菊花的组织培养.ppt

（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花
思考：在整个操作过程中，是如何来 实现无菌环境的？
2、消毒
① 流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻 轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分 数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即 将外植体取出，在无菌水中清洗
③ 消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放 入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取 出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
实验结果
先生长素， 后细胞分裂素
有利于细胞分裂,但不分化
先细胞分裂素， 后生长素
细胞既分裂也分化
同时使用
分化频率提高
三、影响植物组织培养的因素：
（4）不同植物激素使用量
生长素/细胞分裂素比值 比值高时
比值低时
比值适中
结果 促根分化，
抑芽形成 促芽分化，
抑根形成
促进愈伤组织生长
三、影响植物组织培养的因素：
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
三、影响植物组织培养的因素：
（2）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基。
MS培养基主要成分包括：
大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 微量元素: B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养， 培养期间应定期消毒
培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日
2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
课题1 菊花的组织培养
一、植物组织培养
细胞离体 ①必要条件：
一定的营养物质、激素和其他 外界条件
②原理: 细胞的全能性
二、植物组织培养的基本过程
请阅读P32解决下列问题：
1. 什么叫分化？其实质是什么? 2. 什么叫脱（去）分化、再分化？ 3. 愈伤组织的细胞有什么特点？ 4. 如何控制细胞的脱分化与去分化？
（三）接种 1、接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消 毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需 要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩 倍数，计算用量
2、配制培养基
① 配制培养液
② 调PH ③ 培养基的分装
分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml
由于菊花的茎段的组织培养比较容易， 因此不必添加植物激素 3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行高 压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
珍珠岩 ,珍珠岩是一种火山喷发的 酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃 质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍 珠的结构，所以被命名为珍珠岩。
蛭石是一种天然、无毒的矿物质， 在高温作用下会膨胀的矿物。它是 一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。
固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好， 适合栽培
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75 ％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧 一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量 根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的 茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中 的营养成分和光照条件
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段的茎尖基部插 入培养基利于吸收水分和养分
微量元素 和 有机物
。
３、激素：关键激素是生长素和 细胞分裂素，
其 浓度 、使用的条件: pH、温度、光。照
四、植物组织培养过程:
离
细胞分裂素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤
再分化
芽
织 或 细
细胞分裂素 ≈生长素
组 织
根 细胞分裂素<生长素
植 物 体
胞
四、植物组织培养过程:
（5） pH、温度、光照（菊花组培） pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h
（6）消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境
三、影响植物组织培养的因素：
未开花植物的茎上部 新萌生的侧枝
１、植物材料的选择：植物的 种类、材料的年
龄、 保存时间 的长短 ２、营养：ＭＳ 培养基，主要成分是大量元素、
器官
愈伤组织：是通过细胞分裂形成的，其细胞排
列 疏松而无规则，高度 液泡化呈无定形状态 的 薄壁细胞 。
离体的植物 脱分化 器官、组织、 细胞
愈 再分化 根 伤
组
织
芽
植 物 体
三、影响植物组织培养的因素：
（1）植物材料的选择
不同植物材料
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难
同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
植物激素： 生长素、细胞分裂素等
旁栏思考：
MS培养基中各营养物质的作用是什么？ 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 须的无机盐； 蔗糖提供碳源，同时维持细胞的渗透压； 甘氨酸、维生素等物质，主要是满足离体植 物细胞的特殊营养要求。
三、影响植物组织培养的因素：
（3）不同植物激素使用顺序
使用顺序
（一）制备MS固体培养基 （二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培
（一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃ 保存配制好的培养基母液来制备
1、配制各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100 倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可 按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
二、植物组织培养的基本过程
１、植物组织培养的理论基础： 细胞的全能性 .
２、细胞分化：个体发育中，细胞在 形态、 结构和
生理功能上出现 稳定性差异的过程。实质_基__因_的__选_ 择性表达
３、脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或
细胞产生 愈伤组织的过程
根和芽
再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成 等