肾功能不全试验的实验报告

实验步骤
酚红排泄率测定： 酚红排泄率测定： 1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚 1)两组家兔分别耳缘静脉注射 两组家兔分别耳缘静脉注射o 红溶液(1ml／kg)， 红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管 处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。 处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收 集从开始注射酚红起15min或30min的尿 集从开始注射酚红起15min或30min的尿 换算成单位时间的尿量(ml／min)。 液。换算成单位时间的尿量(ml／min)。
实验步骤
观察：24h后 观察：24h后，比较两组动物的一般状态 活动情况与尿量。 、活动情况与尿量。 家兔称重，耳缘静脉注射25％ 家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸 乙酯4 0ml／kg，待动物麻醉后， 乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定 于兔台。 于兔台。
角 膜 反 射
夹 肢 反 射
实验步骤
肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾 肾脏酚红排泄率： 小管排泌功能的指标。 小管排泌功能的指标。正常情况下从静 脉注入酚红后15min或30min， 15min 脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红 排泄率分别＞30%与 45%。 排泄率分别＞30%与＞45%。
实验步骤
血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定 血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定 蛋白法 原理：在碱性条件下，苦味酸与（ 原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿 中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐， 肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐， 使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸 比色测定 使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸 在酸性环境中， ，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被 清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色， 清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者 比色之差为血及尿中肌酐。按表1 比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2的 操作步骤测定血清及尿液肌酐。 操作步骤测定血清及尿液肌酐。
家兔急性 肾功能不全
实验目的
复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对 复制急性中毒性肾衰动物模型， 肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的 观察，了解中毒家兔肾功能的改变。 观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判 断、分析致病因素及导致急性肾衰的可 能发病机制。 能发病机制。
实验原理
肾脏是一个多功能器官， 肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一 是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、 是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小 球滤过率、 球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄 体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。 体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。 当肾血流量减少， 当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾 小管排泌重吸收功能障碍时， 小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功 能受到影响，从而导致肾功能不全。 能受到影响，从而导致肾功能不全。
实验对象
家兔2 3kg。 家兔2—3kg。
实验药品与器材
1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙 、生理盐水、25％氨基甲酸乙 酯、0 酯、0．6％酚红、20％葡萄糖、10％ ％酚红、20％葡萄糖、10％ NaOH、手术器械一套，注射器、试管、 NaOH、手术器械一套，注射器、试管、 加样器、721分光光度计、水浴锅、离心 加样器、721分光光度计、水浴锅、离心 机。
实验步骤
家兔心脏采血 家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不 心脏采血3~5ml置于一干燥管中 置于一干燥管中（ 抗凝），放置10min后 3000r/min离心 ），放置 抗凝），放置10min后，3000r/min离心 15min， 15min，小心吸取血清置于另一干燥管中 ，备测血肌酐
实验步骤
实验步骤
分离右侧颈外静脉，插管用于输液。 分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输 液速度一定要慢 下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1 下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1． 5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用 5cm处做切口 长约4cm，暴露膀胱， 处做切口， 注射器收集2ml尿液于试管中 尿液于试管中， 注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐 检查。 检查。
ARF发病机制的中心环节是 ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。 发病机制的中心环节是GFR的降低 的降低。 肾血流量减少，肾小管阻塞、 肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回 漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低 的降低。 漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。 本实验通过皮下注射1 本实验通过皮下注射1％HgCl2造成家兔 急性肾小管性坏死。 急性肾小管性坏死。 通过本实验学习复制急性中毒性 中毒性肾衰动 通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动 物模型；观察肾衰家兔的一般状态、 物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排 泄率、肌酐清除率等变化； 泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时 肾脏大体形态；根据实验指标，判断、 肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析 急性肾衰的发病机制及病理生理变化； 急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急 性肾衰的病因、 性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加 深理解。 深理解。
表1 血清肌酐测定
单位（ ） 单位（ml） 肌酐标准应 用液 （0.05mg/m l） ） 血清 蒸馏水 碱性苦味酸 标准管 0.20 测定管 _ 空白管 _
_ _ 2.0
0ຫໍສະໝຸດ Baidu20 _ 2.0
_ 0.20 2.0
实验步骤
混匀，37OC水浴 min， 510nm波长比 水浴30 混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比 空白管调零， OD值 然后， 色，空白管调零，读OD值，然后，各管加 50%醋酸液两滴，放置6min后 在测OD’ 50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’ 醋酸液两滴 计算： 值。计算： [Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/ OD标－OD’标 0.01/0.2× ×0.01/0.2×100 正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4µ 正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4µmol/L) 。
混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀 后加蒸馏水6 混匀， 10min后加蒸馏水 0ml， 530nm波长比色 空白管调零， 波长比色， ，以530nm波长比色，空白管调零，读 OD值 计算： OD值。计算： [Cr]u(mg%)=OD测/OD标 0.05mg× ×0.05mg×100ml/0.1ml
实验步骤
在膀胱底部，找出两侧输尿管， 在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离 在近膀胱端结扎输尿管， 之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻 待其略充盈后，用眼科剪剪一小口， ，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口， 向肾脏方向插入一细塑料管( 向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先 用肝素冲洗或充满肝素) 结扎并固定， 用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定， 用于收集尿液。 用于收集尿液。
实验步骤
复制肾功能衰竭模型：于实验前一天， 复制肾功能衰竭模型：于实验前一天， 取两只家兔，称重， 取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注 (o． 0ml／kg)造成急 射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急 性肾功能衰竭，为实验组兔； 性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮 下或肌肉注射等量的生理盐水(1．0ml／ 下或肌肉注射等量的生理盐水(1．0ml／ kg)作为对照组兔 kg)作为对照组兔。 作为对照组兔。
实验步骤
尿肌酐/血肌酐的意义： 尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比 20；功能性肾衰时比值＞40。 值＜20；功能性肾衰时比值＞40。
内生肌酐清除率(Ccr)： ： 内生肌酐清除率
能较准确的反映肾小球滤过率(GFR) 能较准确的反映肾小球滤过率(GFR) Ccr=[Cr] Ccr=[Cr]尿×尿量（ml/min）/[Cr]血 尿量（ml/min） 为此，实验步骤收集尿液必须采集有“ 收集尿液必须采集有 为此，实验步骤收集尿液必须采集有“记录单 位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐[Cr] 位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐[Cr]尿测定 计算出GFR 才能与血肌酐[Cr] GFR。 ，才能与血肌酐[Cr]血比，计算出GFR。肌酐能 自由从肾小球滤过， 自由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收 但有少量是由近曲小管分泌。 ，但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血 浆中的浓度相当低， 浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可 忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近 与菊粉清除率相近， 忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代 表肾小球滤过率。 表肾小球滤过率。
实验步骤
将收集的尿液倒入500ml量筒内， 将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10 量筒内 lOml，用自来水补充至500ml ％NaOH lOml，用自来水补充至500ml 混匀后， 处，混匀后，取出适当量放入与比色管 口径相同的试管中与标准比色管比较 的试管中与标准比色管比较， 口径相同的试管中与标准比色管比较， 得出15min或30min内肾脏酚红排泄率 内肾脏酚红排泄率。 得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。
表2 尿肌酐测定
单位（ ） 单位（ml） 尿液（原尿或 ： 尿液（原尿或1： 50稀释） 稀释） 稀释 尿肌酐标准应 用液 （0.5mg/ml） ） 蒸馏水 碱性苦味酸 12．5%NaoH ． 测定管 0.1 _ 标准管 _ 0.1 空白管 _ _
_ 2 0.5
_ 2 0.5
0.1 2 0.5
实验步骤
实验步骤
肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏， 肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称 肾重量，计算肾体比， 肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾 脏外形，纵向剖开肾脏， 脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条 色泽等。 纹、色泽等。
思考题
1．试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性 试分析氯化高汞（升汞） 肾功能不全的主要发病机制是什么？ 肾功能不全的主要发病机制是什么？ 2．哪些实验结果可说明肾血流量减少也 参与升汞中毒性肾衰的发生机制？ 参与升汞中毒性肾衰的发生机制？为什 么肾血液量会减少？ 么肾血液量会减少？ 3. 急性肾功衰时，家兔的尿液有哪些变 急性肾功衰时， 为什么？ 化？为什么？
如果心脏采血失败，则颈总动脉采血 如果心脏采血失败， 颈总动脉采血 颈部正中剪毛，切开皮肤， 颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈 总动脉，在动脉下穿两根丝线， 总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根 丝线结扎动脉的远心端， 丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉 夹夹闭， 夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一 小斜口， 小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管 放血3ml备测血肌酐 放血3ml备测血肌酐