动物体细胞杂交技术过程1

如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞， 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 体外培养淋巴细胞能无限增殖吗 怎样解决这个问题？ 怎样解决这个问题？
二、单克隆抗体
设计方案： 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 －－ 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 －－
融合后的细胞 进行有丝分裂
思考题
1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？ 、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法， 酶解法，如纤维素酶或果胶酶
2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需， 无需，因为动物细胞无细胞壁
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
幻 灯 片
通过长期的实验， 通过长期的实验，科 学家们采用体细胞杂交 技术获得了“番茄—马 技术获得了“番茄 马 铃薯”植株。 铃薯”植株。
“番茄 马铃薯”理想图 番茄—马铃薯 番茄 马铃薯”
植物体细胞杂交技术过程
原理？ 原理？
植物细胞的融合
方法？ 方法？
融合 完成 的 标志
植物组织培养
原理？
植物细胞A 植物细胞
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合 物理、 物理（离心、 物理（离心、振 物理、化学方法 电刺激） （同左） 动、电刺激） 同左） 化学（聚乙二醇） 化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
诱导方法
用途
获得杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
思考题
7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞 8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体
如果将牛的细胞与植物细胞杂交， 如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶 那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！ 动物细胞也能融合吗？ 动物细胞也能融合吗？
一、动物细胞融合
1、动物融合的过程 请同学们阅读课本P52动物融合
1、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞 不同DNA的两个细胞 DNA 灭活病毒诱导细胞融合
杂种细胞
2.制备过程： 2.制备过程： 制备过程
注射抗原的目的是什么 诱导其融合的方法有哪些？ 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞， 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 一抗体检测， 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是由何种细胞产生的？ 抗体是由何种细胞产生的
提 问
浆细胞)能分泌多种 ２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞 能分泌多种 一个Ｂ淋巴细胞 浆细胞 抗体吗？ 抗体吗？
３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免 一种抗原侵入机体之后， 疫反应产生的抗体只有一种吗？ 疫反应产生的抗体只有一种吗？ 简述获得抗体的传统途径？ ４. 简述获得抗体的传统途径？ ５、这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 这种方法获得的抗体有什么缺陷？
二、单克隆抗体
3.单克隆抗体的应用：
①在基础理论研究中具有重要意义 ②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 在疾病诊断、治疗和预防方面， 特异性高、灵敏度高等优越性。 特异性高、灵敏度高等优越性。 ③生物导弹
思考题
★制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细 胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ ★假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用它 来解决什么问题？
离心、电激等物理方法；PEG等化学方法 离心、电激等物理方法； 等化学方法
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
？
5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 、 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？
去壁
来自百度文库
原生质体A 原生质体A 原生质体B 原生质体
去壁
人 工 诱 导
筛选融 合AB 的原生 质体
促进融合 的方法？ 的方法？
杂种 细胞 脱 再 AB 分
生 出 细 胞 壁 化
愈 伤 组 织
再 分 化
杂 种 植 株
植物细胞B 植物细胞
成果和未解决的问题
成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍， 现自然界没有的新品种。 未解决的问题： 未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。 的需要表现出亲代的优良。
？
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、 特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 抗原 刺激 动物体 浆细胞 抗体 抗体不纯
抗原不纯
每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ 胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。 胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。
不能
6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？ 、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？
2、动物细胞融合的概念
动物细胞融合也称细胞杂交， 动物细胞融合也称细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞形成一个 细胞的过程
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 细胞融合的方法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 动物细胞融合 细胞膜的流动性
细胞融合后培养液中有几种细胞？ 细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 瘤 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途 DNA 两条途径，其中D 径能被氨基嘌呤阻断。 径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两 DNA合成途径 但一般不分裂增殖。 合成途径， 条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓 瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖， 瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖， 将这两种细胞在试管中混合， PEG促融 促融， 将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在 筛选培养基上筛选获得杂种细胞。 筛选培养基上筛选获得杂种细胞。