HPLC法测定阿哌沙班中的有关物质

３ 讨 论
３ ． １ 色谱 条件 优化
为挑选 出适用 本 样 品 的色 谱 柱 ，
试用 了 以下几 种 不 同厂 家 不 同品 牌 的 Ｃ 。 色谱 柱 ： Ａ ｇ ｉ ．
１ ｅ ｎ ｔ ＴＣ — Ｃｌ ８ ； Ｉ ｎ ｅ ｒ ｔ ｓ ｉ ｌ ＰＨ 一 ３； ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１ ８ ； Ａｇ ｉ —
试验
３ ． ３ 、 ４ 、 １ ２和 ２ ４ ｈ测 定 ， 结 果 主峰 峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ 为 １ ． １ ６ ％， 杂质 峰峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ４ ． ５ ０ ％ 。表 明 溶液 在
２ ４ ｈ内基 本稳 定 。
光 照 破坏
不稳 定 ， １ １个 杂 质 ， 杂质含量 ０ ． ８ ６ ％ 产生 的杂质 色谱峰 和主峰能分离开
取
解， 并稀 释 成含 阿 哌沙 班 ５ ． ０ ｘ Ｉ ｇ ／ ｍ ｌ 的溶液 ， 混匀。 供试 品溶 液加稀 释 溶液 溶解 ， 逐渐 稀 释 ， 当信 噪 比约 为 ２ ． ３ 测 定 的方法 取 ２ ０ ｌ 对 照 溶液 ， 进样 ， 调 节检 测 ３ ： １时 ， 阿 哌沙班 的最小 检 测浓 度 为 ０ ． ０ ５ ｇ ／ ｍ ｌ 。当
图２ 。
ｍｏ ｌ ／ Ｌ 磷 酸二 氢铵 （ 用稀磷酸调到 ｐ Ｈ ３ ． ０ ） （ ６ ５ ：３ ５ ） ； 检测 波 长 为 ２ ６ ６ ｎ ｍ； 柱 温为 ３ ５ ｏ Ｃ； 流速 为 １ ． ０ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ ；
进样 量 ： ２ ０ Ｘ Ｉ ｌ 。
２ ． ２ 溶 液制备 ２ ． ２ ． １ 供 试 品溶 液
收稿 １ ３ 期： ２ ０ １ ４ － ０ ７ － ２ ０
１ ０
天 津药学
Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ２ ０ １ ４年
第２ ６卷
第 ６期
２ ． ６ 线 性关 系试 验
取供 试 品溶 液 ， 分别 配 制成 浓 度
为０ ． ２ ５ 、 ０ ． ５ 、 １ ． ０ 、 １ ． ５和 ２ ． ０ ｇ ／ ｍ ｌ的 系列 溶 液 ， 按 “ ２ ． １ ” 项 下 色谱 条件 分 析 ， 记 录 色谱 图 ， 以 峰 面积 为 纵 坐 标 ，以 浓 度 为 横 坐 标 ， 求得 回归方程为 Ａ＝ ３ ２ ６ ０ ６ ０ ６ ． ０ ９ ８ Ｃ～ ４ ０ ６ ７ ． １ ２ ８ （ ｒ＝ ０ ． ９ ９ ９ ６ ） ， 进 样 浓 度 在０ ． ２ ５～２ ． ０ ｇ ／ ｍ ｌ 范 围 内线性 关 系 良好 。
摘
要 目的： 采用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 测定 阿 哌沙 班 中的有 关 物质 。方 法 ： 色谱 柱 为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ—Ｃ （ ２ ５ ０ ｍ ｍ×４ ． ６ ｍ ｍ， ５
ｍ ｌ 范 围内 ， 峰面积与浓度线性 关系好 （ ｒ ＝０ ． ９ ９ ９ ６ ） ， 最 低 检 出 限为 ０ ． ０ ５
表１ Ａ ＶＥ酸 、 碱、 光照 、 加热 、 氧化 分解 破 坏试验 结 果
破坏试验
酸 破 坏
破坏结果
０ ５
不稳定 ， １ ２个 杂 质 ， 杂 质 含量 ３ ８ ． ８ ２ ％ 产生 的杂质色谱峰和主峰能分离开 不稳定 ， １ ３个 杂 质 ， 杂质 含 量 １ ． ５ ０ ％ 产 生 的杂 质 色 谱 峰 和 主 峰 能 分 离 开 加 热 破 坏
灵敏 度 ， 使 主成 分 色谱 峰 的 峰 高 约 为 满 量 程 的 ２ ０ ％； 信噪 比约 为 １ ０ ： １时 ， 阿 哌 沙 班 的定 量 限 为 ０ ． ２ 再精 密 量取 上 述 两 种 溶 液 各 ２ ０ ｌ 进行测定 ， 记 录 色 ｇ ／ ｍ ｌ 。定量 限重 复性 试 验 ， 连 续 测 定 ６次 ， 峰 面积 依 谱 图至主 成分 峰保 留时 间的 ３倍 。按 主 成分 自身对 照 次 为 １ ４ ４ ９ ５ 、 １ ４ ３ ０ ０ 、 １ ４ ３ ８ ０ 、 １ ４ ３ ９ ０ 、 １ ４ ３ ２ ０和 １ ４ ３ ６ ７， 法 计算 。单一 杂质 ： 各 杂质 的 色谱 峰 面积 不 得 大 于０ ． １ 峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ４ ８ ％。
２ ． ８ 重 复性试 验
取 同一 批 号 样 品 ６份 ， 照“ ２ ． ２ ． １ ”
项 下方 法制 备供 试 品溶液 ， 照“ ２ ． １ ” 项 下 色谱 条件 重 复
进样 ， 结 果 主 峰 峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为０ ． ５ ０ ％， 杂 质 峰 总 面
积的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ２ ． ６ ８ ％， 表 明重 复性 良好 。 ２ ． ９ 样 品 测 定 取 ３批 样 品 （ 批号 １ １ ０ １ 、 １ １ ０ ２ 、 １ １ ０ ３ ） ， 照“ ２ ． ２ ． １ ” 项 下方 法 制备 溶 液 ， 并取“ ２ ． ２ ． ２ ” 项
ｍ） ； 流 动 相 为 甲醇 一 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 磷酸二氢铵 （ 用稀磷酸调到 ｐ Ｈ ３ ． ０ ） （ ６ ５ ：３ ５ ） ； 检测波 长为 ２ ６ ６ ｎ ｍ； 柱温为 ３ ５℃ ； 流 速 为 １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ 。结 果 ： 阿哌沙班浓度在 ０ ． ２ ５～ ２ ． ０
中图分类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２
阿哌 沙班 （ ａ ｐ ｉ ｘ ａ ｂ ａ ｎ ） 是 百 时美 施 贵 宝 和辉 瑞 公 司
共 同研 发 的抗凝 血 剂 ， 是 继 达 比加群 、 利伐 沙 班之 后 第
倍对 照溶 液 的主成 分 色谱 峰面 积 ； 总杂 质 含量 ： 各 杂 质 的色 谱峰 面积 之 和不得 大 于 ０ ． ３倍 对 照溶 液 的 主成分
ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ—Ｃ 通 过 对 主 成 份 和 杂 质 的分 离 效 果 ， 检 测 出来 的杂质 个 数 的 比较 ， 最终选择 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ—Ｃ 色
０ ５ １ ０
却， 破 坏 溶液 用 １ ． ０ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ氢氧 化钠 溶 液 调 ｐ Ｈ值 至 中
检 测器 ； 阿哌 沙班 原 料 药 （ 由某 药 业 有 限公 司提 供 ， 批 性 ， 作 为酸解 样 品溶 液 ； 第 ２份 加 １ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ氢 氧化 钠
号 １ １ ０ １ 、 １ １ ０ ２ 、 １ １ ０ ３ ） ； 甲醇 为 色 谱 纯 ； 水 为纯 净 水 ， 其 溶 液 ， 水浴 加 热 ３ ０ ｍｉ ｎ ， 冷却 ， 破坏溶液 用 １ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 余 试 剂为 分 析纯 。 盐 酸溶 液调 ｐ Ｈ值 至 中性 ， 作 为 碱 解样 品溶 液 ； 第 ３份 ２ 方法 与 结果 加 加过 氧化 氢溶 液 １ ｍ ｌ ， 摇匀 ， 放置 ２ ． ５ ｈ ， 作 为 氧化 降 ２ ． １ 色 谱 条 件 色谱柱为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｓ Ｂ —Ｃ
三 个上 市 的新 型 口服抗 凝剂 。其 已在 欧洲 被 批 准 用来 色谱 峰 面积 。 ． ４ 专 属性考 查 取空 白溶 剂 及 “ ２ ． ２ ． １ ”项下 的供 预 防接 受 择期髋 关 节 或膝 关节 置换 手 术 患者 的静 脉血 ２
栓 栓 塞性 事件 Ｊ 。本 文 建 立 了高 效 液 相 色谱 法 测定 试 品溶 液各 ２ ０ ｌ ， 进样 ， 记 录色 谱 图至 主 成 分 峰 保 留 其 有关 物 质 ３ Ｊ ， 该方 法 准确 、 灵 敏度 高 、 专属 性 强 ， 可用 时 间 的 ３倍 ， 空 白溶 剂对 各 杂质 的检查 无 干扰 ， 见图 １ 。
试验
产生 的杂 质 色 谱 峰 和 主峰 能 分 离 开 氧 化 破 坏
２ ． ７ 稳定 性 试 验
取供试品溶液 ， 分别在放置 ０ 、 ２ 、
氧 化 破 坏
不稳 定 ， ｌ ０个 杂 质 ， 杂质含量 ０ ． ４ ５ ％ 产 生 的杂 质 色 谱 峰 和 主 峰 能 分 离 开 光 照 破 坏
天津药学
Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ２ ０ １ ４年
第２ ６卷
第 ６期
９
ＨＰ Ｌ Ｃ 法 测 定 阿 哌 沙 班 中 的 有 关 物 质
张
（ １ ． 天津市胸科 医院 ， 天津
震 ， 孙
燕
３ ０ ０ ０ ７ ０ ）
３ ０ ０ ２ ２ ２ ； ２ ． 天 津 医科 大 学 ， 天津
ｇ ／ ｍｌ （Ｓ ／ Ｎ＝３） ， 定量限为 ０ ． ２
物 质 的检 查 。 关键词
ｍ ｌ（ Ｓ ／ Ｎ＝１ ０ ） 。结论 ： 所 用方法专属性强 、 准确 、 简便 、 快速 ， 适用 于阿哌沙班 中有关
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ， 阿哌沙班 ， 有关物质 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ６ — ５ ６ ８ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ６ ４ ） ０ ０ ９ － ０ ３
取 样 品适 量 ， 精 密 称定 ， 置于 １ ０
ｍ ｌ 量瓶 中 ， 用流动相 溶解 ， 并 稀释成含 阿哌沙班 ０ ． ５
ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 的溶液 ， 混匀。
２ ． ２ ． ２ 对 照品溶 液
取 供试 品溶液 适 量 ， 用 流动 相 溶 ２ ． ５ 最小 检测 浓度 、 定量 限及 定量 限重 复性 试 验
于阿 哌沙 班 的质量 控 制 。
１ 仪 器 与试 药
称 取适 量 阿哌沙 班 （ 含 ４个 杂 质 ， 杂 质含 量 为０ ． ３ １ ％） ５ 份， 第１ 份加 １ ． ０ ｍｏ ｌ ／ Ｌ盐 酸溶 液 ， 水 浴 加热 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， 冷
Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ ２ ６ ９ ５高效 液相 色谱 仪 ， 带Ｐ Ｄ Ａ二极 管 阵列
ｄ ， 作为 光解 样 品 溶 液 。按 “ ２ ． １ ” 项下方法测定 ， 结 果 见表 １ 。经酸 、 碱、 加热、 氧化 、 光 照破 坏试 验 后 ，Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 法 测定 结果 表 明 ， 本 品在 酸 、 碱、 加热、 光照、 氧化 破 坏 下不稳 定 ， 特别 是 在 酸 、 碱条件下 ， 杂 质 含 量 有 较 大 升 高， 分 解 出来 的杂 质都 能与 主成分 分 离 良好 ， 对 有 关 物 质检查 的专属性 较 好 。各破 坏 性试 验 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ色 谱 图见
解 样 品溶液 ； 第 ４份 水 浴 加 热 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， 冷却 ， 作 为 热 解
（ ２ ５ ０ ｍｍ Fra Baidu bibliotek ４ ． ６ ｍｍ， ５ Ｉ ｘ ｍ） ； 流 动 相 为 甲 醇 一０ ． ０ １
样 品溶 液 ； 第 ５份 于强光 ［ （ ４ ５ ０ ０± ５ ０ ０ ）Ｉ Ｊ ｘ ］下 照射 ３
下 对照 品溶 液 ， 按“ ２ ． １ ” 项 下 色谱 条件 进 样 测 定 ， 按 主
０ ５ １ ０ ｔ ｆ … Ｂ Ｉ ５ ２０
成 分 自身 对照法 计算 。结 果 见表 ２ 。 表 ２ 样 品 中降解产 物测 定 结果
１ ． 阿 哌沙 班
图１ 空 白溶液 （ Ａ） 供试 品溶 液 （ Ｂ） Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 色谱 图
试 验
ｌ ０ ｔ ／ ｍｉ ｎ Ｆ
１ ５
２０
１ ． 阿哌 沙 班
碱 破 坏
图 ２ 酸破 坏 （ Ａ）
碱破 坏 （ Ｂ） 加 热破坏 （ Ｃ） 氧 化破 坏 （ Ｄ）
氧化 破 坏 空 白（ Ｅ） 光照 破坏 （ Ｆ） ＨＰ Ｌ Ｃ 色谱 图
加 热 破 坏
不稳定 ， １ ４个杂质 ， 杂质含量 ０ ． ５ ２ ％