药典三部(2015版)-通则-3604新生牛血清检测要求

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血红蛋白检验操作SOP

1.目的
建立血红蛋白测定的操作步骤，以保证试验的顺利进行和结果的真实可靠。

2.适用范围
适用于血清制品血红蛋白的测定（分光光度计法）
3.职责
检验人员。

4.定义
无
5.引用标准
《中国药典》2015版四部通则3604
6.材料及设备
6.1 751分光光度计
6.2 1-cm光路的比色杯
6.3 蒸馏水
7.流程图
无
8.内容
8.1.以蒸馏水为空白对照。

8.2 使用1-cm光路的比色杯，直接测定牛血清样品在576nm、623nm及700nm
波长下的吸光值。

8.3 每个样品至少测定2次。

8.4 计算平均测定值
8.5 按照下式计算样品中血红蛋白含量：
血红蛋白含量（mg/dl）=[(A576×115)−(A623×102)−(A700×39.1)] ×10。

8.6 其中；A576、A623、A700是样品在576nm、623nm及700nm波长下的平均
吸光值。

9.注意事项
9.1. 严格按照仪器说明书进行操作。

9.2. 比色杯要保持清洁，定期在盐酸液中进行浸泡。

9.3. 试验完毕将所有物品放归原处。

10.附录及派生记录
10.1. 血红蛋白检测记录F-SOP-ZL004-01
11.相关文件
无
12.修订记录。

《中国药典》2015年版生物制品质控要点

重组B亚单位／菌体霍乱疫苗（肠溶胶囊）（2010年版增补本）
水痘减毒活疫苗
二、生物制品生产用辅料
1.生物制品生产用常用辅料及分类 2.风险等级分级及用于生产的质量控制要求
风险等级分级原则：原材料来源、生产以及对生物制品潜在的毒性和外源因子污染风险等，从低到高分为四级；
各级生物制品原材料至少应进行的质量控制要求：来源和资质证明、检测要求、病毒污染物控制以及供应商评估等
16
生物制品通则：生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程（修订）
一、对生产用细胞基质总的要求 (一)细胞系/株历史资料 (二)细胞培养操作要求 (三)细胞库 (四)细胞检定 (五)生产细胞培养
二、连续传代细胞系的特殊要求 Vero、CHO、NS0细胞等三、人二倍体细胞株的特殊要求 MRC-5、2BS、KMB17等四、重组细胞的特殊要求
六、特异性免疫血浆制备及其供血浆者免疫要求
(一)血浆 (二)供血浆者 (三)供血浆者免疫
18
生物制品通则：
免疫血清生产用马匹检疫和免疫规程（修订）一、马匹选购二、马匹检疫三、马匹免疫及采血四、血浆分离五、马匹管理
19
通用性技术要求：总论 General Monographs
一、总则二、透视检查三、标签四、包装五、药品说明书
12
生物制品通则：生物制品贮存和运输规程（修订）
总则生物制品贮藏管理要求生物制品运输管理要求
13
生物制品通则：生物制品国家标准物质制备和标定规程（修订）一、定义二、标准物质的种类三、标准物质的制备和标定四、标准物质的审批五、标签及说明书六、标准物质的索取和保管

《中华人民共和国药典(2015年版)》(四部)通则中有关生物测定

《中华人民共和国药典（2015年版）》（四部）通则中有关生物测定部分的增、修订情况介绍作者：唐黎明陈桂良来源：《上海医药》2016年第07期摘要《中华人民共和国药典（2015年版）》将前版药典一、二、三部分别收载的附录整合归为四部，作为药典的通用要求。

四部中有关生物测定部分除整合了热原检查法、异常毒性检查法等原附录外，还新增了组胺物质检查法等，同时对部分原附录进行了修订。

本文介绍相关情况。

关键词《中华人民共和国药典（2015年版）》生物测定通则增、修订中图分类号：R921.2 文献标识码：C 文章编号：1006-1533（2016）07-0009-02Introduction of the revised information about the biologic test in general principle（volume IV）of the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China （2015 version）TANG Liming*， CHEN Guiliang（Division of Pharmacology and Toxicology， Shanghai Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201203， China）ABSTRACT The appendices in the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China （ChP）（2010 version） volume I， II and III were integrated into volume IV in ChP （2015 version），which can be served as the common requirement for pharmacopoeia standards. The histamine test and so on were added in the biological test of volume IV besides the intergradation of pyrogens test and abnormal toxicity test and meanwhile some appendices on bioassay were revised as well. In this paper， the relevant information is introduced for reference.KEY WORDS Pharmacopoeia of the People’s Republic of China （2015 version）； biologic test； general principle； revision《中华人民共和国药典（2015年版）》（以下简称为“2015年版《中国药典》”）已自2015年12月1日起正式实施。

2015版药典三部

第4 级为高风险的原材料。这类原材料主要包括已知具有生物作用机制的毒性化学物质，如甲氯蝶呤、霍乱毒素、金黄色葡萄菌素孔道溶血素、金黄色葡萄菌素肠毒素A 和B 以及中毒性休克综合征毒素，以及大部分成分复杂的动物源性组织和体液，如用于细胞培养基成分的牛血淸、用于细胞消化或蛋白质水解的动物来源的酶以及用于选择或去除免疫靶向性成分的腹水来源的抗体或蛋白质。
风险等级分级及用于生产的质量控制要求：根据辅料的来源、生产以及对生物制品潜在的毒性和安全性的影响等，将辅料按风险等级从低到高分为四级，同原材料分等级，具体参看2015年版药典。
重组人干扰素a2b注射液
3.1原液检定 3.1.6外源性DNA残留量：应不高于1支/瓶应不高于10ng（通则3407）
菌毒种的索取、分发与运输
应符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》等国家相关管理规定。（删除具体要求，按国家生物安全相关规定执行，避免遗漏并保证及时更新）
二、生物制品国家标准物质制备和标定规程
标准物质的种类
1.国家生物标准品，系指用国际生物标准品标定的，或由我国自行研制的（尚无国际生物标准品者）用于定量测定某一制品含量、效价或毒性的标准物质，其含量以毫克（mg）表示，生物学活性以国际单位（IU）、特定单位（AU）或单位（U）[增订]表示。
熔封或严封：系指将容器熔封或用适宜的材料严封，以防止空气与水分的侵入并防止污染。
阴凉处：系指不超过20℃；凉暗处：系指避光并不超过20℃；冷处：系指2~10 ℃；常温（室温）：系指10~30 ℃；
生物制品的贮藏、运输应符合“生物制品贮藏和运输规程”的规定。
毒菌种登记程序
第3 级为中等风险的原材料。这类原材料非药用，包括生物制品生产用培养基成分、非动物来源蛋白水解酶、用于靶向纯化的单克隆抗体，以及用于生物制品提取、纯化、灭活的化学试剂等。这类生物制品原材料的质量控制要求应高于前两个等级的原材料，为使其符合生产用原材料的要求，使用时可能需进一步加工、纯化处理或增加病毒灭活和（或）去除步骤等。

甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)

• 1 基本要求
• 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
甲型肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞）
2 制造 2 . 1 生产用细胞
生产用细胞为人二倍体细胞KMB17株，该细胞株为中国医学科学院医学生物学研究所建立。 2 . 1 . 1 细胞管理及检定
应符合现行版《中国药典》三部生物制品通则“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。取自同批工作细胞库的1 支或多支细胞，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 KMB17株细胞种子代次为第3代，主细胞库细胞代次为第6代，工作细胞库细胞代次为第16代。用于毒种制备的细胞代次为第28代，用于疫苗生产的细胞代次为第32代。 2.1.2 细胞制备取出液氮冻存的同批工作细胞库中的1 支或多支细胞管，复苏混合培养长成单层后，用0.125-0.25%胰蛋白酶消化液消化分散，按10士3万 /ml接种于罗氏瓶/塑料瓶（培养液为160ml士10ml/瓶）或细胞工厂（培养液为200ml士10ml/层），于37 ℃士0.5℃静置培养，经传代扩增至规定代次用于1批疫苗的生产。
2 . 3 . 3 对照细胞外源病毒因子检査
依法检査（《中国药典》通则 3302)，应符合规定。
2. 3 . 4 病毒接种和培养
取工作种子毒种在冰浴条件下经超声破碎细胞释放病毒，按0.05〜1 . 0 M O I （同一工作种子批毒种应按同一 M O I 接种）接种于KMB17 细胞(用于毒种制备的细胞代次为第28代，用于疫苗制备的细胞代次为第32代）， 35 ℃士 0.5℃培养至9-12天更换细胞维持液，继续于35 ℃士0.5℃培养至22-26天收获病毒。
甲型肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞） Jiaxing Ganyan Miehuoyimiao (Ren Erbeiti Xibao) Hepatitis A Vaccine ( Human Diploid Cell) ，Inactivated

冻干人用狂犬病疫苗

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)Donggan Renyong Kuangquan Yimiaoa (Vero Xibao) Rabies Vaccine (Vero Cell) For Human Use, Freeze-dried本品系用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，经培养、收货、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜稳定剂冻干制成。

用于预防狂犬病。

1基本要求生产和检定用设备、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2制造2.1生产用细胞生产用细胞为Vero细胞。

2.1.1细胞管理及检定应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。

各级细胞库细胞代次应不超过批准的限定代次。

取自同批工作细胞库的1支或多支细胞，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。

2.1.2细胞制备取工作细胞库中的1支或多支细胞，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。

将经复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。

2.2毒种2.2.1名称及来源生产用毒种为狂犬病病毒固定的CTN-1V株、aGV株或经批准的其他Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。

2.2.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。

各种子批代次应不超过批准的限定代次。

狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代雌鼠应不超过35代；aGV株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代雌鼠应不超过15代。

2.2.3种子批毒种的检定主种子批应进行以下全面检定，工作种子批至少进行2.2.3.1〜2.2.3.4项检定。

2.2.3.1鉴别试验采用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。

将毒种做10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒液分别与狂犬病病毒特异性免疫血清（试验组）和阴性血清（对照组）等量混合，试验组与对照组的每个稀释度分别接种11〜13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml,逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%）,观察14天。

中国药典》2015年版通则目录及增修订内容

《中国药典》2015年版通则目录及增修订内容 0100 制剂通则 0101 片剂 0102 注射剂 0103 胶囊剂 0104 颗粒剂 0105 眼用制剂 0106 鼻用制剂 0107 栓剂 0108 软膏剂 0109 乳膏剂 0110 糊剂 0111 吸入制剂 0112 喷雾剂 0113 气雾剂 0114 凝胶剂 0115 散剂 0116 滴丸剂 0117 糖丸 0118 糖浆剂 0120 涂剂 0121 涂膜剂 0122 酊剂 0123 贴剂 0124 贴膏剂 0125 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂 0126 植入剂 0127 膜剂 0128 耳用制剂 0129 洗剂 0130 冲洗剂 0131 灌肠剂 0181 丸剂 0182 合剂 0183 锭剂 0184 煎膏剂(膏滋) 0185 胶剂 0186 酒剂 0187 流浸膏剂与浸膏剂 0189 露剂 0190 茶剂 0200 其他通则 0211 药材和饮片取样法(未修订) 0212 药材和饮片检定通则(第二增补本) 0213 炮制通则(未修订) 0251 药用辅料通则 0261 制药用水 0271 药包材通则(待定) 0272 玻璃容器(待定) 0291 国家药品标准物质通则(第二增补本) 0300 0301 一般鉴别试验(第二增补本) 0400 光谱法 0401 紫外-可见分光光度法 0402 红外分光光度法 0405 荧光分光光度法 0406 原子吸收分光光度法 0407 火焰光度法 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法 0412 电感耦合等离子体质谱法(增订) 0421 拉曼光谱法(新增) 0431 质谱法 0441 核磁共振波谱法 0451 X射线衍射法 0500 色谱法(未修订) 0501 纸色谱法 0502 薄层色谱法 0511 柱色谱法(未修订) 0512 高效液相色谱法 0513 离子色谱法 0514 分子排阻色谱法 0521 气相色谱法 0531 超临界流体色谱法(拟新增) 0532 临界点色谱法(拟新增) 0541 电泳法 0542 毛细管电泳法 0600 物理常数测定法 0601 相对密度测定法(未修订) 0611 馏程测定法 0612 熔点测定法 0613 凝点测定法 0621 旋光度测定法 0622 折光率测定法(未修订) 0631 pH值测定法 0632 渗透压摩尔浓度测定法 0633 黏度测定法 0661 热分析法(第二增补本) 0681 制药用水电导率测定法(未修订) 0682 制药用水中总有机碳测定法(未修订) 0700 其他测定法Other Assays 0701 电位滴定法与永停滴定法(未修订) 0702 非水溶液滴定法 0703 氧瓶燃烧法(未修订) 0704 氮测定法 0711 乙醇量测定法 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法(未修订) 0713 脂肪与脂肪油测定法(未修订) 0721 维生素A测定法(未修订) 0722 维生素D测定法(未修订) 0731 蛋白质含量测定法 0800 限量检查法 0801 氯化物检查法(未修订) 0802 硫酸盐检查法(未修订) 0803 硫化物检查法(未修订) 0804 硒检查法(未修订) 0805 氟检查法(未修订) 0806 氰化物检查法 0807 铁盐检查法(未修订) 0808 铵盐检查法(第二增补本) 0821 重金属检查法(第一增补本) 0822 砷盐检查法(未修订) 0831 干燥失重测定法 0832 水分测定法 0841 炽灼残渣检查法(第二增补本) 0842 易炭化物检查法(未修订) 0861 残留溶剂测定法(未修订) 0871 甲醇量检查法 0872 合成多肽中的醋酸测定法(未修订) 0873 2-乙基己酸测定法(未修订) 0900 物理特性检查法 0901 溶液颜色检查法 0902 澄清度检查法 0903 不溶性微粒检查法 0904 可见异物检查法 0921 崩解时限检查法 0922 融变时限检查法(未修订) 0923 片剂脆碎度检查法(未修订) 0931 溶出度测定法(合并释放度测定法) 0941 含量均匀度检查法 0942 最低装量检查法 0951 吸入制剂微细粒子的空气动力学评价方法(原雾滴粒分布测定法) 0952 贴膏剂黏附力测定法 0981 结晶性检查法(未修订) 0982 粒度和粒度分布测定法(第一增补本) 0983 锥入度测定法 1000 分子生物学技术 1001 核酸分子鉴定法(待定) 1100 生物检查法 1101 无菌检查法 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 1107 非无菌药品微生物限度标准 1121 抑菌效力检查法(第三增补本、新增) 1141 异常毒性检查法 1142 热原检查法 1143 细菌内毒素检查法 1144 升压物质检查法 1145 降压物质检查法(未修订) 1146 组胺类物质检查法(新增) 1147 过敏反应检查法(未修订) 1148 溶血与凝聚检查法 1200 生物活性测定法 1201 抗生素微生物检定法(未修订) 1202 青霉素酶及其活力测定法(未修订) 1205 升压素生物测定法 1206 细胞色素C活力测定法(未修订) 1207 玻璃酸酶测定法(未修订) 1208 肝素生物测定法(第三增补本) 1209 绒促性素生物测定法 1210 缩宫素生物测定法 1211 胰岛素生物测定法(未修订) 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用检查法(未修订) 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法(未修订) 1214 洋地黄生物测定法(未修订) 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法(未修订) 1216 卵泡刺激素生物测定法 1217 黄体生成素生物测定法 1218 降钙素生物测定法 1219 生长激素生物测定法(未修订) 1401 放射性药品检定法(未修订) 1421 灭菌法(未修订) 1431 生物检定统计法(未修订) 2000 中药相关检查方法 2001 显微鉴别法(第二增补本) 2002 中药材DNA条形码分子鉴定法(新增) 2101 膨胀度测定法(第二增补本) 2102 膏药软化点测定法(未修订) 2201 浸出物测定法(未修订) 2202 鞣质含量测定法(第二增补本) 2203 桉油精含量测定法(未修订) 2204 挥发油测定法(未修订) 2301 药材和饮片杂质检查法 2302 灰分测定法(未修订) 2303 酸败度测定法(未修订) 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法(未修订) 2322 元素形态及其价态测定法（拟新增） 2331 二氧化硫残留量测定法 2341 农药残留量测定法（第二增补本+增订） 2351 黄曲霉毒素测定法（第二增补本+增订） 2400 中药注射剂有关物质检查法(拟修订) 2401 中药注射剂蛋白质检查法(待定) 2402 中药注射剂鞣质检查法(待定) 2403 中药注射剂树脂检查法(待定) 2404 中药注射剂草酸盐检查法(待定) 2405 中药注射剂钾离子检查法(待定) 2406 中药注射剂高分子聚合物检查法(待定) 3000 生物制品相关检查方法(待定) 3100 含量测定法 3101 固体总量测定法 3102 唾液酸测定法 3103 磷测定法 3104 硫酸铵测定法 3105 亚硫酸氢钠测定法 3106 氢氧化铝(或磷酸铝)测定法 3107 氯化钠测定法 3108 枸橼酸离子测定法 3109 辛酸钠测定法 3110 乙酰色氨酸测定法 3111 苯酚测定法 3112 间甲酚测定法 3113 硫柳汞测定法 3114 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法 3115 O-乙酰基测定法 3116 己二酰肼含量测定法 3117 高分子结合物含量测定法 3118 人血液制品中糖及糖醇测定法 3119 人血白蛋白多聚体测定法 3120 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法 3121 人免疫球蛋白类制品甘氨酸含量测定法 3122 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法 3123 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法 3124 IgG含量测定法 3200 化学残留物测定法 3201 乙醇残留量测定法 3202 聚乙二醇残留量测定法 3203 聚山梨酯80残留量测定法 3204 戊二醛残留量测定法 3205 磷酸三丁酯残留量测定法 3206 碳二亚胺(EDAC)残留量测定法 3207 游离甲醛测定法 3208 人血白蛋白铝残留量测定法 3300 微生物检查法 3301 支原体检查法 3302 病毒外源因子检查法 3303 鼠源性病毒检查法 3400 生物测定法 3401 免疫印迹法 3402 免疫斑点法 3403 免疫双扩散法 3404 免疫电泳法 3405 肽图检查法 3406 质粒丢失率检查法 3407 SV40核酸序列检查法 3408 外源性DNA残留量测定法 3409 抗生素残留量检查法(培养法) 3410 激肽释放酶原激活剂测定法 3411 抗补体活性测定法 3412 牛血清白蛋白残留量测定法 3413 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法 3414 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法 3415 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法 3416 类A血型物质测定法 3417 鼠IgG残留量测定法 3418 无细胞百日咳疫苗鉴别试验(酶联免疫法) 3419 抗毒素、抗血清制品鉴别试验(酶联免疫法) 3420 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法 3421 伤寒Vi多糖分子大小测定法 3422 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 3423 人凝血酶活性检查法 3424 活化的凝血因子活性检查法 3425 肝素含量测定法 3426 抗A、抗B血凝素测定法 3427 人红细胞抗体测定法 3428 人血小板抗体测定法 3429 猴体神经毒力试验 3500 生物活性/效价测定法 3501 重组乙型肝炎疫苗(酵母)体外相对效力检查法 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法 3505 吸附白喉疫苗效价测定法 3506 类毒素絮状单位测定法 3507 白喉抗毒素效价测定法 3508 破伤风抗毒素效价测定法 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法 3510 肉毒抗毒素效价测定法 3511 抗蛇毒血清效价测定法 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验) 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(淋巴细胞毒试验) 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法 3523 干扰素生物学活性测定法 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法 3529 重组链激酶生物学活性测定法 3600 特定生物原材料/动物 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求 3602 实验动物微生物学检测要求 3603 实验动物寄生虫学检测要求 3604 新生牛血清检测要求 3611 细菌生化反应培养基 8000 试剂和标准物质(待定) 8001 试药 8002 试液 8003 试纸 8004 缓冲液 8005 指示剂与指示液 8006 滴定液 8061 标准物质 9000 指导原则 9001 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则(待定) 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则(待定) 9012 生物样品定量分析方法指导原则(待定) 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则(未修订) 9014 微粒制剂指导原则(待定) 9015 注射剂制备指导原则(拟新增，待定) 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则 9102 药品杂质分析指导原则 9103 药物引湿性试验指导原则(未修订) 9104 近红外分光光度法指导原则(未修订) 9105 多晶型药品的质量控制技术与方法指导原则(新增) 9106 基于基因芯片技术的药物安全性和有效性评价技术指导原则(新增) 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则(未修订) 9202 微生物限度检查法应用指导原则 9203 药品微生物实验室质量管理指导原则(第三增补本) 9204 微生物鉴定指导原则(新增) 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则(新增) 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则(新增) 9301 注射剂安全性检查法应用指导原则 9302 有害残留物限量制定指导原则(新增) 9401 中药生物活性测定指导原则 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9502 锝[99mTc]放射性药品质量控制指导原则(未修订) 9701 药用辅料性能指标研究指导原则(第三增补本、拟新增) 9901 国家药品标准物质制备指导原则(第二增补本)。

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0101 0102 0103 0104 0105 0106 0107 0108 0109 0110 0111 0112 0113 0114 0115 0116 0117 0118 01190120 0121 0122 0123 0124 0125 0126 0127 0128 0129 0181 0182 0183 0184 0185 0186 0187 0188 018902610400 0401 0402 0405 0406 0407 0411 0412 0421 0431 0441 0451 X050105020512 0513 05140531 0532 0541 05420611 0612 0613 06210631 pH 0632 063307020704 07110731 08060831 083208710901 0902 0903 0904 09210931 0941 0942 09510952 09831101 1105 1106 1107 1121 1141 1142 1143 11441146 114812051208 1209 12101216 1217 121823012322 2331 2341 23513104 硫酸铵测定法3105 亚硫酸氢钠测定法3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法3107 氯化钠测定法3108 枸橼酸离子测定法3109 辛酸钠测定法3110 乙酰色氨酸测定法3111 苯酚测定法3112 间甲酚测定法3113 硫柳汞测定法3114 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法3115 O-乙酰基测定法3116 己二酰肼含量测定法3117 高分子结合物含量测定法3118 人血液制品中糖及糖醇测定法3119 人血白蛋白多聚体测定法3120 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法3121 人免疫球蛋白类中甘氨酸含量测定法3122 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法3123 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法3124 IgG含量测定法3200 化学残留物测定法3201 乙醇残留量测定法3202 聚乙二醇残留量测定法3203 聚山梨酯80残留量测定法3204 戊二醛残留量测定法3205 磷酸三丁酯残留量测定法3206 碳二亚胺（EDAC）残留量测定法3207 游离甲醛测定法3208 人血白蛋白铝残留量测定法3209 羟胺残留量测定法3300 微生物检查法3301 支原体检查法3302 病毒外源因子检查法3303 鼠源性病毒检查法3400 生物测定法3401 免疫印迹法3402 免疫斑点法3403 免疫双扩散法3404 免疫电泳法3405 肽图检查法3406 质粒丢失率检查法3407 SV40核酸序列检查法3408 外源性DNA残留量测定法3409 抗生素残留量检查法3410 激肽释放酶原激活剂测定法3411 抗补体活性测定法3412 牛血清白蛋白残留量测定法3413 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法3414 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法3415 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法3416 类A血型物质测定法3417 鼠IgG残留量测定法3418 无细胞百日咳疫苗鉴别试验3419 抗毒素、抗血清制品鉴别试验3420 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法3421 伤寒Vi多糖分子大小测定法3422 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法3423 人凝血酶活性检查法3424 活化的凝血因子活性检查法3425 肝素含量测定法3426 抗A、抗B血凝素测定法3427 人红细胞抗体测定法3428 人血小板抗体测定法3429 猴体神经毒力试验3430 人血浆病毒核酸检测技术要求3431 单抗纯度茨顶方法-CE-SDS毛细管电泳（还原和非还原）3500 生物活性/效价测定法3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法3503 人用狂犬病疫苗效价测定法3504 吸附破伤风疫苗效价测定法3505 吸附白喉疫苗效价测定法3506 类毒素絮状单位测定法3507 白喉抗毒素效价测定法3508 破伤风抗毒素效价测定法3509 气性坏疽抗毒素效价测定法3510 肉毒抗毒素效价测定法3511 抗蛇毒血清效价测定法3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验) 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(淋巴细胞毒试验)3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法3522 重组人促红素体内生物学活性测定法3523 干扰素生物学活性测定法3524 重组人白介素-2生物学活性测定法3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法3529 重组链激酶生物学活性测定法3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法3531 尼妥珠单抗生物学活性测定法3532 白介素-11-生物活性测定方法3600 特定生物原材料/动物3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求3602 实验动物微生物学检测要求3603 实验动物寄生虫学检测要求3604 新生牛血清检测要求3611 细菌生化反应培养基8000 试剂与标准物质（待定）8001 试药8002 试液90119012901490159101910291059106910792029203 9204 9205 9206 9301 9302 9303 9304 9305 94019601 9621 96224.国家药典委员会2014年7月30日。

2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)

2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。

药典三部（2015版）-通则-3411牛血清白蛋白残留量测定法

药典三部（2015版）-通则-3411牛血清白蛋白残留量测定法
3411 牛血清白蛋白残留量测定法
本法系采用酶联免疫法测定供试品中残余牛血清白蛋白（BSA）含量。

供试品溶液的制备供试品如为冻干剂型，检测前应按标示量复溶后混匀，室温静置30分钟，检测前应再次混匀。

供试品如为液体剂型可直接用于检测。

干扰试验首次采用该法检测的供试品应进行干扰试验。

制备溶液Ⅰ（供试品倍比稀释）、溶液Ⅱ（供试品和30ng/ml的内控标准品等量混合）和溶液Ⅲ（30 ng/ml的内控标准品倍比稀释）。

当供试品溶液BSA含量高于试剂盒测定范围中点时，则2倍稀释后制备溶液Ⅰ和溶液Ⅱ。

溶液Ⅰ、溶液Ⅱ可倍比稀释测定，溶液Ⅲ应多孔测定（至少10孔以上），并在试验间均匀添加。

按测定法操作，分别测定溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的BSA含量，溶液Ⅰ与溶液Ⅱ的含量之差应在溶液Ⅲ含量测定值的95%可信区间内，表明供试品不会对该检测法产生干扰作用。

测定法按试剂盒说明书进行，并采用试剂盒提供的供试品稀释液稀释供试品，供试品应至少进行2个稀释度测定，每个稀释度做双孔平行测定。

试剂盒标准品的吸光度、内控参考品测定值、标准品线性相关系数、双孔测定吸光度均应在试剂盒要求范围内，试验有效。

以标准品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度代入直线回归方程，再乘以稀释倍数，计算出供试品中BSA含量。

【附注】（1）当同一供试品的低稀释度吸光度明显低于高稀释度吸光度时，可能存在HOOK效应或操作失误，需重试或调整稀释倍数进行检测。

（2）测定BSA含量的容器具应专用，防止实验室中BSA污染。

牛血清的质量检测

牛血清的质量检测（一）化学检测（1）渗透压（280-340mOsmol/kg）：使用凝固点降低的方法检测渗透压，使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对我们的渗透压仪器进行校准；（2）PH值（7.0-7.5）：同样使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准；（3）蛋白含量：（电容法）样品被加到醋酸纤维素介质中并在缓冲溶液体系内迁移，条带经染色、清洁、干燥后用密度仪进行扫描以检测***和球蛋白组分的相对浓度。

***、球蛋白和血红蛋白随着牛年龄的增加血清中总蛋白含量相应增加，总的血清蛋白含量可以确认产品的规格和年龄。

（二）微生物检查（1）细菌和真菌:直接培养法（2）支原体：（培养法及DNA染色法）在支原体专业培养基上培养3-4周，培养温度34°C～36°C分别在需氧和厌氧的条件下进行，有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4代，Hoechst 荧光素DNA染色检查哪些培养法无法检出的支原体如猪鼻支原体等。

（3）病毒：牛兰舌病毒Bovine blue tongue;牛腺病毒Bovine Adeovirus；牛细小病毒Bovine Parvovirus;牛病毒性腹泻病毒Bovine Viral Diarhea Virus;狂犬病病毒Rabies;呼肠狐病毒Reovirus；牛呼吸道合胞病毒BRSV;副流感病毒III型Parainfluenza。

检查方法：已证明无外源因子污染的牛细胞培养物，在细胞生长液中加15%待测血清，连传3代共21天。

阴性对照细胞培养液中价15%已知无病毒污染的牛血清，与试验组同条件下进行。

在观察期内注意细胞形态变化或细胞病变。

在观察期内第14天待检样品和对照样品用标准病毒检测方法检查。

如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到6个含盖玻片的容器内。

阴性对照品按同样方法。

再将牛腹泻病毒、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照，在培养7天，用荧光抗体技术进行检查。

SOP-04-13-3028-01 牛血清促细胞生长检查SOP(2015.12.01)

1.目的：规范牛血清促细胞生长检查的检验操作程序，确保检验结果的准确有效。

2. 适用范围：2.1 本标准规定了本公司原材料牛血清促细胞生长检查的SOP。

2.2 本标准适用于本公司原材料牛血清促细胞生长检验。

3. 职责：3.1 检验人员：严格按照本SOP进行检定，并完成与本SOP相关的记录。

3.2 检定组长：按照本SOP组织相关人员进行培训，并监督实施。

3.3 质量控制室主任：负责对本SOP的实施进行管理。

4. 材料：4.1 供试品：新生牛血清4.2 器具：1ml、10ml刻度吸管，T25细胞培养瓶，96孔培养板，细胞计数板，盖玻片4.3 试剂及检定细胞：高糖DMEM培养基，对照血清（已检测合格的牛血清）,SP2/0细胞4.4 仪器与设备：CO培养箱、倒置显微镜，超净工作台25. 内容5.1 操作步骤：5.1.1取供试品牛血清和对照血清，分别配制含有10%供试品牛血清和对照血清的培养基。

5.1.2 复苏SP2/0细胞，用含有10%对照血清的培养基在T25瓶中培养。

待其状态良好时，分别用对照牛血清及供试品继续适应性传代，每三天传一代，至少连传三次。

5.1.3取对数生长期的细胞用于试验。

弃去T25瓶中的培养基，加入5mlDMEM培养基，用吸管吹打，将SP2/0细胞制成每1ml含104个活细胞的浓度，接种到96孔培养板中，每批供试品培养箱培养，同时做阴性对照。

从第3天起，供试品和阴16孔，每孔0.2ml，置37℃ 5%CO2性对照每天取1孔进行细胞计数，连续计数一周。

5.2 结果计算5.2.1 细胞生长曲线的测定：将计数一周的细胞绘制成生长曲线。

5.2.2 细胞倍增时间的测定：取细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。

倍增时间＝T/A A= logY/X25.3结果判断：细胞最大增殖浓度应不低于106/ml；细胞倍增时间应不超过20小时。

6.健康、安全与环境：6.1 N/A7. 注意事项：7.1 N/A8. 术语：8.1 SP2/0细胞：骨髓瘤细胞9. 引用标准：9.1《中华人民共和国药典》2015年版三部。

牛血清[可修改版ppt]

加入9ml MEM培养液，细胞数为20万/ml。
加入4.5ml MEM培养液，细胞数为多少？
思考2：
Cell增殖：如果加入4.5ml MEM培养液计数 40万/ml。实际上是
否可以进行细胞增殖实验？细胞增殖条件： Sp2/0骨髓瘤细胞：细胞计数30万~50万/ml 其中0.5ml用于细胞计数，3ml传代，1ml进行实验。实际操作是否符合药典相关规定？
总结牛血清在细胞培养中的主要作用
（1）促进细胞生长（2）促进细胞贴壁（3）保护细胞
牛血清的重要意义
牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料，它对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。而细胞培养在医药领域具有特殊的作用和价值，比如基因工程药物或疫苗等在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。由此看出，细胞培养是细胞研究特别是疫苗生产的基础条件，而要做到监控生物制品成品，牛血清的质量又成为关键。
牛血清
一．牛血清简介
定义分类制备成分功能
新生牛血清定义
新生牛血清分类
胎牛血清新生牛血清小牛血清成牛血清
新生牛血清的制备方法
出生14h内未进食的新生牛采全血自然凝集后去除红细胞分离得到血清 0.45um滤膜过滤去除纤维蛋白等 0.22um滤膜除菌 100nm微孔滤膜三次过滤精制
牛血清的成分
蛋白质多肽血小板激素
胰岛素促进细胞分裂类胰岛素生长因子促生长激素促细胞增殖氢化可的松促细胞贴附和增殖
牛血清的功能
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
1.提供维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准

生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准用于生物制品生产的牛血清应为从出生14小时内未进食初乳的新生小牛采血分离血清，经除菌过滤制成。

主要用于细胞培养。

【性状】为淡黄色澄清稍黏稠的液体，无溶血或异物。

【无菌检验】按附录页进行检验，应无菌生长。

【支原体检验】按附录页进行检验，应无支原体生长。

【外源病毒检验】将被检血清按10%浓度加入MEM培养基中，接种48孔细胞培养板培养的VERO、BHK21、PK15、牛睾丸细胞单层，每种细胞接种8孔，同时设立牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（BVDV）对照各2孔，37℃培养5日，观察细胞病变，细胞均不得出现细胞病变。

培养至第5日时，对每种细胞的2孔及病毒对照孔，用PBS洗涤3次，每孔加入80%丙酮0.5ml，4℃以下固定30分钟，弃丙酮后自然干燥，每孔加入BVDV荧光抗体染色0.3ml，室温染色30分钟，弃荧光抗体并用PBS洗涤3次，荧光显微镜观察，被检血清孔不得出现荧光染色。

剩余的6个细胞孔,前3孔，每孔加入0.2%豚鼠、人O型、鸡红细胞等量混合液0.3 ml，2～8℃作用30分钟，另3孔同样加入红细胞后室温作用30分钟。

倒置显微镜观察，均不得出现红细胞吸附现象。

【特异性抗体测定】生产企业应根据血清的使用对象确定测定的抗体种类，测定方法采用中和抗体测定法，如有适用的的ELISA方法，也可采用。

如用于生产口蹄疫疫苗的血清不得含有口蹄疫病毒抗体，用于生产猪瘟疫苗的血清不得含有BVDV抗体等。

【细菌内毒素测定】用凝胶法或细菌内毒素检测仪测定，按照鲎试剂或内毒素检测仪操作程序测定，每毫升血清的内毒素含量应低于10 EU。

【细胞增殖试验】取生长良好的Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞，弃营养液，用无血清MEM配成每毫升30万～50万细胞悬液，计数细胞后，用无血清MEM在96孔细胞板上作1:200、1:400、1:800、1:1600稀释，每稀释度加8孔，每孔0.1ml，每孔再分别补加0.1ml含20%标准血清或20%被检血清MEM营养液，置5％CO2培养箱37℃培养至48小时，倒置显微镜下计数，取每孔克隆数均在30～50之间的稀释度的8个孔，求和计为总克隆数。

新生牛血清药典标准

新生牛血清药典标准新生牛血清是一种重要的生物制品原料，广泛应用于医药、保健品、生物技术等领域。

为了保证新生牛血清的质量和安全性，制定了一系列的药典标准，以规范其生产和使用。

本文将对新生牛血清的药典标准进行介绍，希望能够对相关行业人士有所帮助。

首先，新生牛血清的药典标准主要包括对其生产过程、质量指标、储存条件等方面的规定。

在生产过程中，必须符合相关的生产规范和操作流程，确保产品的纯度和活性。

质量指标方面，主要包括对蛋白质含量、内毒素水平、微生物菌落等指标的要求，以及对可能存在的有害物质的限量标准。

此外，新生牛血清在储存和运输过程中，也有一系列的条件要求，以确保其在使用前的质量稳定性。

其次，新生牛血清的药典标准是根据国际上的相关规定和标准进行制定的，以确保其在国际贸易中的通用性。

这些标准的制定是经过了广泛的讨论和专家的审查，具有很高的权威性和科学性。

因此，符合药典标准的新生牛血清可以更好地满足国际市场的需求，提升产品的竞争力。

再者，新生牛血清的药典标准对于生产企业和使用单位都具有重要的指导意义。

对于生产企业来说，遵循药典标准可以帮助其建立健全的质量管理体系，提高产品质量，降低生产风险。

对于使用单位来说，选择符合药典标准的新生牛血清可以更好地保证实验结果的准确性和可重复性，降低实验风险，提高工作效率。

最后，新生牛血清的药典标准是一个动态的过程，随着科学技术的发展和行业的需求，会不断地进行修订和更新。

因此，生产企业和使用单位都需要密切关注最新的药典标准，及时调整生产和使用的相关流程，以确保产品的质量和安全性。

总之，新生牛血清的药典标准对于保证产品质量和安全性，提升产品竞争力，促进行业健康发展具有重要的意义。

希望本文对相关行业人士有所帮助，也希望大家能够共同遵守药典标准，共同推动新生牛血清行业的发展。

牛血清20150224文稿演示

加入9ml MEM培养液，细胞数为20万/ml。
加入4.5ml MEM培养液，细胞数为多少？
思考2：
Cell增殖：如果加入4.5ml MEM培养液计数 40万/ml。实际上是
否可以进行细胞增殖实验？细胞增殖条件： Sp2/0骨髓瘤细胞：细胞计数30万~50万/ml 其中0.5ml用于细胞计数，3ml传代，1ml进行实验。实际操作是否符合药典相关规定？
内毒素检测原理
细胞增殖试验
Sp2/0骨髓瘤细胞：细胞计数30万~50万/ml 无血清MEM 96孔细胞板 1：200 1:400 1:800 1:1600 每个浓度加8孔，每孔100ul
思考1：
Cell计数：同时复苏两管1.5ml同种、同批次、理论
上数量相同的细胞，相同条件下培养，连续传三代。其中一个克氏瓶加入9ml MEM培养液计数 20万/ml。另一个克氏瓶加入4.5ml EME培养液，理
蛋白质多肽血小板激素
胰岛素促进细胞分裂类胰岛素生长因子促生长激素促细胞增殖氢化可的松促细胞贴附和增殖
牛血清的功能
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
1.提供维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。
二．新生牛血清质量控制
性状、无菌、支原体
淡黄色澄清稍粘稠的液体，无溶血或异物优质血清应为淡黄色，无溶血，半透明，较粘稠，无沉淀和悬浮物的液体。判断血清质量先从外观入手：外观颜色粘稠度
无菌检验：应无菌生长支原体检验：应无支原体生长
外源病毒
1、为什么要检测外源病毒？ 2、牛血清可能携带哪些外源病毒？ 3、检测方法？ VERO/BHK21/PK15/牛睾丸细胞单层血清含量10% 的MEM培养基不得出现荧光红细胞吸附内控PCR：FMDV、BPIV-3、 BcoV、

新生牛血清达标认证检查手册

生牛血清生产企业达标认证检查手册说明：本手册共分机构与人员、厂房与设施、设备、物料、卫生、验证、文件、生产治理、质量治理、产品销售与收回、投诉与处理、内部审核等十二个局部，共 162 项，其中一般工程 62 项，重要工程〔＊〕87 项，拒绝工程〔△〕13 项。

√为增条款，⊙为原条款修改序号条款检查内容1.机构与人员〔13 项，其中△1 项，＊7 项〕企业必需经工商登记注册，具有独立法人资格。

企业应建立生牛血清生产和质量治理机构，明确各级机构和人员的职责。

企业应配备肯定数量的与生牛血清生产相适应的具有相应的专业学问、生产阅历及工作力量，应能正确履行其职责的治理人员和技术人员。

主管生产和质量治理的企业负责人应具有医药或相关专业大专以上学历，并具有 2 年以上牛血清或其它生物制药生产和质量治理阅历，或其它专业大专以上学历，并具有 5 年以上牛血清生产和质量治理实际工作阅历，应对 GMP 标准的实施和产品质量负责。

专职的生产治理和质量治理的部门负责人应具有医药或相关专业大专以上学历，并具有 2 年以上牛血清或其它生物制药生产和质量治理的实践阅历，有力量对生牛血清生产和质量治理中的实际问题做出正确的推断和处理。

生牛血清生产治理部门和质量治理部门负责人不得相互兼任。

企业应建有对各级员工进展GMP 标准和专业技术、岗位操作学问、安全学问等方面的培训制度、培训打算和培训档案。

企业负责人和各级治理人员应定期承受药品治理法律法规培训，并具有培训档案。

从事生牛血清生产操作的人员应通过相应的专业技术培训后上岗，具有根底理论学问和实际操作技能，并具有培训档案。

从事初制生牛血清生产的人员应承受有关生产特定操作的学问培训，并具有培训档案。

1⊙1.1 2* 1.2 3⊙ * 1.3 4⊙ △ 1.4 5⊙ * 1.5 6⊙ * 1.6 7√ * 1.7 8√ * 1.8 9⊙ 1.9 10√1.1011⊙12√13√* 1.111.121.13从事生牛血清质量检验的人员应通过相应专业技术培训后上岗，具有根底理论学问和实际操作技能，并具有培训档案。