【VIP专享】免疫学实验报告

实验报告一姓名：陈羽迪 班级： 12生物制药（1） 学号：2012332870002

实验一：_淋巴细胞的分离 一、实验目的

1.熟悉人外周血淋巴细胞的组成

2.熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法

3.熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法

二、方法步骤、观察内容1、采静脉血2ml 加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀，5min 后加入Hank's 液2ml ，手动轻轻摇匀。

2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含2ml 淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液体界面清晰。

3、将试管平衡后置水平式离心机，1000rpm 离心20min 。

4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。

5、加入5倍体积的Hank's 液，手动旋转试管使液体混匀，1000rpm 离心10min ，弃上清，沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。加入含10%灭活小牛血清Hank ’s 液1 ml ，

混匀后进行计数。 （备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。）6.细胞存活率检测：取10ul 淋巴细胞悬液加入0.4%台昐蓝染色液10ul ，混匀。取10ul 加入血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。优秀良好中等及格不及格成绩

3、观察结果

如图：离心前上层为红色，分离液层（下层）为白色。

离心后分为四层。血浆层为黄色，淋巴细胞层为白色。分离液层为浅黄色红细胞层为红色。

结果计算：

四个大方格中淋巴细胞总数为339

单个核细胞总数=339/4×5（稀释倍数）×1×10^4=4.24×10^6

细胞存活率=226/(226+10)=95.8%

四、分析讨论

1. 人外周血中的淋巴细胞组成？

T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞

2. 根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？

不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同。

具体如下图：

实验报告二姓名： 陈羽迪 班级： 12生物制药（1） 学号：2012332870002 实验二：_E-玫瑰花环形成实验_ 一、实验目的

1.掌握人T 淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。

2.熟悉T 淋巴细胞的功能检测方法。二、方法步骤、观察内容1、取肝素抗凝血1~2ml ，用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks 液调整细胞浓度为2—2.5×106ml 。 2、取小试管加入l ml 淋巴细胞悬液及1%羊红细胞0.l ml ，混匀置37℃水浴箱5分钟。 3、800～1000 r/min 低速离心5分钟，放4℃冰箱2小时。

4、轻轻旋转试管使团块混匀，加2滴0.8%戊二醛液，摇匀，室温静置10分钟，使E 花环固定。

5、取悬液一滴放于载玻片上，将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色3分钟。

6、弃去染液，待干后油镜观察，计数200个淋巴细胞中形成花环的细胞效，算出百分率。优秀良好中等

及格不及格成绩

三、观察结果

1、淋巴细胞染成深蓝色，羊红细胞染成淡红色。

2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形成细胞。

四、分析讨论

1. 形成T淋巴细胞形成玫瑰花环百分率变化的因素有哪些？

温度、淋巴细胞放置时间、保存液、不同介质、不同反应时间、不同羊红细胞对同一淋巴细胞受体亲和力有显著差异。

2. 临床上T淋巴细胞数目的变化与哪些疾病的诊断及治疗疗效观察有关系？

①CD3降低：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。

②CD4降低：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者。

③CD8减低：见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。

④CD4/CD8比值增高：见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应等；CD4/CD8比值减低：见于艾滋病（常<0.5）。

⑤监测器官移植排斥反应时CD4/CD8比值增高预示可能发生排斥反应。

⑥CD3、CD4、CD8较高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病。

花环照片：