QBHHS JC002-2013 发酵豆粕中不良寡糖的定性检测方法
发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测
发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测——SDS-PAGE法1．适用范围本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。
2．仪器设备2.1蛋白电泳仪：2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型）2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型）2.2 25μl微量进样器；2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板）2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材）3．试剂3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic 进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯；3.2 无水酒精，分析纯；3.3 甘氨酸，分析纯；3.4 Tris，分析纯；3.5 考马斯亮兰R250，分析纯；3.6甲醇，分析纯；3.7 冰醋酸，分析纯；3.8 甘油（丙三醇），分析纯；3.9 β-巯基乙醇，分析纯；3.10 溴酚蓝，分析纯；3.11 HCl，分析纯；4.试剂的配置4.1 SDS-PAGE溶液的配制：30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0gN’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至100ml4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。
2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至8.8(要求准确)。
1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至6.8(要求准确)。
10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。
1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。
4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g甲醇 45.40ml冰醋酸 9.20ml水 45.40ml4.4 脱色液：甲醇 456.0ml冰醋酸 72.0ml水 472.0ml4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml10%SDS 4ml蒸馏水 21ml10%过硫酸铵 5ml4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml10%SDS 4ml蒸馏水 46ml10%过硫酸铵 5ml4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g甘氨酸 14.4gSDS 1.0g定容至1L，用HCl调节pH为8.3。
您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】
您须知道的发酵豆粕真正品质评判的测定方法说明【五】发酵豆粕中的小肽与抗原蛋白是衡量品质优劣的两项重要指标，长期以来国内的发酵豆粕产品主要由乳酸菌通过厌氧发酵生产，而出于便捷考虑，业内通常使用酸溶蛋白法测定小肽含量，使用ELISA法测定抗原蛋白含量，但随着发酵豆粕使用普遍性提高，并且芽孢杆菌通过有氧发酵生产的发酵豆粕在国内市场上渐露锋芒，这两种测定方法是否适用，是否能作为客观反映小肽和抗原蛋白真实含量的指标，引起了关注与讨论。
1 小肽-酸溶蛋白法①不同pH 发酵(或酶解)的豆粕在酸中的溶解度不同微生物发酵过程中对蛋白质的分解，实质上就是微生物产蛋白酶的作用。
但是，不同酸碱性的蛋白酶酶解豆粕所得的小肽在酸中的溶解度不同，其中酸性蛋白酶酶解小肽高达96%可以溶于三氯乙酸，而碱性蛋白酶酶解小肽不到 50%。
因此，酸溶蛋白更适合评估酸性发酵或酶解的豆粕产品，将低估希杰速益肽这类芽孢杆菌发酵的中偏碱性产品的小肽含量(刘慧珍，江南大学硕士论文，2007)。
速益肽 55%CP 产品酸溶蛋白相对低(6-10%)。
②小肽应有明确的分子量定义食品国家标准《大豆肽粉GBT 22492》2008 版将小肽的定义由③酸溶蛋白只体现了速益肽小肽含量的一小部分希杰研究所实验发现，同时测定的发酵豆粕样品整体蛋白分布(红色峰)和三氯乙酸溶解后上清液的蛋白分布结果(蓝色峰)。
三氯乙酸提取的分子量5kDa 以下蛋白质部分，而红色图谱和蓝色图谱之间存在一个灰色的面积区域是三氯乙酸没有办法提取出来的样品中的肽含量的部分，即三氯乙酸并不能完全溶解出样品中的所有的肽，只能溶解出其中的一小部分(如下图)。
2 抗原蛋白-ELISA 法和SDS 法①ELISA 法测定加工豆类产品的缺陷致敏性不确定：目前已有商品化大豆抗原蛋白的检测试剂有大豆球蛋白检测试剂盒和β-伴大豆球蛋白检测试剂盒，但是另两种大豆抗原蛋白 Gly m Bd 30K 和 Gly m Bd 28K 并没有商品化试剂盒。
发酵豆粕各项指标检测方法与实用实用标准
发酵豆粕各项指标检测方法与标准发酵工艺2010-12-31 15:16:17 阅读86 评论0 字号：大中小订阅1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。
2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。
3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。
4、可溶蛋白的测定方法5、小肽含量的测定水份的测定水份测定直接参见国标测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。
水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。
总有机酸检测试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂仪器:磁力搅拌器离心机方法：（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。
（终点到溶液呈现粉红）计算乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15gN(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；0.09008：乳酸的毫克当量。
0.1mol氢氧化钠的配制与标定1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。
用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
2、标定称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
发酵豆粕各项指标检测方法与标准
发酵豆粕各项指标检测方法与标准发酵工艺2010-12-31 15:16:17 阅读86 评论0 字号：大中小订阅1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。
2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。
3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。
4、可溶蛋白的测定方法5、小肽含量的测定水份的测定水份测定直接参见国标测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。
水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。
总有机酸检测试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂仪器:磁力搅拌器离心机方法：（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。
（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。
（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。
（终点到溶液呈现粉红）计算乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15gN(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；0.09008：乳酸的毫克当量。
0.1mol氢氧化钠的配制与标定1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。
用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。
2、标定称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。
发酵豆粕的检测方法
发酵豆粕的检测方法引言发酵豆粕是一种富含营养的饲料原料，通过发酵过程可以改变其营养成分和口感等特性。
为了确保发酵豆粕的品质和安全性，需要进行一系列的检测方法。
本文将介绍发酵豆粕的检测方法，并重点讨论营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。
营养成分是评价饲料品质的重要指标之一、以下是一些常用的发酵豆粕营养成分的检测方法：1.水分含量检测：采用干燥法测定。
2. 粗蛋白含量检测：采用Kjeldahl法测定。
3. 粗脂肪含量检测：采用Soxhlet萃取法测定。
4. 粗纤维含量检测：采用Weende方法、AOAC方法或Van Soest方法测定。
5.粗灰分含量检测：采用高温炉燃烧法测定。
微生物含量是评估发酵豆粕安全性的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕微生物检测方法：1.总菌落计数：采用平板计数法或膜过滤法。
2.酵母和霉菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。
3.大肠菌群检测：采用MPN法或膜过滤法。
4.乳酸菌计数：采用平板计数法或膜过滤法。
重金属含量是评估发酵豆粕的环境污染程度的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕重金属检测方法：1.铅和镉的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
2.汞的测定：采用氢化物液相色谱法或电感耦合等离子体质谱法。
3.铬、镍、锰和锌的测定：采用火焰原子吸收光谱法或电感耦合等离子体质谱法。
有害物质的含量是评估发酵豆粕的安全性的重要指标。
以下是一些常用的发酵豆粕有害物质检测方法：1.黄曲霉毒素的测定：采用高效液相色谱法或气相色谱法。
2.农药残留的测定：采用气相色谱法或液相色谱法。
3.病原体的检测：采用PCR法或快速培养法。
结论发酵豆粕的检测方法包括营养成分、微生物、重金属以及有害物质的检测方法。
这些方法可以评估发酵豆粕的品质和安全性，确保其在畜牧养殖中的应用效果。
在实际应用中，还需要根据具体情况选择合适的检测方法，并严格执行相关的检测标准，保证检测结果的准确性和可靠性。
发酵豆粕质量评价方法
发酵豆粕质量评价方法豆粕发酵通常采用固体发酵法，由于传统意义上的固体发酵较粗放，从而容易导致产品的不均匀，产品外观的观测也是判断产品优劣的基本条件，对发酵豆粕的评判，主要可通过以下几方面进行评价。
1.感官评判优质发酵豆粕的产品粒度均匀，色泽一致，较原豆粕略深（产品粒度越细，颜色越浅），有淡淡发酵香味，无豆腥味，且因同一批次的产品加工条件和原料较一致，产品感官的一致性可反映出其生产工艺的稳定性。
2.抗腐败能力好的发酵豆粕在整个发酵生产过程的卫生状况非常好，但如果发酵过程中没有做好消毒卫生工作，染菌情况会非常严重。
判断是否染菌可用清水浸泡，优质的发酵豆粕在25℃环境中，1周内不会变味，气味依然芬芳；而染菌不良者，同样条件，2天就会发臭冒泡。
3.粗蛋白质发酵豆粕的粗蛋白质含量达到50%，是由于去除了不良寡糖和降低了水分浓缩而成的，发酵程度越好，粗蛋白质含量越高。
以46%的豆粕为原料来发酵的话，发酵豆粕成品的粗蛋白质含量一般为48%－51%。
粗蛋白质含量也不是越高越好，发酵豆粕成品的粗蛋白质超过51%的话，一来有掺假的嫌疑，二来发酵损耗过大，得率不高。
3.小肽（酸溶蛋白）可间接地反映地反映发酵豆粕抗原的降解情况。
发酵豆粕的小肽含量大概在8%－12%左右（相对于所含蛋白质的比例），发酵程度越好，小肽含量越高，但如果小肽含量超过15%，则产品粘度过高，干燥困难。
4.酸度（以乳酸计）反映发酵情况。
酸度应大于2%，过低则可能发酵程度不足或发酵控制不当而产氨。
5.氢氧化钾蛋白质溶解度(PS)反映大豆粕产品加热过度的情况。
发酵豆粕是豆粕的二次加工产品，选择合适的烘干工艺可有效防止产品蛋白溶解度的降低，保证产品的营养品质，一般应为65－85%。
蛋白溶解度低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度，营养价值已受到破坏，大于85%则表示加热不足，豆粕的一些抗营养因子还未完全失去活性，降低了豆粕的品质。
6.挥发性盐基氮（VBN)反映发酵豆粕非蛋白氮添加情况和杂菌污染情况。
QBHHS JC003-2013 发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测办法
8%分离胶不同体积各成分含量详表 含量/mL 10mL 15mL 20mL 3.3 5.0 6.7 2.7 4.0 5.3 3.8 5.7 7.6 0.1 0.15 0.2 0.1 0.15 0.2 0.006 0.009 0.012
30mL 10.0 8.0 11.4 0.3 0.3 0.018
50mL 16.7 13.3 19.0 0.5 0.5 0.03
表9
30 6.0 12.0 11.4 0.3 0.3 0.012
50 10.0 20.0 19.0 0.5 0.5 0.02
15%分离胶不同体积各成分含量详表 含量/mL 试剂名称 5 10 15 20 30 蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加 10%SDS 即可配制成非变性 PAGE 胶。
7
附录 SDS-PAGE 分离胶浓度的最佳分离范围 不同样品的检测，需根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，不同分离胶浓度的最
7.1
佳分离范围如表 5 所示。 表5 SDS-PAGE 分离胶浓度 6%胶 8%胶 10%胶 12%胶 15%胶 分离胶浓度与最佳分离范围对照表 最佳分离范围 备注 50-150kD 分子生物学中，kD 表示分子量 的单位道尔顿， 一般写的是 Da， 30-90kD kDa 就是 1000Da。 20-80kD 12-60kD 10-40kD
发酵豆粕各项指标检测方法
发酵豆粕各项指标检测方法发酵豆粕是一种常见的饲料原料，其发酵过程可以提高饲料的消化率和营养价值。
为了确保发酵豆粕质量符合要求，需要进行各项指标的检测。
下面将介绍发酵豆粕各项指标的检测方法。
1.水分水分是判断发酵豆粕是否存在霉变和变质的重要指标。
水分的测定可以通过烘干法和红外干燥法进行。
烘干法是将样品在105℃下加热，然后进行重量测定，计算得到水分含量。
红外干燥法是利用红外辐射对样品进行加热，通过光学传感器测定样品的水分含量。
2.粗蛋白粗蛋白是发酵豆粕中的重要营养成分。
常用的粗蛋白检测方法有凯氏消解法和红外消解法。
凯氏消解法是将样品与酸和碱进行消解，然后利用定量分析方法测定样品中的氮含量，通过乘以样品的氮蛋白转化系数来计算粗蛋白含量。
红外消解法则是通过红外光谱仪测定样品中的氮谱带，然后根据标准曲线计算粗蛋白含量。
3.粗脂肪4.粗纤维粗纤维是发酵豆粕中的非消化性纤维成分。
常用的粗纤维检测方法有酸碱消解法和中性洗涤法。
酸碱消解法是将样品先用酸和碱进行消解，然后进行过滤和洗涤，最后干燥、称重，计算得到粗纤维含量。
中性洗涤法则是将样品浸泡在中性洗涤液中，进行过滤和洗涤，最后干燥、称重，计算得到粗纤维含量。
5.灰分灰分是发酵豆粕中的矿物质成分。
灰分的测定可以通过加热、烘干和称重来进行。
将样品在高温下加热，使有机物燃烧殆尽，然后进行干燥和称重，计算得到灰分含量。
6.外观和色泽外观和色泽是发酵豆粕的质量指标之一，可以通过目测来判断。
良好的发酵豆粕应该具有均匀的颜色和无异物的外观。
综上所述，发酵豆粕各项指标的检测方法主要包括水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰分以及外观和色泽的检测。
这些检测方法能够全面评估发酵豆粕的质量，并确保其适合作为优质饲料原料使用。
发酵豆粕质量鉴定
发酵豆粕教槽料是指猪出生5天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。
在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。
为达到提早...教槽料是指猪出生5 天后开始补料时至断奶后10 天内所使用的饲料。
在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。
为达到提早乳猪猪诱食的目的，又能够克服乳猪断奶营养应激的效果，营养全面、适口性好、消化利用率高和降低腹泻的高品质的乳猪教槽料一直是科研人员研究的热点。
乳猪出生时胃内仅有凝乳酶，胃蛋白酶很少，由于胃底腺部缺乏游离盐酸，胃蛋白酶没有活性，不能很好地消化蛋白质，特别是植物性蛋白质。
这就要求在蛋白原料选择上，既要考虑原料的营养成分，又要考虑其适口性和乳猪的营养生理特点。
不能仅凭简单的实验室分析和资料的说明，应根据以往的经验和实际生产数据来进行选择。
1 蛋白质原料的选择蛋白质原料的选择应从消化率、氨基酸比例、降解产生小肽的速度、蛋白质含量和成本等多方面考虑。
在乳猪教槽料配方中，常用的蛋白质原料有血浆（球）蛋白粉、高蛋白的乳清粉、鱼粉、膨化大豆（豆粕）、发酵豆粕（大豆）和啤酒（核酸）酵母等等。
植物性蛋白中含有许多抗营养因子。
例如大豆抗原（主要以大豆球蛋白和B -伴大豆球蛋白为主）是一种致敏因子，是导致仔猪营养性腹泻的主要原因。
因此大家一直尽量少用植物蛋白，多选用动物蛋白。
动物性蛋白质也有一定的劣势，价格比较昂贵，一些动物性蛋白加工或储存不当容易携带或滋生病原体，鱼粉容易氧化产生过氧化物、组胺和肌胃糜烂素等，同时还有同源性比较近等生物安全问题。
这些问题常常困扰一些配方师，左右为难，难以取舍。
2 发酵豆粕的特点与优势发酵豆粕是利用现代生物技术将植物蛋白源同微生态技术完美结合在一起，是微生态制剂在饲料中原料化的一个体现。
发酵豆粕采用优质多菌种协同发酵，利用微生物丰富的酶系，将植物大分子蛋白降解为寡肽，并将植物蛋白中的抗营养物质如胰蛋白酶抑制因子、脲酶、血凝素、抗原蛋白等彻底分解，植物细胞壁100%破裂，蛋白质消化率大于95% ，显著改善了适口性和消化率。
豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测
豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测
李旺军;方华;季春源
【期刊名称】《粮食与饲料工业》
【年(卷),期】2013(000)004
【摘要】介绍了豆粕和发酵豆粕产品中抗原蛋白和不良寡糖的检测方法,并将从市场上收集到的不同生产厂家发酵豆粕产品,分别通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和薄板层析法检测其中抗原蛋白和不良寡糖的降解情况,同时做了简要分析.结果表明:不同厂家生产的发酵豆粕产品有很大的差异,抗原蛋白和不良寡糖的降解情况参差不齐:部分产品中的抗原蛋白和不良寡糖与豆粕相当,完全没有降解；抗原蛋白和不良寡糖均完全降解的产品并不多.
【总页数】5页(P61-65)
【作者】李旺军;方华;季春源
【作者单位】上海源耀生物科技有限公司,上海201316
【正文语种】中文
【中图分类】S816.2;S816.42
【相关文献】
1.利用蛋白酶产生菌固态发酵去除豆粕中抗原蛋白
2.不同处理方法对豆粕中抗原蛋白和酸溶蛋白的影响
3.不同酶制剂对豆粕中抗原蛋白的影响
4.发酵豆粕抗原蛋白的客观评价方法
5.有效检测发酵豆粕中抗原蛋白的新方法
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发酵豆粕饲用品质的评定指标及其应用
发酵豆粕饲用品质的评定指标及其应用摘要植物肽蛋白饲料发酵豆粕用品质的评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等，本方就这些指标的应用及应注意的问题进行了讨论，指出要正确认识植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质，必须从感观、抗营养因子去除程度、小分子蛋白含量、挥发性盐基氮及有益菌、乳酸含量等方面对其饲用品质进行综合的整体评定。
关键词植物肽蛋白发酵豆粕饲用品质评定指标应用植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等。
1.感官指标及其在植物肽蛋白饲料发酵豆粕饲用品质评定上的应用1.1正常植物肽蛋白饲料发酵的色、香、味与粘度色：植物肽蛋白饲料发酵皆为棕黄色，这是由于豆粕经过发酵干燥颜色变深所致。
如果颜色较浅且不均匀，或与豆粕一致，有可能发酵程度不够或掺入生豆粕或其它浅色蛋白原料。
此外，同一批产品颜色应一致，不同批的产品颜色也应一致或接近一致。
香：淡淡的酸香味，无异味与霉味。
加适量的水煮开后有很强且愉快的发酵酸香气，无氨臭。
掺入了载机酸的植物肽蛋白饲料发酵豆粕，酸味较刺激且不均匀。
味：品尝正常无异物感，略带酸涩味。
粘度：植物肽蛋白饲料发酵豆粕按1：1~2加水调和后可感觉其粘度。
水泡评定：将植物肽蛋白饲料发酵豆粕放置到透明烧杯中用水泡，如果溶液及固体植物颜色金黄或灰黄且均匀，又无发黑杂志和黒（硬颗粒则为未发酵或发酵不彻底的豆粕），表明烘干时加热均匀，没有烘干过度，对营养成分保存较好。
闻之有酸香味但无刺鼻感。
上浮的杂质中无赖皮及其它植物杂质，手捏揉觉柔软但无明显颗粒感。
用水不断轻柔冲洗发现水溶物质较多，最后剩下较少渣滓，则质量较好。
这样的豆粕发酵程度较深，经发酵的其高分子蛋白（﹥66.2ku）、中分子蛋白（25~66.2ku）减少，小分子蛋白（﹤25ku）提高，还有更小的物质如肽、氨基酸等，水解度提高，故手捏无硬物颗粒感。
1.2凭感官指标对植物肽蛋白饲料发酵饮用品质评定的局限性常见的植物肽蛋白饲料发酵掺假是往豆粕中掺入其它非豆粕蛋白原料，常见的有玉米蛋白、大米蛋白、棉粕、菜粕与花生粕等植物源蛋白，或肉骨粉、氨基酸菌体蛋白、水解羽毛粉、水解皮革粉与劣质蛋白胨等以提高蛋白含量，但却降低了植物肽蛋白饮料发酵豆粕的饲用品质。
不同厂家发酵豆粕产品理化指标比较分析
不同厂家发酵豆粕产品理化指标比较分析导读豆粕是大豆经浸提脱油后的副产品，其蛋白质、必需氨基酸含量较高，且组成合理、平衡，是一种优质的植物性蛋白源（姚琨等，2011）。
但豆粕中存在胰蛋白酶抑制剂、大豆凝血素、大豆抗原蛋白（致敏因子）、脲酶、低聚糖、脂肪氧化酶、植酸及致甲状腺肿素等多种抗营养因子，一方面使豆粕的消化率和利用率下降；另一方面对动物的生理、生长和健康造成不良的影响，限制了豆粕在畜禽和高档水产饲料中的应用（胡瑞等，2013）。
近年来，运用微生物发酵技术将豆粕变成发酵豆粕已成为豆粕原料开发生产的热点，市场上不断涌现出各种品牌的发酵豆粕产品，但是由于各工厂之间采用的发酵工艺与菌种差异很大，导致其质量千差万别（林文辉和虞宗敢，2010）。
本研究探讨了市面上7 个不同厂家的发酵豆粕产品在理化指标方面的异同，为不同品质发酵豆粕的评估提供理论依据，进而为生产厂家优化其生产工艺提供借鉴。
1 材料与方法1.1 试验材料在山东某集团饲料厂各分公司库房抽样发酵豆粕样品7 份，分别编号为样品1、样品2、样品3、样品4、样品5、样品6 与样品7。
1.2 测定指标水分：GB/T 6435-2006；粗蛋白质：GB/T 6432-94；粗灰分：GB/T 6438-2007；酸溶蛋白（小肽）：GB/T 22492-2008；KOH 蛋白质溶解度：GB/T 19541 -2004；挥发性盐基氮：GB/T5009.44-2003；pH：《中华人民共和国兽药典》三部附录4 页pH 值测定法；总酸（以乳酸计）：GB/T12456—2008；L-乳酸：SBA-40D 生物传感分析仪；抗原：定性0.6%KOH-SDS-PAGE；大豆低聚糖（水苏糖、棉籽糖、蔗糖）：定性TLC 薄层层析。
氨基酸含量：高效液相色谱法。
每个样品平行检测3 次，取平均值进行数据处理分析。
1.3 数据处理采用SPSS 19.0 软件进行数据统计分析。
2、结果与分析2.1 不同厂家发酵豆粕常规指标含量从表1可以看出，7 个样品的水分含量为9.74%～11.35%，水分之间的差异主要与不同厂家烘干工艺与烘干参数有关，产品之间水分差异导致蛋白质含量有所不同，7 个发酵豆粕样品粗蛋白质含量为49.05% ～ 50.94%，差异不大，极差为1.89%。
QBHHS JC006-2013 发酵豆粕中小肽的检测办法(三氯乙酸法)
1原理利用三氯乙酸作蛋白质沉淀剂，将发酵大豆蛋白中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经过滤、离心、消化、蒸馏，测定其蛋白质含量，并以其占样品粗蛋白质的百分数来表示含量。
本方法是参照中华人民共和国轻工行业标准大豆肽粉标准(QB/T 2653-2004)基础上修订而来。
2试剂及仪器2.1100ml 烧杯；2.210ml，50ml 移液管；2.3干过滤装置；2.4半微量法或全量法粗蛋白质测定的试剂和装置；2.515％三氯乙酸溶液；2.64000r/min 的离心机。
3操作步骤准确称取样品6g 于100mL 烧杯中，准确加入15%三氯乙酸溶液50mL，混合均匀，静置5min，以中速定性滤纸干过滤，弃去少许初始滤液，将滤液转移至离心管，在4000r/min 下离心10min，准确移取其上清液10mL 于消化管中，按半微量法（消化后定容至100mL，准确移取其中10mL 进行蒸馏）或全量法粗蛋白质测定方法测定其粗蛋白质含量。
同时做空白试验、测定样品的粗蛋白质的含量。
4结果与计算小肽%（半微量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×10×5÷m×100%÷cp×100%小肽%（全量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×5÷m×100%÷cp×100%式中：V1-----------------馏出液消耗盐酸标准液的体积，ml；V0-----------------空白试验消耗盐酸标准液的体积，ml；检测技术规范与标准方法编号：QB/HHS JC006-2013修订：第1版第1次修改发酵豆粕中小肽的测定方法（三氯乙酸法）起草：赵丽霞审核：刘永垒批准：执行日期：2013年6月15日C------------------盐酸的摩尔浓度，mol/l；6.25×0.014--------蛋白质转换系数；m-----------------称取样品质量，ｇ；cp-----------------样品的粗蛋白质含量，%。
全能生物科技发酵豆粕品控与检测
*异黄酮含量判断 A.发酵状况 B.是否参假
大豆中含量：128mg/100g 12种异构体，其中苷元类的染料木素最为稳定
检测方法：三波长243、263、283检测
异黄酮含量
3.50 3.00 2.50
原料
胰蛋白酶抑制因子
優肽100
Y
J
B
大豆球蛋白 400 300 200 100 0
120 100 80 60 40 20
原料 優肽100 Y J B
伴大豆球蛋白
*單位:mg/g
0
原料
優肽100
Y
J
B
特殊分析
•乳酸(提高适口性,抗菌)
•异黄酮(抗氧化,抗应激)
乳酸分析
•总酸检测
•HPLC检测(液相色谱仪) •分光光度计检测(尚开发中)
一般成分分析
水分, CP, PH,灰分,色泽
2013第一季竞品一般成分分析
项目 原料 优肽 100 Y J(BJ) J(M) 10.59 50.46 6.61 5.44 B 7.49 50.2 4.79 4.79
水份 12.19 5.62 8.01 7.42 CP 45.72 50.77 51.06 50.06 灰分 5.54 6.12 9.74 6.65 PH --- 4.70 5.4 5.96
粉碎处理
优肽-100®
管 制 原 因 检 测 设 备
原料质量 与安全
菌种最适 生长条件
菌种最适 生长条件
减少蛋白变性 提高消化率
减少颗粒 粒径大小
产品质量与 安全
NIR, ELISA
发酵豆粕的检测方法
2.3 酚酞指示液：取酚酞 1g，加乙醇 100mL 使溶解，即得。
3.仪器、设备
3.1 分析天平，感量 0.001g。 3.2 容量瓶：100、1000mL。 3.3 烧杯：100 mL。 3.4 磁力搅拌器。 3.5 高速离心机。 3.6 离心管：50mL。
称取粉碎试样 3-5g（精确至 0.01g）于 250mL 三角瓶中。吸取 100mL 20℃ 蒸馏水于三角瓶中，振摇使试样不结块，均匀分散。 将三角瓶固定于摇床，温 度控制在(20 士 2)℃.，振荡 60 min。 取下三角瓶，将溶液用中速定性滤纸过 滤。过滤完毕后，取 10mL 上清液，上机蒸馏、滴定；或采用常量直接蒸馏式或 半微量水蒸气蒸馏式凯氏蒸馏装置蒸馏、滴定。 4.1.2 计算
游离氨含量（﹪）={[(V-V0)×C×0.017×100]/(m×10)}×100% 式中： V——滴定样品消化液所耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL)； V0——滴定空白消化液所耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL)； C ——盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； m ——试样的质量，单位为克（g）； 0.017——铵根离子的毫克当量数。 4.2 小肽含量的测定 4.2.1 操作步骤 称取发酵豆粕 m 3～5g（准确至 0.0001 g）于 250mL 具塞三角瓶内，准确加 入 100.00mL 150g/L 的三氯乙酸溶液。摇匀后，室温振荡 30min，静置 5min，将 上清液倒入 50mL 离心管内,4800r/min，离心 15min。 取上清液 10.00mL 于消化管内，加入 2g～3g 混合催化剂，12mL 浓硫酸，420℃ 消化 1.5h。冷却后，缓慢向消化管内加入约 10mL 蒸馏水，摇匀，冷却后蒸馏。 2%的硼酸溶液吸收，0.1mol/L 的盐酸溶液滴定，消耗盐酸体积 V。 4.2.2. 计算：
发酵豆粕的品质评定
Ｏ 引 言
国家 标 准 ， 现行 的行 业 标 准 出 台较 晚 ， 相 应 发 酵 指 标 的检 测 复 杂 ， 用 户 缺乏 参 考 ， 在 产 品 的 选 择 上 存在 盲 目性 。有些 企业甚 至 为 了美 化 主要 指 标 而采 用 了添 加 无 机 氮 、 热处 理 、 后 加 有 机 酸 等 手 段 迷惑 市场 。本 文 围绕发 酵豆粕 的几 个关 键指 标
在 较大 的不 一致
２ ． ２ 无 机 氮 添 加 对 各 指 标 的 影 响
制作 ， 发酵 结束后 测定 各指 标结 果如 表 ２所示 。
表 ２ 添 加 无 机 氮 对 发 酵 豆 粕 品质 的影 响
由表 ２可 以看 出添 加 无 机 氮 源 的 各 组 粗 蛋 白、 挥发性盐基氮 、 小 肽 含 量 明显 高 于 自制 发 酵
母 提取 物 ０ ． ５ ｇ ， １ 一 磷 酸 氢 二钠 ０ ． ２ ｇ ，柠 檬 酸三 氨 ０ ． ２ ｇ ，土 温 一 ８ Ｏ Ｏ ． １ ｍ Ｌ ，硫 酸 镁 ０ ． ０ ５ ８ ｇ ，硫 酸 锰 ０ ． ０ ２ ５ ｇ ， 醋 酸钠 ０ ． ５ ｇ ， 葡 萄糖 ２ ｇ蒸 馏水 １ ０ ０ ｍＬ ， 固 体 培养基 加入琼 脂粉 ２ ％。 高 压灭菌 。 １ ． ２ ． ２ 菌种 活化 流程 菌种 （ 酵母 菌和 枯草 芽孢 杆 菌 ） 活化 ： 原始 菌
的发酵 产 品感官 评价 氨气 味道 比较 明显 。
２ ． ３ 热 处 理 对 发 酵 豆 粕 指 标 的 影 响
豆粕 组 ． 总 酸 的 含 量 明 显低 于 对 照组 ， 其 它 各 个
指 标差 异不 明显 。 分析 ： 添 加 了无 机 氮 使 总 氮 含 量 增 加 ， 粗 蛋
发酵豆粕检测方法
发酵豆粕检测方法（参考）目录1.检测用仪器简介 (2)2.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 (3)3.Elisa 大豆球蛋白（酶联免疫法） (6)4.小肽的检测（酸溶蛋白） (10)5.寡糖的检测——薄板层析法（TLC） (11)6.乳酸的检测 (12)7.蛋白溶解度的检测（PS） (13)8.发酵豆粕蛋白溶解度的检测（改良） (14)9.水溶性蛋白的检测 (15)10.挥发性盐基氮（VBN） (17)11.PH 值测定 (19)12.水苏糖含量的测定 (20)13.水分、粗蛋白、粗灰分、粗纤维、尿素酶活性的检测 (20)1、检测用仪器简介2、变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速而且可重复的方法。
通过对电泳条带的观察和分析，可以很明显的看出发酵前后或不同产品的抗原蛋白含量。
一、 原理SDS —聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳主要依据蛋白质的分子量对豆粕中的抗原蛋白进行分离。
SDS 与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折迭结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。
SDS —蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。
SDS —PAGE 因易于操作和用途广泛， 成为许多研究领域中一种重要的分析技术。
二、 仪器 1、电泳仪及电泳槽 2、振荡器3、离心机（10000 转）4、移液枪（大、中、小）5、离心管（7ml 、5ml 或 1.5ml 、1ml ）三、 试剂： 1、单体母液： 100ml 丙烯酰胺（ACR ） 30g 甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至 100ml ，棕色瓶 4℃下存放。
可保存 3 个月。
2、分离胶缓冲液（（PH=8.8） 100mlTris-base （1.5mol/L ） 18.17gSDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 8.8，定容至 100ml ，过滤，4℃存放。
发酵豆粕质量鉴定
发酵豆粕质量鉴定发酵豆粕是一种通过微生物发酵制作的豆粕产品，具有较高的营养价值和生物利用率。
其质量鉴定是生产和销售过程中的关键环节，对于保障产品质量和消费者权益具有重要意义。
发酵豆粕的生产工艺发酵豆粕的生产主要包括原料准备、发酵、压榨和干燥等工艺步骤。
首先将豆类原料进行清洗、脱皮、破碎，然后添加适量水和酵素发酵，控制好温度、酶活性和发酵时间，使豆粕中的蛋白质、脂肪等成分得以有效分解和转化。
最后通过压榨和干燥工艺，制得成品发酵豆粕。
发酵豆粕的质量鉴定指标1.蛋白质含量：蛋白质是豆粕的重要营养成分，蛋白质含量高低直接影响产品的营养价值。
2.氨基酸组成：氨基酸是蛋白质的组成单位，不同种类的氨基酸含量及比例对产品的质量有重要影响。
3.水分含量：水分含量过高容易导致产品变质，影响保存期限和稳定性。
4.纤维素含量：纤维素是发酵豆粕中的一种重要成分，对于动物的消化吸收有一定的益处。
5.微生物含量：发酵过程中的微生物种类和数量应符合规定标准，避免产品受到污染。
6.异物含量：产品中应无异物杂质，确保产品的纯度和安全性。
发酵豆粕质量鉴定方法1.化学分析：通过化学分析仪器对产品样品进行蛋白质含量、氨基酸组成、水分含量等指标的测定。
2.显微镜观察：通过显微镜观察产品样品的外观、颗粒大小等特征，判断产品质量是否符合标准。
3.微生物检测：利用微生物检测技术对产品中的微生物种类和数量进行检测，确保产品的卫生安全性。
4.红外光谱分析：通过红外光谱仪器分析样品的特征频率，了解其大分子结构和成分。
5.密度测定：利用密度计检测产品的密度值，判断产品的致密程度和结晶性。
发酵豆粕质量鉴定的意义通过对发酵豆粕的质量鉴定，可以保障产品的质量稳定性和安全性，提高产品的市场竞争力和消费者信任度。
同时，合理的质量鉴定方法可以帮助生产企业及时发现问题，并进行合理控制和调整，确保产品在生产过程中保持较高水准的质量。
综上所述，发酵豆粕的质量鉴定是生产和销售过程中不可或缺的环节，需要通过科学的方法和严格的标准来进行，以确保产品的质量和安全性，为消费者提供优质的产品。
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1方法
薄板层析法（TLC）。
2原理
利用不同大小的糖分子在硅胶薄板上的扩散速度的大小不同，将发酵豆粕中的寡糖分开。
3仪器及试剂
3.1硅胶板：10*10cm；
3.2层析缸（可供放置硅胶板）与硅胶板配套；
3.3烘箱；
3.4移液枪(10μl)以及其配套枪头；
3.5高速离心机；
3.6250ml 具塞锥形瓶；
3.7乙醇（分析纯）
3.8正丙醇（分析纯）
3.9乙酸（分析纯）
3.10
α-萘酚（分析纯）3.11正磷酸（分析纯）
4试剂的配制
4.1展开液：正丙醇：乙酸：水＝1:1:0.1(V/V/V)
4.2显色液：α-萘酚
1ml 正磷酸
10ml 乙醇
989ml 共1000ml
5实验方法及步骤检测技术规范与标准方法编号：QB/HHS JC002-2013
修订：第1版
第1次修改发酵豆粕中不良寡糖的定性检测方法起草：赵丽霞审核：刘永垒
批准：
执行日期：2013年06月15日
5.1寡糖标样：用豆粕代替。
5.2样品的预处理
准确称取发酵豆粕样品5.0g于250mL三角瓶中，加入50.0mL80％的乙醇溶液，70℃水浴浸提1h。
取2mL浸提液，10000r/min离心10min，4℃保藏备用。
5.3样品的测定
在预制硅胶板上点样，点样量为5μL，点样干燥后在展开液中展开，展开至离硅胶板前沿2cm处。
自然晾干后，喷淋显色液，在140℃下烘5min显色。
6结果判定
对比硅胶层析板上，样品和标样的条带，直接判读发酵豆粕中寡糖的降解情况。
不同发酵豆粕样品的TLC图谱
6.1样品中寡糖的定性检测结果：
1-4号：++++
5-6号：+++
7号：—
8号：++
6.2定性判定标准如下：
++++：完全没有降解；(图谱斑点与豆粕相同，表现为三个斑点)
+++：基本没有降解；(除了豆粕中的三个斑点外，蔗糖上方还多了一个单糖)
++：降解不完全；(与豆粕相同有三个斑点，但亮度较暗，如8号样品)
+：基本降解；(对应豆粕中的三个样品亮度较暗或很浅)
—：完全降解；(图谱上无斑点，表现为图谱中非常干净)。