美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
贝克曼cytoflex参数
贝克曼cytoflex参数摘要：1.贝克曼cytoflex 简介2.贝克曼cytoflex 参数详解3.贝克曼cytoflex 参数的应用领域4.贝克曼cytoflex 参数的优缺点分析5.总结正文：【贝克曼cytoflex 简介】贝克曼cytoflex 是一款流式细胞仪，广泛应用于细胞生物学、免疫学、生物医学等领域。
其独特的设计理念和高精度的测量技术，使得它在科研和临床检测中具有重要的作用。
【贝克曼cytoflex 参数详解】贝克曼cytoflex 的参数主要包括以下几个方面：1.激光器参数：贝克曼cytoflex 使用的是空气冷却式激光器，具有高效率、低噪声的优点。
其激光波长范围覆盖了350-800 nm，可以满足大部分细胞测量的需求。
2.检测器参数：贝克曼cytoflex 采用的是光电二极管阵列检测器，具有高灵敏度和快速响应的特点。
其检测范围覆盖了280-850 nm，可以实现对细胞各个通道的精确测量。
3.细胞分类参数：贝克曼cytoflex 具有多种细胞分类模式，可以根据细胞大小、形状、荧光强度等特征对细胞进行分类。
4.数据处理参数：贝克曼cytoflex 具有强大的数据处理功能，可以对测量得到的数据进行实时分析和处理，提供各种统计报表和图形。
【贝克曼cytoflex 参数的应用领域】贝克曼cytoflex 的参数在多个领域都有广泛的应用，包括：1.基础科研：用于研究细胞的生长、分化、凋亡等过程。
2.临床检测：用于检测血液、淋巴液等体液中的细胞数量和功能状态。
3.药物研发：用于评估药物对细胞的影响和药物筛选。
【贝克曼cytoflex 参数的优缺点分析】贝克曼cytoflex 的参数具有以下优点：1.高精度：贝克曼cytoflex 使用的是高精度的激光器和检测器，可以提供准确的测量结果。
2.高效率：贝克曼cytoflex 具有多种细胞分类模式，可以快速对细胞进行分类和分析。
3.高灵活性：贝克曼cytoflex 的参数可以根据实际需求进行调整，满足不同场景的需求。
贝克曼库尔特FC500 日常操作流程
FC500 日常操作流程开机前之准备补充鞘液（至8~9分满）并倒去废液瓶中之液体。
开机打开电源箱前门，按ON按钮。
依一般程序开启您的计算机进入WINDOWS界面，点选桌面上的图标，即可进入软件。
样本检测1．仪器光路和流路的检测把QC FLOW-CHECK的方案拖到工作区内。
在试管中加5滴FLOW-CHECK微球和500ul的PBS，混合后上样检测，收集5000个颗粒停止。
（蓝光、红光用不同的微球）如果HPX-CV< 3，表明仪器状态好，可以检测样本。
如果HPX-CV>3, 表明流路有气泡或堵塞，请按工具栏中的键排气泡。
2．检测样本：把所需的方案拖至工作区内。
上样已制备好的样本，收集至一定的细胞数，按工具栏上的即停止键，停止收集。
按工具栏上图标，保存数据。
3．分析数据：点选桌面上的图标，即可进入软件。
按工具栏上图标，打开数据，进行分析即可。
清洗，关机1. 准备5%漂白水1 管和双蒸水3管。
2. 点击工作区右侧的工具栏中的图标后，把CLEANING PANEL拖至工作区下方。
依次把一管漂白水和3管双蒸水放到MCL转盘的1，2，3，4号位，点击中的键，开始清洗。
3. 点击工具栏上的和图标，在真空管中加满双蒸水，分别放到MCL转盘的1，2 号位。
4 先用50%漂白液，之后用70%酒精清洗样本台周围，特别要注意样本台和样本针探头。
6 将装有2ml双蒸水的试管MCL转盘的1号位。
7 按下软件右上角的关闭软件。
8．点选桌面上的CXPOFF图示，您会听到机器关闭的声音。
9．打开电源箱前门, 按OFF按钮。
10．正常程序关掉电脑和打印机，显示器。
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）产品型号：Cell Lab Quanta SC当前价格：0.00元产品数量：0新旧程度：全新有效期至：0000-00-00所在地：产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等详细信息仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。
但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。
在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。
75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。
淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。
对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。
其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。
几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。
但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。
大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。
抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。
贝克曼库尔特流式细胞仪临床应用(精选)PPT文档25页
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
贝克曼库尔特流式细胞仪临床应用（精选） 4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
25
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
流式细胞术(贝克曼)
通过将流式细胞术与基因组学、蛋白质组学等技术相结合， 未来有望实现个体化医疗的精准诊断和治疗。这将为患者提 供更加定制化的治疗方案，提高治疗效果和生存率。
THANKS
感谢观看
血液学研究
造血干细胞研究
利用流式细胞术研究造血干细胞的自我更新、分化等 过程，有助于血液疾病的诊断和治疗。
白血病分型与诊断
通过流式细胞术对白血病细胞进行分型和鉴别，有助 于白血病的诊断和治疗。
红细胞与血小板检测
利用流式细胞术检测红细胞和血小板的数量和质量， 有助于贫血和出血性疾病的诊断和治疗。
04
流式细胞术的优缺点
优点
快速
灵敏度高
流式细胞术可以在短时间内处理大量样本 ，提高了检测效率。
流式细胞术能够检测到低浓度的细胞，灵 敏度较高。
多参数分析
自动化程度高
流式细胞术可以对细胞进行多参数分析， 包括细胞表面抗原、细胞内蛋白质和DNA 等。
流式细胞术通常采用自动化仪器进行操作 ，减少了人为误差和操作时间。
发展历程
20世纪50年代
流式细胞术的原理被提出，并开始应用于细 胞计数和大小测量。
20世纪80年代
计算机技术的引入，实现了自动化数据分析。
20世纪70年代
荧光染料和荧光显微镜的引入，使得多参数 检测成为可能。
21世纪
高通量测序技术的发展，推动了流式细胞术 在基因组学和蛋白质组学领域的应用。
应用领域
免疫学研究
用于检测免疫细胞表 面标志物、细胞因子 等，研究免疫细胞的 分化、发育和功能。
血液学研究
用于检测血液细胞， 诊断血液疾病，如白 血病、淋巴瘤等。
肿瘤学研究
用于检测肿瘤细胞的 表面标志物、基因突 变等，为肿瘤的诊断 和治疗提供依据。
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料仪器名称：流式细胞仪生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司使用方法：一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。
Coulter LH750 全自动血细胞分析仪的性能评价
Coulter LH750 全自动血细胞分析仪的性能评价Coulter LH750 是美国贝克曼库尔特公司推出的全自动五分类血细胞分析仪，它可对血液的多种细胞组分(包括白细胞的五种组分)进行定量分析。
该仪器测定速度快、检测参数多、精密度、准确度高，与已知性能的血细胞分析仪相关性好，是一种性能优良的全血细胞分析仪，能够满足临床血液常规与大批量常规标本的检验需要。
来源：COULTER LH 750全自动血细胞分析仪报告内容：31项参数，白细胞分类多维立体图，多个直方图，含义报告，怀疑性报警，幼稚细胞准确的分系报警速度：最高达110个样本/小时组件：LH 750血细胞分析工作站由一台LH 750血细胞分析仪和一台LH 750电脑工作组成。
工作原理：其中红细胞和血小板采用电阻抗检测，血红蛋白采用HiCN 法检测，白细胞则采用VCS结合细胞化学染色技术，经专用的WBC/DIFF 检测通道(流动室)进行测定.主要性能评价：•LH结合了多种当前最新的科学技术，如固态射频技术，智能微数技术，柔变轮廓分类等•白细胞线性在LH 750血细胞分析工作站上扩展为0-400,000细胞/µL，血小板线性扩展到0-3,000,000细胞/µL，线性的扩展消除了人工稀释样本等准备工作；同时，LH 750血细胞分析工作仪对低血小板样本的计数具有行业内最高的准确度•独有无需耗费任何额外试剂的无折返有核红细胞检测功能，报告提供有核红细胞百分比和绝对值，白细胞总数自动校正•体液分析功能，可分析脑脊液、胸水、腹水、关节液等体液•基于VCS技术，结合全新的智能微数技术，先进的非线性柔变轮廓分类及智能动力系统，无需任何额外试剂即可给出的准确的、分系的幼稚细胞报警•专业配套的试剂系统，行业内最低的试剂成本•提供免费的全球实验室间质量保证体系•真正意义上的随机上样，一次上样144个样本•提供以下五种测试组合：- CBC- CBC/DIFF/NRBC- CBC/DIFF/RETIC/NRBC- CBC/RETIC- RETIC Only•全自动网织红细胞功能，提供7项网织红细胞参数•功能强大的千赫兹计算机工作站，奔腾处理器，20G硬盘，大容量存储，提供在线多媒体帮助和培训，远程诊断服务。
CytoFLEX_brochure
研究需求不断发展——CytoFLEX流式细胞仪，以数据引领发展CytoFLEX先进的检测技术，推动前沿探索，使您的研究处于细胞研究领域的最前沿。
CytoFLEX创新性的设计，使其具有卓越的检测性能，从单激光四色至三激光十三色，让您在多色分析中收获颇丰。
CytoFLEX紧凑的尺寸，极低的维护成本，超高的灵敏度和分辨率，全方位引领市场流式细胞仪的创新发展方向，CytoFLEX伴您在研究道路上轻松前行。
摈弃传统光电倍增管（PMT）检测器，采用固体、高效、低噪音光纤二极管阵列检测器（FAPD）设计而成的波分复用（WDM）检测模块，这一创新性改变，带来的是无以伦比的信号分辨率下更为精确的数据，使对稀有细胞和微颗粒的检测水平有了质的飞跃。
同一个文件，更多的数据含量开辟研究道路中的“美洲新大陆”，挖掘细胞分析领域的前沿热点，引领行业发展趋势。
“万众瞩目的性能革新的设计，确保精确的数据超一流的仪器灵敏度，轻松完成实验：“永不止步的探索独家设计的光学模块，革命性地将光学部件和流动室进行整合，这种创新设计使光在传输中的损失降到最低，从而带来最佳的仪器灵敏度。
CytoFLEX 设计紧凑，无论是三激光十三色还是单激光四色的配置，它的极限灵敏度均领先于市场主流流式细胞仪。
碘化丙啶染色的鸡红细胞核实验中完美的线性关系证明CytoFLEX 系统的优秀表现。
数据来源：芝加哥大学 Ryan Duggan 。
CytoFLEX 先进的光学系统使得光损失程度最低，数据分辨率达到最高，为您不断增加的检测带来超高灵敏度。
光路自动校正，保持仪器稳定性，使您轻松获得准确和可重复性的结果可定制的带通滤光片大大扩展了您荧光素的选择范围，凭借405 nm 紫光侧向角散射光参数轻松实现200 nm 微颗粒与噪音信号的鉴别检测精确的数据呈现出对弱阳性信号的强大鉴别，以及阴性和阳性信号的精准区分•••• 活力检测• 细胞增殖• 细胞周期分析• 细胞死亡• DNA 分析• 细菌分析• 酵母和藻类分析• 细胞绝对计数• 7个数量级的超宽动态数据显示范围• FITC < 30 MESF • PE < 10 MESF • 200 nm 微粒检测CytoFLEX 超高的灵敏度以及便捷的升级设计，为您打造任意驰骋的研究空间，一笔对未来的伟大投资，让您能够在立足于当下需求的同时，放心着眼于未来。
流式细胞仪操作规程-SOP
流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
点击
点击
3色
点击
（命名，点击save）画图
此图为CD45圈门
填写Flow-Count的浓度
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
点击
点击
X-Mean=17.1 negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
2.RBC: abnormal
干细胞检测和绝对计数
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
细胞周期分析
2.画图
血小板膜表面抗体测定
红细胞膜蛋白结构测定（红细胞抗体）
粒细胞抗体测定。
Coulter LH 750全自动血细胞分析仪的性能评价-3
Coulter LH 750全自动血细胞分析仪的性能评价摘要目的对Coulter LH 750全自动血细胞分析仪进行性能评价。
方法：按照国际血液学标准化委员会（ICSH）和美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）制定了评价方案为标准进行评价试验。
结果：全血细胞计数线性良好、相关系数达0.999，携带污染率非常低，CBC各参数精密度高（均小于5％）。
与手工法分类白细胞结果相比较，中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞相关性高（分别为0.9905、0.9972、0.9394、0.9904、0.8527）。
对异常标本（幼稚细胞）筛选，检出灵敏度达93.3％，特异性88.9％。
结论：Coulter LH 750血细胞分析仪各方面性能良好，检测结果准确可靠，能够满足临床血液常规的需要。
关键词：Coulter LH 750，全自动血细胞分析仪，性能评价Performance Evaluation of Coulter LH 750 Fully Automatic Haemacytometer Analyzer Xu yong-zhi Xie Zhi-xiong Zhu Xiao-dong (Laboratory Department of the 175th hospital, PLA; Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University, Zhangzhou Fujian 363000,China)AbstractObjective:：To evaluate the performance of Coulter LH 750 Fully Automatic Haemacytometer Analyzer. Methods：The linearity of the analyzer was good, and the correlation coefficient was 0.999.The carryover rate was low. All parameters of CBC were less than 5%.Compared with the microscopy method, Neutrophil, Lymphocyte, Monocytes, Eosnophils and Basophils showed high correlation (the coefficient were 0.9905、0.9972、0.9394、0.9904 and 0.8527). The sensitivity and specificity of screenning for the abnormal samples (juvenile cell) were 93.3 %and 88.9 %.Conclusion：The performance of Coulter LH 750 fully haemacytometer analyzer is good, and the results are reliable. It can meet the needs of clinical full blood routine test.Key Words：Coulter LH 750，Fully haemacytometer analyzer，Performance evaluation目录引言 (1)1.材料与方法 (1)1.1仪器与试剂 (1)1.2标本采集 (1)1.3方法 (1)2.结果 (2)2.1精密度 (2)2.2线性 (2)2.3携带污染率 (3)2.4准确度 (3)2.5 与手工分类结果比较 (4)2.6对幼稚细胞筛选的评估 (4)3.讨论 (5)4.结论 (5)参考文献 (6)致谢 (7)引言Coulter LH 750 是美国贝克曼库尔特公司推出的全自动五分类血细胞分析仪，它可对血液的多种细胞组分（包括白细胞的五种组分）进行定量分析[1]。
贝克曼流式细胞仪原理及软件介绍
90LS Sensor
侧向散射光
Light Scatter Gating
Side Scatter Projection
1000
Scale
1000 200 50 40 20 15 8
200 400
600
100
30
Monocytes Lymphocytes
0
0 200 400 600 800 1000
免疫荧光
免疫荧光 免疫荧光 DNA染色 免疫荧光
橙色
橙红 红 橙红 深红
PerCP
APC
488
633
670
670
5 Color Single Laser (488nm)
FITC/PE/ECD/PC5/PC7
荧光染料比较(平均荧光强度)
Q-Prep / ImmunoPrep 试剂系统
CD8-FITC
荧光染料的特性
•激发波长(EXCITING)
•发射波长(EMISSION)
常用荧光染料的特性
荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) FITC 488 525 用途 免疫荧光 颜色 绿色
PE(RD1)
ECD PeCy5 PI PECy7
488
488 488 488 488
575
620 675 620 755
beckmancoulter流式细胞仪发1947年wallacecoulter发明了库尔特原理用于血细胞分析1953年推出了世界上第一台流式细胞分析仪coultercountermodel1972年推出世界上第一台激光流式细胞仪epicsii1997年推出世界上第一台单激光四色数字化流式细胞仪epicsxlmcl2000年首先将高精度数字化颜色补偿技术adcadvanceddigitalcompensation应用于流式平台引领流式进入全新的全矩阵补偿全自动补偿和脱机补偿时代2003年推出世界上第一台单激光五色的流式细胞仪fc500mcl2005年升级为fc500mpl2006年推出世界上第一台具有ev参数同时进行无成本绝对计数的多功能细胞分析系统quantasc将流式细胞术与库尔特原理完美结合2007年推出mpl进样系统2007年收购dako公司的moflo和cyan使beckman公司成为高端流式市场的领导者2009年推出世界是第一台三激光十色的分析型流式细胞仪galliosnaviosepicsxladcquantasccytomicsfc500beckmancoultercelllabfamilymofloxdpgalliosnavioscyanadpfc500硬件whatflowcytometry
贝克曼cytoflex参数
贝克曼cytoflex参数
（最新版）
目录
1.贝克曼 cytoflex 简介
2.贝克曼 cytoflex 参数分类
3.贝克曼 cytoflex 参数详细介绍
4.贝克曼 cytoflex 参数的应用领域
5.贝克曼 cytoflex 参数的优缺点
正文
贝克曼 cytoflex 是一款流式细胞仪，广泛应用于生物科学和医学研究领域。
它可以对单个细胞进行快速、准确的测量和分析，为研究者提供大量有价值的信息。
为了更好地了解贝克曼 cytoflex，我们需要对其参数有一个全面的认识。
贝克曼 cytoflex 的参数主要分为以下几个方面：
1.激光器参数：包括激光波长、激光功率等，这些参数决定了流式细胞仪可以检测的细胞类型和检测灵敏度。
2.检测器参数：包括检测器类型、检测器灵敏度等，这些参数决定了流式细胞仪可以检测到的细胞信号的强度和准确度。
3.样品处理参数：包括样品稀释、样品温度等，这些参数影响着流式细胞仪的测量结果的准确性和重复性。
4.数据处理参数：包括数据采集速率、数据存储方式等，这些参数影响着流式细胞仪的测量效率和数据质量。
贝克曼 cytoflex 参数的应用领域非常广泛，包括细胞计数、细胞分类、细胞表面标志物检测、细胞凋亡检测等。
不同的应用领域需要不同的
参数设置，研究者需要根据实际需求进行选择。
贝克曼 cytoflex 参数的优点在于其灵敏度高、测量速度快、数据质量好，可以大大提高研究者的工作效率和研究质量。
然而，其也有一些缺点，如设备价格昂贵、操作复杂、需要专业人员进行维护等。
流式细胞仪的概念及其发展历史
1 流式细胞仪的概念及其发展历史1.1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪(flow cytonletry,FCM)是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器,主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术,计算机对数据的采集和分析技术等。
流式细胞仪以流式细胞术为理论基础,是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。
流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。
其特点是:测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量,且在统计学上有效。
1.2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年,Moldavan 提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置测量的设想。
1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。
其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进,设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。
近20年来,随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作,以扩大FCM的应用领域和使用效果。
宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。
这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等,例举了其在医学和生物工程中的应用,非常适合从事此方面专业研究的人。
由于这本书是13年前出版的,所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。
此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说,这本书太复杂太深奥。
细胞周期分析
3：清洗液(No.8546930)液体5L室温
4：荧光微球(No.6605359)液体10ML2-8℃(Flow-Check)
仪器
BeckmanCoulterEPICSXL/FC500/Altra
样本制备：
灌洗液或培养细胞
1．PBS洗，稀释为1.0×106/ml，取100ul,加入DNA-Prep LPR 10秒后加入DNA-PБайду номын сангаасep染料1ml,室温避光15分钟。
要求1．实体（肿瘤）组织、灌洗液和培养细胞如果不能立即做应用冷乙醇固定，－20℃可保存2－3个月，－70℃可保存半年以上。
2．样本计数应在1.0×106/ml
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
成分1：DNA-Prep试剂系统液体2—8℃
（No.6607055）
（包括DNA-Prep LPR和DNA-Prep染料）
细胞周期分析
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
利用特殊的荧光染料(PI、EB、AO等)与细胞内DNA碱基结合，被荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光，荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量
标本采集与处理
检测对象实体（肿瘤）组织、灌洗液、石蜡块、培养细胞
参考值
临床意义
DNA倍体分析用于肿瘤早期诊断、良恶性肿瘤判断、肿瘤预后、治疗方案的选择，正常组织和良性肿瘤DNA均为二倍体，恶性肿瘤时则出现异倍体。
方案（Protocol）
1.选参数
选择Cytometer Control点击Parameters后
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美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）产品型号：Cell Lab Quanta SC当前价格：0.00元产品数量：0新旧程度：全新有效期至：0000-00-00所在地：产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等详细信息仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。
但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。
在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。
75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。
淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。
对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。
其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。
几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。
但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。
大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。
抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。
对这一些，一些商业化的公司对常用单抗的检验均推出了一系列质控物。
如BECKMAN COULTER公司的Cyto-Trol、Immuno-Trol等（见表一）。
（三）染色方法细胞表面染色：大多数免疫表型分析均采用此方法。
但由于许多抗原也同时存在细胞内，所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异性。
表面标记又分溶血前标记和溶血后标记。
若红细胞对标记有影响或血浆成分对标记有影响的，适合溶血后标记，但要注意溶血剂膜抗原的影响，所以，溶血剂一般不含固定剂。
如免疫球蛋白轻链检测和阵发性血红蛋白尿的检测等。
细胞内染色：有些胞内抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD79a。
胞内染色的关键是使细胞膜通透，把抗体或核酸染料导入胞内而不影响细胞骨架的完整性。
还要保证固定和透膜的步骤不影响有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合。
某些适用于胞内染色的试剂可能不适于表面标记分析。
通常胞内染色不能与细胞活性的检测同时进行，除非用EMA的方法。
对于胞内染色，所用的荧光素应足够小到能穿透到胞膜内。
对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活细胞染料，无需固定或透膜。
胞膜和胞内染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。
三、数据的获取和分析流式细胞仪数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。
由于流式细胞仪是基于对散射光信号和荧光信号进行分析的仪器，因此，仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定直接影响结果。
同型对照的设定尤为重要。
同型对照是指与单抗种宿来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物的免疫球蛋白。
同时考虑浓度、F/P值尽量相同，这样阳性阈值的界定才比较准确，特别是对于弱表达抗原阳性率的测定。
而DNA倍体分析中参照物的设定非常重要，一般鸡红细胞作为内参照物。
为了结果的可靠性，对获取的细胞量至少应在10000-20000个。
但不同的实验目的对于获取的细胞量要求一般是不一样的，如DNA倍体分析，至少应获取10000个细胞；微小残留病灶（MRD）的检测，要求达到10-4数量级水平，则应至少分析100000个细胞；干细胞移植中CD34的检测，应至少获取100个CD34阳性细胞或75000个有核细胞。
对于获取的数据，应保存在listmode文件中，便于分析。
设门（gating）对于流式数据分析至关重要。
设门实际就是确定分析区域。
在DNA倍体分析中，设门实际就是圈定单个细胞，排除粘连细胞。
对于细胞成分单一的标本（如培养细胞），设门比较简单。
但对于成分复杂的标本（如骨髓）而言，准确的设门就不那么简单。
前向散射光（FS）与侧向散射光（SS）设门干扰因素较多，目前，越来越多的被免疫标记物加散射光设门所取代。
如，CD45/SS设门已成为白血病/淋巴瘤免疫分型、CD34检测、MRD监测最佳的设门方法；CD19/SS设门对于成熟B淋系增生性疾病分析非常适用。
在数据分析中，百分率、荧光强度、DNA指数（DI）、多少个/ul是我们报告中常用的。
百分率主要适用于检验指标集中在细胞有无的数量变化。
如T细胞亚群检测、网织红细胞检测等；荧光强度主要适用于检验指标的变化集中在细胞上抗原量的多少。
如血小板无力症（GT）的检测、慢性淋巴细胞白血病（CLL）CD20的变化等。
DI用于DNA 倍体分析。
而爱滋病划分中外周血CD4的绝对定量、OKT3治疗监测中CD3的绝对定量、干细胞移植中的CD34的定量等等，最终都以多少个/ul的浓度形式表示出来。
对于白血病/淋巴瘤免疫分型结果的分析，以前基本上都是以百分率的形式报告临床，但单纯的百分率结果并不能完整的反映肿瘤细胞的特性。
因为20%人为认定的阳性判断标准忽略了低于20%的弱阳性结果，以及忽略了阳性结果之间荧光强弱的差别，而这一切对于白血病/淋巴瘤的诊断和分型却非常重要。
目前，大多主张以文字描述抗原有无和强弱的报告方式，废弃百分率的报告形式。
四、临床检验的分析过程的质量评价质量控制也必须重视检验方法学的选择和评价。
任何一次实验都一定有误差，在一定意义上可以将误差分为实验方法学的系统误差及除此之外的随机误差。
质量控制的方法和手段都只能减少或消除随机误差，但不影响系统误差。
要使检验结果的误差控制在临床可接受的低水平或者允许的误差范围内，必须使用总误差水平符合临床要求的检验方法（包括仪器、试剂、具体操作方法等），才能保证检验结果在质量控制下符合临床要求。
临床检验质量控制的目的，是监测实验过程中出现重要的误差时，用适当的方法警告分析人员。
一般说来，检查实验结果质量的方法是测定质控物，最通用做法是将质控品和病人一起进行常规检验，了解检验质量则是将质控品测定的结果画在控制图上，观测控制结果是否超过控制限来决定失控与否。
在开始使用质控物的第一个月内，检验人员每天将质控物随机插入病人标本中进行检验项目的测定。
月末对当月的测定结果（n≥20）做简单统计，求出均值x和标准差s。
若检验结果的分布接近正态分布，结果的分布即可用均值和标准差来描述。
这就意味着95.5%的结果在x+2s范围内,99.7%的结果在x+3s范围内。
为便于观察质控结果，及时了解有何失效情况，常使用质控图。
目前在临床检验质量控制中使用较多的方法是Levey-Jennings质控图。
BECKMANCOULTER公司是目前世界上唯一一家在流式细胞仪上装备自动记录和绘制Levey-Jennings质控图软件的厂家。
一般质控图是测定时间（次数）和测定值的关系图（见图一），图中标出x 、x±2s、x ±3s的横线。
x±2s为上下警告限，x±3s为失控限。
质控图建立后将每次质控品测定值绘在图上。
技术参数：侧向散射光准确测量颗粒度488nm的二极管激光用来测量荧光信号和侧向散射光，细胞的侧向散射光信号通过一高敏感度的光电二极管检测器收集库尔特体积精确测量细胞大小库尔特原理是检测细胞大小和计数细胞的金标准，它不受细胞形状、颜色或反射等因索的影响.注射器装置精确计算样本浓度注射器将样本注入流动室并精确计算注入体积，从而精确计算出样本浓度，并且液流非常稳定。
数千种试剂可供选择优化实验程序贝克曼库尔特公司有数千种试剂可供选择，使在Quanta SC系统上实验程序更加优化.细胞存活率PI和7-AAD不能渗透入活细胞，死细胞的胞膜完整性破坏而呈阳性(左图)。
因为死细胞和活细胞的体积不同，利用体积和侧向散射光的双参数图也可辨别死细胞(右图)三色细胞表型分析Quuntu SC可测最CD抗原表达的浓度和数最，分离的淋巴细胞用CD4-FITC.CD8-PE和CD3-PC5标记，用488nm激光激发分别发绿色、橙色和红色荧光.细胞调亡Annexin V-FITC和7-AAD同时标记细胞推测程序性细胞死亡的阶段。
活细胞膜内存在磷脂酰丝氨酸，调亡早期倒转到膜外，Annexin V-FITC与膜外的磷脂酰丝氨酸特异性结合而被检测。
坏死细胞会有7-AAD渗入胞浆而呈阳性.早期调亡细胞Annexin V-FITC阳性而7-AAD阴性，晚期凋亡和死细JJAnnexin V-FITC和7-AAD双阳(Q2)。
荧光浓度和表面荧光密度Quanta SC是世界上唯一的能同时测量细胞直径和体积的流式细胞分析系统，通过测量直径和荧光强度得出表面荧光密度，测量体积和荧光强度得出荧光浓度(FC)。
.测量FC 可消除细胞体积因素的影响。
本例中，由于调亡细胞大小非常不均，利用FC同单纯利用荧光强度(左图)相比活性的caspase 3阳性群更明显(右图)CFP表达Quanta SC的LV光源可检测9CFP的表达(422/39激发并且用480/30BP滤片)。
UV光源还包括405nm和435nm的激发波。
通过这些设置能很好的检测稳定转染CFP的酵母，否则无法检测(如插入的图)细胞周期分析利用DNA染料如DAPI或Hloechst可以很容易的获得细胞周期的各个阶段，Quanta SC的汞弧灯具有能激发这些染料的理想的365nm的激发波。
通过荧光强度可冷测GO/G1期、S期和G2/M期并且可以和细胞体积进行比照。
细胞存活率Syto9和PT联合应用计数活菌和死菌，syto9是细胞渗透性染料可结合细胞的DNA, Pi仅染坏死和胞膜不完整的细胞。
从而精确得计算出活菌和死菌的浓度和百分数。
细胞增殖CFSE是一种可渗透入细胞的染料，与胞内胺共价结合并且酶切产生荧光，一旦细胞分裂，CFSE以较原来低的浓度保留在子细胞中，CFSE可保留在细胞中若干天，每个峰代表细胞分裂的下一循环，峰的面积代表细胞数。
简单灵活的软件系统软件界面友好，采集和分析样本简单方便，容易圈门，有单参数的线性门、双参数的多边形门和十字门。