致泻大肠埃希式菌的检验

OK多价2 O26：K60（B6） O125：K70（B15） O126：K71（B16） O128：K67（B12）
OK多价3 O44：K74（L） O114：K90（B） O119：K69（B14） O142：K86（B）
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5、结果报告
❖ 根据以上生化试验和血清学试验结果作出 报告。
致泻大肠埃希氏菌及其检验
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ຫໍສະໝຸດ Baidu
一、目的与要求
❖ 1、学习掌握致泻性大肠埃希氏菌检验的基本原理 和方法；
❖ 2、了解动物性食品检验致泻性大肠埃希氏菌的意 义。
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二、 生物学特性
俗称大肠杆菌 1、革兰氏阴性菌 2、杆状、两端钝圆、周生鞭
毛、无荚膜 3、需氧及兼性厌氧 4、能在普通琼脂上生长
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五物 、学 微检 生验
检样
乳糖发酵阳性 的发酵管
25g+营养肉汤225mL
36℃±1℃
6h
麦康凯 EMB
36℃±1℃ 18h~24h
肠道菌增菌肉汤
乳糖发酵或不发酵的菌落3个~5个， 氧化酶—，革兰氏阴性杆菌
TSI、靛基质、pH7.2尿素 KCN、赖氨酸、动力
TSI底层+， H2S—，
KCN—，尿素—
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普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli
扫描照片
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三、污染途径 ❖ 污染水源和土壤，进而污染食物 ❖ 肉类食品 ❖ 乳制品 ❖ 水产品等
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四、致病性
❖ 肠道内感染 腹泻、食物中毒、肠热症
❖ 肠道外感染 鼠疫（烈性传染病）、泌尿道感染、 肺炎、脑膜炎、伤口化脓、败血症
❖ 赖氨酸脱羧试验：细菌从赖氨酸脱去羧基（COOH），导致培养基pH变碱，指示剂溴麝香草酚 蓝就显示出蓝色，试验结果为阳性，如果细菌不能 脱酸，培养基不变则为黄色。
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4、血清学试验
❖ 假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希菌的 琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、 侵袭性大 肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O 血清 和出血性大肠埃希氏菌 O157 血清做玻片凝集试 验。
血清学试验
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报告
非左述的各种 反应结果
非大肠埃希氏菌
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（一）检验步骤
检样→样品处理→增菌培养→伊红 美蓝（EMB）平板分离培养→生化鉴定 →血清学鉴定→报告
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1、增菌培养 ❖ 以无菌手续称取检样25 g，加在225 mL营养 肉汤中，以均质器打碎1 min或用乳钵加灭 菌砂磨碎。
❖ 取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定 大肠菌群MPN，其余的移入500 mL广口瓶 内，于36±1℃培养6 h。
❖ TSI斜面产酸或不产酸,底层产酸, H2S阴性,KCN 阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌.
❖ TSI底层不产酸或 H2S、KCN、尿素有任何一项 为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。
❖ 必要时做氧化酶实验或革蓝氏染色镜检。
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❖ 三糖铁琼脂试验：只能利用葡萄糖的细菌， 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因 量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化， 加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱 性产物，故使斜面后来又变红，底部由于 是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大 量的酸，使整个培养基呈现黄色。细菌分 解含硫氨基酸，产生H2S，与FeSO4发生反 应形成FeS。
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❖ 挑取1 环，接种于 1管30 mL肠道菌增菌肉 汤内，于 42℃培养 18 h。
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2、分离培养 ❖ 将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌
液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平 板；
❖ 污染严重的检样，可将检样匀液直接划线 接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培 养18～24 h，观察菌落。
❖ 当与某一种多价 O 血清凝集时，再与该多价血清 所包含的单价O血清做试验。
❖ 致泻大肠埃希氏菌所包括的 O抗原群。如与某一 单价 O 血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。
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多价血清 单价血清
单价血清
单价血清
单价血清
OK多价1 O55：K59（B5） O86：K61（B7） O111：K58（B4） O127a：K63（B8）
❖ 不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也 要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
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EMB培养基
菌落特征：黑紫色或紫红 色，圆形，边 缘整齐，表面 光滑，湿润， 常具有金属光 泽，也有的呈 紫黑色，不带 或略带金属光 泽。
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3、生化检验
❖ 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁
琼脂（TSI）或克氏双糖铁琼脂（KI）。同时将这 些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2 尿 素琼脂、KCN 肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。 以上培养物均在 36℃培养过夜。
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分
解乳糖，不产生H2S。
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靛基质试验：细菌分解蛋白质中的色氨酸产
生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用，形成
玫瑰吲哚而成红色。精选课件
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❖ 脲酶试验：细菌分解尿素产生两分子氨，使培养基 pH升高，指示剂酚红显示出红色，即证明细菌有脲 酶。
❖ 动力试验：有动力的细菌会沿着穿刺线扩散生长。