坏死性小肠结肠炎动物模型具体方法及步骤

坏死性小肠结肠炎动物模型具体方法及步骤原型物种人

来源人工喂养以及缺氧和冷刺激诱导的新生儿坏死性小肠结肠炎

模式动物品系SPF级新生SD大鼠，2日龄

实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组

实验周期1~2 weeks

建模方法雌雄不限，体重约5~10g。新生大鼠出生48h内母乳喂养，自由摄食，与母鼠同笼；出生后48h随机分成模型组和对照组。对照组新生大鼠出生48h后继续与母鼠同笼，鼠乳喂养，不进行缺氧冷刺激。模型组新生大鼠出生48h后与母鼠分开，置入保育箱中并采用鼠乳代用品人工喂养，并定期给与缺氧冷刺激，以建立新生鼠坏死性小肠结肠炎动物模型；

NEC模型组：

1.新生大鼠与母鼠分离，放置在保育箱内(控制保育箱内温度28~30℃，湿度45%~65%)，采用鼠乳代用品喂养。采用5号静脉留置针定时经口插管喂养，第1天给予0.2ml/次，每4小时1次，随后每24h增加0.2ml/次,48h后逐渐增至0.4ml。

2.缺氧及冷刺激：将新生SD大鼠置入缺氧箱中，5%氧气+95%氮气10分钟，随即打开缺氧箱，取出新生鼠，随后将其置入冰箱冷藏室中，给予4℃刺激，持续10分钟，结束后放回保育箱。每日2次，分别进行一次缺氧+冷刺

激，连续3d，最后一次缺氧+冷刺激后24h空腹断头处死大鼠，打开腹腔取出十二指肠下端至直肠上端的肠道组织。

应用疾病模型

1.外观表现及生长情况模型组新生大鼠在开始造模后相继岀现不冋程度地排黄绿色黏液稀便、消瘦,体重减轻,随后出现胃潴留、腹胀、腹泻、进奶量下降、嗜睡常卷缩而卧、活动度下降、反应迟钝，行动缓慢，且逐渐加重。对照组新生大鼠进食及排使均正常，无腹胀及胃潴留，活动度良好，皮下脂肪丰满；

2. 小肠肉眼观改变进行拍照；

3. 记录每只小鼠每天体重，进食情况。

4. 标本制作白片，电镜固定标本，western blot , PCR标本以用户后续检测。

肠道组织病理学检查

取盲部近端肠管1cm置于固定液中固定，石蜡包埋，取冠状切面，HE染色在光镜下观察肠组织形态学改变。

新生大鼠回盲部病理切片，HE染色，光学显微镜病理观察显示:对照组回肠部结构完整，肠黏膜完好，上皮完整、连续，腺体排列规则,组织结构清楚、分泌功能活跃、固有层血管无扩张,肌层无异常，无炎性细胞浸润及溃疡。模型组出

现绒毛脱落、坏死，绒毛结构消失，甚至肠穿孔；固有层多量淋巴细胞、噬细胞及中性粒细胞浸润。