照强度的增加而增强。
但当光照强度过高时，根系活力会下降。
（3）土壤水分：在一定土壤水分范围内，根系活力随土壤水分的增加而增强。
但当土壤水分过多或过少时，根系活力会下降。
五、结论本次实验通过TTC法测定了不同植物根系活力，并分析了温度、光照、土壤水分等环境因素对根系活力的影响。
结果表明，根系活力受多种因素影响，其中温度、光照、土壤水分等因素对根系活力的影响较为显著。
根系活力的测定
根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、 原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3.1％TTC溶液 准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸 用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸 称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
三、实验步骤（1）TTC标准曲线的制作 取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
实验四 根系活力的测定
实验四根系活力的测定一、意义根系是植物对水分和矿质营养的主要吸收器官，同时又是植物体中重要物质如氨基酸、激素等物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平等具有重要的实际意义。
在科学研究中常把根系的呼吸强度、阳离子代还量（CEC）、对有色物质的吸附量和ATP酶的活性等作为作物根系活力的指标。
二、测定原理TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯基甲月朁（TTF）。
具有活力的组织和细胞在呼吸作用中，脱氢酶催化底物氧化脱氢产生NADH、NADPH 等还原性物质，当TTC渗入组织或细胞时呼吸过程产生的还原物质可将其还原成TTF（红色），组织或细胞被染成红色。
死细胞无呼吸，不发生这样的氧化还原反应。
应用这一原理，可根据组织或细胞染色情况来检测种子、花粉、根系等的活力。
植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到加强；而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制。
还原强度（即根系活力强弱）可用TTF的生成量来表示。
TTF在485 nm 处有吸收峰，用乙酸乙酯提取后测定OD485，通过标准曲线计算TTF的生成量，用单位时间内单位根重产生的TTF表示根系的活力。
三、仪器设备1.分光光度计；2.分析天平（感量0.1mg）；3.托盘天平（感量0.1 g）；4.温箱；5.研钵：1套；6．4 cm漏斗：2 个；7.量筒10 mL：1 个；8.刻度移液管：0.5 mL、2 mL、5 mL；9．10 mL容量瓶（或10 mL具塞刻度试管）：8个；10．试管架：1 个；11.石英砂适量；12.高型称量瓶（30×60 mm）：2 个。
四、试剂1.乙酸乙酯（分析纯）；2.连二亚硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末；3．1 %TTC溶液：准确称取TTC 1.0000 g，溶于少量水中，定容到100 mL，用时稀释至需要浓度；4．0.1 mol ·L -1 pH 7.5磷酸缓冲液；5．1 mol ·L -1 硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL；6．0.4 mol ·L -1琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL。
ttc法测定根系活力实验报告
ttc法测定根系活力实验报告实验报告：TTC法测定根系活力一、实验目的通过TTC法测定根系的活力，了解植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应。
二、实验原理TTC(2,3,5-三苯基四氮唑氯化物)法可用于测定细胞线粒体等颗粒物质的活力。
根在呼吸作用下，产生的CO2可以和TTC反应生成甲烷基红色染色物质，反应方程式如下：TTC + 2e- + 2H+ → 染色物质染色物质色深程度与细胞活力成正比，因此可以用染色物质的颜色来评估样品的活力。
三、实验步骤1. 准备材料：TTC试剂、木瓢、淀粉液、滴定管、97%乙醇、植物根系样品。
2. 切取根系样品，在温水中清洗后，将样品放置于淀粉液中进行苏木素染色。
清洗样品的目的是除去外表的污垢和细胞内的胶质物，以避免影响反应的准确性。
在样品染色前，淀粉液要先煮沸，以破坏淀粉酶。
3. 若样品过大，可以在放入淀粉液前用刀片切成较小片段。
4. 取出染色后的样品，用纸巾吸干淀粉液。
避免在植物根系上留下过多的染料，以免干扰实验结果。
5. 将植物根系样品放入烟花瓶内，并加入0.1%TTC试剂，再加入适量的滴定水保持水位2cm左右。
盖住烟花瓶口，避免空气进入。
6. 放置到37℃恒温实验箱中培养30分钟后，加入5～10mL的1N HCl，使混合液呈现明显的色泽变化。
7. 用滴定管加入97%乙醇混合液，振荡均匀。
8. 在另一试管中取相同量的HCl和TTC，作为对照。
9. 用比色计或分光光度计测定样品和对照试管的吸光度值，计算出样品的活力。
四、实验结果本次实验得出了样品的活力，数据如下表所示（数据为典型数据，仅供参考）：根系样品过氧化氢消耗量（mg）活力（%）样品1 3.2 68样品2 2.5 57样品3 3.8 76五、结论通过TTC法测定根系活力，我们可以对植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应有一个更加全面的了解。
本次实验得出的活力数据，说明样品的抗逆能力较强，在不同环境下能够保持一定的生命活力。
植物根系活力的测定
2. Evans blue stranining（伊文思蓝）
是一种检测活细胞的染料。其原理在于Evans blue不能透 过健康细胞的完整细胞膜，但当细胞死亡时能够渗入破损 细胞膜染色
图2 不同伤根处理后根尖Evans blue 染色图 Fig2 The cell viability test determined by Evans blue staining in roots tips
定量测定：6ml 95％乙醇，盖上盖子，于热水浴中提 取5min。冷却定容至10ml，于600nm处测定吸光值。 计算根系相对活力（可不做）。
3. -萘胺法
A、B两组分别称取0.30g根段放入15ml试管（标号为A、 B），加入40ppm -萘胺和磷酸缓冲液的等量混合液
10ml，在25ºC反应1-2hr。
实验11 TTC、萘胺法及 Evans-blue染色法比较测
定植物的根系活力
【前言】
植物根系是水分和矿质营养的主要吸收器官，也 是多种物质（如氨基酸、植物激素、生物碱等） 的同化、转化或合成的重要器官，因此，根系的 生长发育状况和根系的活力强弱将直接影响植物 的生命活动，根系活力是植物生长的重要生理指 标之一。
A、B两组分别称取0.30g根段放入15ml试管（标号为 TA、TB），在试管中加入去离子水至10ml，再分别 加入3ml 0.6％TTC，混匀，在37ºC水浴中反应1hr。
加入0.5ml 2M H2SO4终止反应，然后排干试管中溶液， 用纯水充分冲洗，加入6ml 95％乙醇，盖上盖子，于 热水浴中提取5min。
对氨基苯磺酸+ 2H+ +NO2- + -萘胺 → 对-苯磺酸-
偶氮--萘胺
植物根系活力的测定（ttc法）
实验概要植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲瓒，生成的三苯甲瓒比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
主要试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3. 1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
主要设备1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
实验材料水培小麦根系。
实验步骤1. 定性测定1）配制反应液把1％TTC 溶液、0.4 mol／L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4 比例混合。
2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
植物根系活力的测定
植物根系活力的测定实验5植物根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。
2.次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。
3.1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL用时稀释至需要的浓度。
4.磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。
5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL6.0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。
（三）仪器设备小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1mg），电子顶载天平（感量0.1g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤1.定性测定（1）配制反应液把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无色 溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的 三苯基甲替（TTF），如下式：
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所 引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹 果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所 以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力 的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套； 漏斗； 量筒； 移液管；试管； 刻度试管 10ml； 试管架； 药勺； 石英砂适量； 烧杯； 小培养皿；洗瓶。
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h= 四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频
保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配 现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
二、材料、设备仪器及试剂
（三）试剂： 1. 乙酸乙酯 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉） 3. 1mg/ml的TTC溶液： 4. 磷酸缓冲液（66mmol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸： 6. 0.4mol/L琥珀酸：
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入 三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处 放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明 显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
ttc法测定植物根系活力的原理
ttc法测定植物根系活力的原理植物根系活力是指植物根系的生长和发育能力，是植物生长的重要指标之一。
根系活力的高低直接影响着植物的生长和发育状况，因此对于研究植物根系活力的测定方法具有重要的意义。
目前，有许多方法可以用来测定植物根系活力，其中一种常用的方法是 TTC 法（Triphenyltetrazolium chloride method）。
TTC 法是一种常用的生化试验方法，通过测定植物根系细胞内还原酶的活性来间接反映根系的活力水平。
TTC 法的原理是基于细胞内的还原酶对 TTC 的还原作用。
TTC 是一种无色的化合物，在细胞内被还原为红色的三苯基四唑盐（Tetrazolium salt），这种红色产物在细胞内会积累并沉积在细胞质中，形成红色颗粒。
这些红色颗粒的数量和颜色的深浅可以反映细胞内还原酶的活性水平，从而间接反映出植物根系的活力。
TTC 法的具体操作步骤如下：1. 准备 TTC 溶液：将 TTC 溶解在缓冲液中，得到一定浓度的TTC 溶液。
一般来说，TTC 的最佳浓度为 0.5%。
2. 取一定量的植物根系样品：将待测植物的根系样品取出，并将其洗净去除表面污物。
3. 处理样品：将根系样品切碎，并加入适量的 TTC 溶液中，使样品充分浸泡在 TTC 溶液中。
4. 孵育样品：将处理后的样品置于一定温度下孵育一段时间，一般常温孵育 2-4 小时。
5. 观察样品：观察样品的颜色变化情况。
如果样品呈现红色或深红色，说明根系细胞内还原酶活性较高，根系活力较强；如果样品呈现浅红色或无色，说明根系细胞内还原酶活性较低，根系活力较弱。
通过上述步骤，我们可以利用 TTC 法测定植物根系活力。
需要注意的是，在进行实验时要注意控制好各项实验条件，如温度、时间和浓度等，以确保实验结果的准确性和可靠性。
TTC 法具有操作简便、结果直观等优点，因此被广泛应用于植物生理学和农业科学研究中。
通过测定植物根系活力，可以评估植物对环境逆境的适应能力、抗逆性以及生长发育状态，为研究植物生长机理、筛选抗逆品种以及优化农业生产提供重要参考。
索莱宝植物根系活力检测试剂盒(TTC法)说明书
植物根系活力检测试剂盒（TTC 法）说明书可见分光光度法货号：BC5270 规格：50T/24S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 试剂一A 粉剂×2瓶 2-8℃保存 试剂一B 粉剂×2瓶 2-8℃保存 试剂二 液体70 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂三 粉剂×3支常温保存 试剂四 液体130 mL×1瓶（自备）2-8℃保存 标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂一：临用前取一瓶试剂一B 加入一瓶试剂一A 中，加入30mL 试剂二溶解。
现用现配。
配制好后置于2-8℃保存，一周内使用，若出现红色，则不能使用。
2、 试剂四：乙酸乙酯，自备。
提供一60mL 棕瓶3、 标准品：临用前加入1mL 试剂二，充分震荡混匀, 即10mg/mL TTC 标准液。
2-8℃可以保存1周，若出现红色，则不能使用。
产品说明：根系是植物吸收水分和矿质营养的主要器官，同时又是植物体中重要物质如氨基酸、激素等物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平等，根系活力具有重要的实际意义。
TTC 可被氢还原成不溶性的红色三苯基甲臜（TTF ），TTF 在485nm 处有吸收峰。
当TTC 溶液渗入到植物根部组织时，呼吸过程产生的还原物质可将其还原成TTF(红色)，植物根部组织被染成红色。
根系活力强弱可用TTC 的还原量来表示。
此方法检测的根系活力即植物根系的脱氢酶活性。
TTC TTF （485nm ）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、乙酸乙酯，冰和蒸馏水。
(完整版)植物生理学实验氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
四、结果计算
四氮唑还原强度： mg/g(根鲜重)/h=
四氮唑还原量（mg）/ 根重（g）×时间(h)
五 注意事项
分光光度计的使用：看视频 保险粉的量要过量。 乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。 T T F暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配
现用。
标准曲线制作
定量试验
定性实验
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸乙 4 酯（ml)
OD(485 nm)
2 3 4 5 6 空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
实验4
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系 活力
实验目的
根系活力是衡量根系活动能力强弱的 重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿 质元素的能力大小，甚至可以反映地上 部分的营养状况以及产量水平。学会利 用TTC法测定根系活力。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成为无 色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水 的三苯基甲替（TTF），如下式：
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
植物生理学实验 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化， 所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根 所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、 苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。 所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系 活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料： 玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 天平； 恒温箱1台； 研钵1套；
三、实验步骤
2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作
取1mg/mL的T T C 2mL于100mL容量瓶中，加入2勺 （黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右 剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度， 即成TTF标准液(20 µg /mL )。
按下表制作 T T F标准曲线。以空白作参比，在 485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。
三、实验步骤
1．定性测定(教师做演示实验） （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和 磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三 角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放 1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显 地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
试管编 1 号
TTF含量 0 (ug)
TTF
0
(ml )
乙酸空白 样品 20 40 60 80 100 12345
9 8 7 6 5 ｝10 10
三、实验步骤
（2）.样品的提取及测定 样品提取：称取根样品0.5g，放入小培养皿，加入
0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把 根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加 入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。（与此同时做一空 白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上）。
根系活力的测定(ttc法)实验综述报告
根系活力的测定(ttc法)实验综述报
告
TTC法是一种用来衡量根系活力的有效实验方法，在许多现有的测量植物生长
与发育状况中已被广泛应用。
它是对植物源区域生长活力和发育状况的直接反映，主要通过检测植物根系中是否存在勃起层来量化测量根系的活力。
TTC法的实验步
骤如下：
（1）前期备料：从植物根系挖取一定数量的根系，将其浸入TTC溶液中，然后放
置在25℃恒温环境中诱导根系活力。
（2）TTC测试：以半芯径0.5厘米为主，采用2％——4％TTC溶液测定植物根系
组织的活力，其原理就是那些有活力的根系细胞被黑色染料染色，而死亡的细胞则没有。
（3）固定检测：根据TTC测试结果，将TTC活力分为正活力、弱活力、失活力等
几种，进而检测植物的生长发育状况。
TTC法的实施，可以获知植物根系的情况，也可以作为植物如何应对显著条件
的变化的有效测量依据，因此被广泛应用于植物的生长、发育状况的评价中。
然而，TTC法也有一定的局限性，比如，整个TTC实验过程耗时较长，容易产生假阴性结果，可能误报出尚未出现生长力衰弱的根系组织。
总之，TTC法是衡量植物根系活力的一种有效实验方法，它可以为决定环境要
素对植物生长发育状况的影响提供重要参考意见，是植物学家和拟研究环境因子与植物生长发育关系的科学家的重要研究工具。
但TTC法也具备一定的局限性，在实验步骤的实施中，需要注意控制各项参数，以准确获取植物根系活力的信息。
根系实验报告
一、实验目的本次实验旨在通过测定植物根系活力，了解不同环境因素对根系活力的影响，从而为提高植物生长和产量提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）植物：小麦、玉米、大豆等（2）实验容器：塑料盆、塑料杯等（3）土壤：富含有机质的壤土（4）实验试剂：TTC（2,3,5-三苯基氯化四氮唑）等2. 实验方法（1）实验设计：采用完全随机区组设计，将实验分为对照组、干旱组、盐害组、氮肥过量组、氮肥不足组等，每组设置多个重复。
（2）根系活力测定：采用TTC法测定根系活力。
具体操作如下：①将植物根系洗净，用滤纸吸干水分；②将根系浸泡在TTC溶液中，置于黑暗条件下反应24小时；③取出根系，用蒸馏水冲洗，置于显微镜下观察根系染色情况；④计算根系活力：根据根系染色程度，将根系活力分为5个等级，分别为0-4级。
三、实验结果与分析1. 不同环境因素对根系活力的影响（1）干旱组：与对照相比，干旱组根系活力明显降低，根系染色程度较低，说明干旱对根系活力有显著抑制作用。
（2）盐害组：与对照相比，盐害组根系活力降低，根系染色程度较低，说明盐害对根系活力有显著抑制作用。
（3）氮肥过量组：与对照相比，氮肥过量组根系活力降低，根系染色程度较低，说明氮肥过量对根系活力有显著抑制作用。
（4）氮肥不足组：与对照相比，氮肥不足组根系活力降低，根系染色程度较低，说明氮肥不足对根系活力有显著抑制作用。
2. 不同植物根系活力比较（1）小麦根系活力：在干旱、盐害、氮肥过量、氮肥不足等条件下，小麦根系活力均低于玉米和大豆，说明小麦根系对不良环境因素的抵抗能力较弱。
（2）玉米根系活力：在干旱、盐害、氮肥过量、氮肥不足等条件下，玉米根系活力均高于小麦和大豆，说明玉米根系对不良环境因素的抵抗能力较强。
（3）大豆根系活力：在干旱、盐害、氮肥过量、氮肥不足等条件下，大豆根系活力均高于小麦和玉米，说明大豆根系对不良环境因素的抵抗能力最强。
四、结论1. 干旱、盐害、氮肥过量、氮肥不足等环境因素对植物根系活力有显著抑制作用。
植物根系活力的测定——TTC法
植物根系活力的测定——TTC法TTC即氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-Tripheyl Tetrazolium Chloride)，又可称为红四氮唑，是一种氧化还原物质。
当TTC溶于水后，溶液呈现无色透明状，但当TTC被根系细胞内的脱氢酶还原时，其产物便呈红色，名为三苯甲腙(TTF)。
TTF比较稳定，不溶于水且不易被空气中存在的氧气氧化。
利用氯化三苯基四氮唑(TTC) 的还原能力，在一定程度上能够反映出植物根系活力的强弱如何。
植物根系的呼吸速率越高代表其活力越强，因此根系中TTC还原的量就愈多；相反，当根系呼吸速率变弱时，其还原的量就相对减少。
一、实验器材分光光度计；恒温箱；容量瓶；刻度试管；研钵。
二、试剂配制1. 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，俗称保险粉；2. 乙酸乙酯(分析纯)；3. 石英砂(适量)；4. 0.4mol·L-1琥珀酸：使用电子天平称取4.72g的琥珀酸，使其溶解在盛有约90mL的蒸馏水中，然后定容至100mL(不需配制)；5. 4g·L-1 (0.4%) TTC：使用电子天平准确称取TTC试剂1.0g，将其溶解在盛有适量蒸馏水的小烧杯中，用玻璃棒充分搅拌均匀，倒入250mL棕色容量瓶定容至刻度，现用现配；6. pH=7.0 66mM磷酸缓冲液：由A液和B液混合而成，A液：使用电子天平准确称取1.1876g Na2HPO4·2H2O(分子量177.99 g·moL-1) 或2.3896g Na2HPO4·12H2O(分子量358.14 g·moL-1)，将其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
B液：在电子天平上准确称取0.9078g的KH2PO4，使其溶解在蒸馏水中，定容至100mL。
实验用pH=7.0 66mM磷酸缓冲液可取A液60mL再加入B液40mL混合；7. 1mol·L-1 H2SO4：戴上手套后小心量取5.435mL 98%的浓硫酸，加入盛有蒸馏水的烧杯中(用玻璃棒边搅拌边加入)，冷却后稀释至100mL。
生理实验02-TTC法测定根系活力+光合因子
品抽提液的吸光值。
7
五、原始数据 六、结果计算
根据样品的A485，参照标准曲线或回归方程先计算出X（mg）
，然后按下列公式计算根系还原TTC的强度，并代表根系活力。
TTC还原强度[mg/(g· h)]=
X W· t
W：样品鲜质量（g）；t：反应时间（h）。
12
四、实验步骤
1. 样品准备
选取功能叶片，Байду номын сангаас中脉—→打取叶圆片约50片—→加水淹没叶片
后，放入减压装置，减压至叶片完全下沉（呈半透明状）—→置于暗
处备用。 取100mL三角瓶4个，编号，在1号瓶中加入新制的无CO2水 40mL，再向2、3、4号瓶中各加入40mL 0.5%的碳酸氢钠溶液。
13
在2号瓶上用较厚白纸遮光，3号瓶放在冰浴中降温至10℃左右
8
七、分析与讨论
结合不同处理下根系活力大小以及反应过程中三苯
甲腙在根尖上“着色”部位的差异进行分析。
9
实验02-2 环境因子对光合作用的影响
(真空渗入法)
一、实验目的
直观了解光照强度、温度和二氧化碳浓度对光合作
用强度（速率）的影响。
10
二、实验原理
真空渗入法可使叶肉细胞间隙充满水分而使叶片下沉。
实验02-1 根系活力的测定 (TTC法)
一、实验目的
理解植物根系活力的内涵；掌握TTC法测定根系活
力的原理与方法。
1
二、实验原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）的标准氧化电位为 80mV的氧化还 原物质，获得氢的能力强。溶于水为无色溶液，还原后即生成红色 而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。
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植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC 比色法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。
TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为80mV 的氧化还原色素，溶解于水为无色，可以检测根系活力。
Leagene 植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC 比色法)检测原理是在弱酸性条件下，以TTC 为底物，植物根系中脱氢酶能够还原TTC 生成红色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，生成的TTF 比较稳定(不会被空气中的氧自动氧化)，于分光光度计或酶标仪检测吸光度，计算TTC 还原量，以该还原量表示脱氢酶活性，并作为植物根系活力的指标。
该试剂盒主要用于定量测定植物根系中根系活力或脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管和(或)容量瓶
3、乙酸乙酯
4、滤纸
5、恒温箱或水浴锅
6、研钵或匀浆器
7、比色杯、96孔板
8、分光光度计、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、配制TTC Assay buffer 工作液：取TTC 完全溶解于TTC Assay buffer 中，即为TTC
Assay buffer 工作液，即配即用，避光保存。
编号
名称
TP102340T Storage
试剂(A):TTC
2×0.5g RT 避光试剂(B):TTC Assay buffer 2×250ml
RT 避光
使用说明书
1份
2、制作TTC标准曲线：取TTC Assay buffer工作液置于10ml离心管或容量瓶，加入少
许NaS2O4粉末(一般2mg左右，各管量一致)，混匀，产生红色的TTF，用乙酸乙酯补加至10ml，混匀。
按下表，分别取上述溶液0.25、0.5、1、2、3ml置于离心管或容量瓶中，用乙酸乙酯补加至10ml，即TTF含量为25μg、50μg、100μg、200μg、300μg/10ml的系列标准溶液，以乙酸乙酯为空白调零，以分光光度计或酶标仪测定吸光度，绘制标准曲线。
加入物(ml)12345
TTC Assay buffer工作液0.250.5123
乙酸乙酯9.759.5987
相当于TTF含量(μg/10ml)2550100200300
3、准备样品：取植物须根系，洗净，用滤纸吸干，完全浸没于TTC Assay buffer工作液，
避光孵育，加入TTC终止液。
空白对照：先加入TTC终止液，加入干净的植物须根系，完全浸没于TTC Assay buffer工作液，避光孵育，以次液作为空白对照。
4、加样：把上述根系取出，滤纸吸干水分，放入研钵或匀浆器中，加入乙酸乙酯，充分研
磨或匀浆，以提取出TTF。
把红色提取液转移至离心管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2-3次，再将洗涤液一并转移至离心管，最后补加乙酸乙酯。
5、根系检测：以空白调零，比色杯光径1.0cm，以分光光度计或酶标仪测定TTF吸光度。
计算：
以系列标准溶液TTF浓度(25μg、50μg、100μg、200μg、300μg10ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制TTF标准曲线，根据TTF与吸光度计算回归方程，根据回归方程计算出待测样品的四氮唑还原量，即为根系活力或脱氢酶活性。
根系(脱氢酶)活力(mg/g·h)=C×V/(1000×W×t)
式中：C=根据标准曲线查得的样品提取液的浓度(μg/ml)
V=样品提取液总体积(ml)
W=植物须根系的重量(g)
t=孵育时间(h)=1(h)
注意事项：
1、配制好的TTC Assay buffer工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。
2、提高温度可以增加反应速度，但会降低重氮盐的稳定性，所以反应需在相同条件下进
行。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应注意酶标板每孔最大检测
体积。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004LB培养基
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。