单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选
专题2 2.2 动物细胞融合和单克隆抗体(练习作业)参考答案【学习后使用】
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体【作业】一、选择题1.关于动物细胞融合的说法，不正确的是()A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能解题分析A项为动物细胞融合的含义；B项是融合后细胞的特点；C项中紫外线照射常用于人工诱变，可诱发基因突变，而不是诱导细胞融合的因素，常用的诱导动物细胞融合的物理因素是离心、振动和电激；D项为动物细胞融合的意义。
答案 C2.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是()A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞解题分析两种细胞工程所用的技术手段不完全相同，植物体细胞杂交时要先去除细胞壁后诱导原生质体融合，而动物细胞融合时，要先使细胞分散后再诱导细胞融合，B错误；诱导的方法，除动物细胞的融合常用灭活的病毒作诱导剂外，其他的二者基本相同，A错误；二者采用的原理不同，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，最终形成的是杂交细胞，植物体细胞杂交还用到细胞的全能性，最终形成杂种植株，C错误。
答案 D3.动物细胞融合属于动物细胞工程的技术手段之一，下列有关动物细胞融合的叙述正确的是()A．动物细胞融合产生的细胞称为重组细胞B．融合后形成的细胞为单核或多核细胞C．常用的诱导融合的生物诱导剂是聚乙二醇、灭活的病毒等D．也称细胞杂交，可由两个或多个动物细胞结合成一个细胞答案 D解析动物细胞融合产生的细胞称为杂交细胞，核移植产生的细胞称为重组细胞，A错误；融合后形成具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，B错误；诱导动物细胞融合的生物诱导剂是灭活的病毒，聚乙二醇属于化学诱导剂，C错误；动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，D正确。
第2章 细胞工程 过关检测(B卷)(学生版含答案详解)
单元过关检测卷(B卷)第2章细胞工程(时间:90分钟满分:100分)一、选择题(本题共20小题,每小题2.5分,共50分。
每小题只有一个选项符合题目要求)1.花药经离体培养形成试管苗,通常需要经过的两个阶段是()A.脱分化形成愈伤组织,再分化形成根、芽B.分化形成愈伤组织,进一步分化形成根、芽C.通过减数分裂形成配子,配子再发育形成根、芽D.先用秋水仙素处理花粉,再进行花药离体培养2.下面的简式表示植物组织培养的大致过程。
据此判断,下列说法错误的是()①②③④A.若①是来自不同植物体细胞融合的杂种细胞,则④可能出现不同植物的遗传特性B.若①是二倍体的花粉,则④是单倍体植株,经染色体加倍后可得到性状稳定遗传的品种C.若①是人参细胞,对②进行扩大培养可提高细胞产物人参皂苷的产量D.若①是具有杂种优势的农作物细胞,则利用③进行繁殖会发生性状分离3.植物体细胞杂交尚未解决的问题有()A.去掉细胞壁,分离出有活力的原生质体B.将杂种细胞培育成植株C.让杂种植物按照人们的需要表现亲代的优良性状D.尚未培育出属间杂种植物4.下列关于植物细胞工程的叙述,正确的是()A.植物细胞只要在离体状态下即可表现出全能性B.制备原生质体时可利用酶或植物激素去除细胞壁C.愈伤组织经过细胞的增殖会形成新的植物组织、器官D.叶肉细胞经脱分化形成愈伤组织离不开植物激素的作用5.若要获得脱毒苗,一般选取植物体的哪一部位进行组织培养?()A.叶B.花粉C.根D.茎尖6.下列关于细胞融合的说法,错误的是()A.植物细胞在融合之前需经酶处理B.细胞融合过程依赖细胞膜的功能特点——流动性C.融合后,动植物细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息D.动、植物细胞融合均需要诱导剂诱导7.与植物体细胞杂交相比,动物细胞融合的原理及其特有的诱导因素分别是()A.细胞膜的流动性、离心B.细胞膜的流动性、灭活病毒C.细胞的全能性、电刺激D.细胞的全能性、灭活病毒8.下列关于单克隆抗体制备的说法,正确的是()A.将特定抗原注射到小鼠体内,可以从小鼠血清中获得单克隆抗体B.经特定抗原免疫过的B淋巴细胞在体外培养时可分泌单克隆抗体C.诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,发生融合的细胞均为杂交瘤细胞D.筛选出杂交瘤细胞后,需利用特定抗原进行检测,再次筛选能分泌特定抗体的细胞9.下列有关细胞工程的说法,正确的是()A.植物体细胞杂交实际上是不同植物体细胞的细胞核融合的过程B.胡萝卜的愈伤组织重新分化形成根、芽等器官的过程称为脱分化C.悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和营养物质缺乏等因素而分裂受阻D.动物细胞培养的原理与植物组织培养的原理是相同的10.下列叙述不属于动物体细胞核移植技术的应用前景的是()A.加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育B.增加濒危物种的存活数量C.将正常的造血干细胞移植到病人体内,恢复病人的造血和免疫功能D.利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物可以作为生物反应器11.下列有关哺乳动物精子和卵子的发生以及受精的叙述,正确的是()A.采集到的精子和卵子相遇即可发生受精作用B.排卵就是排出成熟卵子的过程C.卵子形成时的分裂过程均在卵巢内完成D.受精过程中,透明带和卵细胞膜都会发生生理反应,以防止其他精子入卵12.为了加快优良种牛的繁殖速度,科学家常采用胚胎移植的方法。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选制备单克隆抗体的过程一般包括以下步骤：免疫原的制备、免疫小鼠、脾细胞融合、杂交瘤筛选和克隆、筛选单克隆杂交瘤、扩增和纯化单克隆抗体。
首先，免疫原的制备是制备单克隆抗体过程的第一步。
免疫原可以是纯化的蛋白质、多肽、细胞表面抗原等。
免疫原的选择和制备需要根据实验的目的和需求进行设计。
第二步是免疫小鼠。
免疫小鼠是制备单克隆抗体的常用动物模型。
通常选择BALB/c小鼠作为实验动物，并使用免疫佐剂增强免疫效果。
小鼠需要进行免疫，例如通过皮下注射、肌肉注射等途径将制备好的免疫原注射到小鼠体内。
第三步是脾细胞融合。
在获得免疫反应满意的小鼠后，需要从其脾脏中获得淋巴细胞。
将脾细胞与合适的骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
融合的方法包括传统的体外融合和新型的凭借细胞融合特性的电融合等。
第四步是杂交瘤筛选和克隆。
将融合得到的细胞悬浮液进行稀释，使得每个孔中只存在一个细胞。
然后需要在含有细胞导入剂的选择培养基中培养杂交瘤细胞。
导入剂可以使得杂交瘤细胞在含有肿瘤抗原的培养基中进行生长，而非杂交瘤细胞则会死亡或生长缓慢。
通过这样的选择，可以筛选出产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
第五步是筛选单克隆杂交瘤。
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，筛选出产生特定抗原结合特异性的单克隆杂交瘤细胞。
这一步骤可以帮助确定那些产生目标抗原结合特异性抗体的杂交瘤细胞。
经过初步筛选和单克隆筛选之后，通常会得到一定量的单克隆抗体，然而这些抗体还需要经过进一步的扩增和纯化。
扩增单克隆抗体的过程涉及到培养大量的单克隆杂交瘤细胞，并进行培养和收集细胞上清液。
最后一步是纯化单克隆抗体。
通过蛋白质A/G亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技术手段，将目标单克隆抗体从细胞上清液中纯化出来。
在整个制备单克隆抗体的过程中，经过两次筛选是确保获得特异性抗原结合能力的单克隆杂交瘤细胞的重要步骤。
只有通过这样的筛选过程，才能获得具有较高亲和力和特异性的单克隆抗体。
高中生物学选择性必修3动物细胞融合技术与单克隆抗体
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
1．(科学思维)单克隆抗体的制备过程
(1)思考不直接用经过免疫的 B 淋巴细胞(浆细胞)获得抗体的原因是什么？
(2)连线比较单克隆抗体制备过程中几种细胞的特点。
Ⅰ.免疫过的 B 淋巴细胞 ①能无限增殖但不能产生抗体
Ⅱ.骨髓瘤细胞 ②既能无限增殖，又能产生单一抗体
Ⅲ.杂交瘤细胞 ③能增殖、分化形成浆细胞、记忆细胞
诱导融合后得到多种杂 从小鼠体内提取的 B 淋巴
交细胞，另外还有未融合 细胞有很多种，形成的杂
的细胞
交瘤细胞也有很多种
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
项目
第一次筛选
第二次筛选
用特定的选择培养基筛选：
用多孔培养皿培养，在每个孔只有一
未融合的细胞和同种细胞
筛选
个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化
融合后形成的细胞都会死
2．诱导原理和结果 (1)诱导原理：____细__胞__膜__的__流__动__性______。 (2)诱导结果：形成__杂__交____细胞。
3．诱导动物细胞融合的常用方法
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
(1)化学法：__P_E__G___融合法等。 (2)物理法：电__融__合__法__等。
(1)动物细胞融合过程中既有细胞膜的融合也有核的融合。( √ )
(2)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导方法有聚乙二醇
融合法、灭活病毒诱导法。( × )
(3)动物细胞融合的结果是形成单核的杂交细胞，植物体细胞杂交的结果
是得到杂种植株。( √ )
(4)动物体细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞。( × )
网络构建
新教材·生物（RJ） 选择性必修3
备战2024年高考生物易错题(新高考专用)易错点17 生物工程的“四个”不相等(含答案
备战2024年高考生物易错题（新高考专用）易错点17 生物工程的“四个”不相等（含答案易错点17 生物工程的“四个”不相等目录01 易错陷阱（四大陷阱）02 举一反三【易错点提醒一】脱毒苗≠抗毒苗【易错点提醒二】杂交瘤细胞≠分泌所需抗体【易错点提醒三】卵子受精≠受精完成【易错点提醒四】受体细胞有抗性≠导入重组DNA03 易错题通关易错陷阱1：利用植物组织培养技术培养植物分生区可获得抗毒苗【分析】植物组织培养技术培养植物分生区获得的是脱毒苗，没有抗病毒的能力不是抗毒苗（基因工程可得到）。
易错陷阱2：第一次筛选得到的杂交瘤细胞即可分泌所需的抗体【分析】经过克隆化培养和抗体检测筛选后得到的杂交瘤细胞才能分泌所需抗体。
易错陷阱3：卵子受精就代表受精作用完成【分析】形成两个极体代表卵子受精，常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志。
易错陷阱4：受体细胞表现抗性就表示导入重组DNA【分析】受体细胞表现抗性也有可能导入空载体。
【易错点提醒一】脱毒苗≠抗毒苗【例1】甘薯由于具有增强免疫功能、防癌抗癌、抗衰老、防止动脉硬化等作用，故越来越被人们喜爱。
但甘薯属于无性繁殖作物，同时又是同源六倍体，具有自交不育和杂交不亲和性，这使甘薯生产和育种存在诸多常规方法难于解决的问题。
下列相关操作不合理的是（）A．用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，可以解决种苗用量大、成本高的问题B．利用茎尖分生组织培养脱毒苗，使植株具备抗病毒的能力，产品质量得到提高C．利用原生质体融合实现体细胞杂交，克服杂交不亲和，可以充分利用遗传资源D．利用培养的愈伤组织进行诱变育种，可以显著提高变异频率，有利于缩短育种年限【变式1-1】下列实例培育过程中应用到植物组织培养技术的是（）①制造人工种子②培育抗盐转基因植物③培育抗病毒转基因烟草④培育单倍体A．②③④B．①③④C．①②④D．①②③④【变式1-2】辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。
2025版高考生物一轮总复习课时质量评价38动物细胞工程
三十八动物细胞工程(建议用时：40分钟)一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求。
1．(2024·广东东莞期末)一种杂交瘤细胞只能产一种抗体，抗体由两条相同的重链和两条相同的轻链构成。
科学家通过动物细胞融合技术，将两株不同的杂交瘤细胞(A和B)融合形成双杂交瘤细胞AB。
双杂交瘤细胞能够悬浮在培育基中生长繁殖，产生的双特异性抗体AB 如下图所示。
下列相关说法错误的是( )A．将杂交瘤细胞A、B混合并诱导融合后，利用选择培育基无法筛选出双杂交瘤细胞AB B．双杂交瘤细胞同时识别α、β抗原后，才能产生双特异性抗体C．对培育到肯定密度的双杂交瘤细胞进行传代培育时，无需运用胰蛋白酶处理D．将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔，腹水能为细胞供应糖类、氨基酸、无机盐、维生素等养分条件2．如下图所示，核苷酸合成有两条途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。
正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。
现用加入H、A、T三种物质的“HAT培育基”来筛选特定的杂交瘤细胞。
下列相关叙述正确的是( )A．B淋巴细胞及其自身融合细胞因含有转化酶可在HAT培育基上大量增殖B．杂交瘤细胞因为可以进行上述两个途径所以能在HAT培育基上大量增殖C．HAT培育基上筛选出的杂交瘤细胞都能分泌针对同一种抗原的抗体D．利用杂交瘤细胞制备的单抗可作为特异性探针探讨相应抗原蛋白的结构3．(2024·湖北武汉模拟)核移植后，从克隆胚胎中分别、培育而成的干细胞称为核移植胚胎干细胞(NTESC)，这种细胞对于胚胎嵌合探讨和细胞治疗探讨均具有重要的意义。
有关说法正确的是( )A．重组细胞进行体外培育时，气体环境中CO2的主要作用是促进呼吸作用B．NTESC在饲养层细胞上或在添加抑制因子的溶液中，能够快速增殖分化C．将小鼠NTESC注入猪囊胚时须注入滋养层处才能获得猪—鼠嵌合胚胎D．NTESC分化成的组织器官，移植给供核个体，发生免疫排斥可能性小4．青蒿素主要用于恶性疟疾的症状限制以及耐氯喹虫株的治疗。
单克隆抗体制备过程中的两次筛选
单克隆抗体制备过程中的两次筛选动物细胞工程中动物细胞融合的主要应用是制备单克隆抗体。
在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选，这地方学生很容易弄混了。
第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法并不相同。
第一次筛选：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
白细胞介素6试题
白细胞介素6试题？
答：以下是一道白细胞介素6相关试题：
白介素6（IL-6）是引发新冠肺炎患者炎症风暴中的关键炎症因子，能使机体出现高烧、呼吸衰竭等症状。
托珠单抗是一种阻断白细胞介素-6（IL-6）受体的单克隆抗体，它能改善重症COVID-19患者的临床症状，是救治新冠肺炎重症患者的有效方法。
请回答下列问题：
1.托珠单抗制备过程中涉及两次筛选，第一次是利用特定的选择培养基排除未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞，只留下杂交瘤细胞；第二次是通过_______获得足够数量能产生托珠单抗的杂交瘤细胞。
2.研究发现，托珠单抗用于治疗新冠肺炎患者后，患者的体温恢复正常，该调节过程的中枢位于_______。
3.研究发现，在托珠单抗治疗后，以CD8+T细胞为代表的细胞免疫应答和以B细胞为代表的_______免疫应答均有一定程度提高，减弱了炎症细胞因子风暴可能对机体带来的损伤，同时可以帮助机体维持高水平的抗病毒免疫应答，从而有效治疗疾病。
答案：
1.抗体检测
2.下丘脑
3.体液。
2022年重庆一中高三2023届11月月考生物参考答案
2022年重庆一中高2023届11月月考生物参考答案一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10答案 C D B B D C D C A D题号11 12 13 14 15 16 17 18 19 20答案 C D A A D C D B D B 【解析】1．水分子间的氢键不断地断裂与形成，使水在常温下具有良好的流动性，A正确。
氨基酸之间可形成氢键等，使多肽链盘曲折叠形成特定的空间结构，B正确。
转录时RNA聚合酶具有断裂氢键，解开DNA双螺旋的作用，也有催化核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键的作用，但碱基之间氢键的重新形成不需要酶的催化，C错误。
DNA双螺旋结构的维持与碱基之间的氢键的作用密切相关，D正确。
2．T2噬菌体侵染细菌的实验说明T2噬菌体的遗传物质是DNA，A错误。
环状DNA无游离的磷酸基，B错误。
DNA每条单链内嘌呤与嘧啶比值互为倒数，即A1+G1/C1+T1=T2+C2/A2+G2，C错误。
DNA作为遗传物质的特点有：结构稳定、能准确复制、能储存大量遗传信息、能控制蛋白质合成等，D正确。
3．脂质体甲与小肠上皮细胞膜在化学成分上的区别是前者没有蛋白质、多糖和胆固醇，A错误。
A处是磷脂双分子层的内部，是疏水性尾部组成的结构，脂溶性药物可在A处稳定存在；B处是亲水性头部朝向的部位，水溶性药物B处稳定存在，B正确。
脂质体甲到达靶细胞后，药物可通过胞吞或细胞膜融合的方式进入靶细胞，都是借助脂质体的流动性进入靶细胞，C错误。
脂质体乙、丙是磷脂单分子层结构；内质网膜和高尔基体膜都是磷脂双分子层构成的单层膜结构，D错误。
4．酶的高效性可提高细胞代谢的速率，保证细胞代谢快速进行；酶的专一性保证细胞代谢有条不紊地进行，A错误。
细胞呼吸的中间产物如丙酮酸可转化为脂质和氨基酸，因此可参与糖类、脂质和蛋白质代谢，B正确。
高考生物现代生物科技专题知识点汇总
高考生物现代生物科技专题知识点汇总1.限制酶主要是从原核细胞中分离得到的原因原核细胞易受外源DNA的侵袭，具有限制酶的原核细胞可选择性地破坏不同于自身DNA的外来DNA，从而适应环境。
2.PCR扩增DNA的大致过程(选修三10页)目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，在DNA聚合酶作用下进行子链延伸，如此重复循环多次。
3.启动子的位置和生物作用(选修三11页)位于基因首端一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，它能驱动基因转录出mRNA。
4.农杆菌转化法中农杆菌的作用(选修三12页)农杆菌可感染双子叶植物和裸子植物，所含的质粒上的T－DNA可转移并整合到受体细胞染色体的DNA上。
5.转移的基因能在受体细胞内表达的原因生物界共用同一套遗传密码。
6.原核生物作为转基因受体细胞的优点(选修三13页)繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。
7.用两种不同限制酶同时处理质粒和含目的基因的片段的主要优点可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(也能防止反接)。
8.转基因抗虫或抗病农作物个体检测(选修三14～15页)用相应害虫或病原体分别感染转基因和非转基因植株(做抗虫或抗病的接种实验)，观察比较植物的抗性。
9.细胞内的代谢产物一般不会过度产生和积累的原因代谢产物过多以后，可以负反馈抑制与之相关的酶的活性，从而使代谢产物的量不会过多。
10.与杂交育种相比，植物体细胞杂交的优势(选修三37页)克服远缘杂交不亲和的障碍，获得杂种植株。
11.选取茎尖培育脱毒植物的原因(选修三39页)茎尖病毒极少甚至无病毒。
12.动物细胞培养需要添加血清的原因(选修三46页)人类对细胞所需的营养物质还没有完全搞清，而动物血清成分复杂，可保证细胞营养需要。
(扩展补充：如果要研究某种营养成分对动物细胞的影响时，反而要用无血清培养液，此时是要排除血清复杂成分的干扰)13.单克隆抗体主要的优点(选修三54页)特异性强、灵敏度高，可大量制备。
细胞工程和胚胎工程知识点总结
细胞工程和胚胎工程知识点总结一、知识提炼：1．植物组织培养和动物细胞培养植物组织培养 动物细胞培养 不同点① 需要酶解法去除细胞壁② 最终获得植株个体③原理为细胞的全能性 ① 需要酶解法使组织变为单个细胞 ② 最终不能形成个体③原理为细胞增殖 相同点① 两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH 等条件2．细胞工程运用：植物体细胞杂交、单克隆抗体的制备、克隆： （1）植物体细胞杂交过程：原生质体的制备(酶解法)→原生质体融合(物理或化学方法)→杂种细胞（标志：再生细胞壁）→植物组织培养→杂种植株的筛选与培养→杂种植株诱导与鉴定（2）单克隆抗体制备过程：骨髓瘤细胞和正常小鼠免疫处理后获得免疫B 淋巴细胞→动物细胞融合(物理、化学、生物方法，其中灭活的病毒是不同于植物原生质体融合的诱导方法)→杂交瘤细胞筛选与培养→单克隆抗体的提纯（3）克隆：优良动物的体细胞提供细胞核与受体细胞（未受精的卵细胞）提供细胞质→融合→体外培养→移植到雌性子宫培养→新个体 3．胚胎工程运用： 来源 特点运用 细胞早期胚胎或原始性形态特征：体积小，细胞核大，移植可以治疗人类的某腺细胞核仁明显功能特性：具有发育的全能性；在培养条件下可以增殖而不发生分化、可以对其冷冻保存和遗传改造些顽症胚胎移植雌性动物体内的早期胚胎、体外受精获得的胚胎、克隆、胚胎分割获得的胚胎等整个胚胎工程的最后一个环节加速育种工作和品种改良；保存品种资源和濒危物种。
胚胎分割桑椹胚或囊胚是一种无性繁殖，同时获得同卵双胎或多胎加速繁殖优良品种二、重点突破：（一）常见问题：精子和卵子能够受精的前提条件：1．成熟的精子并不代表具有受精能力，必须获能后方才具备受精能力。
2．动物排出的卵子并未成熟且成熟程度因动物种类不同而异，但只有达到减Ⅱ中期时，才具备与精子受精的能力。
（二）易错提醒：胚胎分割、胚胎移植易混淆的问题：1．材料选择：发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚。
单克隆抗体制备两次筛选的原理
单克隆抗体制备两次筛选的原理一、引言单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和性的抗体，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和治疗等领域。
制备单克隆抗体的关键步骤之一就是筛选，而为了获得更高亲和力和特异性的抗体，通常需要进行两次筛选。
本文将介绍单克隆抗体制备两次筛选的原理及其意义。
二、第一次筛选原理第一次筛选是为了从混合的抗体群体中筛选出特异性较高的单克隆抗体。
筛选的关键是对目标抗原进行免疫反应，然后通过适当的方法分离和检测抗体。
1. 免疫反应：通常采用的方法是将目标抗原免疫到动物体内，激发免疫反应。
免疫反应的方式可以是免疫原注射或者抗原与适当的载体融合，然后注射到动物体内。
2. 分离抗体：在免疫反应完成后，可以从动物体内采集到血清或者细胞，其中含有大量的抗体。
通过一系列的分离步骤，如离心、过滤、层析等，将目标抗原特异性较高的抗体分离出来。
3. 检测抗体：得到抗体后，需要进行检测以确定其特异性。
常用的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化和免疫印迹等。
这些方法可以通过检测抗体与目标抗原的结合情况来评估抗体的特异性。
三、第二次筛选原理第一次筛选得到的抗体是一种多克隆抗体，包含多个亲和力和特异性不同的抗体。
第二次筛选的目的是从第一次筛选得到的抗体中筛选出特异性和亲和力更高的单克隆抗体。
1. 单克隆化：将第一次筛选得到的抗体进行单克隆化处理。
常用的方法有杂交瘤技术和限制稀释法。
杂交瘤技术是将抗体产生的B细胞与肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，进而筛选出单克隆抗体。
限制稀释法是将抗体稀释到一定程度，使得每个孔只有一个抗体分子，然后进行培养，最终得到单克隆抗体。
2. 亲和度筛选：通过亲和层析等方法对单克隆抗体进行筛选，选择亲和度更高的抗体。
亲和层析是将抗体与亲和基质结合，然后通过洗脱的方式分离出亲和度较高的抗体。
这一步骤可以进一步提高抗体的特异性和亲和力。
四、意义与应用单克隆抗体制备两次筛选的原理可以提高抗体的特异性和亲和力，使得抗体在生物医学研究、临床诊断和治疗等领域具有更广泛的应用。
选择性必修3 生物工程与技术 概念判断题(答案版)
选择性必修3 生物工程与技术概念判断题（答案版）第一章第1节传统发酵技术的应用1．酵母菌在有氧条件下利用葡萄汁产生酒精。
(×)2．利用带盖的瓶子制作果酒时，应将瓶子装满，以创造无氧环境。
(×)3．变酸的酒表面的菌膜是酵母菌繁殖形成的。
(×)4．醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸。
(×)5．日常生活中不能吃存放时间长、变质蔬菜的原因是其内含的大量亚硝酸盐可致癌。
(×) 6．制作酸奶可用含有抗生素的牛奶。
(×)第一章第2节第1课时微生物的基本培养技术1．培养基只能用以培养、分离、鉴定、保存微生物，不能用以积累其代谢产物。
(×) 2．琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一。
(√)3．培养霉菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性。
(×)4．消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部的微生物，包括芽孢和孢子。
(×)5．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
(√)6．经高压蒸汽灭菌后的培养基，要冷却至50 ℃左右时，才能在酒精灯火焰附近倒平板。
(√) 7．平板划线时要注意将最后一次的划线与第一次的划线相连。
(×)第一章第2节第2课时微生物的选择培养和计数1．筛选分解尿素的细菌的培养基以尿素为唯一氮源，且为固体培养基。
(√)2．利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。
(×)3．统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计。
(×)4．利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。
(×)5．利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量。
(×)6．培养分解尿素的细菌，培养基的pH会增大。
(√)第一章第3节发酵工程及其应用1．发酵工程中所需的性状优良的菌种只能从自然界中筛选出来。
(×)2．在菌种确定之前就要选择原料制备培养基。
人教版高中生物选择性必修第3册 课后习题 综合检测(B卷)
综合检测(B卷)(时间:90分钟满分:100分)一、选择题(本题共20小题,每小题2.5分,共50分。
每小题只有一个选项符合题目要求)1.图甲为果酒和果醋制作装置,图乙表示制作过程中的物质变化。
下列有关叙述正确的是( )A.制作果酒时应关闭阀b,适时打开阀a几秒钟B.制作果醋时需打开阀a通气,打开阀b排气C.过程①②都只能发生在缺氧的条件下D.过程①~④所需的最适温度基本相同答案:B解析:图甲装置中,阀a控制进气,阀b控制出气,制作果酒时应关闭阀a 以创造缺氧环境,适时打开阀b几秒钟以排出产生的CO2,A项错误。
制作果醋时,打开阀a是为了通气,打开阀b是为了排气,B项正确。
酵母菌属于兼性厌氧微生物,在有氧时进行有氧呼吸,在无氧时进行无氧呼吸产生酒精;过程②只能发生在缺氧的条件下,过程①在有氧和无氧条件下都能发生,C项错误。
过程①②③是酵母菌的呼吸作用,所需的最适温度基本相同(约28℃);过程④是利用醋酸菌酿醋的过程,所需的最适温度为30~35℃,D项错误。
2.家庭制作泡菜并无刻意的灭菌环节,在发酵过程中,乳酸菌产生的乳酸就可以抑制其他微生物的生长。
当环境中的乳酸积累到一定浓度时,又会抑制乳酸菌自身的增殖。
下列有关叙述错误的是( )A.在发酵的初期,乳酸菌的种内关系主要表现为种内互助B.在发酵的中期,由于营养物质的消耗和代谢产物的积累,乳酸菌的种内竞争趋于激烈C.密闭的发酵环境使乳酸菌在种间竞争中占据优势D.在发酵的中期,泡菜坛内各种微生物大量繁殖答案:D解析:在发酵的初期,乳酸菌数目增加较快,其种内关系主要表现为种内互助、抑制其他微生物的生长,A项正确。
在发酵的中期,随着营养物质的消耗和代谢产物的积累,乳酸菌的种内竞争趋于激烈,B项正确。
由于乳酸对乳酸菌代谢活动的影响不大,所以在乳酸菌与其他微生物的生存斗争中乳酸菌占据优势,C项正确。
在发酵的中期,由于乳酸的大量积累,泡菜坛内的微生物减少,D项错误。
单克隆抗体制备 免疫流程
单克隆抗体制备免疫流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!单克隆抗体制备是一种重要的生物技术，它能够产生高度特异性和高度亲和力的抗体，用于研究和治疗各种疾病。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选[1]
![单克隆抗体制备过程中经过两次筛选[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/9a194bfd6394dd88d0d233d4b14e852458fb39b0.png)
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的H A T选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HA T培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DN A合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HA T培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B 细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HA T培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HA T培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选
单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选(资料)单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HA T选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d 左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S 途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
高三选择性必修三生物知识点总结(问答方式)总复习资料
1.基因工程三大工具，四大步骤分别是？（1）三大工具①限制酶（限制性内切核酸酶）②DNA连接酶③载体（2）四大步骤①目的基因的筛选与获取（前提）②基因表达载体的构建（核心）③将目的基因导入受体细胞（关键）④目的基因的检测与鉴定2.两种DNA连接酶的区别？镁离子的作用？（1）两种DNA连接酶的区别①E.coli DNA连接酶：来源于大肠杆菌，只连接黏性末端②T4 DNA连接酶：来源于T4噬菌体，既能连接黏性末端，又能连接平末端（但连接平末端的效率相对较低）（2）镁离子的作用激活DNA聚合酶3.什么是启动子？启动子的作用是什么？载体的种类？质粒的特点？构建基因表达载体的目的？（1）启动子①定义：一段有特殊序列结构的DNA片段②位置：位于基因的上游，紧挨转录的起始位点③作用：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA诱导型启动子：当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。
（2）载体种类①质粒②噬菌体③动物病毒（3）质粒的特点一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
（4）构建基因表达载体的目的①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。
②使目的基因能够表达和发挥作用。
4.基因表达载体的组成及作用？转化的含义？（1）基因表达载体的组成及作用①组成：目的基因外，还必须有启动子、终止子、标记基因，复制原点等。
②作用：a.目的基因：编码蛋白质的基因，能控制表达所需要的特殊性状；如Bt基因b.启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。
c.终止子：使转录在所需要的地方停下来。
d.标记基因：便于重组DNA分子的筛选e.复制原点：DNA复制的起始位点（2）转化的含义目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程5.将目的基因导入微生物，动物，植物细胞的方法？目的基因导入，转录和蛋白质表达的方法分别是？导入动物细胞为什么要选受精卵？（1）将目的基因导入微生物，动物，植物细胞的方法①微生物细胞：Ca2+处理法②动物细胞：显微注射法③植物细胞：花粉管通道法、农杆菌转化法（常用）（2）目的基因导入，转录，表达的方法①目的基因导入方法PCR技术②目的基因转录方法分子杂交技术③蛋白质表达的方法抗原抗体杂交（3）导入动物细胞为什么要选受精卵①体积大，易操作。
杂交瘤细胞两次筛选的原理
杂交瘤细胞两次筛选的原理一、杂交瘤细胞的基本概念说到杂交瘤细胞，大家肯定都会有点疑问，“这玩意儿听起来像个生物学怪物。
”其实呢，它并没有那么可怕。
简单来说，杂交瘤细胞就是我们把两种不同的细胞—一种是可以产生抗体的B细胞，另一种是能无限增殖的瘤细胞—合在一起，形成一种新的细胞。
这些细胞不仅能不停地分裂，而且还能制造出大量我们需要的抗体，甚至在实验室里可以一直繁殖下去，简直是细胞界的“千年不老”神话！想象一下，你有一个工厂，这个工厂需要不断生产某种特定的商品，比如说抗体。
而这个工厂不仅得生产出你要的商品，还得保证质量好，产量大，且永不停止。
这时候，你就得找一种既能生产又能不死的细胞来帮忙。
瘤细胞就是一个理想的选择，因为它能不断分裂，不会被老化、死亡这些麻烦事困扰。
二、杂交瘤细胞两次筛选的原理聊完了什么是杂交瘤细胞，接下来我们得说说，怎么筛选出来那些能帮我们生产理想抗体的杂交瘤细胞。
你可能会想：“难道一开始就能找到完美的杂交瘤细胞？”当然不！这一过程，简直就是一次激烈的“人才选拔”，而且这个选拔分两轮。
首先说第一轮筛选。
假设你现在已经做出了杂交瘤细胞，但是它们并不全都能生产你需要的抗体。
于是，第一轮筛选就开始了。
我们会把这些杂交瘤细胞放进一个培养基里，那个培养基里包含了许多不同的东西。
其中最重要的一点就是，一部分细胞会被淘汰，因为它们没有办法在这个培养环境中生存。
而那些没有生成抗体的B细胞，它们很快就会死掉。
而那些能在这种特殊条件下生存并生成你需要的抗体的细胞，它们就能活下来，成为我们的“优秀选手”。
接下来的第二轮筛选，情节就更紧张了。
你也许会想：“这么一筛，剩下的这些细胞就完美了吧？”当然不！虽然这些细胞可能能生产抗体，但它们并不一定适应你的需要。
所以在第二轮筛选中，我们要通过更为严格的测试来挑选出那些最棒的细胞。
这个过程就像是在做面试，一层层筛选下去，最后留下的都是最符合要求的精英细胞。
换句话说，就是从“千军万马”中挑选出“独占鳌头”的那一个。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
单克隆抗体制备中杂交瘤细胞的两次筛选(资料)
单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA 合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S 途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D 途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。
因此，单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。