血清碳酸氢根测定方法的改良

0. 004 3
50 0. 470 0. 009 4 0. 225 0. 004 5
注: 终点法吸光度: A 空白- A 测定; 速率法吸光度: 两个测光点吸光度差值( A 1- A 2)
60 0. 516 0. 008 6 0. 240 0. 004 0
2 准确度及精密度 两法测定靶值为 26. 5 mmol/ L 的定值血清 20 次, 结果显示, 终点法和速率 法的均值分别为 23. 9 mm ol/ L 和 25. 6 mm ol/ L ,
作者单位: 230023 合肥, 中铁四局集团中心医院检验科 作 者简介: 贾扬 地( 1966- ) , 男, 主管检 验师, 本科, 主要从事 临床检验工作。电话: 0551-3744114
图 1 碳酸氢根反应曲线
临床输血与检验 2004 年 4 月第 6 卷第 2 期
·10 5·
4 线性检查 称量法配制碳酸氢钠浓度( mm ol/ L ) 分别为 10、20、30、40、50、60, 用上述参数进行检 测, 重复 3 次, 求均值。打开分析软件吸光度—浓度 界面, 记录吸光度变化值, 绘制吸光度—浓度曲线, 同样用终点法检测, 与改良速率法比较。 5 准确度及精密度 分别用两种方法检测郎道定 值血清 20 次, 计算均值( x-) 和变异系数( CV ) 。 6 回收试验 以郎道定值血清为基准, 添加已知
灯检、包装
3 质量标准 用于血小板保存的 DM SO 的质量
检测项目设 定, 除理化指 标如比重、吸光度、重金
属、水份、含量等须合格外, 还须进行无菌试验、热
原试验、溶血试验、急性毒性试验等生物学检测及
外观检查。
作者单位: 210042 南京, 江苏省血液中心研究室 作者简介: 刘衍春( 1960- ) , 男, 山东滕州人, 副主任技师, 主要 从事输血与血液制品研究。电话: 025-5411563-8013
94. 0 92. 0 90. 0 89. 5 90. 4
96. 0 98. 0 98. 7 94. 5 95. 2
4 临床应用比较 随机选择 80 例住院患者样本, 终 点法和速率法的检测结果分别为( 22. 4±8. 3) mm ol/ L 和( 24. 1±8. 5) mmo l/ L , 差异有显著性 ( t = 2. 41, P < 0. 05) 。相关及回归分析显示, r = 0. 938( P < 0. 01) , Y = 0. 925 X + 1. 34。 5 质量控制 以郎道质控血清( 21. 3 m mol / L ) 作为 控制品, 应用两点速率法检测 3 个月质控( n= 63) , 结 果为( 20. 5±0. 91) m mol / L , CV 为 4. 27% 。
CV 分别为 7. 66% 和 3. 69% 。 3 回 收试 验 终 点法 和速 率法 的平 均回 收率 分别 为 91. 2% 和 96. 5% , 见表 2。
管号
0 1 2 3 4 5
表 2 两种方法回收试验结果
测 定值 终点法 速率法
回收量 终点法 速率法
加入量
回收率( % ) 终点法 速率法
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J Clin T r ansfus L ab M ed, Apr . 2004. Vo l 6. N o . 2
血清碳酸氢根测定方法的改良
贾扬地
【摘要】 目的 改良血清碳酸氢根测定方法 , 提高准确性及精密度。方法 改良终点法为两 点速率法, 进行线性、准确 性、精密度、回收试验、临床应用等研究。结果 速率法和终点法的变异系 数分别为 3. 69% 和 7. 66% 。临床 应用结果显示两 法具 有一定的 相关性( r = 0. 938) , 检测结果 的差异具 有显著 性( P< 0. 05) 。速 率法和 终点法平 均回收 率分别 为96. 5% 和 91. 2% 。结论 改良后的速率法, 简便易行, 准确度及精密度高, 值得推广应用。 【关键词】 碳酸氢根 终点法 两点速 率法 【中图分类号】 R 446. 11 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-2587( 2004) 02-0104-03
讨 论
碳酸氢根是反映体内酸碱平衡的重要指标之 一, 目前多数实验室采用终点法检测。试剂组成中 含有磷酸烯醇丙酮酸羧化酶( P EP C) 、苹果酸脱氢 酶( MDH) 及辅酶( NADH ) , 这些酶具有不稳定性,
检 测过程中, 试剂开 放, 易与 空气中 CO 2 发生反 应, 试剂空白吸光度处于不断变化中, 而速率法可 消除空白吸光度的影响[ 1] , 避免终点法需经常定标 的缺陷, 提高了检测系统的准确性和精密度。从表 1 可看出: 终点法测定时, 不同浓度碳酸氢根的斜 率差异大, 呈下降趋势, 表现为一种曲线关系, 若用 单点定标, 会出现随样本浓度增高, 而测定值相应 偏低的现象。改良后的速率法, 在 10～50 m mol / L 之间, 斜率基本一致, 直线回归方程为 Y = 0. 004 4 X + 0. 000 2( r = 0. 992, P < 0. 01) , 结果可靠[ 2] 。董 松苗报道[ 3] 速率法中的动态零值现象, 在改良方法 中没有观察到, 是否与检测系统灵敏度有关, 有待于 进一步探讨。两种方法的回收试验结果显示, 速率 法回收率高于终点法, 终点法引入8. 8% 负偏差, 速
1/ 100, 主波长为 340 nm, 用浓度为 50 mm ol/ L 的 N aHCO 3 连续反应 10 min( 共 35 个测光点) , 记录 吸光度值, 绘制吸光度—时间曲线, 见图 1。从图 1 可见: 最佳测光点范围约为 4～28 点( 相当于 1～8 m in) , 反应界限吸光度为 0. 84。考虑到实际样本间 浓度差异性, 设定延迟时间为 2 min, 读数时间为 3 m in。样本试剂体积比为 1/ 100, 主波长为 340 nm, 副波长为 450 nm。为避免基体效应, 用人血基质校 准品校准, 校准类型为线性。
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·研究报告·
血小板保存中 DM SO 的制备与质量标准
刘衍春 魏平 刘毅 刘洪莉 纪云鹏 薛敏 唐荣才
【关键词】 血小板 DM SO 制备 质量标 准 【中图分类号】 R 457 【文献标 识码】 A 【文章编号】 1671-2587( 2004) 02-0106-03
材料与方法
1 试剂和设备 DM SO( 上海试剂二厂, 分析纯) ,
树脂滤膜( 浙江海宁市膜分离设备厂出品) 。西林 瓶、不锈 钢桶、滤液瓶 均经过 180℃干烤 2 h 除热
原, 灌封机, 空压机, 压盖机, 蔡氏滤器。
2 制备过程
30℃～40℃
除菌
分装
压盖
DM SO
混合
预温 1 h
滤液
5 m l/ 瓶
以 NADH 作为指示剂, 测定吸光度。 2 材料、数据处理及统计学方法 试剂由梅里埃公司
生产, 仪器为日立 7020 型全自动生化分析仪,ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ分析系
统软件由智方科技有限公司提供, 版本 6. 0。采用直线
回归、相关分析、t 检验进行统计学处理。
3 延 迟 时间 、测 光 点及 反 应 界 限设 定 打开 分 析 软件的吸光度—时间界面, 设定样本试剂比为
目前检测血清碳酸氢根常用终点法, 由于试剂 的不稳定性及方法的缺陷, 易出现漂移现象。为此, 笔者设定各项分析参数, 将终点法改良为两点速率 法, 现报告如下。
材料与方法
1 反应原理
磷酸烯醇丙酮酸 +
HC
O
3
PEPC 草 酰乙酸
+
H2P
O
4
草 酰 乙酸 + N A DH + H+ M DH 苹 果 酸 + N A D+
自 1959 年 L ovelock 等发现 DMSO 可以低温 保存细胞以来, DM SO 主要用于组织细胞的低温 保存[ 1] 。近年来, 随着临床成分输血及造血干细胞 移植的进展, DM SO 被普遍用于血小板及造血干 细胞的深低温保存。但临床输注时由于没有去除
DM SO, 故对其质量与安全性提出了一定的要求, 笔者在采用市售分析纯 DMSO 制备适用于血小板 保存的 DM SO 时, 进行了相应的质量控制。
终点法 速率法
吸 光度 斜率
吸 光度 斜率
10 0. 112 0. 011 2 0. 045 0. 004 5
20 0. 214 0. 010 7 0. 091 0. 004 5
浓度( mmo l/ L )
30
40
0. 312
0. 404
0. 010 4
0. 010 1
0. 141
0. 172
0. 004 7
量的 N aHCO 3, 建立 5 种不同浓度样本, 进行回收 试验。 7 灵敏度 进行试剂空白测定 20 次, 计算均值和 标准差, 以大于 x-+ 2s 为响应量, 两种方法的检测 限均可达到 0. 1 m mol / L 。
结 果
1 线性检查结果见表 1。
表 1 两种方法的吸光度、斜 率比较
20. 6 25. 3 29. 8 34. 1 38. 5 43. 2
21. 7 26. 5 31. 5 35. 4 40. 6 45. 5
4. 7 9. 2 13. 5 17. 9 22. 6
4. 8 9. 8 13. 7 18. 9 23. 8
5. 0 10. 0 15. 0 20. 0 25. 0
The improvement on detecting serum hydrocarbonate J I A Y angd i. D ep ar tment of L abor atory , T he Center H osp ital of China T iesij u Civil Eng ineer ing Gr oup , H ef ei 230023 【Abstract】 Obj ective T o impr ov e serum hy dr o car bonate measur ing metho d and height en its accur acy a nd pr ecision. Method U sing two point -speed metho d instead o f cust omar y end-po int m et hod and the linear ity , accur acy, precision, recov ery ex per iment, clinical application, etc wer e detect ed. Results T here was definite co rr elatio n bet ween tw o po int-speed method and end-po int method( r = 0. 938) . M easuring r ando x -v alue ser um 20 times, the CV o f tw o point -speed met ho d w as 3. 69% , a nd t hat o f end-point method w as 7. 66% . T he tw o metho ds sho wed o bvio us difference in r esults o f clinical applicatio n ( P < 0. 05) and the aver ag e r ecov ery rat es w ere 96. 5% and 91. 2% r espectively. Conclusion T he impro ved t wo po int -speed metho d, easy to operat e and of high accur acy and pr ecisio n, is w or th gener alizing. 【Key words】 Hy dr ocar bo nate End-po int method T wo po int-speed m ethod