葡萄的组培快繁技术
阳光玫瑰葡萄组培快繁技术
104 XIANGCUN KEJI 2021 年 7 月（下）
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选出最佳培养基及植物生长调节剂配比为 B5+ 6-BA （1.5 mg/L）+ NAA（0.5mg/L）。
处理 1 2 3 4
表 1 葡萄阳光玫瑰的启动培养
阳光玫瑰葡萄属欧美杂交种，但具有典型的欧亚种 特性。该品种果穗呈圆锥形，果穗质量 600 g 左右，大穗 可达 1 800 g，平均单果质量 8～12 g；果粒着生紧密，呈椭 圆形，黄绿色，果面有光泽，果粉少；果肉鲜脆多汁，有玫 瑰香味，可溶性固形物含量在 20%左右，最高可达 26%； 鲜 食 品 质 极 优 ，是 目 前 市 场 上 最 受 欢 迎 的 葡 萄 品 种 之 一［1］。为了进行优良阳光玫瑰葡萄果苗的快速繁育，并 保 持 该 品 种 的 优 良 特 征 ，宜 采 用 组 织 培 养 方 式 进 行 繁 殖。对葡萄进行组织培养的研究已多有报道［2-10］，但是关 于阳光玫瑰葡萄组织培养的论文仅有 1 篇［11］。为了解影 响阳光玫瑰组织培养效果的条件，此试验对阳光玫瑰葡 萄的组织培养和快速繁殖技术进行研究，为阳光玫瑰葡 萄的快速繁殖提供参考。
1 试验材料与方法
1.1 试验材料 试验材料选取阳光玫瑰葡萄春季萌发的 10 cm 长的 茎段，在室内去掉叶片，流水冲洗 30 min，去掉顶梢最嫩 的一段，剪成带 1 个芽的茎段。将茎段放在超净工作台 上，先用70%的酒精浸泡60 s，然后用0.1%氧化汞消毒9 min， 再用无菌水涮洗 3 次，每次 5 min。在无菌接种盘或者无 菌培养皿上，切掉葡萄带芽茎段两端，然后将茎段接种在 启动培养基上。 1.2 启动培养 B5 为葡萄外植体芽诱导的基本培养基，培养基中添 加植物生长调节剂 6-BA 和 NAA。6-BA 的浓度分为 4 个 梯度，分别为 0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L 和 2.0 mg/L， NAA 的浓度为 0.5 mg/L。此次试验接种 30 瓶，每瓶 1 个 外植体，设 3 次重复。外植体生长 30 d，调查统计葡萄无 菌芽的诱导成功率。 1.3 增殖培养 将诱导成功的葡萄组培苗在用无菌操作条件下切
优质葡萄品种组培快繁育苗工厂化技术研究
收稿 日期 ： ０ １—１ ２０ ０—１ 修回 日期 ：０ １—１ ９； ２０ １—２ ６ 作者 简介 ： 何家 海 （ ９ ０ ， 湖北 宜城 人 ． １ ７ 一） 男， 襄樊 耳 业技术学 院生 物 工程 系讲 师 ， Ｉ Ｉ 从事 植物 生理 及组 织培养 研 究。
１ ６
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第 １ 第 １ 卷 期
襄 樊职 业 技术 学院 学 报
２０ ０ ２年 第 １ 期
１ １２ 结果与分析 ．． 表 （） 应 ： 用 ０ １ １反 选 ． ％Ｈｇ １ 同 灭 菌 时 间对 外 植 体 诱 导 成 活 率 影 响 较 大 。 灭 菌 时 间 为 ６—８分 钟 Ｃ２不 时， 因时间短， 不能杀死所有病 菌， 灭菌不彻底 ， 几乎全 部污染 ； 菌ｕ ｆ 延长 至 ｌ 一ｌ 灭 ￣￣ ３ ２ ５分钟 ， 导成 活率 诱 越来越高 ； 之后 ， 由于灭菌时 间过长 ， 对材料伤害加 重， 导致诱 导成活率下 降。 因此 ， 灭菌时 间以 ｌ 一ｌ 分 ２ ５
中图 分 类 号 ：３ ６ 文 献 标 识 码 ： 文章 编 号 ：６ １ １ Ｘ（０ ２ ０ —０ １ ￥３ Ｂ １ ７ —９ ４ ２ ０ ） １ ０ ６—０ ４
葡萄 （ ｔ ｉｉ ｒ） Ｖｉｓ ｎｆ ａ是温 带地 区著名 水果 ， 种植面 积和 产 量在 果树 中居 第 二位 ， 年来 ， ｉＶ ｅ 其 近 在我 国农 业 产 业 结 构 调 整 中 ． 多 地 区 因其 产 量 高 ， 养 价 值 高 ， 植 效 益 好 而 列 为优 先 发 展 产 业项 目， 萄 名 、 、 许 营 种 葡 优 新 品 种 苗 木 的 需 求 量 大 增 ， 常 规 繁殖 方 法 难 于满 足 ， 用 组 培 快 繁 则 可 在 短 期 内提 供 大 量 名 、 、 品种 用 而 优 新
美人指葡萄组培快繁技术研究
＋Ｉ ＢＡ ５ ｍ ｇ Ｌ ： ＢＡ ５ ｍ ｇ Ｌ ＋ Ｉ ０． ／ ６一 ０． ／ ＢＡ ５ ｍ ｇ Ｌ ； ＢＡ ０． ／ ６－
定 时 间后 成 苗 ， 剪 成 带 一 叶 的 单 芽 茎 段 ， 代 又 可 成 再 继
后 进 行 沙 培 炼 苗 ， 备 有 下 铺 电 热 线 并 能 调 节 温 度 的 沙 在
床 。 阴 天或 傍 晚 ， 培 养 瓶 内 的 幼 苗 轻 轻 倒 出 ， 去 根 上 将 洗
０ ０ ／ ．２ｍｇ Ｌ＋ＩＡ ０ ５ｍｇ Ｌ 以 及 ＩＡ ０ ５ｍｇ Ｌ制 成 增 Ｂ ． ／ ； Ｂ ． ／ 殖生 根 培 养 基 ， 较 对 增 殖 生 根 的 影 响 。 培 养 基 中 均 加 比 入３ ％蔗 糖 ， ． ％琼 脂 ，Ｈ 值 调 至 ６ ０ ０６ ｐ ． 。培 养 条 件 为 光 照 强 度 ２５ ０Ｉ ， 日光 照 １ ， 度 ２ ～２ ０ 每 ｘ ６ｈ 温 ５ ７℃ 。
基 ， 根 率 达 ９ ％ 。试 管 苗 根 长 ３ ｍ 时 开始 移栽 ， 栽 成 活 率 ９ ％。 生 ８ ～４ｃ 移 ０
关 键 词 ： 人 指 葡 萄 ； 织 培 养 ； 繁 美 组 快
中 图 分 类 号 ：６ ３ １ ￥ ３ ． 文 献标 识 码 ： Ｂ
葡 萄 的组 培 培 养 过 程 可 分 为 四 种 类 型 ， 无 菌 短 枝 即 型 、 生 芽 增 殖 型 、 官 发 生 型 和胚 状 体 发 生 型 ， 中无 丛 器 其 菌 短枝 型 的 培养 方 法 最早 由 Ｇ ｒ （ ９ ６ 报 道 的 ， ａ ｙ ａ ｙ １６ ） Ｇ ｌ 将 ｚ 待 繁殖 的材 料 剪 成 带 一 叶 的 单 芽 茎 段 ， 入 成 苗 培 养 基 ， 转
‘甜蜜蓝宝石’葡萄组培技术研究
中国果菜China Fruit &Vegetable第43卷,第6期2023年6月栽培生理Cultivation Physiology‘甜蜜蓝宝石’葡萄组培技术研究周闰，杨亚，骆夏辉，刘跃荣，彭丁文，刘伟，申超峰，徐严*（郴州市农业科学研究所/湖南省农业科学院郴州分院，湖南郴州423000）摘要:以鲜食葡萄品种‘甜蜜蓝宝石’为试材，取当年生的半木质化茎段作为组织培养的外植体，通过探索外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽环节的关键技术，建立适用于‘甜蜜蓝宝石’的组培快繁体系。
结果表明，将当年生半木质化茎段，先用75%酒精消毒40s 、再用0.1%升汞消毒15min ，外植体成活率达到40%；最佳启动培养基为1/2MS+30g/L 蔗糖+6.5g/L 琼脂，腋芽萌发率达到57.8%；利用1/2MS 培养基作为继代培养基，增殖效果最好，45d 增殖系数高达5.2；利用1/4MS+IBA 0.1mg/L 培养基进行生根培养效果最好，生根率达到88.3%，新芽茎秆较为粗壮，生长正常；生根培养50d 以上，按程序炼苗过渡移栽，成活率高达90%。
关键词:葡萄；组织培养；快繁技术中图分类号：S663.1文献标志码：A文章编号：1008-1038(2023)06-0062-06DOI：10.19590/ki.1008-1038.2023.06.011Study on Tissue Culture Technology of ‘Sweet Sapphire ’GrapeZHOU Run,YANG Ya,LUO Xiahui,LIU Yuerong,PENG Dingwen,LIU Wei,SHEN Chaofeng,XU Yan *(Chenzhou Institute of Agricultural Science,Chenzhou Branch of Hunan Academy of Agricultural Sciences,Chenzhou 423000,China)Abstract:A tissue culture and rapid propagation system for‘sweet sapphire’was basically established by exploring the key techniques of explant disinfection,starting culture,proliferation culture,rooting culture and transplanting of fresh grape variety ‘sweet sapphire’.The results showed that when the semi-lignified stem segments of the current year were first disinfected with 75%alcohol for 40s and then with 0.1%HgCl 2for 15min,the survival rate of explants reached 40%.The optimal starting medium was 1/2MS+30g/L sucrose+6.5g/L agar,and the germination rate of axillary buds reached 57.8%.The 1/2MS medium was used as the subculture medium,and the proliferation rate was as high as 5.2after 45days.The best rooting effect was obtained by 1/4MS+IBA 0.1mg/L medium,and the rooting rate reached 88.3%.The stem of new bud was relatively strong and the growth was normal.Root culture for收稿日期:2022-10-25基金项目:郴州市级重点研发及技术创新引导资金项目（zdyf201905）；郴州市级研发中心项目（yfzx201904）第一作者简介:周闰（1984—），男，农艺师，本科，主要从事植物组培及脱毒研究工作*通信作者简介:徐严（1987—），男，农艺师，硕士，主要从事果树育种及栽培研究工作葡萄作为重要的经济类果树作物之一，具有悠久的栽培历史和丰富多样的品种，是世界第二大水果。
组培脱毒技术在新疆葡萄快繁育苗中的应用
培 养室 的温 度 控 制在 ２ ＋ ｏ ５ ２Ｃ，并 用 双 管 ４ Ｗ ０ 日光灯 照射 １ｈｄ ２／。
１２１ 外植 体 消毒 、 种 － ． 接
取 “ 香 无 核 ” 新 梢 ， 去 叶 片 ， 留 ３ ４ｍ 紫 的 除 保 －ｃ
的单 芽 茎段 ， 用 自来水 冲洗 １ｍ ｎ 用 蒸馏 水 洗涤 先 ０ ｉ， １ ，在 超净 工作 台上 用 ７ ％酒精 浸 泡一 下 ，再 用 次 ０
０１ ．％Ｌ汞 分 别 浸泡 ３ ５ ７ ９ １ ｍ ｎ 、 、 、 、 Ｉ ｉ ，然 后 用无 菌 水 冲 洗 ４ ５次 ， 以无 菌 滤 纸 吸 干 水 分 ， ～ 并 置于 双 目解 剖镜 下 ， 无菌镊 子 和解剖 针剥 离幼 叶和 叶原基 ， 用 切
天 １～ ０ 夜 间 ８ １ ℃； ８ ２ ℃， ～ ０ 叶菜类 的 苗 白天 １－ ５ ０ １ ℃，
夜间 ３４ － ％。
６９ 病 虫 害 防 治 ．
秧 苗达 到壮 苗标准后 及 时 出苗 。秧 苗包 装容器
应 有一 定强 度 ， 选用 纸箱 、 可 木条箱 或 塑料箱 。远距
离 运输 装苗 量不 易过大 ， 运输 过程 中应采 取控 温 、 保 湿、 防风 、 阳等措 施保 护秧苗 。秧 苗运 输 的适 宜温 遮
除 ， 喷药 防治 ； 苗定植 喷 药预 防病害发 生 。 并 秧
６１ 成 苗 标 准 ．０
平盘 和穴盘 用完后 要 清除基 质 等残 留物 ，可 用 ５１的水 和次氯 酸钠溶 液浸 泡 。 理后 在荫 凉处用 薄 ： 处 膜 密 封 ２ ｈ 再用 清水 冲洗 干净 并 放在 荫 凉处 凉干 ， ４， 然 后储 藏在无 鼠害 、 害 、 虫 干燥 的库房 里备用 。
葡萄的组培快繁技术
葡萄的组织培养技术湖北第二师范学院1.葡萄外植体的采集和消毒1.1外植体是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
在该组织培养中，用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。
葡萄脱毒过程中，外植体的大小与脱毒率高低成相关性。
所以选取外植体的大小适宜在葡萄脱毒过程中应要掌握好.葡萄在茎尖培养中，光的效果通常要比暗培养好。
一般多采用光培养的方式，试管苗培养适宜的温度是25+/-2度1.2防止外植体带菌1.2.1选择好外植体采集时期和采集部位1.2.1.1外植体采集以春秋为宜；1.2.1.2优先选择地上部分作为外植体；1.2.1.3阴雨天勿采，晴天下午采集；1.2.1.4采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。
1.2.2室内或无菌条件下进行预培养。
1.2.3外植体严格灭菌灭菌效果实验多次灭菌和交替灭菌1.3培养材料的消毒1.3.1先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
1.3.2在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
1.3.3再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水消毒10分钟。
1.3.4取出后用无菌水冲洗三、四次。
1.4制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。
“然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。
2.培养基的成分及制备2.1培养基的成分组织培养过程中，外植体生长所需的营养和生长因子，主要是由培养基供应的。
因此，培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。
所有这些物质，可概括为5大类：2.1.1无机营养物培养基的各种盐类中均含有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯。
无机氮可以两种形式供应，即硝态氮和铵态氮。
有些培养基以硝态氮为主，另一些以铵态氮为主，多数二者兼而有之。
葡萄的栽培方法
葡萄的栽培方法葡萄是一种色艳味美且富有营养的水果，深受人们喜爱。
葡萄适应性很强，在我国广大地区均在种植。
栽培葡萄中主要有欧洲葡萄和美洲葡萄两大种。
下面是店铺为你整理的关于葡萄栽培技术方面的相关内容，希望能帮到你。
葡萄栽培技术1、育苗后移植。
扦插、压条和嫁接是葡萄常用的育苗方法。
其中以扦插法最简单，使用最普遍。
现将近年葡萄育苗的一些新方法介绍如下。
①阳畦小塑料袋扦插蒲膜覆盖法。
春季土温10~15ºC进行扦插时，将鸡粪、锯木屑、河沙、菜园土按配比混合作培养土，装入底部有小孔的小塑料袋，使培养土高15厘米左右，而后将三芽一段的葡萄枝条用清水浸泡一夜，轻轻插入培养土中，上端留一芽在塑料袋外面。
灵而将塑料袋埋入土中，举世足水后，上面加盖薄膜，至成苗为止。
与露天插育苗相比，此法具有如下好处：成苗早，较露天扦插提早将近一个月;成活率高，达95%以上，而露天扦插一般仅为80%左右，节省浇水的劳力;占地少。
②绿枝扦插。
6月份从当年的新梢或副梢上，截取半木质化的2-3节长的枝条，进行绿枝扦插。
除插条的顶端保留1片绿叶(叶片较大可剪去一半)、其他节留1段叶柄外，扦插与管理均与硬枝扦插相同。
③水催根。
6月，剪取当年生蔓(下端带一节或两节二年生蔓);插入盛大半瓶水的罐头瓶中，取牛皮纸或塑料薄膜剪成瓶口大小的圆形，并剪一刀至圆心，然后把葡萄蔓夹在剪口中间，再用胶布之类贴好;将插了葡萄蔓的瓶移入较暖和的房间或厨房，15天左右出根，便可移到肥沃疏松的土壤中。
一般一年能催根2-3次，每次15天左右，一个罐头瓶能插8-10株苗，利用层架，一个房间可培育2000-3000瓶，可育苗1.6-2万株。
④当年扦插育苗、当年压枝以苗繁苗。
这是提高葡萄繁殖系数的一项新技术。
扦插后加强肥水管理，使苗肥苗壮。
当苗长到50厘米时，摘心壮株，促使副梢生长，每株保留3-5个副梢。
7月中旬，待副梢长10厘米左右，进行压枝，将主梢压于土中5-10厘米，副梢直立在地面上生长。
植物无糖组培快繁技术
植物无糖组培快繁技术一、无糖组培技术原理无糖组培快繁技术是由日本千叶大学的古在丰树教授上世纪八十年代末发明。
它是一种全新的植物组织培养技术，是环境控制技术和组织培养技术的有机结合。
它以CO2代替糖作为植物体的碳源，利用工程技术手段调节组培微环境的空气、光照、温度、湿度等影响因子，促进植物光合作用，使组培植物由兼养型转变为自养型，从而促进植物的生长发育。
经大量实验研究证明，该项研究成果已成为世界领先技术。
目前，中国、美国、英国、韩国等国家已将该项技术应用于种苗工业化生产中。
该技术于1997年由国家外国专家局和昆明市科技局委托昆明市环境科学研究所从日本引进。
二、无糖组培技术优势由于植物无糖组培以CO2代替糖作为植物体的碳源，对植物无糖组培微繁殖中的容器换气次数、光照强度、CO2浓度、培养基质、植物生长调节剂进行调节，并通过监测反馈结合植株生长特性建立符合植株生长要求的稳定供气系统和温度调控系统，从而解决了传统组织培养中存在的污染率高、植物生长发育不良、生长迟缓、生理功能紊乱、玻璃苗、畸形苗多等问题。
据相关资料报道，无糖组培快繁技术与传统的植物组织培养技术相比，显著提高苗的质量和产苗率，可缩短培养周期，种苗生产综合成本降低。
经大量实验研究证明，该项研究成果已成为世界领先技术。
无糖组培生产工艺简单，流程缩短，技术和设备的集成度提高，降低了人工操作强度，更易于在规模化生产上推广应用。
三、无糖组培技术国内外研究进展无糖组培快繁技术通过多年的试验研究和生产示范，在引进消化吸收国外先进技术的基础上，结合国情，昆明市环境科学研究所研制开发了无糖培养微繁殖生产的配套设施，获得三项专利。
目前，该项技术已初步应用于非洲菊、彩色马蹄莲、灯盏花、甘薯、葡萄、满天星等植物并获得成功。
上述研究结果表明，无糖组培技术培育出的苗具有抽叶多、植株健壮、节间距短、根系发达、干物质积累多、光合自养能力强等优良的生物学性状。
美国、韩国、英国、日本等国家已将该项技术应用于生产，并显示出了巨大的优势和良好的效果。
果树组培快繁技术流程
果树组培快繁技术流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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设施葡萄高产优质高效栽培技术
设施葡萄高产优质高效栽培技术设施葡萄种植技术，作为一种高产优质高效的栽培方法，在近几年得到了广泛的应用和推广。
通过科学的管理和合理的技术操作，设施葡萄种植能够在较小的土地面积上获得更高的产量和品质。
本文将从设施选择、栽培管理、病虫害防治等方面进行分析和论述。
一、设施选择1. 影响设施选择因素设施种植葡萄要考虑到气候条件、土壤状况和自然灾害等因素。
它们将直接影响葡萄生长发育和产量品质。
2. 设施种类选择常见的设施包括温室、大棚和留光膜棚等。
根据当地的气候和土壤特点，选择适合的设施种类是提高种植效益的前提。
二、栽培管理1. 土壤改良为了提供良好的生长环境，设施葡萄种植需要对土壤进行改良。
适当施用有机肥料，改善土壤结构，提高土壤肥力，有助于葡萄的生长。
2. 定植和培训选择健康的葡萄苗木，控制定植密度，保证葡萄间的通风和光照。
同时，及时进行葡萄藤的培训和修剪，使其分枝均匀，有利于果实的均匀生长。
3. 水肥管理设施葡萄种植需要合理施用水肥。
注意根据生长阶段和气候条件调整水肥比例，避免过度施肥和浇水过多造成的病害和品质下降。
4. 病虫害防治葡萄种植过程中，常常会受到多种病虫害的侵袭。
通过预防、监测和合理施用农药，可以有效控制病虫害的发生和传播。
三、高产优质高效种植技术1. 授粉和授粉期管理合理管理授粉期可以提高葡萄的授粉率和果实质量。
保证花期内的足够光照和温度条件，有助于提高果实的成熟度和品质。
2. 管理果穗和果粒数量设施葡萄的特点是能在较小的面积上获得高产量。
根据葡萄品种和设施类型，控制果穗和果粒数量，使其达到最佳的生长状态。
3. 控制葡萄生长周期通过合理控制葡萄的生长周期，可以达到早熟或晚熟的目的，使得葡萄的上市时间增加，提高经济效益。
结语设施葡萄高产优质高效的栽培技术，对于现代农业生产具有重要意义。
通过科学的设施选择、栽培管理和病虫害防治等方面的措施，可以提高葡萄的产量和品质，增加农民的收益。
同时，设施葡萄种植技术也为我们提供了可持续发展的道路，为农业现代化做出了重要贡献。
香妃葡萄的简化组培快繁
８
［ ］ 莳庆文． 莓越冬性 试验研 究初报 ［ ］ 沈 阳农业大学 学 ２ 树 Ｊ．
报 ，００，１ ２ ：７ ２０ ３ （ ） １２—１２ ７．
［ ］ 董丽， ３ 黄亦工， 贾麦娥 。 Ｊ京 园林常绿阔叶植物抗冻性及 等． Ｅ
香妃葡萄是我所培育 的大粒 、 早熟且有浓 郁玫瑰香味的优 良品种。为建立离体保存体系 和加快 繁 育 ， 们进 行 了简化 组培 扩 繁试 验 。 我
１ 材 料和 方法
和带 芽 茎 段 ， 流 水 中 冲 洗 ２～３小 时 后 ， 在 用 ７ ％ 酒精 浸泡 ３ ０ Ｏ秒 ， 再用 ０ １ 升 汞处理 ７～ ．％ ８
３ 、 ％ 琼脂 ０ ５ ； ． ％ 最佳繁 殖生根 培养基 为 １２ ／ ＭＳ＋ Ｂ ． ｌ ／ ． ２ 、 Ｉ Ａ０ ２玎 Ｌ 糖 ％ 琼脂 ０ ５ 。在 增殖生根培养基 中， ｇ ．％ 用 食用 白砂糖代替蔗糖 ， 自来水代替 蒸馏水 ， 用 增殖生根 效果基 本相 同， 以降低 生产成本 。 可 关键词 ： 香妃 葡萄 ； 织培 养 组 中图分类号 ： ￥６ ． ６３ １ 文献 标识 码 ： Ｂ 文章编号 ： １０ ２ １ （０ ６ ０ ０ ０ Ｏ ０ ２— ９ ０ ２０ ）２－ ０ ８一 ２
调至 ５ ８ ．。培养基 于高压灭菌锅 （ 压力 为 １ １ ． ｋ／ｍ ） ｇｃ 中灭 菌 ｌ ５分 钟 。培养 时 温度 ２ ２～ ２℃ ， ５ 光强 ２０ Ｉ， ００ｘ每天光照 ｌ ２小时 。
水代替蒸馏水 ， 对香妃试 管苗 的增殖和生根影
响很小 ， 用蔗 糖及 蒸馏 水 的效果 基本 相 同 。 和
葡萄砧木-抗砧3号组织培养快繁技术初探
葡萄砧木-抗砧3号组织培养快繁技术初探引言葡萄栽培中，砧木扮演着重要的角色。
砧木是指承接上部果树的嫁接树，主要用于家葡萄和饮用葡萄的生产上，它对于影响葡萄的耐病性、抗寒性以及养分吸收等方面都有着非常重要的作用。
在葡萄栽培中，常见的砧木有铁线木砧、江北香桥砧、京欣砧、汉阳砧、鸟嘴栎砧、O39-16砧、SO4砧和101-14Mgt.砧等，其中，抗砧3号砧木在近年来受到了广泛关注，因其具有很好的抗病毒和耐盐碱适应性。
在砧木生产中，为满足市场需求，提高生产效率和降低成本，繁殖砧木已成为非常必要的一项技术。
常见的繁殖方法有苗条繁殖、接枝繁殖、愈伤组织培养和组培快繁等。
本文主要介绍抗砧3号组织培养快繁技术的初步研究。
抗砧3号组织培养快繁技术实验材料与仪器实验所用的砧木为抗砧3号，子实体来自于葡萄园生长正常的葡萄株，采摘后立即进行快速消毒处理。
实验所需的基本培养基为MS基本培养基，辅以50g/L蔗糖、0.3g/L植物生长素等添加物。
实验所需仪器主要为无菌操作台、恒温摇床、离心机、显微镜和光学显微镜等。
消毒处理首先，将采摘来的砧木子实体用70%的酒精中洗涤2分钟，再用0.1%的双氧水或10%的漂白粉溶液中消毒15分钟。
消毒处理完成后，将砧木子实体刨去表皮进行组织分离。
组织分离将消毒过的砧木子实体贴上无菌手套，用无菌铲子分离出砧木子实体中的叶片、芽眼、幼嫩茎段等为材料进行组织培养。
将分离好的材料放入含有基本MS培养基的试管中。
组织培养经过溶液快速去除杂质等这一系列前置工作后，我们将所得的砧木材料通过微操作放置到初步培养的含有基本MS培养基的试管中，试管中加入50g/L的蔗糖和0.3g/L的植物生长素等添加物，这些添加物可以促进组织分化和生长。
另外为防止生长过程中细菌污染，实验过程中需采用无菌技术，保证操作过程无菌。
结果与分析经过一段时间的培养后，我们发现在添加植物生长素等添加物的培养基中，砧木材料可以快速分化和生长。
葡萄的组培快繁技术
葡萄的组培快繁技术
于秋艳;王丹萍
【期刊名称】《农技服务》
【年(卷),期】2016(033)017
【摘要】葡萄组培快繁,是利用细胞的全能性的原理,利用葡萄组织的藤、叶片、种子、花粉等器官,培养成完整葡萄植株的一种快速繁殖技术.葡萄的组培快繁过程大致有无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型和胚状体发生型等四种类型.葡萄组培快繁技术在应用中要注意基因型、外植体的选择、植体的生理状态、培养基的选择、植物激素的种类和浓度、培养方式以及培养条件等主要影响因素,葡萄组培快繁技术更有利于及时满足人们的需求,是未来除葡萄外更多植物培养的发展方向.【总页数】1页(P155)
【作者】于秋艳;王丹萍
【作者单位】通化市园艺研究所,吉林通化 134001;通化市园艺研究所,吉林通化134001
【正文语种】中文
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4.脱毒葡萄试管苗组培快繁技术试验 [J], 张亚飞;赵宇
5.阳光玫瑰葡萄组培快繁技术 [J], 孙知雨
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藤稔葡萄组培快繁与脱毒研究
Ｉ Ａ、 Ａ 组 成 ８种 不 同 培 养 基 ， 养 ４ ～ ０ｄ 观 察 导培 养 基 ． Ａ Ｉ Ｂ 培 ０ ５ ， Ⅱ号 培养 基 为 最适 宜 的诱 导 培 养基 ， 苗 成
一
９ — ５
瘩业 ｌ 难ｌ瓤 Ｌ
数最多 ， 出苗 率 达 到 ９ ％ ； ６ １ 培 养基 成 苗 数 次 之 ， Ｖ号
体 系 ， 出 了提 高 移 栽 成 活 率 的 几 个 关 键 步 骤 。 提
关 键词 ： 葡萄 ； 织培 养 ； 毒 组 脱
藤 稔葡 萄 是 日本 巨峰 群 品种 ，亲本 为井 川 ６ ２ 增殖 生根 情况 。 ８￣
先锋。 嫩梢 绿 色 ， 附带 浅 紫红色 。 叶淡红 色 ， 绒 毛 。 １ － 热 处理 培 养 对 已成 苗 的植 株进 行 热 处 理培 幼 有 ．３ ２
试 究 ２１６ 验研 ０１ ．
组培快繁的主要操作流程和技术要点
组培快繁的主要操作流程和技术要点1. 供体材料的选择和消毒
- 选择健康、无病的植株作为供体材料
- 对供体材料进行充分消毒,去除污染源
2. 无菌操作和接种
- 在无菌条件下操作,避免污染
- 将消毒后的外植体接种到培养基上
3. 培养条件的控制
- 严格控制光照、温度、湿度等环境条件
- 保持培养基的pH值和营养成分适中
4. 脱分化和诱导
- 通过添加不同植物生长调节剂,诱导外植体脱分化
- 形成不定芽或胚状体
5. 增殖和生根
- 对脱分化后的组织进行增殖培养
- 添加适当auxin诱导生根
6. 移植和驯化
- 将体细胞系移植到无菌基质中
- 逐步驯化,使幼植株适应自然环境
7. 扩繁和种苗生产
- 将驯化的植株扩繁,大量繁殖种苗
- 严格检疫,确保种苗质量
组培快繁技术需要严格无菌操作,合理控制培养条件,精心调节植物生长素水平,从而实现植物组织的脱分化、增殖和再生,快速获得大量优质种苗。
葡萄促早栽培技术
葡萄促早栽培技术嘿，朋友们！咱今天就来讲讲葡萄促早栽培技术。
你们想啊，要是能让葡萄早点成熟，那咱不就能早点尝到那甜甜的滋味啦！先来说说品种选择吧，这可太重要啦！就好比你去挑衣服，得选适合自己的呀。
咱得挑那些适合促早栽培的葡萄品种，它们就像那些天生就有优势的选手，稍微加点油就能跑得飞快。
然后呢，是建园。
这就像是给葡萄们安个家，家得舒服呀。
土壤要肥沃，排水得好，可不能让葡萄们“住”在一个脏兮兮、湿漉漉的地方。
就好像咱人也喜欢住在干净、舒适的房子里不是？接下来是定植啦。
这可得小心点，就跟咱种小树苗似的，得让它站直了、站稳了。
种得歪歪扭扭的，那葡萄怎么能长得好呢？施肥也是关键的一环呀！就像人要吃饭才有劲一样，葡萄也得有足够的营养呀。
氮磷钾啥的，一个都不能少，得给它们搭配好了，不然葡萄可要不高兴啦。
修剪也不能马虎呀！这就像给葡萄做个造型，把那些多余的枝条剪掉，让养分都集中到该长的地方去。
你想想，要是不修剪，那葡萄不就长得乱七八糟的啦。
还有温度的控制呢。
葡萄就像个娇贵的小孩子，冷了不行，热了也不行。
咱得给它创造一个适宜的环境，让它舒舒服服地长大。
说到这，你们不觉得种葡萄就跟养孩子似的吗？得精心呵护，每一个环节都不能大意。
要是有一个环节出了问题，那这葡萄可就长不好啦。
再说说病虫害防治吧。
这就像是给葡萄打预防针，可不能等生病了才去治呀，那多麻烦。
平时就得做好预防工作，让那些病虫害都不敢靠近。
哎呀呀，这葡萄促早栽培技术可真是一门大学问呀！咱可得好好研究研究，把咱的葡萄种得棒棒的，让大家都能早点吃到那美味的葡萄。
咱也能骄傲地说：“看，这是我种的葡萄！”这感觉，多好呀！所以呀，大家都行动起来吧，让我们的葡萄快快长大，早早成熟！。
巨峰葡萄组织培养快繁技术研究
生绿 色不 定芽 ， 经一 周时 间长 成丛 生芽 ， 同 再 不
培养基 的诱 导效 果 见 表 ３ 。６种 芽 分 化 培养 基
对 葡 萄腋 芽 茎 段 发 生 不 定 芽 的 诱 导 率 ７ ％ 一 ５
１０ ， ０ ％ 不定 芽发 生 数 量 以 Ｄ 和 Ｅ两 种 芽 分 化
培 养基 （ ／ ＭＳ ＋ ０ ０ ｍ ／ Ａ １２ ． ３ ｇ Ｌ Ｎ Ａ＋１Ｏ ｇ Ｌ ．ｍ ／６
制 ６种 培养基 （ １ ， １０ ｌＬ的 Ｎ Ｏ 调 表 ） 用 ． ｍｏ ／ ａＨ
节 ｐ 值 至 ５８ 加 热 到 ８ ￣ 加 人 琼 脂 粉 Ｈ ．， ０Ｃ时
４ ０ ／ ， 沸后 分 装 于 １０ 的三 角瓶 中制 成 ． ｇＬ 煮 ０ ｍｌ
芽或 顶芽 ， 为组 培外植 体 。 作 取材 时用 ７ ％ 的酒精 棉 球擦 洗 剪 刀 ， 盛 ５ 对 放嫩 枝 的器 械 消 毒 ， 减少 细菌 污 染 。用 自来 水
一
２０ Ｌ ０ ０ ｘ条件下 培 养诱 导不 定芽 。
表 １ 巨峰葡 萄腋 芽茎段 ６种芽分化培养基的组成
Ｂ 和 １２ Ａ ／ ＭＳ＋ ０ ０ ｍｇ Ｌ ＮＡＡ ＋１ ０ ｍｇ Ｌ ６ ．５ ／ ． ／
一
Ｂ Ａ培养 基 ） 导 出 的 为多 ， 诱 分别 是 ８个 和 ６
个 。但 不定 芽 的 生 长情 况 以 Ｆ培 养 基 （ ／ ＭＳ １２
＋ ．０ｍｇＬ Ａ ０ １ ／ Ｎ Ａ＋１Ｏ ｇＬ ． ｍ ／ ６一Ｂ Ａ培 养基 ） 较
好。
表 ３ 不 同培 养基 对巨峰葡萄腋芽茎段丛 生芽诱导 效果 ～１ １ 试验材 料与 Nhomakorabea消毒 ．
０ １ ｍ ／ Ｎ Ａ 和 ０ ５ ～１０ ｇ Ｌ ．０ ｇＬ Ａ ． ． ｍ ／ ６一Ｂ 配 Ａ，
百花山葡萄组织培养和快速繁殖
小 种 群 的保 存 与 繁 殖提 供 了保 障 。
关键 词 ： 百花 山 葡萄 ； 快 速繁 殖 ； 组织培 养 中 图分类 号 ： ￥ ７ ２ ３ ． １ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编号 ： １ ０ ０ １ — ７ ４ ６ １ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ — ０ ０ ９ ９ — ０ ４
ｆ ｅ ｃ ｔ ｆ ｏ ｒ ４ ｍｉ ｎ ｗａ ｓ ｍｏ ｓ ｔ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ 。ｔ ｈ ｅ ｂ ｅ ｓ ｔ ｃ ａ ｌ ｌ ｕ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｗａ ｓ Ｍ Ｓ＋ ０ ． ６ ｍｇ ・Ｌ ６ － ＢＡ ＋ ０ ． ３ ｍｇ
Ｔｉ ｓ ｓ ｕｅ Ｃｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ Ｒａ ｐｉ ｄ Ｐｒ ｏ ｐ ａ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｖｉ ｔ ｉ ｓ ａ ｍｕｒ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ Ｒｕ ｐｒ ．ｖ ａ ｒ ． ｄｉ ｓ ｓ ｅ ｃ ｔ ａ ＢＩ Ｎ Ｙｕ — ｂ ｏ ，Ｓ ＨＡ Ｈａ ｉ — ｆ ｅ ｎ ｇ 。 ，ＲＥＮ Ｊ ｉ ａ ｎ — ＷＵ ，Ｂ ＡＩ Ｑｉ － ｆ ａ ｎ ｇ
（ １ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ Ｂ ０ Ｐ ｃ ＾ 竹 ０ ｚ ０ ｇ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ８ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ２ ． Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇＦ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｓ ｅ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ Ｓ ｅ ｅ ｄ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ ９ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
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葡萄的组织培养技术湖北第二师范学院1.葡萄外植体的采集和消毒1.1外植体是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
在该组织培养中，用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。
葡萄脱毒过程中，外植体的大小与脱毒率高低成相关性。
所以选取外植体的大小适宜在葡萄脱毒过程中应要掌握好.葡萄在茎尖培养中，光的效果通常要比暗培养好。
一般多采用光培养的方式，试管苗培养适宜的温度是25+/-2度1.2防止外植体带菌1.2.1选择好外植体采集时期和采集部位1.2.1.1外植体采集以春秋为宜；1.2.1.2优先选择地上部分作为外植体；1.2.1.3阴雨天勿采，晴天下午采集；1.2.1.4采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。
1.2.2室内或无菌条件下进行预培养。
1.2.3外植体严格灭菌灭菌效果实验多次灭菌和交替灭菌1.3培养材料的消毒1.3.1先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
1.3.2在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
1.3.3再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水消毒10分钟。
1.3.4取出后用无菌水冲洗三、四次。
1.4制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。
“然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。
2.培养基的成分及制备2.1培养基的成分组织培养过程中，外植体生长所需的营养和生长因子，主要是由培养基供应的。
因此，培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。
所有这些物质，可概括为5大类：2.1.1无机营养物培养基的各种盐类中均含有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯。
无机氮可以两种形式供应，即硝态氮和铵态氮。
有些培养基以硝态氮为主，另一些以铵态氮为主，多数二者兼而有之。
铁往往以无机铁供应，如硫酸亚铁，为了防止沉淀，目前皆用螯合铁，即硫酸亚铁加乙二胺四乙酸钠配成。
2.1.2有机物质主要有两类：一是作为有机营养物质，为植物细胞提供碳、氢等必要元素，如糖类、氨基酸及其酰胺类；另一类是一些生理活性物质，在植物代谢中起一定作用，如硫胺素、吡哆醇、烟酸、生物素、肌醇、单核甘酸及其碱基。
2.1.3植物生长刺激物质激素及激素浓度直接影响着愈伤组织的状态，质地和分散性。
以ＭＳ为基本培养基，附加适量的细胞分裂素6-BA和NAA。
最适的培养基配方为MS+6-BA0.5-3.0mg/L和NAA0.01-1.00mg/L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。
2.1.4其他附加物这些物质不是植物生长所必需的，但对细胞生长有益。
琼脂(agar)是固体培养基的必要成分，本身并不提供任何营养.琼脂条的用量在6—10g／L之间，抗生物质，包括青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5—20mg/L之间。
添加抗生物质可防止菌类污染，减少培养中材料的损失，尤其对大量通气长期培养，效果更好。
对于刚感染的组织材料，可向培养基中注入5%—10%的抗菌素。
应当注意抗生素对植物组织的生长也有抑制作用，值得提醒的是，在工作中不能以为有了抗菌素，而放松灭菌措施。
3.1.5其他对生长有益的未知复合成分常用的为植物的天然汁液，如酵母提取物等。
他们的作用是供给一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素物质等.以下为MS培养基配方:下面列出继代培养和试管苗培养的培养基配方。
①继代培养和生芽培养的培养基配方是：MS培养基+6BA(质量浓度为0.5～1.0 mg/L) +NAA(质量浓度为0.1～0.15 mg/L)。
即在1 L MS培养基中加入5～10 mL6BA和1～1.5 mL的NAA母液。
NAA配合6BA，可以促进不定芽的生长。
②生根培养的培养基配方是：MS培养基+NAA(质量浓度为0.1～0.5 mg/L)。
即在1 L MS培养基中加入1～5 mL的NAA母液。
NAA起促进生根的作用。
2.2培养基制备的方法2.2.1培养基配方的选定使用标准方法，应严格按其规定进行配制.2.2.2培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。
2.2.3培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。
完全称取完毕后，还应进行一次检查。
2.2.4培养基各成份的混合和溶化配置母液时，各种化合物一定要单独充分溶解后再倒入容量瓶中定容，避免其中的离子之间发生沉淀.激素一般难溶于水，所以生长素用少量0.1mol/L NaOH溶液，少量0.1mol/L HCL溶解，然后用蒸馏水或去离子水定容。
最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化。
待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。
如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。
在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。
2.2.5培养基pH的初步调正因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行PH的初步调正。
对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终PH，保证培养基的质量。
PH调整后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
2.2.6培养基的过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。
一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应折叠成折扇或漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。
2.2.7培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。
分装量不得超过容器装盛量的2/3。
容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎。
分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。
分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。
每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。
2.2.8培养基的灭菌可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。
某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。
抗生素则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50°C左右的培养基中。
琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成适当斜面，待其自然凝固。
2.2.9培养基的质量测试每批培养基制备好以后，应仔细检查一遍,并测定其最终pH。
将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。
用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长不好。
应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。
2.2.10培养基的保存培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。
放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。
每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。
3.接种过程3.1准备工作在正式接种之前要做好准备工作，包括准备酒精灯、灭菌用脱脂棉以及准备接种工具、分取培养基、接种用苗和工作台灭菌等。
3.2接种过程操作人进入接种室，酒精棉球擦拭手掌；外植体移入工作台面，用升汞（0.9%）浸泡，再用酒精快速擦拭；无菌水漂洗数次。
点燃酒精灯，用具入酒精瓶浸泡数分钟，取出在酒精灯上灼烧。
拿出培养皿；外植体放在培养皿中，用刀子切割，镊子接种于培养瓶中每瓶接种4－10个。
封口膜要及时捆绑，其松紧度以用手转不动为准；下台前要把品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示到瓶上。
3.3在适宜的培养条件下进行培养.4.培养条件4.1.温度：，培养温度为25Ċ，3-4周更换一次培养基。
3次重复。
4.2.光：刚开始无光,一段时间后保持光照10-12h/d，光强800-1200LX。
4.3.渗透压：渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。
在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。
4.4.PH:保证培养基pH为5～6．5。
在培养过程中pH可发生变化，磷酸氢盐或二氢盐起到缓冲作用，可起稳定作用。
4.5通气：悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。
小量悬浮培养时时常转动或振荡，可起通气和搅拌作用。
5.愈伤组织的形成和试管苗的培养5.1愈伤组织的培养一般来说，从接种外植体到出现愈伤组织，需要经过2周时间。
2周之内就可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。
首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。
2周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养。
5.2愈伤组织的继代培养：进行继代培养所用的培养基，和培养愈伤组织所用的培养基相同。
在严格的无菌条件下(接种箱内)将愈伤组织连同原来的外植体，一起移到新的培养基上。
愈伤组织的继代培养，一代为20 d。
如果延长培养时间，培养基中的营养物质会减少，外植体也会分泌一些有毒物质，造成自身中毒。
20 d以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行继代培养，还是进行试管苗培养。
如果愈伤组织长到直径为1～1 5 cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需要进行第二次继代培养。
在愈伤组织进行继代培养期间，可以将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光。
愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色。
试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的培养。
试管苗的培养分为生芽培养和生根培养。
要想培育出一株完整的试管幼苗，必须先进行生芽培养，然后进行生根培养。
如果顺序颠倒，先诱导生根，就不好诱导生芽了。
生芽大约需要4～6周的时间，而生根培养时，1周以后就可以见到幼根了。
注意，试管苗应该进行见光培养。