微生物基本试验原理及操作教学文稿

胆汁七叶苷试验
原理：在10-14%胆汁存 在下，测定细菌水解葡 萄糖苷七叶苷为七叶亭 和葡萄糖的能力。
胆汁七叶苷培养基成分
蛋白胨 5g
牛肉浸膏 3g
牛胆汁（胆汁）40g
七叶苷 1g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂
15g
蒸馏水 1000ml
结果：培养基变为黑色或 深褐色为阳性。有生长物 时，并不表示七叶苷裂解， 仅表示胆汁浓度不能抑制D 群链球菌外的细菌生长。
碳水化合物的代谢试验
氧化-发酵试验（OF试验） 糖醇发酵试验 B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 甲基红试验 VP试验 胆汁七叶苷试验
氧化-发酵试验（OF试验）
原理：细菌在分解葡萄糖的过 程中，必须有分子氧参加的称 为氧化型；在无氧条件下降解 葡萄糖的称为发酵型；不分解 葡萄糖的细菌称为产碱型。利 用此试验可以区别细菌的代谢 类型。
结果：产生大量气泡为 阳性，不产生气泡为阴 性。
血浆凝固酶试验
原理：凝固酶能凝固血浆纤维蛋 白，是鉴定金黄色葡萄球菌的主 要试验。本试验分玻片法和试管 法，玻片法主要是检测结合凝固 酶，试管法是为了肯定玻片法试 验结果和对玻片法试验阴性者进 行复查，检测游离凝固酶。
试剂：甲液：6%a-萘酚乙醇溶液
乙液：40%氢氧化钾溶液
方法：将被检菌接种葡萄糖 蛋白胨水培养基后，于35培 养48小时，于2ml培养基内 加入甲液1ml和乙液0.4ml， 振摇后观察结果。
结果：于数分钟内呈红
色为阳性；如无红色出 现，而且于35℃中4小时
后仍如故者即为阴性。 本试验较为敏感。
原理：有的细菌可产生B-半乳糖 苷酶，此酶可分解邻-硝基酚-BD- 半 乳 糖 苷 （ ONPG）。ONPG 为无色，经B-半乳糖苷酶水解后， 可产生黄色的邻硝基酚，即使浓 度很低也能检出。
结果
呈 现 黄 色 为 阳 性 反 应 。 迅 速 及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，本试验可作为 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴 定方法。
蛋白胨水或肉膏汤 100ml 所需的糖、醇或苷类 0.5或1g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 0.1ml
结果
接种的细菌，若能耐分解培 养基中的糖类产酸时，则使 培养基中的指示剂呈酸性反 应。若产气可使半固体培养 基内或液体培养基中的倒管 内出现气泡。若不分解则无 变化。
B—半乳糖苷酶试验（ONPG 试验）
Hugh-Leifson二氏培养基（O-
F培养基）成分
蛋白胨 2g
磷酸氢2钾0.3克
氯化钠 5g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香酚蓝溶液 12ml
琼脂
2.5g
蒸馏水 1000ml
方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 二 支 Hugh-Leifson 培 养 基 的 试 管 中 ，
均用接种针穿至管底，其中五支 加入灭菌的液体石蜡约1厘米厚。 35，培养48小时观察结果。培养 基颜色变黄即为产酸。
西蒙氏柠檬酸盐培养基成分
MgSO4-7H2O 0.2g
NH4H2PO4 1g
K2HPO4
1g
柠檬酸钠
5g
氯化钠
5g
琼脂
20g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
蒸馏水
1000ml
结果：阳性者表面上 长有菌落，培养基 变为蓝色。
葡萄糖酸盐试验
原 理 ： 检 查 细 菌 是 否 具 有 氧化葡萄糖作为唯一碳源， 并具有还原2-酮基葡萄糖酸 盐与班氏试剂混合加热生 成黄红色酮类的能力。
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方 法 ： 接 种 大 量 待 检 菌 于 培养基内，35，24-48小时， 0.5ml培养基加班氏试剂3滴
左右，加热煮沸后观察结 果。
葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤成分
蛋白胨 0.15g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氢钾 0.1g 葡萄糖酸钾（或钠）4g 蒸馏水 100ml
结果：出现黄色到橙 红色沉淀为阳性，无 颜色变化为阴性。
各种酶类试验
过氧化氢酶（触酶）试验 氧化酶试验 血浆凝固酶试验 硝酸盐还原试验 胆汁溶解试验 环腺苷酸（cAMP）试验
过氧化氢酶（触酶）试验
原理：有些细菌具有过 氧化氢酶，能将过氧化 氢酶分解为水。
试剂：3%过氧化氢溶液。
方法：①玻片法：用牙签挑取 18～24小时培养的菌苔，置于 洁净的玻片上，滴加3%过氧化 氢溶液1～2滴。②试管法：取 不含血液的18～24小时培养物 一接种环于试管内，加入1ml 3%过氧化氢溶液。3%过氧化氢 溶液应置于棕色瓶内冷藏。
甲基红试验
原理：某些细菌在糖代谢过程中， 分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 可进一步被分解为甲酸、乙酸、 乳酸等，而使培养基的pH下降至 4.5以下，加入甲基红指示剂出现 红色（阳性）。
甲基红试验
原理：有些细菌分解葡萄糖产酸 量少，或产生的酸进一步转化为 其它物质（如醇、酮、醛、气体 和水），则培养基的酸碱度仍在 6.2以上，故加入甲基红指示剂呈 黄色（阴性）。
结果
代谢类型 发酵型 氧化型 产碱型
加蜡封口管 开放管
产酸
产酸
不变色
产酸
不变色
不变色
糖醇发酵试验
原理：各种细菌因含有发酵不同 糖、醇类的酶，所以分解糖、醇 类的能力各不相同。分解糖、醇 类后产生的代谢产物可因菌种不 同而异，有的产酸、产气，有的 仅产酸，故用于鉴别细菌。
糖、醇类试验培养基成分
葡萄糖蛋白胨水培养基成分
多价蛋白胨 7g
葡萄糖
5g
磷酸氢二钾 5g
蒸馏水
1000ml
方法：被检菌接种于上 述培养基内，于35℃培 养48小时，于2ml培养液 内加甲基红指示剂2滴， 立即观察结果。
结果：红色为阳性；桔 红色为弱阳性；黄色为 阴性。
VP试验
原理：有些细菌在葡萄糖的代谢过 程中生成丙酮酸，丙酮酸进一步脱 羧后可产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲 基甲醇在碱性溶液中被空气的氧氧 化为二乙酰（丁二酮），进而与培 养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基发生反应，生成红色化合物，即 VP反应阳性。培养基中的胍基太少 时，加入少量含胍基的化合物，如 肌酸或肌酸酐等，可加速此反应。
微生物基本试验原理及操作
微生物基本试验
碳源和氮源利用试验 碳水化合物的代谢试验 各种酶类试验 氨基酸和蛋白质代谢试验
碳源和氮源利用试验
柠檬酸盐试验 葡萄糖酸盐试验
柠檬酸盐试验
原理：有些细菌能利用柠檬酸盐 作为唯一碳源，分解柠檬酸钠生 成碳酸钠，使培养基呈碱性。能 利用柠檬酸盐作唯一碳源的细菌， 也能利用铵盐作为唯一氮源，铵 盐被分解为氨而产生碱性。