低分子量树枝状聚乙烯亚胺-g-黄秋葵多糖作为基因药物合成载体的构建

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方面，高分子量的复合物结构将大大提高其细胞转染效率；
另一方面，该复合物易生物降解，且降解后的产物低毒，细胞
兼容性好。
１材料与方法
１．１试剂
ＬＢ９５０７荧光素酶检测仪；恒温摇床（ＴｈｅｍｏＦｏｒｍａ）；一８０℃
５：１时，复合物能与质粒ＤＮＡ牢固结合，且在投射电镜下观察看到，复合物包裹质粒ＤＮＡ成直径约为２００ｎｎｌ的核
状；细胞毒性试验表明，该复合物毒性远低于ＰＥＩ一２５ｋｕ，而细胞转染效率试验结果表明，该复合物转染效率较高，当重量比为７０：１时，与ＰＥＩ一２５ｋｕ接近。说明ｂＰＥＩ — ｇ一黄秋葵多糖复合物是一种高转染、低毒、生物兼容的基因药
危险ｕ，所以，人工合成的非病毒基因药物载体成为研究热点。其中，基于聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）的阳离子非病毒载体由于
其结构中的胺基能与ＤＮＡ很好地结合，保护ＤＮＡ不被酶降解而获得更多的重视。ＰＥＩ的转染效率与其分子量成正比，
高分子量的ＰＥＩ具有高转染率，但细胞毒性也高。目前研究
表明，ＰＥＩ一２５ｋｕ具有最高的转染效率，但毒性也最大；低分子量的ＰＥＩ虽然细胞毒性较低，但几乎没有转染率。目前，大家都在寻求通过修饰ＰＥＩ的结构获得低毒、高效的基因药物载体。黄秋葵多糖是从药食两用的植物一黄秋葵果实中提取的一种天然植物多糖，具有降脂、降压、抗癌、抗热应激
８．０ｇＮａＣ１、３．４７８５ｇＮａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２０／２．９ｇＮａＨ２ＰＯ４、
载体具有极其重要的作用。目前，临床应用的基因药物载体
主要为病毒性载体，具有易引起免疫反应和基因突变的潜在
０．２ｇＫＣ１、０．２ｇＫＨ２ＰＯ４溶于１０００ｍＬ蒸馏水；Ｔｉｆｓ一乙酸
（ＴＡＥ）缓冲液：Ｔｒｉｓ碱２４２ｇ、冰乙酸５７．１ｍＬ、ＥＤＴＡ１８．６１２ｇ溶于０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液中，加水定容至１０００ｍＬ。
１．２仪器
透析膜（分子量８０００～１４４００ｕ）购自Ｐｉｅｒｃｅ公司；
ＦＤ一１冰冻干燥机；瓦里安４００ＭＨｚ核磁共振仪；Ｕ一２８００紫外分光光度计；ＪＥＭ一２１００ＨＲ透射电镜；ＳｅｉｒｅｓＩＩ细胞培养
江苏农业科学
２０１３年第４来自百度文库卷第８期
一３９一
阂莉静，李敬芬．低分子量树枝状聚乙烯亚胺一ｇ一黄秋葵多糖作为基因药物合成载体的构建［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（８）：３９ — ４２
低分子量树枝状聚乙烯亚胺一ｇ一黄秋葵多糖作为基因药物合成载体的构建
性、抗疲劳等生理活性。其结构中存在大量的一ＯＨ，可以与低分子量ＰＥＩ中的胺基通过酯键耦合成高分子量复合物。
一
箱；ＢＩＯ— ＲＡＤ６８０酶标仪；ＴａｎｏｎＥｐｏ凝胶电泳仪；ＪＳ一３８０Ａ
自动凝胶图像分析仪；ＮｉｋｏｎＥｃｌｉｐｓｅＴＥ２００倒置荧光显微镜；
闵莉静，李敬芬
（湖州师范学院生命科学学院，浙江湖州３１３０００）
摘要：通过合成设计，获得１种转染率高、细胞毒性低、生物相容性好的基因药物合成载体。用水煮醇沉法提取黄秋葵多糖，纯化，键合树枝状聚乙烯亚胺（ｂＰＥＩ，分子量为６００、１２００Ｕ），获得ｂＰＥＩ — ｇ一黄秋葵多糖复合物，并对复合物进行系列理化生表征。ＨＮＭＲ结果表明复合物合成成功；凝胶阻滞电泳结果表明，在复合物与质粒ＤＮＡ重量比在
料有限公司；绿色荧光蛋白质粒ｐＥＧＦＰ—Ｎ１均为上海市肿瘤研究所惠赠；质粒提取试剂盒购自Ｑｉａｇｅｎ公司；荧光素酶检测试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。ＣＯＳ一７细胞（非洲绿猴肾上皮细胞）培养于含有１０％小牛血清的１６４０培养基中，由浙江大学肿瘤免疫所赠送。ＭＴｒ溶液：５ｍｇ／ｍＬ甲基噻唑基四唑 × ＰＢＳ液，过滤除菌，避光，２０℃保存；磷酸缓冲液（ＰＢＳ）溶液：
物合成载体。
关键词：低分子量；树枝状；聚乙烯亚胺；黄秋葵多糖；合成载体
中图分类号：Ｑ７８２文献标志码：Ａ文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０８— ００３９— ０４
基因治疗有望解决一些内源性疾病，该过程中基因药物