植物细胞工程培养基配制
植物培养基的配制配方
植物培养基的配制配方植物培养基的配制配方，这个话题一听就觉得挺有意思，对吧？你有没有想过，植物就像我们一样，也需要一个“家”来茁壮成长？想想看，咱们平时喝的水、吃的饭都得讲究，植物当然也不能马虎！哎，培养基就是植物的“营养餐”，它能给植物提供各种必要的养分。
说到这里，咱们不妨好好聊聊这个配方。
得准备一些基本的材料。
最常见的就是水，别小看了水，这可是植物的“生命之源”。
然后是琼脂，它就像是培养基的“胶水”，能把一切都粘在一起，形成一个温暖的小窝。
哇，这种感觉就像是为植物准备了一个舒适的沙发，让它们能好好安顿下来。
就是各种营养盐，听上去就有点像化学课上的东西，但别担心，这些盐分能为植物提供生长所需的各种矿物质，真是不可或缺的“助力”。
我们要加入一些糖，嘿，不是说要给植物开派对，而是植物也是需要能量的，糖就是它们的“能量饮料”。
想象一下，植物喝上一口，立马活力四射，茁壮成长，真是太酷了！咱们得注意pH值，维持在一个适合植物生长的范围，就像是给植物调制了一杯美味的饮料，太过酸或碱都会让植物“不舒服”，所以这一步可不能马虎。
再说说各种微量元素，比如铁、锌、锰，听起来就像是植物的小伙伴，没它们可不行。
它们虽然需要的量不多，但缺了可就麻烦了。
这就像咱们的日常饮食，少了点什么就觉得不对劲，植物也是如此。
所以，得把这些微量元素也加进去，让它们和水、糖、盐一起“聚餐”。
混合这些材料的时候，别忘了把它们搅拌均匀，就像是调和一杯完美的奶昔，确保每一口都有好滋味。
然后，把混合好的培养基倒入培养皿里，让它们静静地“凝固”，就像是在给植物铺上一层柔软的地毯。
等到它们完全凝固，就可以开始种植了，兴奋得不行吧？在这个过程中，其实还有个小窍门，那就是控制温度。
太热或太冷都不行，植物就像是小孩子，得温暖的环境才能快乐成长。
你可以把培养皿放在阳光能照到的地方，确保它们能吸收到足够的光线，毕竟阳光是植物最喜欢的调味料，没了阳光，植物可就变得无精打采了。
植物细胞工程综合大实验
植物细胞工程综合大实验（一）——培养基配制和无菌操作一、实验目的与要求熟练掌握器皿的洗涤MS培养基的配制分装培养基和物品的高压灭菌实验室的消毒灭菌植物材料的取材及流水冲洗无菌操作材料的培养观察二、实验原理植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）茎节（用于诱导芽）五、实验方法与步骤（一）器皿的洗涤一般器皿有培养物但未污染的器皿有培养物且污染的器皿（二）MS培养基的配制分装1、MS培养基母液的配制母液A-F，每组配制A-E 100ml、F 50ml0.1%升汞的配制75%酒精的配制6-BANAA2、MS培养基的配制按每人配制100ml，分5小瓶。
过程如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；加入蔗糖30g/L；量取母液A-F；加入PGR（自己设计）；用容量瓶定容；用0.1-1N NAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。
（三）培养基和物品的高压灭菌培养基、无菌水（每组至少5瓶）、空瓶（每组至少2个）、烧杯（每组至少1个）、培养皿（每组至少一套）、接种工具（2套），包好或者分好以备高压灭菌。
高压锅的使用。
（四）实验室的消毒灭菌75%的酒精擦拭超净工作台内表面，新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。
（五）植物材料的取材及流水冲洗选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。
（六）无菌操作演示。
（七）材料的培养观察接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。
培养初期每天观察一次，持续1周。
之后每2-3天观察一次。
统计指标：污染率（%）= （污染的外植体个数／接种外植体的总数）×100%。
植物细胞工程实验指导
实验一植物组织培养培养基的配制【实验目的】通过实验，掌握常用MS培养基的配制。
【仪器及试剂】1．仪器：：500 ml试剂瓶4个，100 ml试剂瓶4个，高压灭菌锅，电子天平，烧杯（大、中、小各2个），玻璃棒，移液管，搪瓷缸，培养瓶，电炉，pH计或精密pH试纸，容量瓶（大、中、小各1个）2．试剂：见MS培养基的配制方法一览表【操作步骤】1、母液的配制：为了避免每次配制培养基时都要对所需的各种成分进行称量，人们便把培养基中必需的一些物质按原量的10倍、100倍或1000倍称量后放在一起，成为一种浓缩液，这种浓缩液就叫“母液”。
①大量元素：一般配成使用浓度的10－20倍，浓度太大的母液在冰箱保存时会结晶。
除钙盐外，其它大量元素按一定倍数分别称量并分别用蒸馏水溶解后混合在一起，最后加蒸馏水定容。
钙盐要单独配制，不能和PO43-、SO42-混合，以免生成Ca3(PO4)2或CaSO4，发生沉淀。
②微量元素：微量元素因用量小，为称量方便及精确起见常配成100倍或1000倍的母液，即每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐个溶解并混合在一起。
③铁盐：微量元素中的铁盐是单独配制的，由硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）5.56克和乙二铵四乙酸二钠（Na2-EDTA）7.46克溶于1升水中配成。
每配1升培养基加铁盐5毫升。
④有机物质：主要指氨基酸和维生素物质，它们都是分别称量及分别用容量瓶配成所需浓度（0.1－10毫克/毫升），用时按培养基配方中要求的量分别加入。
这些化合物都易溶于水，直接用水配制。
⑤生长调节物质：一般配成0.1－1.0毫克/毫升。
生长素类IAA、NAA、2,4-D等，配制时先按要求浓度称好药品，置于小烧杯中，用1－2毫升0.1 N氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。
如果用少量95％的乙醇来溶解亦可，有时效果不如氢氧化钠好。
配制细胞分裂素类物质时，则宜先用少量0.5 N或1 N盐酸来溶解，然后加蒸馏水至所需量。
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
植物组织培养基的配制—培养基制作方法
• 6-BA:7.5ml
• NAA:5ml
• 大量Ⅰ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 大量Ⅱ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 微量母液吸取量(200倍)：1.25ml
• 铁盐母液吸取量（100倍）：2.5ml
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：1.25ml
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：1.25ml
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。
• 3、按需称取琼脂后加入（2）水中加热搅拌均匀。加入称好的糖。
如何配置1mol/LNaOH100ml?
• 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。（一般最后加激素母液）
• 5、定容。
• 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。
分化：1/2MS+2.5mg/L6BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂
• 大量Ⅰ母液吸取量：
• 大量Ⅱ母液吸取量：
• 微量母液吸取量(200倍)：
• 铁盐母液吸取量（100倍）：
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：
• 肌醇母液吸取量（50倍）：
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。 • 3、按需称取琼脂、糖。 • 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
（一般最后加激素母液） • 5、定容。 • 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。 • 7、分装。 • 8、封口。 • 9、灭菌 • 10、冷却备用。书写标签（培养基类型代码、配制日期、配制人）
《细胞工程》实验指导书
实验指导书课程：细胞工程授课专业：生物工程、生物技术主编：徐艳实验一实验室的概况与培养基母液的配制一、实验目的：熟悉植物细胞工程实验室的基本结构、必须的基本设备及其用途与作用方法，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物等。
2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶等。
三、教学时数：4课时。
四、实验内容：（一）实验室的基本结构及主要设备：1、洗涤室：水槽、工作台、蒸馏水器等功能：器皿及材料洗涤；蒸馏水制备。
2、消毒室：高压蒸汽灭菌锅、烘箱等功能：器皿的干燥；器皿及培养基的消毒。
3、试剂室：试剂柜、冰箱功能：存放试剂及器皿。
4、准备室：工作台、天平、水浴锅、电炉、显微镜及各种玻璃仪器、金属仪器等功能：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析。
5、接种室（含缓冲室）：超净工作台、接种箱等功能：无菌操作。
6、培养室：培养架、摇床等功能：培养物的控制培养。
7、驯化移栽室：如温室、大棚等功能：试管苗的驯化移栽。
（二）培养基母液的配制：1、MS基本培养基母液：各成分单独称量、单独溶解后混合定容①大量元素母液：10倍，1L注意：CaCl2.2H2O易与其他成分反应产生沉淀；②微量元素母液：100倍，0.5L③铁盐母液：100倍，0.5L注意：两者等体积溶解后混合，且需80℃水浴1h充分螯合，等待冷却后定容；④有机母液：100倍，0.5L2、激素类母液的配制：①1mg/ml的6－BA 50ml：先用0.1mol∕L的 HCL或NaOH溶解后再加水定容；②0.1mg/ml的NAA 50ml：先用少量0.1mol∕L的NaOH溶解后再加水定容。
注：精度要求精确到小数点后三位。
（三）培养器皿的洗涤：1、对污染的培养器皿先进行消毒灭菌处理；2、清除残渣，用清水洗净，浸泡于合成洗涤剂中6-24小时；3、用洗涤刷洗涤，并用自来水冲洗干净；4、用烘箱烘干或晾干，存放于防尘橱内备用。
TCB4-2植物细胞培养
植物细胞培养与细胞工程愈伤组织植物细胞培养和细胞工程的理论基础细胞全能性学说激素化控理论•细胞全能性认为：植物的细胞具有发育为胚胎和植株的潜能。
•不是所有的细胞都具有全能性，但许多类型的细胞可以在离体培养条件下发育为胚状体。
•把细胞全能性学说看作是细胞工程的理论基础：1）通过细胞培养和植株再生可以将细胞遗传修饰变成植物的遗传修饰，从而改变整个植株的遗传特性；2）利用植物细胞的大量培养的方法，在生物反应器中生产有用的化合物。
胚性细胞－植物的干细胞•不是植物体内的每一个细胞都具有全能性。
一般说来，高度分化或特化的细胞，已经失去分裂和再生的能力，即使在离体培养的条件下，也不可能发育成植株。
•只有胚性细胞（embryogenic cells 或embryonic cells）或分化程度不高的细胞才可具备发育为胚胎或植株的全能性。
•胚性细胞同胚胎干细胞基本相同，如被子植物的合子、植物早期胚胎细胞及植物的分生组织细胞。
•动物器官分化是一个有限的过程，在胚胎成熟时器官的分化过程已完成。
•植物的器官分化是一个无限的过程，种子中的胚胎萌发成苗后，在整个生活史中不断形成新的器官，直到生命的终结。
植物的连续的器官分化是由顶端分生组织来完成的，可见它们是一种具有全能性的细胞。
•脱分化（dedifferentiation）——在离体培养条件下，一个分化细胞转变为分生状态，形成胚性细胞团或愈伤组织的现象；需要两个条件：创伤和外源激素。
•再分化（redifferentiation）——大多数情况下，在愈伤组织细胞中发生；但在有些情况下，可以直接发生于脱分化的细胞中，无须经历愈伤组织阶段。
一、细胞脱分化过程的形态学和生物化学变化：外植体：用于组织培养的组织块。
烟草叶肉细胞脱分化过程可以概括为以下三个阶段：①静止的叶肉细胞进行第一次分裂；②经过连续几次细胞分裂，叶肉细胞转变为分生细胞；③分生细胞形成愈伤组织。
•一个愈伤组织内大多为薄壁细胞；少量为分生细胞－生长中心（包在内部，成为芯子），仍保持分生状态，可不断分裂，生长较快；出现少量的维管分子（管胞、伴胞、筛管）－维管结节。
植物细胞培养的基本过程和方法
植物细胞培养的基本过程和方法植物细胞培养是一种将植物细胞体外培养的技术，其主要目的是为了研究细胞的生理、生化过程以及植物的生长发育等方面的问题，也可以用于植物遗传改良、利用细胞培养生产植物品种等领域。
下面将对植物细胞培养的基本过程和方法进行详细介绍。
1.材料准备：选择合适的植物组织作为培养材料，如茎段、叶片、根尖等。
同时还需要准备一些基本的实验仪器和培养基成分。
2.细胞分离：将选取的植物组织进行表皮剥离、细胞壁酶解等操作，将细胞分离出来。
可以使用显微镜观察细胞的分离程度。
3.培养基配制：根据不同的培养目的和植物类型，调配适合的培养基。
培养基通常包括无机盐、有机物、维生素、激素等成分，用于提供细胞生长所需的养分。
4.细胞培养：将分离得到的细胞悬浮在培养基中，将其培养在恒温恒湿的培养箱中。
培养箱中的温度和光照条件可以根据植物的特性进行调节。
5.观察和保存：定期观察细胞的生长情况，包括细胞的形态、分裂情况等。
同时可以进行细胞生长速率、物质代谢等方面的研究。
对于需要保存的细胞，可以使用液氮冷冻或低温贮藏的方法保存。
1.组织培养：将植物组织培养在含有适当激素的培养基上，促使其分化和增殖。
常用的组织培养方法包括愈伤组织培养、种子发芽培养、胚培养等。
2.悬浮细胞培养：将植物细胞分散在培养基中形成悬浮细胞。
可以利用悬浮细胞进行物质代谢、遗传变异等研究。
3.离体培养：将完整的植物器官（如茎尖、叶片等）切分成适当大小的组织块，培养在含有激素的培养基上，使其分化为根、茎、叶等组织。
4.离体器官培养：将完整的植物器官（如拟南芥的花蕾、水稻的胚等）取出，培养在含有细胞分裂素和植物生长素的培养基中，经过适当的处理后，可以使其分化为新的植株。
5.基因转化：将外源基因导入植物细胞中，使其产生新的表型特征。
常用的基因转化方法包括农杆菌介导的转化、基因枪轰击法等。
总之，植物细胞培养是一种重要的实验手段和研究方法，通过培养和处理植物细胞，可以为植物生物学和生物技术研究提供重要的理论基础和实验依据。
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
植物常用培养基附加配制说明
备注：培养基和激素母液配制方法（1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶，不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。
（2）200×Fe盐溶液称取1.39g FeSO4•7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2•EDTA溶于热水（B液）；将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。
（3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解；加水定容至100ml，4℃保存。
如果出现沉淀，需要重新配置。
（4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m l，4℃保存。
（5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。
（6）100mM乙酰丁香酮（As）的配制称取196.2mg As，用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml，过滤灭菌后，分装入无菌小管，-20℃冰冻保存。
使用前加入灭菌培养基。
（7） 0.5mg/ml KT和ABT的配法称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量1N KOH溶解，再用水稀释定容至100ml，4℃保存。
（8）其他附加物的溶解及配制A、称取吗啉乙磺酸（MES）5g溶于水中，定容至10mL。
4℃保存。
B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏水稀释定容至10mL，现用配制。
4℃保存。
C、称取850mg硝酸银，用蒸馏水溶解后定容至100mL。
4℃保存。
D、头孢霉素（cefotaxime）2500mg，用蒸馏水溶解后定容至10mL。
植物培养基的配制
培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
常见植物培养基的配制配方
2015-4-16常见培养基的制备LB；G AUSE I;P AD培养基[]LB培养基LB（lysogeny broth）培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠(NaCl) 10g固体培养基另加琼脂粉(15-20)g加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。
配制方法：✓称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
✓溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。
✓调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
✓定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积.✓加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
✓分装、加塞、包扎。
✓高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
培养细菌：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)天然培养基；Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂）成分：✓KNO3 1g✓Soluble starch（可溶性淀粉）20g✓K2HPO40.5g✓MgSO4 .7H2O 0.5g✓NaCl 0.5g✓FeSO40.01g✓Agar （琼脂）20g✓water （水） 1000ml✓pH 7.2-7.4方法：加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20分钟备用.。
性状：干燥粉末，易吸潮。
PDA培养基制作PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它属于固体培养基、半合成培养基。
PDA 培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。
植物细胞工程实验 (修改版)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
细胞培养技术中的培养基配制与操作步骤
细胞培养技术中的培养基配制与操作步骤细胞培养是现代生命科学研究中常见的一项关键技术。
在细胞培养中，培养基是维持细胞生长发育所必需的营养物质的来源。
因此，正确的培养基配制和操作步骤对于细胞培养的成功至关重要。
在本文中，我们将详细介绍细胞培养技术中培养基的配制和操作步骤。
一、培养基配制培养基是由多种化学物质组成的，为了保证细胞能够正常生长和增殖，需按照一定比例和操作步骤进行配制。
下面是培养基的配制步骤：1.准备培养基成分：将培养基所需的各种化学品、培养基粉末等准备好，并确保其纯度和质量。
2.按照指定比例称取各种成分：根据培养基的配方，按照比例准确称量所需的化学品。
注意，称量过程中应该避免将不同化学品混合。
3.将化学品溶解于溶液中：取适量的无菌水或其他溶液，将称取好的化学品逐一加入到溶解液中，轻轻搅拌直到完全溶解，并过滤以去除悬浮物。
4.调整pH值和渗透压：使用pH计和滤器检测和调整培养基的pH值，并使用渗透压仪调整培养基的渗透压。
5.灭菌：将配制好的培养基放入高温高压灭菌器中，以确保培养基中无菌。
二、培养基的操作步骤在细胞培养技术中，正确的操作步骤是维持培养基的无菌性和细胞生长的关键。
以下是培养基的操作步骤：1.佩戴无菌操作装备：在开始操作之前，使用石英灯或紫外线灯照射操作台和周围区域，戴上无菌手套，穿戴无菌面罩、无菌衣等无菌操作装备。
2.准备培养器皿：将所需的培养器皿（如培养皿、培养瓶、细胞培养板等）放入培养箱中进行高温高压灭菌，以确保其无菌。
3.操作培养基：将培养器皿放在无菌操作台上，使用均匀受热器加热培养基至适宜温度（通常为37℃），然后将培养基倒入培养器皿中。
4.培养细胞：将待培养的细胞用无菌工具如吸管、吸头等转移到培养基中，确保转移过程中避免细胞接触到外界环境，以防止细胞受到污染。
5.培养器皿密封：将培养器皿封闭，并用无菌胶带封口，以确保培养基中的细胞免受外界细菌和污染物的污染。
同时，避免培养器皿开盖时间过长，以减少空气中的微生物进入。
ms培养基配方
ms培养基配方MS培养基是一种广泛用于植物细胞培养的抗生素添加的标准培养基，可以用于各种植物细胞生物学实验，是一种快速高效的植物细胞培养方法。
MS培养基（Murashige and Skoog，1962）主要由六种化学复配组成，包括氯化钾、磷酸钾、硝酸钾、谷氨酸、氯化钠和B5维生素混合液。
这六种补充物是培养细胞生长和发芽的重要成分，可以通过调整不同组分的比例来获得更高的营养价值，以满足不同植物的生长需求。
MS培养基的组成比例可以调整，以便满足不同植物的生长需求。
氯化钾是培养基中最重要的钾源，每克培养基含有0.5-2.0毫克氯化钾，磷酸钾作为钾的替代品，其含量为0.2-0.8毫克每克培养基。
硝酸钾是细胞生长所需的重要组分，每克培养基含有0.15-0.8毫克硝酸钾。
谷氨酸作为一种有机氮源，每克培养基含有0.1-0.4毫克谷氨酸；氯化钠可维持培养基的离子平衡，每克培养基含有0.1-0.5毫克氯化钠；B5维生素混合液通常为2-9％，用于维持正常细胞生长。
此外，MS培养基作为植物细胞培养的标准培养基，也可以添加24种氨基酸和多种无机盐，以满足细胞生长和发芽的需求。
24种氨基酸中，非必需氨基酸比饱和氨基酸高出2倍左右，作为某些特殊植物细胞特殊需要的氨基酸，如甘氨酸和苏氨酸，可以根据细胞的特殊需求以不同的比例添加进去。
常用的无机盐包括硫酸钾、硫酸钠、氟化钠、氯化钠、酸钠、硫酸胺和亚硝酸钠等，细胞在此无机盐环境中才能正常发芽。
MS培养基是根据美国科学家Murashige和Skoog（1962）提出的植物培养技术来配制的，是一种标准化的植物细胞培养基配方，由营养物质如钾、磷、氮和铁等成分通过恰当的比例混合而成。
它具有组成比例可调、配方固定、细胞发芽率高、培养效率高、平衡缺乏及对细胞有利等特点，常用于植物细胞的培养实验，广泛用于植物细胞的生物学实验和栽培。
MS培养基的制备和使用步骤要求严格，首先，经过精制的培养基配方应由专家进行审核，确保其品质和效果，然后将所有组分称量、混合、离心、灭菌并过滤后，使其具有良好的稳定性。
植物组织培养基的配制
植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。
为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。
所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。
普通母液配成比所需浓度高10～100倍。
母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。
配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。
药品的称量及定容都要精确。
各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。
母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。
(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。
用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。
注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。
然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。
(2)微量元素母液可配成100倍的母液。
用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。
(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。
(4)有机物母液可配成l00倍的母液。
按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。
(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。
用时按照需要取用。
由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。
另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。
激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。
植物培养基的配制过程
植物培养基的配制过程
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲植物培养基的配制过程，这可有意思啦！
咱先得准备好各种材料，这就好比做饭得有米有菜一样。
什么大量元素啦、微量元素啦、有机成分啦，一个都不能少。
你想想，要是缺了点啥，那这培养基不就像缺了调料的菜，没滋没味的啦！
然后呢，把这些材料按照一定的比例放进容器里。
这可不能马虎，就像你调鸡尾酒，比例不对那味道可就差老远了。
得仔细量好，不能多也不能少。
接下来就是加水啦！水可是很重要的哦，就像人不能不喝水一样。
加多少水也得有讲究，多了太稀，少了太浓，得恰到好处。
然后就是搅拌啦！把它们搅和均匀，让各种成分充分融合。
这就像是揉面团，得把面和水揉得匀匀的，这样做出来的馒头才好吃呀。
这时候你可能会问啦，这么简单？嘿，可别小瞧了这配制过程，每一步都得精心对待呢！要是不小心弄错了一点，那可能就前功尽弃啦。
配好了培养基，就像是给植物宝宝们准备好了美味的食物。
它们在里面能茁壮成长，开出漂亮的花，结出丰硕的果。
你说神奇不神奇？我们就靠着这些小小的培养基，能培育出各种各样的植物。
这就像是一个小小的魔法世界，我们就是那神奇的魔法师，用
我们的双手创造出美丽的植物景观。
所以啊，朋友们，可别小看了这植物培养基的配制过程哦。
它虽然看似简单，实则暗藏玄机。
就像生活中的很多事情一样，表面上看起来容易，实际做起来可得下一番功夫呢！咱得用心去对待，才能得到满意的结果呀！这就是我要告诉你们的关于植物培养基配制的事儿，大家都记住了吧！。
细胞工程培养基及其配制
琼脂
加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简 便，通气问题易于解决，便于经常观察研究等，但它也有 不少缺点，如培养物与培养基的接触（即吸收）面积小， 各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分的充分利用，同时 培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产 生毒害作用。
其它
有玻璃纤维、滤纸桥、海绵等，总的要求是排出 的有害物质对培养材料没有影响或影响较小。
④天然有机添加物
是化学成分不明的复杂的营养混合物。尽管它们 对细胞和组织的生长和分化有明显的促进作用， 但因成分不定，质和量受多种因素的影响，实验 的可重复性差，应尽量避免使用。常用的有机附 加物有: ⑴椰乳： ⑵香蕉： ⑶水解酪蛋白：
3. 植物生长调节物
植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物， 它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、 发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成 熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生 理生化活动，在培养基的各成分中，植物生长调 节物是培养基的关键物质，对植物组织培养起着 决定性作用。
④脱落酸
• 脱落酸 抑制蛋白质合成，抵消和抑制生长素、细 胞分裂素和GA发挥作用。ABA诱导休眠，促进 衰老和脱落。ABA不能高温高压灭菌，故应采用 过滤除菌。
⑤乙烯
• 乙烯具有促进果实成熟，促进脱落和衰老等作用， 在组织培养中很少使用。
4. 琼脂
• 培养基有固体和液体两种。固体培养基最好的固 化剂是琼脂，它是从海藻中提取的一种高分子多 糖类物质，不提供任何营养成分。琼脂能溶解在 热水中，成为溶胶，冷却至40℃即凝固为固体状 凝胶。通常所说的“煮化”培养基，就是使琼脂 溶解于90℃以上的热水。
IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合 成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素， 对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也 易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。
7 植物细胞培养基的配制
实验7 植物细胞培养基的配制 与灭菌
目的： 学习用母液法配制MS培养基的方法 掌握培养基的灭菌方法及操作过程
原理： 组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各种营养物 质，同时也是各种微生物滋生和繁殖的好场所，必需对培 养基等进行灭菌处理，以确保无菌。
实验器具与药品 ：
电子天平、烧杯、量筒、玻璃棒、可调移液器及移液 器嘴（1ml，200µl），移液器嘴盒、1.5ml EP管、 药勺、称量纸、试剂瓶、滴管、pH计或pH试纸、三 角瓶（100ml，250ml）、无菌培养皿、耐高温高压 专用封口膜、棉线、标签纸、记号笔、高压锅。
思考题:
一些生物活性物质如果使用高温灭菌会使之散失活性， 这些物质应采取什么方法灭菌？原理是什么？
灭菌结束后关闭电源，待锅内温度自行下降，压力降至0时，打开排气阀， 开盖，取出灭菌物品，置超净工作台或温箱中。
培养基的分装 ： 培养基在超净工作台中冷却至40－50℃后进行分装，
液体培养基分装到灭菌好的250mL锥形瓶内，每瓶约装50mL，用封瓶膜封 好；固体培养100 l基倒平板到无菌培养皿中，每皿20ml左右,用封口膜 parafilm封边。
的母液量
取用的母液 l母液
量
50 ml
25ml
50 ml
25 ml
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CuSO4 ·5H2O CoCl2· 6H2O
0.025 0.025
1.25 1.25
（3）铁盐 （200倍液，500ml）
药品名称 配方用量mg/L 扩大100倍称量mg
FeSO4 ·7H2O
27.8
2780
Na2 –EDTA
37.3
3730
EDTA：乙二胺四乙酸是最常见的螯合剂
定容至500ml 每次取用5ml
（2）无机微量(100倍液，配制500ml）
药品名称 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg
MnSO4 ·4H2O
22.3
1150
ZnSO4 ·7H2O
8.6
430
定容于500ml
H3BO3
6.2
310 蒸馏水中。每
Na2MoO4 ·2H2O 0.25 12.5 升培养基吸此
KI
0.83
41.5 液10ml
药品名称 配方用量mg/L 扩大10倍称量mg
KNO3 NH4 NO3 MgSO4 ·7H2O KH2 PO4
1900 1650 370 170
19000 16500 3700 1700
定容于1000ml 蒸馏水中。配 制每升培养基 取此液100ml
CaCl2·2H2O 440 4400 单独配制成10倍1000ml
可分装约200-250瓶
准备各种器具等：
洗涤三角烧瓶、移液管、准备器具（枪形镊、 剪刀、解剖刀）、烧杯、搪瓷缸、电炉、 棉线、脱脂棉、滤纸、报纸、（聚丙烯塑 料薄膜）、培养皿、蔗糖、琼脂、吐温-80 或吐温-20等
3.灭菌
• 准备好需要灭菌的物品：培养基分装包扎 并做好标记；滤纸裁剪放入培养皿中包扎； 接种器具一副（剪刀、镊子、解剖刀）包 扎；250ml及100ml小烧杯包扎；蒸馏水装 瓶包扎
植物组织培养实验
实验一植物组织培养培养基的配制
一、实验目的：掌握培养基母液的配制及培 养基的制备与灭菌的操作方法。
二、实验用品： 1、仪器用具：电子天平、高压灭菌锅、试剂
瓶、烧杯、玻棒、移液管、培养瓶、电炉、 pH试纸、量筒等 2、试剂：见MS培养基配方
三、实验步骤：
1、母液的配制： 1）大量元素：配制成10倍液，1000ml；钙盐单独
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等）
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
四、实验步骤
3、接种：取出茎段置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的茎段上下切口， 将茎段剪成适当大小（带茎节，约0.5cm）， 接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写 好标签（时间、材料等）
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
注意事项：该母液用棕色瓶保存。
（4）有机化合物 （100倍液，500ml）
药品名称
配方用量mg/L 扩大50倍称量mg
甘氨酸
2.0
100 定容至500ml
盐酸硫胺素(B1) 0.4
盐酸吡哆醇(B6) 0.5
烟酸
0.5
20
每升培养基取
25
此液10ml
25
肌醇
100
5000
生长调节物质的配制
各配成1mg/ml母液100ml（称取0.1g样品，配100ml) ① NAA：先用少许95%酒精或热水溶解后再加水定容。 ② 2,4-D：先用少许1N NaOH溶解后再加水定容。 ③ 6-BA：先用少许1N HCl溶解后再加水定容。
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
• 灭菌 ：加水、盖严、0.05MPa(0.5kg/cm2 ) 放气、121摄氏度(1.0kg/cm2)保温灭菌 20min，降压到0，开盖，取出
实验二 植物愈伤组织的诱导
一、实验目的：对植物的叶片诱导愈伤组织 ， 掌握无菌操作方法，学习诱导植物外植体 形成愈伤组织的方法。
二、实验用品：
1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球
实验四 玉米成熟胚的培养
一、实验目的：玉米成熟胚培养，掌握胚培 养的方法
二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验
一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、
75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：玉米种子
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备）；材料的 准备（玉米种子次氯酸钠消毒，无菌水冲 洗、浸泡）
2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水
三、实验材料：植物叶片（月季或菊花）
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备）
2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
2．培养基配制 以MS1升培养基为例
水 药品 → 配成母液 → Байду номын сангаас合 → 调节pH
琼脂 + 水→ 加热溶解 + 糖 玻璃器皿或其他 →分装→ 灭菌→冷却→凝固→接种
配制的培养基配方
• 1、MS+BA 1 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 2、MS+BA 3 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 3、MS+BA 5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 4、MS+BA 1 mg/L+ 2,4 D 1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 5、MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 2 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 6、MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 3 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • pH5.8 • 每小组配制1种培养基800ml，配制6种培养基共4800ml，
配制
2）微量元素：配制成100倍液，500ml； 3）铁盐 200倍液 500ml 4）有机物质100倍液 500ml 5）激素：BA、NAA、2,4 D 各配成1mg/ml母液
100ml 其他还需配制：70%-75%乙醇1000ml；0.1%升汞
500ml
母液的配制
以MS培养基为例，一般配四种母液。配方如下： （1）无机大量 （10倍液，配制1000ml）：
2、培养材料表面灭菌：剥取玉米成熟胚； （此处开始在超净台上操作）75%酒精浸 泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒 出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备 用。
四、实验步骤
3、接种：取出玉米胚置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，接种到适当培养基中。重新包扎 好瓶口，写好标签（时间、材料等）
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法
二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验
一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、
75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等；接种 室的准备（超净台的准备）