骨髓淋巴细胞分离液试剂盒使用说明
淋巴细胞亚群检测试剂盒
02
产品用途与原理
检测目的与适用范围
检测淋巴细胞亚群
试剂盒可用于检测人体内淋巴细胞亚群的分布和比例，适用于免疫学、血液学等领域的研 究和应用。
评估免疫状态
通过对淋巴细胞亚群的检测，可以了解机体的免疫状态、免疫功能缺陷或免疫应答异常等 情况，为疾病诊断、预后评估等提供参考。
监测免疫治疗
在免疫治疗过程中，定期监测淋巴细胞亚群的变化有助于评估治疗效果、调整治疗方案以 及预测不良反应等。
生物医药研究领域应用
淋巴细胞亚群功能和分子机制研究 药物免疫学研究和评价
免疫应答和免疫调节研究 疫苗免疫效果评估和优化
其他应用场景与案例分享
健康体检和筛查 生物安全评估和检测
流行病学调查和监测 法医鉴定和亲子鉴定等司法鉴定领域
06
产品常见问题与解决方案
试剂配制问题与解决方案
01
02
总结词：试剂配制问题 通常涉及试剂配制过程 中出现的误差，如试剂 浓度不准确、试剂污染 、试剂失效等。
03
产品性能指标
灵敏度与特异性
灵敏度
试剂盒应能够检测到最低限度的淋巴细胞亚群，确保对微小变化做出准确反 应。
特异性
试剂盒应能够准确区分不同的淋巴细胞亚群，避免混淆和误判。
重复性与稳定性
重复性
使用相同样本和试剂盒多次检测时，应得到一致的检测结果。
稳定性
试剂盒在长时间储存和使用过程中应保持稳定，确保检测结果的可靠性。
可以对细胞进行定量和定性分析。03数据分析通过对检测数据的分析，可以获得淋巴细胞亚群的分布和比例等信息
，进而对机体的免疫状态进行评估。
样本要求与处理
样本类型
通常采用外周血或骨髓液等作为样本，要求采集新鲜、无污 染的样本。
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法如下：
1. 悬浮细胞：将需要进行分离的细胞悬浮在分离液中。
2. 离心：将悬浮液在2000rpm的转速下离心5分钟，收集沉淀的细胞。
3. 清洗：使用清洗液清洗离心后的细胞沉淀，以去除杂质和多余的分离液。
4. 再次离心：将清洗后的细胞在相同条件下再次离心，以进一步纯化细胞。
5. 培养：将纯化后的细胞接种到培养基中进行培养，以进行后续的实验或研究。
需要注意的是，大鼠骨髓淋巴细胞分离液需要在无菌条件下操作，且启封后应置常温保存。
如果需要在4℃保存，应避免出现白色结晶，以免影响分离效果。
此外，该试剂盒易感染细菌，因此在使用过程中需要特别注意无菌操作。
以上是大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法，仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关网站。
淋巴细胞分离液说明书
Lonza Walkersville, Inc.biotechserv@Tech Service: 800-521-0390Document # INST-17-829-1 06/07Walkersville, MD 21793-0127 USA© 2007 Lonza Walkersville, Inc.Lymphocyte Separation MediumInstruction For Use17-829EIntroductionLymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.Protocol1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)should be used.Note: Always treat human and other primatesource material as potentially infectious and take safety precautions.2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-freePBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clearplastic centrifuge tube with a cap. For largevolumes use a similar ratio of diluted blood toLSM.3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.4. Remove plasma-PBS without disturbing theinterface.5. Collect the interface with a cannula and dilute to20 ml in serum-free medium, such as RPMI1640.6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.7. Discard supernatant fluid and resuspend pelletin 2-3 ml serum-free medium.8. Count nucleated cells on a hemocytometer orelectronic counting device.9. Lymphocytes will be concentrated at theinterface, along with some platelets andmonocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium anderythrocytes will pellet at the bottom of the tube.References1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cellsand granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and ofgranulocytes by combining centrifugation andsedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.Suppl. 97:77-89.2. Boyum, A. 1976. Isolation of lymphocytes,granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.3. Boyum, A. 1977. Separation of lymphocytes,lymphocyte subgroups and monocytes: areview. Lymphology. 10-2:71-6.4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.5. Boyum, A. et al. 2002. Separation of HumanLymphocytes from Citrated Blood by DensityGradient (NycoPrep) Centrifugation: MonocyteDepletion Depending upon Activation ofMembrane Potassium Channels. Scand. J.Immunol. 56-1:76-84.6. Koistinen, P. 1987. Human peripheral blood andbone marrow cell separation using densitygradient centrifugation on Lymphoprep andPercoll in haematological diseases. Scand. J.Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.Methods. 20:255-62.Product Use StatementTHESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.INST-17-829-1 06/07Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarksherein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.1。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书
MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书主要用途：淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。
可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。
技术背景：全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。
为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。
产品内容：淋巴细胞分离液（200）毫升产品说明书1份产品特点：-密度变化率依照Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。
-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格检测标准：热源检测结果：＜0.5EU∕ml无菌检测结果：已检测应用人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。
这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血细胞及组织匀浆。
实验步骤实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。
然后进行下列操作。
（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。
如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。
1．准备无菌的锥形离心管2．加入淋巴细胞分离液3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。
3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。
（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g5．小心取出离心管，切记不要震动6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。
骨髓淋巴细胞分离液试剂盒使用说明
骨髓淋巴细胞分离液试剂盒使用说明规格：4×200mL/kit保存：18-25℃保存，有效期2年。
骨髓淋巴细胞分离液试剂盒易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后置于常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：动物骨髓淋巴细胞分离液200mL样本稀释液200mL清洗液200mLF液200mL一、各种动物骨髓细胞的采集方法1.大鼠、小鼠骨髓的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的F液，冲洗出胸骨或股骨中全部骨髓液，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清。
沉淀以F液重复洗涤一次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/mL），备用。
2.大动物骨髓的采集：A．骨髓穿刺点定位（1）胸骨：穿刺部位在胸骨中线,胸骨体与胸骨柄连接处,或选胸骨上1/3部。
（2）胫骨：穿刺部位在胫骨内侧,胫骨上端的下方1厘米处。
（3）肋骨：穿刺部位在第5～7肋骨各自的中点上。
（4）髁骨：穿刺部位在髁前上棘后2～3厘米的髁嵴。
（5）股骨：穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处。
B．骨髓穿刺方法（1）实验动物按要求固定，穿刺部位去毛、消毒、麻醉，要求局部麻醉范围直达骨膜，也可作全麻。
（2）操作人员带消毒手套，确定穿刺点，估计从皮肤到骨髓的距离并依此固定骨髓穿刺针长度。
左手拇、食指绷紧穿刺点周围皮肤，右手持穿刺针在穿刺点垂直进针，小弧度左右旋转钻入，当有落空感时表示针尖已进入骨髓腔。
用左手固定穿刺针，右手抽出针芯，连接注射器缓慢抽吸骨髓组织，当注射器内抽到少许骨髓时立即停止抽吸，收集骨髓细胞加入4-5mLF液混匀，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清，沉淀以F液重复洗涤两次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/mL），备用。
（3）左手压住穿刺点周围皮肤，迅速拔出穿刺针，用棉球压迫数分钟。
大鼠外周血淋巴细胞分离液
大鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期说明书修订日期：：2015.10.21Cat number ：KGA832Store at 4 for 12 months ℃For Research Use Only （科研专用）一、试剂盒组份名称 规格 A各种动物外周血淋巴细胞分离液 200ml B全血及组织稀释液（赠品） 200ml C 细胞洗涤液（赠品） 200ml注：本试剂内容中各单品可根据货号单独购买，客户可根据试剂使用情况自行选择购买。
适用于从动物抗凝血液中分离淋巴细胞，无菌条件下所分离的淋巴细胞可用于细胞培养等。
本品仅供科研使用。
二、试剂盒原理本分离液为FICOLL 、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。
抗凝外周血可在分离液中分层。
离心时，在FICOLL 、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层，红细胞污染可忽略不计。
大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。
其他人及动物多重比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
三、试剂盒以外自备仪器和试剂可提供400g 离心力的水平转子离心机、15ml 玻璃离心管、吸管等。
四、试剂盒试剂盒使用注意事项使用注意事项1. 使用前，本分离液需复温至18-22℃。
为获得最佳的实验结果，最好在取血后2小时内进行试验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。
2. 实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用Ca 、Mg 离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。
本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗涤液不含Ca、Mg离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分，推荐使用。
3. 最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。
应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。
4. 当血液样本粘度过高或血样样本大于等于3ml时，最优稀释方法：将血液于18-22℃以250g离心10分钟，弃去血浆，补充添加全血及组织稀释液，添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍，混匀备用。
结核杆菌核酸扩增检测试剂盒说明书
结核杆菌(TB)核酸扩增检测试剂盒说明书(PCR-荧光探针法)【名称】通用名：结核杆菌(TB)核酸检测试剂盒说明书英文名：Mycobacterium Tuberculosis Fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction(PCR)Diagnostic kit汉语拼音：jie he fen zhi gan jun he suan kuo zeng jian ce shi ji he【目的】本试剂盒适用于检测疑似患者痰液、血液、及乳液或肺脏组织等样本中结核分支杆菌(TB)DNA，用于结核分支杆菌(TB)感染的辅助诊断及流行病学调查。
其检测结果仅供参考。
【原理】本试剂盒选取一对结核分支杆菌(TB)一段高保守区域特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取DNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对结核分支杆菌(TB)进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。
【组成】名称数量规格核酸提取液B4管500μl/管Taq酶系1管80μl/管TB PCR MIX1管960μl/管TB-阳性质控品1管50μl/管(1×107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管【标本采集、保存和运输】1.适用标本：血液、痰液、乳液或肺脏组织等。
2.标本采集：血液：无菌注射器抽取待检者静脉血2-3ml，置于EDTA2Na抗凝管中，充分混匀，密闭送检。
痰液：无菌条件下取受检者深部痰液2-3ml，置入5ml离心管，密闭送检。
3.保存和运输：上述处理后的标本可保存于-20℃，保存期为6个月，-70℃可长期保存。
运送应采用0℃冰壶。
【适用仪器】主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。
人CD45分子检测试剂盒(流式细胞仪法-FITC)
当某一细胞通过流式细胞仪被检测到具有此 525nm 特异光信号，就可以确
定该细胞表面表达 CD45 分子。对某一细胞群体进行该项检测，可以确定
本试剂用于体外流式细胞仪半定量检测经 EDTA、枸橼酸钠或肝素钠 抗凝的骨髓细胞表面 CD45 分子的表达。
CD45 的荧光强度结合测向角可以用于流式细胞仪检测时设门，准确找 到白血病细胞群，然后进行细胞免疫分型表达分析。
用 CD45 与侧向角（side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地 分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依 据是 CD45 是所有白细胞的抗原。其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞， 成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞， 成熟红细胞）不表达 CD45[1-3]。SSC 反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞 SSC 最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，早期造血细胞，红细胞。以 CD45/SSC 双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。若同时加上一个，二个甚 或三个荧光标记的单抗，则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样 可以排除正常细胞的干扰。在幼稚细胞百分率低的情况下或检测残存白血 病时尤为必要 。
异硫氰酸（FITC）标记小鼠抗人 CD45 单克隆抗体试剂是一种流式细胞 仪用试剂，主要用于白血病分型诊断时，应用流式细胞术 CD45/SSC 设门进 行急性白血病免疫分型[4]。
通过使用本品检测 CD45+细胞，只作为辅助判断白血病的免疫分型， 其百分率高低与白血病的具体类型、发病、疾病进程和预后并无直接关系， 需要临床医师根据病人的临床表现及其他检查结果综合做出判断。 【检验原理】
大鼠骨髓间充质干细胞分离操作方法
大鼠骨髓间充质干细胞分离操作方法
（1）取SD大鼠（2周龄），颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。
（3）从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注射器吸取DMEM/F12溶液冲出骨髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞。
（4）缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL 离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。
（5）2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨髓基质细胞层（白色浑浊状），PBS洗三次。
（6）用含15%胎牛血清及青链霉素的DMEM/F12以106/mL的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养。
（7）24小时后弃去培养液（看细胞贴壁情况），PBS冲洗2-3次去除未贴壁细胞，加入培养液继续培养。
以后每3d半量换液1次，一般10d细胞生长融合。
（8）经0.25%胰酶消化，1：2传代，其后一般3-5d传代1次，选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
细胞形态
骨髓间充质细胞原代培养过程中，约24小时即可出现贴壁生长，细胞呈圆形、梭形、三角形生长缓慢。
换液后细胞增殖明显，出现以梭形为主的多种形态，10-14天70%-80%可融合达到传代标准。
传代细胞形态单一，呈梭形或扁平型，增殖至细胞融合时呈漩涡状和放射状排列。
人淋巴细胞分离液
人淋巴细胞分离液说明书修订日期：2018.12.10 Cat number：KGA830Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、试剂盒说明人淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，本品为带有乳光或微乳光的注射水溶液，主要组成成份是羟乙基淀粉（6%）与泛影酸钠9%，适用于从血液或组织匀浆中中分离所需细胞。
单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和白细胞等细胞密度较大，为1.090 g/ml 左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090 g/ml，血小板为1.030～1.035 g/ml。
经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
二、试剂盒组份组份Cat: KGA830 保存条件人淋巴细胞分离液200ml 2-8℃，12months三、试剂盒以外自备仪器和试剂注射用生理盐水、离心机四、使用注意事项1. 启封后应置4℃保存，有效期6个月。
2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，混匀后使用。
3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃，否则会影响分离质量。
五、操作方法本分离液要求血液为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
1. 取新鲜抗凝血1ml，与注射用生理盐水1：1混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以400-800×g离心（半径15cm水平转子）20-30分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层（第一层为血浆层（含血小板），第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞），红细胞层表面有悬起的部分白细胞层，收集此界面上的细胞）2. 用吸管小心收集第二层淋巴细胞，放入含4-5毫升注射用生理盐水的试管中，充分混匀后，以500×g离心20分钟，弃上清，沉淀经反复洗2次即得所需细胞。
小鼠外周血淋巴细胞分离液
小鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期：2016.03.31 Cat number：KGA831Storage RT for2yearsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明小鼠淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，主要成分聚蔗糖（Ficoll）或葡聚糖与泛影酸葡甲胺或泛影酸钠，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。
二、试剂盒组份组份Cat:KGA831保存条件小鼠淋巴细胞分离液200ml室温，有效期两年。
样本稀释液（赠品）200ml清洗液（赠品）200ml三、试剂盒以外自备仪器和试剂离心机（最大离心力要求达到1200g）四、操作方法首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A：稀释后的血液样本量小于5ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血浆层。
第二层为环状乳白色淋巴细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。
人淋巴细胞功能相关抗原（LFA-3）ELISA 试剂盒说明书
人淋巴细胞功能相关抗原（LFA-3）ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中LFA-3含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中LFA-3水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入LFA-3抗原、生物素化的抗人LFA-3抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的LFA-3呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10000 pg/mL，5000pg/mL，2500pg/mL，1250pg/mL，625pg/mL，312.5pg/mL，156pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配制。
如配制5000pg/mL标准品：取0.5ml10000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。
各种动物骨髓单核细胞分离液试剂盒
各种动物骨髓单核细胞分离液试剂盒规格：200ml/kit保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。
无菌开封后，保存于室温。
试剂盒组成：试剂A200mL试剂D200mL全血及组织稀释液200mL 细胞洗涤液 200mL操作步骤：1. 制备骨髓的单细胞悬液。
2. 取一支无菌离心管，先加入试剂A ，再加入试剂D ，使两者形成梯度界面〔试剂A ：试剂D 的体积比为3：2，如细胞悬液的体积小于5ml ，那么先后加入3ml 试剂A 和2ml 试剂D ；如细胞悬液的体积大于5ml ，试剂总量与细胞悬液量相等〕，两种试剂的分层一定要清晰。
3. 将细胞悬液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
〔能够使用巴氏德吸管吸取细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面〕4. 室温，水平转子500~800g ，离心20~30min 〔样本的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最正确的分离条件需自行摸索，离心转速最大不超过1000g 〕。
5. 离心后将出现明显的分层：第一层为稀释液层；第二层为白色单核细胞层；第三层为透明试剂D 液层；第四层为半透明试剂A液层；第五层为红细胞层〔如图示〕。
6. 小心吸取第二层乳白色细胞层和第三层试剂D 层到另一无菌的15ml 离心管中，加入10mL 细胞洗涤液或PBS ，颠倒混匀，250g ，离心10min 。
7. 弃上清，5mL 的细胞清洗液或PBS 重悬细胞，250g ，离心10min 。
8. 重复步骤79. 弃上清，细胞重悬备用。
10. 差异贴壁法纯化细胞：用单核细胞培养基以106个/ml 的密度重悬细胞，将细胞铺于细胞板或细胞瓶中，置于细胞培养箱中进行贴壁培养。
1) 2~4h 内贴壁的为单核细胞。
2) 10~24h 内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。
3) 不贴壁的为淋巴细胞。
依照不同细胞的贴壁时间存在差异，以达到简单纯化单核细胞的目的。
血液RNA提取
完全可以,我曾经全血标本6个小时后分离白细胞提RNA,结果很好.因为你提的是白细胞内的RNA,因而在细胞没破损前,一般情况下不会出现RNA的降解,当你开始加TIIZOL时,你的所有器材的处理尤其重要,因而放心的做吧,本人长期从事白血病融合基因的检测，曾经使用4度保存3天的血液进行RNA提取，效果同样非常满意，目前使用的一次性耗材基本上不用DEPC水处理，只要注意规范操作，按TIIZOL说明书操作，提取的RNA 质量同样非常的高。
附上本试验室的简易操作程序：1．外周血及骨髓（抗凝）利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞（1）外周血送检需5-10ml抗凝血，骨髓需1-3ml抗凝，常温送检(样本量根据单个核细胞的数量来确定，一般需要5x106单个核细胞以上)。
（2）加入等体积无菌PBS于外周血及骨髓中充分混合，形成细胞悬液；（3）加入5ml淋巴细胞分离液于另一离心管。
（4）吸取5ml细胞悬液沿管壁轻轻加入到淋巴细胞分离液表面（注意勿与淋巴细胞分离液混合）。
离心1500rpm 20min。
（5）用吸管轻轻吸出界面层（白膜）中的MNC入另一离心管中。
无菌冷PBS洗2次，最后1次洗涤可以将细胞悬液移入EP管中，离心去上清直接或加入TRIzol混匀后-70℃冻存，或直接提取RNA（可以先进行细胞计数以保证细胞数）。
2．利用Trizol的方法提取细胞总RNA（参照Invitrogen公司Trizol说明书）以下步骤要严格防止RNA酶降解RNA，所使用的离心管和枪头要用0.1% DEPC水处理24h，然后高压灭菌并烤干。
尽量快地进行操作，减少RNA降解。
（1）先加1ml Trizol于1×107细胞中，若冻存细胞直接加入Trizol，不需解冻，吹打裂解后室温静置5-10min。
（可-70℃，1月）（2）加入0.2ml氯仿（三氯甲脘），剧烈震荡（vigorously）15s，室温静置2-3min。
（3）在4℃下1,2000g离心15min。
人或各种动物血液及骨髓干细胞分离液
人或各种动物血液及骨髓干细胞分离液规格：200ml保存：18℃-25℃避光保存，有效期2年。
本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。
主要成分是Ficoll400与泛影酸葡甲胺。
适用于从各种动物血液及骨髓中分离干细胞，在医疗和医学生物学研究中广泛应用。
其他人及动物多种比重细胞分离液。
注：因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。
一、分离方法说明及图例A.Ⅰ.取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙基淀粉550按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；Ⅱ.取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液，混匀后以400g（约1500转/分）离心5分钟，弃去上清。
沉淀与羟乙基淀粉550按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；B.加入为步骤A中所得混合液1/2体积的全血及组织稀释液混匀20℃-30℃自然沉降20-30分钟，吸取上清吸取上清备用；C.向步骤B中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液混匀，以500g（约1800转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子），弃去上清保留沉淀细胞；D.向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液调整细胞浓度为2×108—1×109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）；E.以400g（约1500转/分）离心20分钟（半径15cm水平转子）；此时离心管中由上至下细胞分四层。
第一层;为稀释液层。
第二层；为环状乳白色含所需干细胞层。
第三层；为透明分离液层。
第四层；为极少红细胞层。
收集第二层细胞放入为其5-10倍体积的细胞洗涤液中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心15分钟。
沉淀经反复洗涤2次即得所需干细胞。
F.为获得纯度更高的干细胞，在步骤E中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙基淀粉550按1:1比例混匀，20℃-30℃自然沉降20-30分钟，收集上清加入细胞洗涤液500g（约1800转/分）离心15分钟。
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骨髓淋巴细胞分离液试剂盒使用说明
规格：4×200mL/kit
保存：18-25℃保存，有效期2年。
骨髓淋巴细胞分离液试剂盒易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后置于常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：
动物骨髓淋巴细胞分离液200mL
样本稀释液200mL
清洗液200mL
F液200mL
一、各种动物骨髓细胞的采集方法
1.大鼠、小鼠骨髓的采集：用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨，用注射器吸取少量的F液，冲洗出胸骨或股骨中全部骨髓液，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清。
沉淀以F液重复洗涤一次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/mL），备用。
2.大动物骨髓的采集：
A．骨髓穿刺点定位
（1）胸骨：穿刺部位在胸骨中线,胸骨体与胸骨柄连接处,或选胸骨上1/3部。
（2）胫骨：穿刺部位在胫骨内侧,胫骨上端的下方1厘米处。
（3）肋骨：穿刺部位在第5～7肋骨各自的中点上。
（4）髁骨：穿刺部位在髁前上棘后2～3厘米的髁嵴。
（5）股骨：穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处。
B．骨髓穿刺方法
（1）实验动物按要求固定，穿刺部位去毛、消毒、麻醉，要求局部麻醉范围直达骨膜，也可作全麻。
（2）操作人员带消毒手套，确定穿刺点，估计从皮肤到骨髓的距离并依此固定骨髓穿刺针长度。
左手拇、食指绷紧穿刺点周围皮肤，右手持穿刺针在穿刺点垂直进针，小弧度左右旋转钻入，当有落空感时表示针尖已进入骨髓腔。
用左手固定穿刺针，右手抽出针芯，连接注射器缓慢抽吸骨髓组织，当注射器内抽到少许骨髓时立即停止抽吸，收集骨髓细胞加入4-5mL
F液混匀，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清，沉淀以F液重复洗涤两次后用全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/mL），备用。
（3）左手压住穿刺点周围皮肤，迅速拔出穿刺针，用棉球压迫数分钟。
如穿刺的是肋骨，除压迫止血外，还需胶布封贴穿刺点，防止发生气胸。
3.人骨髓的采集：
临床方法收集骨髓细胞加入4-5mL F液混匀，以500g（约1800转/分）离心20分钟，弃上清，沉淀以F液重复洗涤两次后用含20%胎牛血清的全血及组织稀释液悬起（细胞浓度为2×108-1×109个/mL），备用。
二、骨髓淋巴细胞分离方法
1.取一支15mL离心管，加入与骨髓单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于3mL）。
2.用吸管小心吸取骨髓单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min。
（注：根据骨髓单细胞悬液量确定离心条件，骨髓单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件可以客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下细胞分四层。
第一层为稀释液层。
第二层为环状乳白色淋巴细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向离心管中加入10mL清洗液，混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5mL-10mL清洗液重悬所的细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
注意事项：
1.全程过程样本、试剂及实验环境均需要在20℃±2℃的条件下进行。
为获得最佳的实验结果，最好在取血后2h内进行实验，血液存放时间越久，分离效果越差。
血液放置超过6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理后的玻璃制品，因为静电作用会导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交接处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本时，分离效果更佳。