第十章细菌学概论

2. 媒染—碘 化钾溶液 浸湿30S
3. 脱色—95%乙醇溶液 进行颜色洗脱
4.复 染—
石炭酸 复红
第二 次染 色
细菌呈现第一次染色的效果紫色
，革兰氏阳性菌（紫阳G+
）；
呈现第二次染色的效果红色；
称革兰氏阴性菌（红阴G -
）
革兰氏染色法
阳性菌 阴性菌
抗酸染色法 只适用于少数抗酸性细菌如结核分枝杆菌麻 风分枝杆菌的检查。
第六节 细菌的检查方法
一、细菌形态的检查法
（一）显微镜 细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须藉助显微镜
放大后才能观察。常用的是 １、普通光学显微镜 经油镜放大1000倍左右可观察细菌 大小、形态、荚膜、芽胞、鞭毛等。 ２、电子显微镜 放大倍数可达数十万倍，主要观察细菌 的超微结构,分辨率在１nm以下。电镜分二类： １）透射式：主要用于观察细菌、病毒内部的精细结构。 ２）扫描式：主要用于表面结构的观察，立体感较强。
⑷ 弥散性血管内凝血（DIC）：是在中毒性休克基础上 ，通过启动凝血的连锁反应，在小血管内形成大量微血 栓，接着内毒素又通过启动溶血的系统，小血管壁坏死 、出血，患者常因重要内脏出血而发生严重后果。 细菌外毒素与内毒素的主要区别见表11-7。
（二）病原菌的侵入数量
感染的发生，除致病菌必须具有一定的毒力物质 外，还需有足够的数量。菌量的多少，一方面与致病菌 毒力强弱有关，另一方面取决于宿主免疫力的高低。一 般是细菌毒力愈强，引起感染所需的菌量愈小；反之则 菌量需大。
２、毒素
1）外毒素 主要由革兰阳性菌产生，某些革兰阴性菌 也能产生外毒素。大多数外毒素是在菌细胞内合成后分 泌至细胞外；也有存在于菌体内，待菌溶溃后才释放出 来，如痢疾志贺菌和肠产毒型大肠埃希菌的外毒素。
外毒素化学成分是蛋白质，不耐热，易被热、酸、蛋白 酶分解破坏。但葡萄球菌肠毒素例外，能耐100℃30min 。
方法：
将细菌涂片、干燥、固定—>石炭酸复红—>盐酸酒精—>
稀释美蓝
（加温染色） （脱色）
（复染）
结果：
抗酸性细菌：一旦着色后，能抵抗盐酸洒精脱色，仍保留 红色者。非抗酸性细菌：被盐酸洒精脱色而复染成蓝色者
３、暗视野显微镜 光线不是直接穿过物镜，而是由 样品反射或经折射后再进入物镜。因此视野呈黑色， 样品呈明亮的。所以象黑夜观察星星一样，主要用于 不染色活菌的观察。
４、相差显微镜 利用相差板作用，使光线在穿入标 本中密度的部位时，引起位相差异并呈现出光强度的 明暗对比，使物象有立体感，主要用于活菌及超微结 构的观察。
⑶ 内毒素血症与中毒性休克：当血液中细菌或病灶内细 菌释放大量内毒素入血时，可导致内毒素血症。内毒素 作用于巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板、补 体系统、凝血系统等并诱生TNF-α、IL、组胺、前列腺 素、激肽等生物活性物质，使小血管功能紊乱而造成微 循环障碍，表现为微循环衰竭和低血压、组织器官毛细 血管灌注不足、缺氧、酸中毒等。严重时则导致以微循 环衰竭和低血压为特征的中毒性休克。
２）复染色法 用二种以上的染料进行染色的方法常用的有：
革兰染色法(Gram stain) 该法是丹麦细菌学家革兰 (Hans Christian Gram)于1884年创建，至今仍在广泛 应用。标本固定后，先用碱性染料结晶紫初染，再加碘 液媒染，使之生成结晶紫-碘复合物，然后用95％乙醇 脱色处理，最后用稀释复红或沙黄复染。
(3)败血症(septicemia)：致病菌侵入血流后，在其中大量 繁殖并产生毒性产物，引起全身性中毒症状。 (4)脓毒血症(pyemia)：化脓性病原菌侵入血流后，在其中 大量繁殖，并通过血流扩散至宿主的其他组织或器官，产生 新的化脓性病灶。
４、带菌状态
有时致病菌在显性或隐性感染后并未立即消失，在体内 继续留存一定时间，与机体免疫力处于相对平衡状态，为带 菌状态，处于带菌状态的人称为带菌者，是重要传染源。
２、消化道感染 病原菌随病人的粪便排出，污染周围 环境尤其是水源，进而污染食品等，可经口食入而发生感 染。
３、创伤感染 病原菌可经破损的皮肤粘膜侵入而发生感 染。
４、接触感染 病原菌通过人-人或动物-人的密切接触而 感染。其方式可为直接接触或通过用具等间接受染。
５、节肢动物叮咬感染 病原菌通过吸血昆虫叮咬而传播 。如人类鼠疫由鼠蚤传播，恙虫病由恙螨幼虫传播等。
2）全身感染 感染发生后，致病菌或其毒性代谢产物向 全身播散引起的全身性症状。临床上常见的有：
(1)毒血症（toxemia)：致病菌只在机体局部生长繁殖， 不进入血循环，但其产生的外毒素或由于细菌死亡裂解 释放的内毒素进入血流，引起特殊的中毒症状。常见的 病原菌有破伤风梭菌、白喉棒状杆菌等。
(2)菌血症(bacteremia)：病原菌由局部侵入血流，但未在 血流中生长繁殖，只是短暂的一过性通过血循环到达体内适 宜部位后再进行繁殖而致病。
第五节 细菌的感染与致病性
一、细菌的感染
感染是指病原菌突破机体的防御功能，侵入机 体，并在一定的部位生长繁殖引起不同程度的病理 过程。
（一）感染的来源
１、外源性感染 外源性感染是指感染来源于宿主体外，传染源有：
１）病人 是传染病流行传播的主要传染源。
2）带菌者 有些健康人携带有某种致病菌但不产生临床症 状，也有些传染病患者恢复后在一段时间内仍继续排菌， 称为带菌者。这些健康带菌者和恢复期带菌者是很重要的 传染源，因其不出现临床症状，不易被人们察觉，故危害 性更大。
3）病畜和带菌动物 有些细菌是人畜共患，因而接触这 类病畜或带菌动物也可引起人类感染。
２、 内源性感染
内源性感染是指感染来源于患者自身体内或体表。这类 感染的致病菌大多是体内的正常菌群，少数是以隐伏状态 存在于体内的致病菌。正常菌群在特定条件下成为条件致 病菌后再致病。
（二）传播方式与途径
１、呼吸道感染 病原菌随病人或带菌者的咳嗽、喷嚏、 大声说话时喷出的飞沫等散布到周围空气中，经吸入而感 染。
①菌毛粘附素：由细菌菌毛分泌，如大肠埃希菌的 I型菌毛、定植因子抗原I(CFA／I)、淋病奈瑟菌菌毛 产生的是菌毛粘附素。
②非菌毛粘附素：非细菌菌毛分泌的，是细菌表面的蛋 白质或其他组分，如金黄色葡萄球菌的脂磷壁酸、A群 链球菌的M蛋白、肺炎支原体的P1蛋白等属非菌毛粘附 素。
3）侵袭性酶 侵袭性酶一般不具有毒性，但在感染过程 中可以协助致病菌抗吞噬或向四周扩散。如致病性葡萄 球菌凝固酶，能使血浆中液态纤维蛋白原变成固态的纤 维蛋白围绕在细菌表面，可协助细菌抵抗吞噬。A群链 球菌产生的透明质酸酶、链激酶和链道酶，能降解细胞 间质透明质酸、溶解纤维蛋白等，有利于细菌在组织中 扩散。
根据临床上病情缓急不同，分为： １）急性感染 发作急，病程较短，一般是数日至数周。 病愈后，致病菌从宿主体内消失。常见的病原菌有脑膜炎 奈瑟菌、霍乱弧菌等。
2）慢性感染 病程缓慢，常持续数月至数周。多见于胞 内菌感染，如结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等。
根据临床上感染部位不同，分为：
1）局部感染 致病菌侵入宿主体后，局限在一定部位生 长繁殖引起局部的病变。如化脓性球菌所致的疖、痈等 。
５、荧光显微镜 以紫外光为光源，当紫外光照射到 荧光物质染色的标本时，因吸收紫外光而放射出荧光 临床上常用荧光素标记抗体，来测末知的抗原。
（二）不染色标本的检查 将细菌标本直接放在显微镜下观察 用途：观察细菌运动能力及繁殖方式。 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野观察法
（三）染色标本的检查 １、常用染料：美蓝、碱性复红、结晶紫及龙胆紫等。 利用细菌的等电点较低，在近中性的溶液中带负电荷， 容易与带正荷的碱性染料结合使细菌着色。 ２、常用方法： １）单染色法 用一种染料进行染色，只能用于观察细 菌的大小、排列和形态。
2）内毒素 是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖 (1ipopolysaccharide,LPS)组分，只有当细菌死亡裂 解或用人工方法破坏菌体后才释放出来。
内毒素耐热，加热至160℃经2～4h才被破坏。
内毒素抗原性弱，不能用甲醛液脱毒成类毒素。
不同革兰阴性菌的脂多糖结构类型一致，主要毒性 成分脂质A结构也基本相似。因此，不同革兰阴性菌 感染时，由内毒素引起的毒性作用也基本相同。
此法可将细菌分为两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色 者为革兰阳性菌，被乙醇脱色后复染成红色者为革兰阴 性菌。
意义：鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性
革兰氏染色
1884年，丹麦医生C.Gram发明 程序：（1）初染（结晶紫1-2min）
（2）媒染剂（碘液1min） （3）脱色（95%乙醇20~30S） （4）复染（蕃红1 ~ 2min）
二、 细菌的致病性
致病菌的致病机制与其毒力强弱、侵入数量以及侵入部 位有着密切的关系。 （一）细菌的毒力
毒力(virulence)是指致病菌的致病性强弱程度。构成细 菌毒力的物质是侵袭力和毒素。
１、侵袭力 指病原菌突破宿主皮肤、粘膜生理屏障， 侵入机体并在体内生长繁殖、蔓延扩散的能力。包括 1）荚膜 具有抗吞噬和阻挠杀菌物质的作用，使致病菌 能在宿主体内大量繁殖，产生病变。 A群链球菌的微荚膜 、伤寒沙门菌的Vi抗原、大肠埃希菌的K抗原等结构，其功 能也与荚膜相同。
（三）感染的类型
感染的发生、发展和结局是宿主免疫系统和致病菌相 互作用的复杂过程。根据两者力量对比，感染类型可出现 不同临床表现。而且随着双方力量的增减，可以出现相互 转化的动态变化。
１、隐性感染
当宿主的抗感染免疫力较强或侵入的病菌数量不多、毒 力较弱，感染后对机体损害较轻，不出现或出现不明显的 临床症状，为隐性感染，或称亚临床感染。隐性感染后机 体常可获得足够的特异免疫，清除入侵的病原性细菌。
２、潜伏感染 当机体免疫力与病原菌在相互作用过程中暂时处于平
衡状态时，表现为潜伏感染。一当机体免疫力下降，潜伏 的病原菌则可大量繁殖引起病变。 ３、显性感染