乙肝病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
心数秒，按 43μl/管分装到反应管中。 2. 内参配制 将 n×3μl 内参（单通道仪器不加内参）及 n×50μl 核酸提取液 B 至于一新离心管中混匀备用（混合后避免反复冻融 使用，使用前混匀 5 秒钟） 。 3. 样本、对照品的处理 样本处理：取 100μl 待检血清样本（冻存血清使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）分别加入 100μl 核酸提取液 A， 振荡混匀 10 秒种，12000rpm 离心 10 分钟，弃上清；分别加入 50μl 核酸提取液 B 与内参的混合液至沉淀中（使用前一定 要充分混匀， 将颗粒和液体一起加入沉淀中， 其中颗粒量应在 15％以内） ， 振荡混匀 10 秒钟， 100℃保温 10 分钟， 12000rpm 离心 2 分钟。处理后的样品应在 1 小时内使用，或在-20℃～-80℃最长保存 1 个月（不宜反复冻融）。 血清对照品处理：按照血清标本处理方法处理试剂盒内阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性对照。（冻存血清对照品 使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）。 定量校准品处理：定量校准品无需处理，在样本加样前直接将定量校准品 1 号至 5 号振荡混匀 10 秒钟，低速离心数秒 后加样。 4. 样本加样 将样品处理上清液（冻存样品使用前室温充分融化，振荡混匀数秒，12,000rpm 离心 2 分钟）、阳性血清对照、弱阳性 血清对照、阴性对照以及定量校准品各 7μl 分别加入反应管中，低速离心数秒，取出置定量 PCR 仪上。 5. 仪器扩增程序 1、ABI7300/7500/Mx3000P/SLAN 双通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。60℃采集 FAM、JOE 荧光通道的信号。 2、LightCycler 480 仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。 60℃采集 FAM、RED 610 荧光通道的信号。 3、单通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次，60℃采集 FAM 荧光通道信号。 6. 质量控制 试剂盒中提供定量校准品五个，阴性对照，阳性血清对照和弱阳性血清对照各一个。如试剂质量完好并操作正确，阳性 血清对照、弱阳性血清对照、定量校准品应表现为阳性结果，阴性对照应表现为阴性结果，阳性血清对照定量值为 5.0±2.5 ×10 IU/ml，弱阳性血清定量值为 5.0±2.5×10 IU/ml。如超过范围则实验无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的 误差。在每次检测中都应设置阴阳性对照品。 7. 结果判断 仪器程序运行完成后，按软件要求进行结果保存，输入HBV 定量校准品的量值，选择自动分析模式，软件将自动给出标 准曲线并计算各样本的HBV DNA 含量Q(IU/ml）。
核酸采集送样系统操作方法
核酸采集送样系统操作方法
1.准备工作：核酸采集管、消毒酒精、手套、无菌棉签、盒子等。
2.穿戴手套，并在消毒酒精中浸湿无菌棉签。
3.让病人张开口，用无菌棉签沿口腔内壁摩擦舌头和颊粘膜，至少采集两次。
4.取出核酸采集管，打开管盖并将采集管放入口腔内，用力吸气后，将采集器从口腔内取出，立即将管盖紧闭。
5.用标签标记采样日期、时间、病人姓名及病人信息。
6.将采集好的核酸样品放入盒子中，并贴上标签。
7.发送到指定实验室进行检测。
8.在完成操作之后，正确处置已使用的手套和消毒酒精、无菌棉签、核酸采集管和盒子等。
乙肝病毒核酸检测实验操作流程
原理图
每产生一条DNA链，就切断一条探针 每切断一条探针，就产生一个荧光信号 信号强度与结合探针的DNA分子数成正比
操作流程
一、标本采集
一次性无菌注射器抽取 受检者静脉血2毫升，注 入无菌的干燥玻璃管 用一次性无菌注射器抽取 受检者静脉血2毫升，注 入含EDTA或枸橼酸钠抗凝 剂的试管
血 清 的 采 集
93℃ 30秒→55℃ 45秒→30个循环
结果分析
1.
2.结果读取
3.结果报告
结果的报告必须简单清楚 定量测定则必须报告量的多少 1、结果高于测定方法线性范围上限，可报告>多少； 也可对样本稀释后再测，结果乘以稀释倍数 2、结果低于方法的测定范围下限，则报告多少即可， 不能报告“0”或阴性
乙肝病毒核酸检测 实验操作流程
广西临床检验中心 唐 娟
主要内容
HBV-DNA的检测原理
标本采集
HBV-DNA操作流程
DNA 提取 PCR 扩增
HBV-DNA检测结果分析
临床意义
检测原理
HBV ： 用一对乙型肝炎病毒特性引物（Primer）和一
条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反
应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、四种脱氧 核苷酸单体（dNTPs）等成分，用PCR体外扩 增法定量检测乙型肝炎病毒DNA
室温（22～25ºC）放置 30～60 分钟血标本使用 水平离心机，4000转/分 离心5分钟
血 浆 的 采 集
立即轻轻颠倒玻璃管混合 5～10次，使抗凝剂与静 脉血充分混匀
吸取上层血清，转移至 1.5ml灭菌离心管
5～10分钟后即可分离出 血浆，转移至1.5ml灭菌 离心管
最新核酸采样操作规程
最新核酸采样操作规程核酸采样操作规程一、前言核酸采样是一种重要的病毒检测方法，能够快速准确地检测出病毒的存在，对于疫情防控具有重要意义。
为了确保核酸采样操作的安全性和规范性，制定本操作规程。
二、采样准备1. 采购符合国家标准的核酸采集管、护目镜、口罩、手套等防护用品。
2. 每次采样前，操作人员需要进行充分的洗手，并佩戴防护用品。
三、操作流程1. 开展核酸采样前，操作人员需仔细阅读相关操作指南和参加培训，熟悉操作流程。
2. 根据患者信息准备核酸采集管，确保采集管的标签与患者信息一致。
3. 确定采集部位，常见的采集部位有咽拭子、鼻拭子、肛拭子等。
a. 咽拭子采集：操作人员需要戴好手套，让患者张口露出咽部，使用消毒的咽拭子从扁桃体、咽侧壁下方刮取黏膜样本，并放入核酸采集管中。
b. 鼻拭子采集：操作人员需戴好手套，让患者坐直，向后仰头。
然后将鼻拭子插入患者的鼻孔，轻轻旋转3-4次，刮取鼻咽部黏膜样本，并放入核酸采集管中。
c. 肛拭子采集：操作人员需戴好手套，将涂有适量润滑剂的肛拭子插入患者肛门约2cm，旋转数次，取出后放入核酸采集管中。
4. 操作人员应在采样过程中保持仔细、细致，避免污染和交叉感染。
5. 收集完样本后，操作人员应将核酸采集管离心，确保样本与溶液充分混合。
6. 确认样本采集完毕后，将核酸采集管密封，并在外壳上填写相关信息。
四、后续操作1. 采样完毕后，操作人员应将采集工具进行正确处置，保持实验室的清洁和卫生。
2. 操作人员应及时将样本送往实验室进行核酸提取和检测。
3. 操作人员需做好个人防护，及时更换防护用品，并做好手部卫生。
五、注意事项1. 在进行核酸采样操作前，应查看操作指南，了解操作细节和注意事项。
2. 每次采集样本前，都需要及时更换防护用品，保持操作的清洁和安全。
3. 操作人员需严格遵守操作规程，确保操作的准确性和一致性。
4. 样本采集完毕后，应及时进行标签填写，确保样本与患者信息的一致性。
新冠核酸检测标本采集、送检、处理流程
新冠核酸检测标本采集、送检、处理流程新冠病毒的肆虐给全球带来了巨大的冲击，新冠核酸检测成为了疫情防控中至关重要的环节。
准确、高效的标本采集、送检和处理流程对于及时发现病毒、控制疫情传播具有重要意义。
以下将详细介绍这一流程。
一、标本采集（一）采集人员要求采集人员需要经过专业培训，熟悉采集流程和防护要求。
在采集过程中，必须严格遵守生物安全操作规范，穿戴好个人防护装备，包括防护服、口罩、护目镜、手套等。
（二）采集前准备1、确定采集对象：根据疫情防控需要，明确采集对象的范围，如密切接触者、发热患者、高风险地区人员等。
2、告知采集对象：提前向采集对象说明采集的目的、方法和注意事项，缓解其紧张情绪。
3、准备采集用品：包括拭子、病毒保存液、采样管、条码标签、消毒用品等，并确保其质量和数量符合要求。
4、选择采集地点：采集地点应通风良好，具备清洁消毒条件，避免交叉感染。
（三）采集方法1、鼻咽拭子采集（1）让采集对象头部后仰，保持不动。
（2）采集人员将拭子缓缓插入鼻腔，沿下鼻道的底部向后缓缓深入，直至鼻咽后壁。
（3）轻轻旋转拭子 3 5 圈，停留数秒后取出。
2、口咽拭子采集（1）让采集对象张口，发出“啊”的声音。
（2）采集人员将拭子越过舌根，在两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少 3 次，然后在咽后壁上下擦拭至少 3 次。
（四）采集注意事项1、采集过程中动作要轻柔，避免损伤采集对象的鼻腔和咽喉黏膜。
2、采集后立即将拭子放入含有病毒保存液的采样管中，折断拭子杆，使其完全浸泡在保存液中。
3、确保采集管的盖子拧紧，防止标本泄漏。
4、对每一个采集对象，使用新的拭子和采样管，避免交叉污染。
二、标本送检（一）标本包装1、将采集好的标本放入密封袋中，确保密封完好。
2、在密封袋上标注采集对象的姓名、性别、年龄、采集时间、采集部位等信息。
（二）标本运输1、运输人员应穿戴好个人防护装备，携带消毒用品。
2、标本应放置在专用的运输箱中，运输箱内要有冰袋或制冷设备，保持低温环境。
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
核酸检测血液样本与体液样本的正确操作流程
核酸检测血液样本与体液样本的正确操作流程1. 准备工作- 确保具备所需实验室设备和试剂，包括核酸提取试剂盒、离心机等。
- 检查所有设备的工作状态，并进行必要的校准和维护。
- 确保操作人员具备相关的培训和资质。
2. 样本采集- 根据标准采集程序，获取所需的血液样本或体液样本。
- 血液样本采集时，注意采集管的正确使用方法和采集量的准确控制。
- 体液样本采集时，根据样本类型选择适当的采集方法和。
3. 样本处理- 对血液样本，按照提供的操作指南使用核酸提取试剂盒进行核酸提取。
- 对体液样本，根据样本类型和需要，采取适当的前处理步骤，如离心、过滤等。
- 按照核酸提取试剂盒的说明书进行样本处理步骤，并注意所有步骤的正确操作和时序。
4. 核酸检测- 将处理后的样本加入核酸检测试剂盒中，按照说明书进行核酸检测步骤。
- 注意控制实验条件，如温度、时间等，以确保检测结果的准确性和可重复性。
- 在检测过程中，及时记录所有操作步骤和观察结果。
5. 结果分析与报告- 根据核酸检测试剂盒的结果解读标准，对检测结果进行分析和判断。
- 根据实验室要求，及时编写检测报告，并确保报告的准确性和完整性。
- 如有需要，将结果与参考值或对照样本进行比较，并记录相关信息。
6. 清洁与文档管理- 在操作完成后，及时清洁实验室设备和工作区域，以防止交叉污染。
- 正确管理所有与样本采集、处理和检测相关的文档和记录，包括样本标识、操作记录等。
请注意，本文档提供了核酸检测血液样本与体液样本的基本操作流程，具体操作步骤可能因实验室和检测方法的不同而有所差异。
在进行任何核酸检测操作之前，请参考相关的操作指南和实验室规程，以确保操作的正确性和安全性。
核酸样品采集流程及注意事项
核酸样品采集流程及注意事项1. 介绍核酸样品采集是分子生物学和遗传学研究中至关重要的一步。
本文档旨在介绍核酸样品采集的流程和注意事项，以保证采集到高质量和准确的核酸样品。
2. 核酸样品采集流程以下是常见的核酸样品采集流程的一般步骤：步骤一：准备工作在进行核酸样品采集前，需要做好以下准备工作：- 确定采集的样品类型，例如血液、唾液、尿液等。
- 准备采集所需的器具和试剂，如采血针、采样管、收集盒、保存液等。
- 清洁和消毒采集所需的器具。
步骤二：采集样品根据所采集的样品类型，采取相应的采集方法：- 采集血液样品：在清洁消毒后，使用采血针采集适量的血液样品，并将其转入采样管或收集盒中。
- 采集唾液样品：在采集前，请勿进食、饮水或擦拭口腔，使用采集棒擦拭口腔内壁，确保采集到足够量的唾液样品。
- 采集尿液样品：在清洁消毒后，将尿液直接收集在收集盒中。
步骤三：保存样品根据所采集的样品类型，选择合适的保存方法：- 血液样品：将血液样品转入保存液中，并根据保存液的要求采取适当的保存温度和时间。
- 唾液样品：将唾液样品收集后立即封闭盖子，并根据保存液的要求采取适当的保存温度和时间。
- 尿液样品：将尿液样品收集后立即封闭盖子，并根据保存液的要求采取适当的保存温度和时间。
3. 注意事项在进行核酸样品采集时，需注意以下事项：- 使用消毒器具和试剂，以防止样品污染。
- 严格按照采集方法和保存要求操作，避免样品质量受损。
- 在采集过程中，避免样品受到外界环境中的污染和去污染操作。
- 样品采集后，及时封闭收集的盖子，以避免样品的挥发和交叉污染。
- 在样品保存和运输过程中，注意温度的控制和稳定，防止样品降解。
4. 结论核酸样品采集是科研和诊断的重要环节，严格遵循采集流程和注意事项可确保样品的质量和准确性。
我们希望本文档能为您提供有关核酸样品采集的指导和帮助，使您能够顺利进行核酸研究和相关应用。
请在使用本文档时，根据实际情况进行必要的修改和调整，以满足具体需求。
病毒样本采集运送及生物安全
检验条码打印一张即可，采样管手写患者信息。 条码随标本一起送至检验科接收。
2.标本采集种类
每个病例必须采集急性期呼吸道标本和急性 期血液标本；重症病例优先采集下呼吸道标本 （如支气管或肺泡灌洗液等），可根据临床表现 与采样时间间隔进行采集。 • 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽 抽取物； • 下呼吸道标本：包括深咳痰液、呼吸道抽取 物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、肺组织活检标 本； • 血清标本：尽量采集发病后7天内的急性期抗 凝血。采集量要求5mL,以空腹血为佳，建议使用 含有抗凝剂的真空采血管采集血液。
专用转运箱
（第三层包装）
病毒采样管
（直立放置 并做好标记）
第一层包装
第二层包装
6.标本保存及运送
标本采集后，应立即送检，无法立即送检 时，可保存在4°C或者冰上短暂保存，30 分钟内送检。
标本置入标本转运箱后，由专人直接送至 检验科，其间不可随意打开。
7.其他注意事项
科室备两个白色收纳箱(作为标本转运箱)，贴 有生物安全标识，以便送检时与检验科替换。
4.标本采集方法
咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子 同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子 头浸入3mL采样液的管中，尾部弃去，旋紧 管盖。
4.标本采集方法
鼻拭子：取出1根据鼻 拭子测量长度：鼻尖至 耳垂的1/2，后插入患 者一侧鼻腔直至有“触 墙感”时停留15-30秒， 右侧旋转3圈、左侧旋 转3圈，再缓慢退出， 放入病毒保存液中，剪 去尾部；同法采集另一 侧，放入同一个病毒保 存液中，盖紧瓶帽。
病毒样本采集、运送及生物安全
HBV简易操作流程-新批号
KHB 科华生物
乙型肝炎病毒核酸定量检测流程图
核酸提取（标本处理区） ：
100µl 样本处理液 A+加入 100µl 被测标本
振荡混匀
13000rpm/20000g 离心 10min（注意离心时固定离心管方向）
Байду номын сангаас
吸弃上清 （在离心管底部沉淀对侧吸上清， 避免搅动或碰到沉淀） 加入 25µl 样本处理液 B
振荡混匀，瞬时离心
金属浴 100℃，10min 13000rpm/20000g 离心 10min 取上清为 PCR 反应模板 注意： 上清若不立即使用， 须置-20℃保存， 重新使用时需 13000rpm 离心 10min。
PCR 试剂准备（PCR 前准备区） ：
普通 PCR 反应管 PCR 反应液 反应模板 总反应体 28µl 2µl 30µl 18µl 2µl 20µl 毛细管
PCR 反应（PCR 反应区） ：
步骤 1 2 3 4 UNG 酶反应 预变性 变性 退火、 延伸及检测荧光 普通 PCR 反应管 温度 50℃ 94℃ 94℃ 60℃ 时间 2min 2min 10s 30s 毛细管 温度 50℃ 93℃ 93℃ 60℃ 时间 2min 2min 3s 30s 循环数 1 1 40 1
仪器冷却 35℃ 10s 35℃ 10s 步骤 3 中 60℃时荧光检测，检测通道：530nm（FAM）
上 海 科 华 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司
SHANGHAI KEHUA BIOENGINEERING CO.,LTD.
标本采集和运送方法
附件3 标本采集和运送方法一、标本采集（一）血标本。
1．采集病例出疹后28日内静脉血2～3ml，加入到无菌试管中，标明采集日期和病例姓名、编号。
2．有条件地区可用1500rpm/20分钟离心机分离血清。
如果没有离心机，在室温下凝固分离血清，或冷藏条件下放置，直到血清完全析出。
3．在无菌条件下，将血清移至外螺旋盖带垫圈的无菌管中，避免吸到红血球。
4．血清标本运送前应在2～8℃保存，如果7日内不能运送的，应置-20℃以下保存，避免反复冻融。
全血标本不能冻结。
5．填写完整的标本送检表，送检表上要注明病例编号。
6．出疹后3日内采集的血标本检测麻疹、风疹IgM抗体均为阴性，且无病原学标本核酸检测结果的，应在出疹后4～28日采集第2份血标本进行检测。
注：合格血标本的基本要求是：出疹后28日内采集，血清量不少于0.5ml，无溶血，无污染；2～8℃条件下保存、运送。
（二）病原学标本。
咽拭子病原学标本的采集方法如下：（1）出疹当日至出疹后5日采集。
（2）使用的棉拭子和试管等应灭菌。
（3）用无菌棉拭子适度用力在咽喉部擦拭，获得上皮细胞。
（4）把拭子放入有外螺旋盖并装有2ml病毒运输液的冻存管中。
（5）病毒运输液有商业成品可用。
常用的病毒运输液包括：pH 7.4～7.6的Hank’s液：在90ml蒸馏水中加入10mlHank’s，然后加入10ml牛血清和0.2ml 0.4％酚红溶液，过滤消毒。
加1ml青/链霉素溶液。
分装到无菌管中，于4℃储存备用。
组织培养液：DMEM液加入青/链霉素使其终末浓度分别为500～1000IU/ml 和500～1000ug/ml，加入胎牛血清使其终末浓度为2％，加入谷氨酰胺至浓度为1％；加入7.5％的NaHCO调节pH至7.4～7.6。
3注：合格病原学标本的基本要求：出疹后5日内采集，冷藏运送，-70℃以下保存。
二、标本运送（一）血标本。
1．标本采集后按照监测方案要求送到实验室，严防标本污染或容器渗漏。
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
【注意事项】 1. 2. 开始检测前请仔细阅读本说明全文。 核酸提取一定要在样本采集后 48 小时内尽快进行，否则 DNA 会发生明显降解。不能尽快进行的，应参照【样本要求】 保存。 3. 4. 5. 6. 7. 8. 实验中所用器具均应经过灭菌处理。 使用本品时，应遵循临床基因扩增实验室的技术要求进行操作。 加样时应使样本完全落入反应液中，不应有样本粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。 样本处理等步骤须在生物安全柜或其他防护设施中进行。 实验室人员必须经过专业培训。 实验过程应分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备， 各区个阶段用品不得交叉使用；各区间人员流动及空气流向应有严格要求，最大限度避免交叉污染。 9. 10. 实验用消耗品（如离心管、吸头等）应有合理的清洁和质检程序，避免污染或扩增反应抑制物造成假阴性结果。 本品仅用于体外诊断。
心数秒，按 43μl/管分装到反应管中。 2. 内参配制 将 n×3μl 内参（单通道仪器不加内参）及 n×50μl 核酸提取液 B 至于一新离心管中混匀备用（混合后避免反复冻融 使用，使用前混匀 5 秒钟） 。 3. 样本、对照品的处理 样本处理：取 100μl 待检血清样本（冻存血清使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）分别加入 100μl 核酸提取液 A， 振荡混匀 10 秒种，12000rpm 离心 10 分钟，弃上清；分别加入 50μl 核酸提取液 B 与内参的混合液至沉淀中（使用前一定 要充分混匀， 将颗粒和液体一起加入沉淀中， 其中颗粒量应在 15％以内） ， 振荡混匀 10 秒钟， 100℃保温 10 分钟， 12000rpm 离心 2 分钟。处理后的样品应在 1 小时内使用，或在-20℃～-80℃最长保存 1 个月（不宜反复冻融）。 血清对照品处理：按照血清标本处理方法处理试剂盒内阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性对照。（冻存血清对照品 使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）。 定量校准品处理：定量校准品无需处理，在样本加样前直接将定量校准品 1 号至 5 号振荡混匀 10 秒钟，低速离心数秒 后加样。 4. 样本加样 将样品处理上清液（冻存样品使用前室温充分融化，振荡混匀数秒，12,000rpm 离心 2 分钟）、阳性血清对照、弱阳性 血清对照、阴性对照以及定量校准品各 7μl 分别加入反应管中，低速离心数秒，取出置定量 PCR 仪上。 5. 仪器扩增程序 1、ABI7300/7500/Mx3000P/SLAN 双通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。60℃采集 FAM、JOE 荧光通道的信号。 2、LightCycler 480 仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。 60℃采集 FAM、RED 610 荧光通道的信号。 3、单通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次，60℃采集 FAM 荧光通道信号。 6. 质量控制 试剂盒中提供定量校准品五个，阴性对照，阳性血清对照和弱阳性血清对照各一个。如试剂质量完好并操作正确，阳性 血清对照、弱阳性血清对照、定量校准品应表现为阳性结果，阴性对照应表现为阴性结果，阳性血清对照定量值为 5.0±2.5 ×10 IU/ml，弱阳性血清定量值为 5.0±2.5×10 IU/ml。如超过范围则实验无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的 误差。在每次检测中都应设置阴阳性对照品。 7. 结果判断 仪器程序运行完成后，按软件要求进行结果保存，输入HBV 定量校准品的量值，选择自动分析模式，软件将自动给出标 准曲线并计算各样本的HBV DNA 含量Q(IU/ml）。
乙肝dna检测的操作规程
乙肝dna检测的操作规程
乙肝DNA检测的操作规程主要包括以下步骤：
1. 采集血液样本：通过抽取受检者的静脉血液来获取样本。
建议在空腹状态下进行抽血，以提高检测的准确性。
2. 提取DNA片段：利用特定的设备和技术，如EV卸电泳、PCR等，从血液样本中提取出乙肝病毒的DNA片段。
这一步骤是检测的关键环节，需要使用精密的仪器和专业的操作。
3. 比对和分析：将提取出的DNA片段与标准样本进行比对，通过特定的检测方法，如荧光定量PCR、基因测序等，分析DNA片段的特性和序列，以确定乙肝病毒的种类和复制程度。
4. 得出检测结果：根据比对和分析的结果，得出乙肝病毒DNA的定量或定性检测结果。
通常情况下，检测结果会以数字或阴阳性方式呈现。
5. 报告与解读：将检测结果整理成书面报告，并提供给医生或受检者。
医生根据检测结果判断受检者是否感染乙肝病毒，以及病毒的复制程度和传染性。
受检者应遵循医生的建议进行相应的治疗或监测。
需要注意的是，乙肝DNA检测是一项高技术含量的实验，需要由经过专业培训的医务人员进行操作。
同时，乙肝病毒的检测结果解读需要结合其他相关检查结果和临床表现进行综合分析，因此最好在医生的指导下进行。
临床基因扩增检验实验室HBVDNA标本处理的标准操作程序
临床基因扩增检验实验室HBV-DNA标本处理的标准操作程
序
一、目的：
规范临床基因扩增检验实验室对临床标本的处理，提高检测结果的准确率。
二、适用范围：
中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒。
三、职责：
由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。
四、程序：
1、打开加热器，设定温度100℃。
2、从试剂盒中取出DNA提取液、阴性对照、阳性对照，让其在室温下完全融化。
3、将DNA提取液、强阳性对照、临界阳性对照、阴性对照
于振荡混匀器振荡5s，6000—8000rpm离心5s。
4、取40ulDNA提取液，分别加到1.5ml离心管中。
5、再加入待测样本血清或试剂盒中的阳性对照品40ul，振荡混匀。
6、放入100℃干浴或沸水浴10min。
7、转至4℃静置8～12小时，10000rpm离心5min，保留上
清4℃保存备用（如需长期保存请放置于-20℃）。
8、离心管取出转移至加样区，取上清液2ul加样进行PCR 扩增。
此标准操作变更程序：如果本操作程序使用者在实际工作中发现其存在问题，则应向科室负责人提出，科室负责人则召集所有与本程序有关的人员讨论，以决定是否需要变更本程序。
HBV样本处理流程图。
核酸采集应急演练流程
核酸采集应急演练流程如下：
1.指挥部接通知后，通知各组组长。
感控科划分区域，医务科安排车辆运送标本，后勤人员协助运送物品，保卫科维持秩序。
2.采样组组长启动应急预案，通知各科护士长召集第一梯队采样人员，共18人，并通知核酸采集室准备用物。
3.采样护士到达指定地点，穿戴防护用品，每两人一组开始采样。
预计每小时采集540份，6小时共3240份。
4.采集够一批次标本后，用专用送检箱专车运送至核酸实验室，并通知实验室准备。
每6小时换班，及时处理医废并交接。
5.演练结束后清理现场，恢复正常状态。
核酸样本采集操作规程
核酸样本采集操作规程核酸样本采集操作规程1. 采集前的准备及所需工具a. 预先准备好所有所需的采集工具，确保其完整和清洁，包括手套、无菌棉签、无菌采集管、标签、吸管、纱布等。
b. 根据临床需要和采集方式，选择合适的采集工具和容器，确保采集操作的准确性和安全性。
2. 采集人员准备a. 采集人员应穿戴干净、整洁的工作服，佩戴帽子、口罩和手套，确保操作环境和样本不受污染。
b. 采集人员应经过相关培训，熟悉采集操作规程，了解常见的采集并发症及应对措施。
3. 采集过程a. 大致告知患者采集操作的目的和步骤，确保其理解并配合。
b. 提醒患者在采集前30分钟内不要饮食、嚼口香糖、吸烟、喝水等，防止样本被污染。
c. 采集人员应首先对自己的双手进行洗手，戴好手套，并确保采集区域的皮肤干净和无创伤。
d. 选择采集部位，常见的采集部位有鼻腔、咽喉、肛门等，具体根据实际需要进行选择。
e. 鼻腔采集：采集人员用无菌棉签轻轻旋转刺激鼻腔粘膜，收集粘膜上的样本。
f. 咽喉采集：采集人员用无菌棉签轻轻刮取咽喉部上皮细胞，收集样本。
g. 肛门采集：采集人员用无菌棉签轻轻插入肛门，刮取肠壁黏膜上的样本。
h. 采集过程中应注意避免交叉感染，每个患者的采集工具应专用，避免重复使用。
4. 采集后的处理a. 采集完成后，将棉签或采集工具放置于无菌采集管内，并轻轻旋紧管盖，确保样本的密封性。
b. 在采集管上标注患者的相关信息，如姓名、性别、年龄、采集时间等，以便后续的样本处理和分析。
c. 注意将未采集的样本或者采集失误的样本及时通知医务人员，并重新采集。
5. 样本处理和保存a. 采集完成后，将样本迅速送至实验室或相关科室进行处理和保存。
b. 样本处理前应严格按照操作规程进行处理，以确保样本的准确性和可靠性。
c. 样本的保存应遵循相关规定，如冷藏或冷冻保存，并注意样本标识的清晰和准确。
6. 采集后的清理和消毒a. 采集完成后，采集工具应立即进行无菌处理或采用一次性材料，避免交叉感染。
核酸样本采集管理制度
核酸样本采集管理制度一、总则为规范核酸样本采集工作，保障数据质量和人员健康安全，制定本管理制度。
二、适用范围本管理制度适用于所有进行核酸样本采集工作的医疗机构、实验室等单位。
三、核酸样本采集工作流程1.核酸样本采集前的准备工作：（1）核酸采集人员需进行专业培训，了解采集流程和技术要求。
（2）核酸采集人员需佩戴个人防护装备，包括口罩、手套等。
（3）核酸采集工具需提前准备充足，保证采集过程中的无菌操作。
2.核酸样本采集的操作流程：（1）核酸采集人员根据患者信息，确认采集部位和样本类型。
（2）核酸采集人员通过无菌操作，进行样本采集，并保证采集过程的唯一性和完整性。
（3）采集完成后，核酸样本需及时封存，并标注相关信息，以确保后续操作的准确性和可追溯性。
3.核酸样本采集后的处理工作：（1）核酸采集人员需对采集工具进行消毒处理，确保再次使用的安全性。
（2）核酸样本需及时送至实验室进行分析和检测，确保数据的及时性和准确性。
四、人员管理1.核酸采集人员的要求：（1）具有医学或相关专业背景，通过专业培训并取得相关资格证书。
（2）具备良好的职业道德和责任心，保证采集作业的质量和安全。
（3）定期接受技术培训和考核，保持专业水平。
2.人员培训和考核：（1）新员工入职需接受相关培训，包括技术操作、安全知识等。
（2）定期组织技术交流和培训，保证员工技术水平的提升。
（3）定期组织考核，对不合格人员进行培训和指导。
五、设备管理1.核酸采集设备的要求：（1）设备应具备相应的资质认证和检测报告。
（2）设备定期维护和检修，确保其正常运行。
（3）设备使用过程中需严格按照操作规程进行操作。
2.设备维护和管理：（1）设备管理员需对设备进行定期巡检，保证其正常运行。
（2）设备出现故障或异常情况时，需及时报修和处理。
（3）设备维护记录需及时更新，保证设备维护情况的可追溯性。
六、质量控制1.核酸样本采集质量控制：（1）对核酸样本采集过程进行抽查和核实，确保操作规程的执行。
病毒核酸检测流程
病毒核酸实验室检测步骤具体操作如下：1.病毒采样：取病人唾液或者鼻咽拭子于病毒采样管保存，常用的采样管中病毒保存液分灭活型与非灭活型，以下为德晟生产的病毒保存液两种型号：1)灭活型：灭活病毒保存液的颜色为透明的，它的特点是可以杀死病毒，保留核酸片段，一般用来检测新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒及甲乙流感等此图为灭活病毒保存液2)非灭活型：非灭活病毒保存液不含裂解液，可保留病原体的活性与完整性，颜色为粉红色，它主要应用于病毒的培养和繁殖，使检测结果更精准此图为非灭活病毒保存液采样操作步骤2.核酸提取：提取病人唾液或者鼻咽拭子样本里的遗传物质，如果病人携带病毒，则样本里就会有该病毒的遗传物质RNA,使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。
提取RNA时应注意防止RNA降解。
DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-70℃或液氮保存。
3.逆转录合成cDNA:进行提取液中RNA的逆转录，把RNA逆转录成cDNA逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。
在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。
建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。
在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。
使用商品化RT-PCR 一步法试剂进行第一轮扩增反应。
4.PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法）:用病毒cDNA的特异性引物进行PCR扩增PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。
在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。
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乙肝病毒核酸检测标本采集、送检、处理
流程
一、引言
乙肝病毒核酸检测是一种重要的手段，用于乙肝病毒感染的早期诊断和监测治疗效果。
本文档旨在描述乙肝病毒核酸检测的标本采集、送检和处理流程，以确保流程规范和结果准确性。
二、标本采集
1. 标本选择：乙肝病毒核酸检测的标本可使用血清、血浆或乙肝病毒DNA提取物。
根据实验室提供的要求和使用的方法，正确选择合适的标本进行采集。
2. 采集器具：使用无菌器具进行标本采集，如无菌收集管、无菌采血针等。
3. 采集流程：
- 患者应事先了解采集流程与注意事项，并保持合作配合。
- 消毒部位：消毒患者采血部位，通常选择肘弯处的静脉。
- 采血：按照相应的方法采集合适数量的血液样本。
注意血液采集的整洁和标本不得受到污染。
4. 采集注意事项：
- 采血前需要对采血设备进行消毒处理。
- 采血时要避免对血液标本造成不必要的污染，防止样本交叉感染。
- 采血后进行适当的处理，确保采血点不出现血肿或其他并发症。
三、标本送检
1. 样本存放：采集的标本应放入防漏、密封良好的中。
若需要长期保存，应在-80℃低温条件下保存，以防止DNA的降解。
2. 标本信息：在标本上标注清楚患者信息，如姓名、年龄、性别等。
确保标本信息准确，以避免混淆和误诊。
3. 快递选择：选择快递公司进行标本运输，确保安全、快捷的
送达实验室。
在包装标记时，应注明标本的特殊性质，以提醒运输
人员注意。
四、标本处理
1. 样本分装：实验室收到标本后，根据实验要求进行样本分装。
如分装到提取试剂盒、酶解管中，标注清楚样本编号，确保实验过
程的可追溯性。
2. 提取和纯化：根据实验方法进行标本的提取和纯化操作。
确
保提取和纯化过程的洁净，避免外源性核酸污染。
3. PCR扩增：将提取纯化后的样本进行PCR扩增反应。
注意PCR操作条件的准确性，避免扩增过程中的交叉污染。
4. 结果分析：根据PCR扩增结果，通过相关分析方法，如凝
胶电泳、定量PCR等，对乙肝病毒核酸进行检测和分析。
五、质量控制与结果报告
1. 质量控制：在标本处理过程中，应设置质量控制方案，监测
实验过程中可能存在的问题。
如加入内外对照，以确保实验的准确
性和可靠性。
2. 结果报告：将实验结果整理记录，并进行结果分析和解读。
准确撰写结果报告，提供给医生或患者进行诊断和治疗的参考。
六、总结
本文档介绍了乙肝病毒核酸检测的标本采集、送检和处理流程。
严格按照流程操作，可确保样本的准确性和实验结果的可靠性。
对
于临床乙肝病毒感染的早期诊断和治疗效果的监测具有重要意义。
以上是乙肝病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程的文档，
希望对您有所帮助。