香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究_张欣

香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究3

张　欣　吕作舟

(华中农业大学　武汉　430070)

摘要　本研究以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。并且,从香菇菌盖中提取纯化得到两种新多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)。

关键词　香菇　菌盖　多糖　提取　纯化　理化性质

香菇(Lentinula edodes)不仅是一种美味佳肴,也是一种著名的药用菌。我国历代的医药学家对香菇的药性及功能均有著述,如《日用本草》认为香菇“益气、不饥、治风、破血”〔1〕。现代研究结果表明,香菇中含有能降低血浆胆固醇的香菇嘌呤〔2〕,含有诱生干扰素的双链核糖核酸〔3〕,且含有抗肿瘤活性物质———香菇多糖及香菇糖肽〔4,5〕。

1970年G oro Chihara首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为Lentinan〔5〕。自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究〔6,7,8〕。但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。

本研究以香菇的菌盖、菌柄、菌丝体为试材,分别采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖,检测分析了粗多糖、多糖、蛋白质与原材料之间量的关系,并且,从香菇菌盖中提纯了两种新多糖,对其理化性质和结构进行了初步研究,为进一步对香菇多糖的结构分析、药效、药理实验提供参考。

本研究主要结果如下:

11以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。粗多糖、多糖得率都以菌盖的水浸物为最高,而以菌丝体的碱浸物为最低。蛋白质得率以菌柄水浸物为最高,以菌丝体的碱浸物为最低。

21氨基酸自动分析仪的分析结果表明:香菇菌盖水浸物、碱浸物中氨基酸含量丰富,其中包括人体必需氨基酸。水浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸;碱浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。

31采用水浸法、碱浸法从香菇菌盖中提取粗多糖,然后经乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、CT AB (十六烷基三甲基溴化铵)络合沉淀、氨化钠溶液溶解、透析,得到两种多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)〔9〕。这种纯化方法具有简便、经济的特点。

41多糖的纸层析结果表明:多糖A、多糖B均仅为一个斑点,R f值分别为0152,0120。多糖的PAGE电泳结果表明:多糖A,B均为紫红色的单一谱带,R f值分别为0151,0162;它们均从负极向正极移动,表明它们是酸性多糖。紫外光谱分析结果表明:多糖A、多糖B均未发现核酸(260nm)和蛋白质(280nm)特征吸收峰〔10〕。组分含量分析表明:多糖A、多糖B均无含氮物质存在,但含少量灰分和水分。以上对多糖的鉴定结果表明:多糖A、多糖B均一性高,多糖A的纯度为7911%,多糖B的纯度为8312%,符合化学定性定量标准;它们是酸性多糖。

51多糖A,B均为灰白色粉未。多糖B不溶于稀酸。多糖A,B均溶于水、稀碱,尤易溶于热水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂,其水溶液透明粘稠状,可被5%CT AB络合沉淀。旋光计测得多糖A的旋光率为〔α〕D25℃+ 4311°(水),多糖B的旋光率为〔α〕D25℃+2513°(水)。采用改良型膜渗透压法测得香菇多糖A的数均分量为8131×104,香菇多糖B为9140×104。

61红外光谱分析结果表明,多糖A、多糖B具类似结构,但不属同一种物质。两种多糖在890cm-1均具吸收峰,在840cm-1均无吸收峰,表明它们为β-糖苷〔11〕;多糖A,B都含有-C OO-基团。因此,香菇多糖A、香菇多糖B均是β-酸性异多糖。

71纸层析结果表明:多糖A,B均由葡萄糖(G lc)、半乳糖(G al)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(X yl)、鼠李糖(Rha)构成。用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂,以葡萄糖的R f值为1100,则它们的R f值之比为,G lc∶G al∶Ara∶X yl∶Rha= 1100∶1117∶1152∶1176∶2117。气相色谱检测多糖的单糖组成及摩尔比,多糖A为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc= 4136∶2103∶1100∶5164∶13180;多糖B为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc=9137∶1100∶1164∶7119∶23136。

3　湖北省重点科技计划项目。收稿日期　1999—07—20

43中国食用菌　E DI BLE FUNGI OF CHI NA V ol118,N o16

81将多糖A 、多糖B 与已发表的香菇多糖相比较,结果表明:香菇多糖A 、多糖B 不同于已报道的香菇多糖,是香菇多糖家族中的两个新成员。

主要参考文献

1　杨新美主编1食用菌栽培学1中国农业出版社,19962　孙培龙等1香菇嘌呤研究简述1中国食用菌,1995,14

(2):44～46

3　Fujii Suzuki 等1香菇提取物可作干扰素诱生剂1见:杨

庆尧主编1国外食用菌研究,1983,223～230

4　Fujii T ,et al.Is olation and Characterization of a New Antitu 2m or P olysaccharide ,K S -2,Extracted from Culture M ycelia of Lentinus edodes.The Journal of Antibiotics ,1978,31(11):1079～1090

5　Chihara G.et al.Fraction and Purification of the polysaccha 2

rides with M arked Antitum or Activity ,Especially Lentinan from Lentinus edodes.Cancer Res.,1970,30:2776～2781

6　杨晓彤等.香菇菌丝体中两种新多糖的分离、纯化和

鉴定1食用菌学报,1994,1(2):25～31

7　杨晓彤等1香菇菌丝体多糖LeBD1-1的分离纯化和分析1微生物学报,1997,37(1):119～1238　郑健仙等1香菇柄P JFI 多糖的结构研究1中国食用菌,

1995,14(5):7～9

9　张惟杰主编1复合多糖生化研究技术1上海科学技术

出版社,1987

10　曹培让等1金针菇子实体多糖PA3DE 的分离、纯化

和分析1生物化学与生物物理学报,1989,21(2):

152～156

11　许燕萍等1凤尾侧耳多糖的分离纯化及抗氧化作用1

中国生化药物杂志,1997,18(2):59～61

STU DIES ON EXTRACTION,PURIFICATION,CHEMICAL AN D

PH YSICAL PROPERTY OF SHIITAKE POLYSACCHARIDES

Zh ang Xin ,Lu Zuozhou

(Huazhong Agricultural University ,Wuhan 430070)

Abstract :Shiitake polysaccharides have been gained from cap ,stipe and mycelia of shiitake by means of water -extracted and alkali -extracted methods and tw o kinds of new polysaccharides ,polysaccharide A (the water -extracted com ponent )and polysaccharide B (the alkali -extracted com ponent ),were purified from shiitake cap.

K ey w ords :Lentinula edodes ;Cap ;P olysaccharide ;Extraction ;Purificaton ;Chemical and physical property

5

3第18卷　第6期 中国食用菌　E DI BLE FUNGI OF CHI NA