染色体生物剂量计
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Soochow University
染色体生物剂量计
• 染色体畸变是反映电离辐射损伤的敏感指标；
•借助剂量效应曲线，估算事故受照人员的剂量；
•IAEA 出版了染色体畸变分析的报告书－－国际公认 的可靠、灵敏的生物剂量计；
•在辐射事故中，染色体畸变分析估算的剂量不仅与临 床表现相符，而且与物理剂量相一致； •用物理方法难以估算剂量时，更显其优越性。
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2.CB法微核:
微核（micronuclear）：无着丝粒断片（染色体碎片）或 在分裂后期落后的整条染色体，在分裂末期不能纳入主核， 当进入下一个间期时，它们在细胞质内浓缩成小于主核1/3， 着色与主核相同或略浅的小核。
胞浆分裂阻滞微核法(CB法)：培养基中加入胞松素-B,后者 不干扰细胞核分裂，但能阻滞胞浆分裂。分裂一次的淋巴细 胞的胞浆中出现双细胞核,简称CB细胞。CB细胞大,具有双 核,易于鉴别。双核细胞是只经历一次分裂的细胞。
Soochow University
酵母wk.baidu.comEL1基因表达对A-T细胞缺陷性表型的影响研究 曹建平
致
谢
Thank you
Soochow University
MN
Soochow University
CB法估算剂量范围：0.25-5.0Gy； 受照后微核随时间变化规律 : 照射后立刻升高 , 然后保持 恒定水平,持续时间不清； 照后尽早采血,不超过一月； 微核法：直接涂片法、培养法、CB法； 微核仅出现在诱发后经过一次分裂的间期细胞传统微核 法不能分辨未转化、分裂一次和一次以上的淋巴细胞,影 响微核测试的准确性； CB法计数CB细胞中的微核,可显著提高微核检测的灵敏度 和准确性。
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染色体生物剂量计（非稳定性染色体畸变）
适用于均匀、急性全身外照射；不用于内照射、分次照 射、长期小剂量照射；局部或非均匀照射，给出相当于均 匀照射时的全身剂量当量；
l
l 分析“双着丝粒体＋着丝粒环”；
l 取血在事故后48小时内，最迟不超过2月； l 体内存在时间与淋巴细胞寿命、剂量水平、剂量分布、 照射持续时间、个体差异等有关； l 剂量估算范围： 0.1--5Gy。其最低值， X 线约为 0.05Gy ； r线0.1Gy；裂变中子0.01Gy。
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CB法优点：方法简单,分析快速,易于掌握, 有利于自动化分析,尤其在核事故涉及的人 员较多时更显示具优越性。
缺点：不像双着丝粒体对辐射敏感、特异； 自发率高，1％－2％；个体差异大，自发 率与性别无关，与年龄呈正相关，估算剂 量下限的不确定性高；衰减速度比双着丝 粒体快。
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3,稳定性染色体畸变（易位）分析：荧光原 位杂交(FISH)技术
利用生物素(biotin)标记的已知碱基序列的核酸作为 探针,按照碱基互补的原则,与标本上染色体同源序列 进行特异性结合（原位杂交）,然后用荧光标记的生物 素亲和蛋白 (avidin)和抗亲和蛋白的抗体进行免疫监 测和放大,使探针杂交区发出荧光(显色),形成可监测的 杂交双链核酸,最后在荧光显微镜下检查探针存在与否。 结合了探针的染色体呈现出特定的颜色,未结合探针的 染色体不着色,如着色与未着色的染色体间发生了互换, 这种异常的染色体在荧光显微镜下非常容易鉴别。
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常见的其他生物剂量测定方法
1：早熟凝聚（PCC）染色体；
2：CB法微核；
3：稳定性染色体畸变（易位）FISH ；
4：HPRT基因位点突变
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1、早熟凝聚染色体（PCC）分析：
PCC: 当一个分裂中期细胞和一个间期细胞进行 细胞融合后，间期核被诱导提前进入有丝分裂期。 间期核中极度分散状态的染色质凝聚成染色体样 结 构 ， 这 种 纤 细 的 染 色 体 称 为 PCC （ Premature condensed chromosome ）。 显微镜下，融合细胞中可见诱导细胞的中期染色 体和纤细的单股PCC。这一现象称为染色体熟前 凝 聚 （ premature chromosome condensation, PCC）
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FISH
4
1
Soochow University
FISH
易位
易位
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特点：
L FISH与G显带相比，节省了人力物力,由于不需要 分散良好的分裂相,增加了分析的细胞数,提高了检 测的精确度。
L FISH 对结构畸变分析较常规法快速、准确 , 有望 成为较理想的生物剂量计。是当前辐射细胞遗传学 发展中的一门前沿技术。 缺点： l 对倒位和缺失等不大敏感；探针的特异性；价格 昂贵。
染色体生物剂量计
• 染色体畸变是反映电离辐射损伤的敏感指标；
•借助剂量效应曲线，估算事故受照人员的剂量；
•IAEA 出版了染色体畸变分析的报告书－－国际公认 的可靠、灵敏的生物剂量计；
•在辐射事故中，染色体畸变分析估算的剂量不仅与临 床表现相符，而且与物理剂量相一致； •用物理方法难以估算剂量时，更显其优越性。
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2.CB法微核:
微核（micronuclear）：无着丝粒断片（染色体碎片）或 在分裂后期落后的整条染色体，在分裂末期不能纳入主核， 当进入下一个间期时，它们在细胞质内浓缩成小于主核1/3， 着色与主核相同或略浅的小核。
胞浆分裂阻滞微核法(CB法)：培养基中加入胞松素-B,后者 不干扰细胞核分裂，但能阻滞胞浆分裂。分裂一次的淋巴细 胞的胞浆中出现双细胞核,简称CB细胞。CB细胞大,具有双 核,易于鉴别。双核细胞是只经历一次分裂的细胞。
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酵母wk.baidu.comEL1基因表达对A-T细胞缺陷性表型的影响研究 曹建平
致
谢
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CB法估算剂量范围：0.25-5.0Gy； 受照后微核随时间变化规律 : 照射后立刻升高 , 然后保持 恒定水平,持续时间不清； 照后尽早采血,不超过一月； 微核法：直接涂片法、培养法、CB法； 微核仅出现在诱发后经过一次分裂的间期细胞传统微核 法不能分辨未转化、分裂一次和一次以上的淋巴细胞,影 响微核测试的准确性； CB法计数CB细胞中的微核,可显著提高微核检测的灵敏度 和准确性。
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染色体生物剂量计（非稳定性染色体畸变）
适用于均匀、急性全身外照射；不用于内照射、分次照 射、长期小剂量照射；局部或非均匀照射，给出相当于均 匀照射时的全身剂量当量；
l
l 分析“双着丝粒体＋着丝粒环”；
l 取血在事故后48小时内，最迟不超过2月； l 体内存在时间与淋巴细胞寿命、剂量水平、剂量分布、 照射持续时间、个体差异等有关； l 剂量估算范围： 0.1--5Gy。其最低值， X 线约为 0.05Gy ； r线0.1Gy；裂变中子0.01Gy。
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CB法优点：方法简单,分析快速,易于掌握, 有利于自动化分析,尤其在核事故涉及的人 员较多时更显示具优越性。
缺点：不像双着丝粒体对辐射敏感、特异； 自发率高，1％－2％；个体差异大，自发 率与性别无关，与年龄呈正相关，估算剂 量下限的不确定性高；衰减速度比双着丝 粒体快。
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3,稳定性染色体畸变（易位）分析：荧光原 位杂交(FISH)技术
利用生物素(biotin)标记的已知碱基序列的核酸作为 探针,按照碱基互补的原则,与标本上染色体同源序列 进行特异性结合（原位杂交）,然后用荧光标记的生物 素亲和蛋白 (avidin)和抗亲和蛋白的抗体进行免疫监 测和放大,使探针杂交区发出荧光(显色),形成可监测的 杂交双链核酸,最后在荧光显微镜下检查探针存在与否。 结合了探针的染色体呈现出特定的颜色,未结合探针的 染色体不着色,如着色与未着色的染色体间发生了互换, 这种异常的染色体在荧光显微镜下非常容易鉴别。
Soochow University
常见的其他生物剂量测定方法
1：早熟凝聚（PCC）染色体；
2：CB法微核；
3：稳定性染色体畸变（易位）FISH ；
4：HPRT基因位点突变
Soochow University
1、早熟凝聚染色体（PCC）分析：
PCC: 当一个分裂中期细胞和一个间期细胞进行 细胞融合后，间期核被诱导提前进入有丝分裂期。 间期核中极度分散状态的染色质凝聚成染色体样 结 构 ， 这 种 纤 细 的 染 色 体 称 为 PCC （ Premature condensed chromosome ）。 显微镜下，融合细胞中可见诱导细胞的中期染色 体和纤细的单股PCC。这一现象称为染色体熟前 凝 聚 （ premature chromosome condensation, PCC）
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FISH
4
1
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FISH
易位
易位
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特点：
L FISH与G显带相比，节省了人力物力,由于不需要 分散良好的分裂相,增加了分析的细胞数,提高了检 测的精确度。
L FISH 对结构畸变分析较常规法快速、准确 , 有望 成为较理想的生物剂量计。是当前辐射细胞遗传学 发展中的一门前沿技术。 缺点： l 对倒位和缺失等不大敏感；探针的特异性；价格 昂贵。