鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析
鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
１ ． ２ ． ７ 动物试验
将纯 培养的细菌接种 一 ｆＳ ｍｌ 营 养肉汤。
置 于３ ７ ℃培养２ ４ ｈ 。取２ ０ 只小 白 鼠，雌雄各 半 随机 分为
２ Ｎ ，试 验组 小 白鼠为１ ４ 只 ，腹腔 注射菌 液０ ． １ ｍｌ ／ 只 ；对 照组小 自鼠６ 只 ，注 射Ｄ Ｈ值为７ ． ６ 的生理盐水０ ． １ ｍｌ ／ 只 ，４ ｈ
关键词 鸡 白痢 沙 门氏 分离 鉴定 药敏 试验
中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ １
文 献标识码 ：Ａ
文章编号：１ ０ ０ ７ ． １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ ｔ ２ ． ０ ３
酵管和 其他 生化反 应管 中 ，置 于３ ７ ＂ Ｃ温箱培养 ，每 曰观 察 ；采 用 沙 门 氏菌 诊 断 ｍ清 对 分 离 菌株 进 行ｊ ｆ 【 Ｌ 清 型鉴
取肺 组织进 行真 菌分 离培养 来分 离到任何 真菌 ；于
盲肠 内榆查到异刺线虫７ 条 ，ｆ肠道榆 查到绦虫ｌ 条 ，除此 之外 ，末见其他寄生虫和虫卵。 ３ ． ３ 分离菌株培养特性
特 征 。将细 菌 纯 培 养物 接 种 于 ｊ 糖 铁 琼 脂 ，３ ７ ＂ Ｃ培 养
２ ４ ｈ。
所。
养物分别用灭菌生理盐水冲洗 ，稀释 成浓度 为３ ｘ ｌ Ｏｔ ｅ ｆ ｕ ／ ｍｌ
的荫 液 ，吸取稀释 菌液 均匀涂 布 于普通平板 。室温 放置
５ ａｉ ｒ ｎ 后 ，分别 贴上 符 种药 敏 纸片 ，３ ７ ＂ Ｃ条件 下培 养 １ ６ ～
１ ８ ｈ ，观 察 并 测 量 抑 菌 环 大 小 。
鸡致病性大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验
中 图 分 类 号 ：８ ２６ ￥ ５ ．１ ４ ２
文 献 标 识 码 ：Байду номын сангаас Ｂ
文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （ ０ ）２ ０ ０ — ２ １０ — ０ ０ ２ １ ０ — ０ ３ ０ １
鸡 大肠 杆 菌 病 是 由大肠 杆 菌 的某些 致 病 性 血清 型 引
临床 剖检 有典 型心 包炎 、 周炎 、 肝 气囊炎 或 卵黄 性腹 膜炎 ，
疑 似 为 大 肠 杆 菌 感 染
１２ 试 剂 ． ・
分 离 、 定 ， 到接 种后 ７ｄ为止 。７ｄ后仍 存 活 的鸡 进行 鉴 直 解 剖 ．观 察病 变 作 细菌 分离 鉴 定 根 据 鸡 的死 亡 数 和病 变 程度确 定 分离株 的致 病性 １３ ．． 药 敏 试验 ４ 按 ＷＨ Ｏ推 荐 的 Ｋｒｖ Ｂ ｕ ｒ 片 扩散 ｉ — ａｅ 纸 ｂ
加 大肠 杆 菌病 给养禽 业造 成 了严 重的 经济 损失 ． 国每 我 年 因大 肠杆 菌病 造成 的经 济损 失达 ３ 多元 ． 亿 而且还 有增
加 的 趋 势 … 据 对 南 阳 市 及 周 边 主 要 养 禽 集 中 区 及 兽 医 门
诊 的调查 ． 规模 养禽场疫 病 的发 生 以大肠 杆菌病 居首位 。 由 于其 血清型 复杂 ． 耐药菌株 不断增 加 ． 给防治工 作带 来 了巨
苯尼 考 等有 一定 的 耐药 性 对 头孢 噻肟 、 丁胺 卡那霉 素 、 壮 观霉 素 和新 霉素 较 敏感
３ 讨 论 ３１ 血 清 型 分 析 ．
是卫 生 状 况差 、 养 密度 大 、 理 粗放 、 毒 不 严格 、 用 饲 管 消 使
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
通过革兰氏染色分离菌株显示阴性小杆菌，多单个验鉴定情况
分离出菌株的生化试验结果能发酵麦芽糖、乳糖、葡萄糖、 甘露醇，均能产酸产气，大多数菌株不发酵蔗糖，少数缓慢发 酵，VP实验、枸橼酸盐试验均为阴性，MR试验、吲哚试验均为 阳性，以上试验结果可以证明分离出的菌株为大肠杆菌。 2.4 毒力试验情况
用19种药物对分离出的菌株进行药敏试验，其结果如附表所 示。
附表 分离菌株的药物敏感性实验结果 （mm）
抑菌药物
判断标准 耐药 中敏 敏感
抑菌圈 直径
判定 结果
氟苯尼考
≤12 13～17 ≥18
13±2
中敏
复方新诺明 ≤12 13～16 ≥17
0±5
耐药
螺旋霉素 ≤13 14～17 ≥18
22±3 敏感
（2）试剂准备：麦康凯琼脂培养基及生化试剂均由市场采 购。
（3）药片准备：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素 等含药纸片。
（4）实验动物选用昆明系小白鼠雌雄各6只。 1.2 试验方法 1.2.1 病株的分离与培养 将提前采集的心血、肝、脾、等样品 接种在麦康凯琼脂培养基上，于恒温箱内37℃培养18～24h，观察 菌落生成情况，从培养基上挑取粉红色、表面光滑的单个菌落分 别接种到营养琼脂斜面上，于恒温箱内37℃培养18～24h后，置冰 箱备用。 1.2.2 染色镜检 将以上所得的菌株分别进行涂片，革兰氏染色 后镜检，通过观察细菌形态和染色特征，选取符合大肠杆菌形态 特征的菌株进行生化实验。 1.2.3 生化试验 用分离出的纯培养物进行吲哚试验、枸橼酸 盐试验、MR试验、VR试验、糖发酵试验，根据观察变化记录结 果。 1.2.4 毒力实验 选取通过镜检及生化反应的大肠杆菌特性的菌 株接种营养琼脂平板，于恒温箱内37℃培养18h，将菌落制成菌悬 液。选取小白鼠公母各3只，一组每只皮下注射0.2ml菌悬液，另 一组注射相同剂量的无菌生理盐水。观察将1～2d内死亡的小鼠立 即解剖，采取其心血接种于营养琼脂培养基上，于恒温箱内37℃ 培养18h，并对分离出的菌株进一步鉴定。 1.2.5 药敏试验 将0.1ml稀释好的菌液接种到平板上，让菌液
禽霍乱病原菌的分离鉴定及药敏试验
２ 方 法
禽 霍乱 病 原 菌为 多 杀性 巴氏杆 菌 ， 一种 环 境 是
． 济 损失 。常常造 成严 重 的 经 济损 失 ， 霍 乱又 称 禽 ２ １ 从流行 病 学特点 进行鉴 定 禽
当 败血 性传染 病 ， 病发病 率死亡 率较 高 ， 此 急性 型呈 败 中广泛存 在 的条件 性 致 病 菌 ， 细菌 和 鸡体 之 间 的 细 血症剧 烈下痢 ； 慢性 型 以发 生 肉髯 水肿 和关 节 炎为 平 衡状态 被破 坏时 ， 菌 毒力 增 强 而鸡 体 抵 抗力 下 特征 ， 由于引起 禽霍 乱 的 禽 多杀 性 巴 氏杆 菌 容 易产 生 耐药性 ， 因此 在生 产 上 常造 成抗 菌药 物 治疗 效 果 不好 的情 况 。禽 霍 乱可 以各种 年 龄 的禽类 ， 性 成 但 熟后 的鸡 更 为 敏 感 ， 常 ６月 龄 以 内 的 商 品 蛋 鸡 通
学 ） 。
（ ） 验动 物 。实 验选 用 晋 中种 鸡 场 疑 似禽 霍 １试
很高 ， 曾用 多种抗 生 素 治疗 ， 效 果 均不 理 想 ， 但 应用
（） ２病料 。病死 鸡 的肝 、 、 、 等 。 脾 肾 肺
多 杀性 巴氏杆 菌疫 苗也不 能控 制该疫病 的流 行 。经
（） ３ 培养基 。鲜 血琼脂 培养基 和麦 康凯培 养基 ， 剖检 死鸡 多 只 ， 理变 化 主要表现 为心包 积液 ， 病 心冠 均按 常规方法 配制 ， 类 生化 反 应 培 养基 和 试 剂购 脂肪和心外膜有多量针尖大小出血点 ， 各 有肌 胃和腺 自广州合 华科技 有 限公 司。
有鸡霍乱并从病鸡上分离到 １ 株禽多杀性 巴氏杆菌 ， 采用纸 片扩散法和试管 稀释法分别 测定 了青 霉素钾 、 土霉 素 、 酸卡那霉素 、 酸庆 大霉素 、 硫 硫 硫酸链霉素 、 甲砜 霉素、 氟哌酸 、 环丙沙 星和恩诺 沙星等 ９ 药物对分离 菌的 种 体外抗菌活性。结果表 明分离到的禽多杀性巴氏杆 菌对 青霉 素钾和土霉 素耐药 ； 对硫酸 卡那霉素 、 硫酸庆大 霉 素、 硫酸链霉素 、 甲砜霉素 、 哌酸敏感 ； 环丙沙星 和恩诺沙星极敏感 。结合临床症状及 实验 室诊断 ， 氟 对 确诊此 次
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。
为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。
关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。
1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。
液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。
禽多杀性巴氏杆菌病病原的分离鉴定和药敏试验-最新年精选文档
禽多杀性巴氏杆菌病病原的分离鉴定和药敏试验1 巴氏杆菌属概述巴氏杆菌［1］属(Pasteurella )分类地位未定的1属，为无芽孢，不运动，兼性厌氧，菌体两端常染色浓重的革兰氏染色阴性小杆菌［2］，因1880 年巴斯德氏首先自病鸡分离到本属中的多杀巴氏杆菌而得名。
［3］该属已确定的种有多杀巴氏杆菌、嗜肺巴氏杆菌、溶血巴氏杆菌、尿巴氏杆菌和鸭疫巴氏杆菌等。
属中的多杀巴氏杆菌危害畜、禽最严重，主要引起动物发生出血性败血症。
从发病动物体液或组织中培养分离到的菌落基本有两型：一为在过45°折光，低倍显微镜下，呈现鲜明的蓝绿色而带金光，边缘有狭窄的红黄色带的Fg 菌落型，相当于血清型乙型；另一为在45°折光下，低倍显微镜下，菌落呈现橘红色、边缘稍带狭窄的黄绿光的F0菌落型，相当于血清型甲型［4］。
在中国，牛、猪、驴和马的多杀巴氏杆菌病绝大多数为Fg型菌所致，家禽流行性巴氏杆菌病都是F0型菌所致［5］。
多杀巴氏杆菌菌体抗原有12个型，荚膜抗原有5 个型，前者以阿拉伯数字表示，后者以英文大写字母表示，如1：A，2; A，1：B等，已知组成的菌型有16个。
本菌血清型与宿主的分布有一定关系，其细胞壁含有明显的内毒素活性，但未发现外毒素。
本菌可引起家禽霍乱的暴发性流行，牛的出血性败血病、原发性或继发性肺炎等，国外免疫用的菌苗以加不同佐剂的灭活菌为主，也使用禽霍乱弱毒活菌，中国已于1959年使用弱毒活苗[6] 。
2 多杀性巴氏杆菌及其危害多杀性巴氏杆菌( Pasteurella multocida ，Pro )是一种重要的病原菌，对多种动物和人均有致病性，可以导致猪肺疫、禽霍乱、牛羊兔出血性败血症等危害严重的畜禽传染病。
多杀性巴氏杆菌正常存在于多种健康动物的肺和咽喉部黏膜，当动物处于应激状态、机体抵抗力低下时，细菌侵入体内，大量繁殖并致病，发生内源性传染。
此菌类在同种或不同种动物间可相互传染，蝉和蚤被认为是自体传播的媒介昆虫[7] 。
雏鸡关节炎病原菌株分离鉴定及药敏性分析
做 两个 重 复 。把 抑 菌 圈直径 的大 小作 为 判定 药 物敏 感 性 的高 低 的 式 报告结 果 ，即敏感 、 中度敏 感和 耐药 （ 见表１ ）。
表 １具体判定标准
结 果表 明 ，对鸡 的细 菌 性疾 病 ，采 取 预 防措 施 ，对 症 下药 是 提 高 标 准 ，采用 ＷＨ Ｏ 质 控标 准 菌 的敏 感性 及 菌 环大 小 ，采用 划 分方
保定地区鸡多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
菌 落形 态 一 致 的 菌 落 ， 涂 片 ， 兰 氏 经 革
染 色 ， 检 。 染 色 特 征 上 应 为革 兰 氏 镜 在
阴性 小 杆 菌或 球 杆 菌 ，菌 体形 态也 一
发展 趋 势 ， 细 菌 来 讲 ， 现 单 一 耐 药 从 呈 到多 重 耐 药 趋 势 。 药 物 来 讲 ， 现 低 从 呈 耐 药 率 到 高 耐 药 率 的 趋 势 。 且 发 展 速 度 越 来 越 快 尤 其 是 人 类 在 畜 禽 疾 Ｉ 。 病 治 疗 过 程 中 大量 不 当 使 用抗 菌 药物
２ 察 菌 落 特 征 ， 选 典 型 菌 落 接 ４ｈ观 挑 种 到 斜 面 培 养 基 上 ， 温 保 存 ， 鉴 低 待
定。
病原 分 离鉴 定 ． 终 确 定病 原 体 为禽 多 杀性 巴 氏杆 菌 。 用 １ 种 药物 做 了药 敏 最 并 １ 试 验 ． 果 该 鸡 场 分 离的 鸡 多 杀 性 巴 氏杆 菌 除 对 恩 诺 沙 星 、 丙 沙星 两 种 药 物 结 环 敏 感 ， 氟派 酸 中介 外 。 其 余 的 ８种 抗 生 素 均 产 生 耐 药 性 。 对 对
医药 品监 察 所 。 １１ ．． 验 动 物 ： 重 ２ － ５ｇ小 白 鼠 ４实 体 ０ ２
１ 只。 ２
１２ 试 验 方 法 ．
１ ． 料 涂 片镜 检 ： 鸡 肝 脏 ， 其 ． １病 ２ 病 用 新鲜 切面在玻 片上压 印， 加 几滴 甲 滴
０ １０ ） ７ ０ １ 醇 ， 用 ２ ３ｍ ｎ 自然 干 燥 。 后 分 作 — ｉ， 然
关 键 词 多杀性巴氏杆菌
分 离鉴定
药敏试验
鸡
１ Ｉ 离 菌 的 生 化 鉴 定 ：１ 分 离 菌 ． ３分 ２ （） 的纯 度 检 验：分 离培 养 物 在 进 行 生 化 鉴 定 之 前 ， 检 查 培 养 物 的 纯 度 。 将 要
鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验
试验研究空鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验乜英青（青海省贵德县农畜产品质量检验检测中心811799）摘要：本文对青海省贵德县鸡沙门氏菌的流行及耐药情况、最佳治疗和预防效果进行分析。
试验对该地部分鸡场病死鸡只进行细菌分离，用革兰氏染色、三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验进行菌株鉴定，并进行14种药物敏感性试验。
结果：试验成功分离到6株禽沙门氏菌，革兰氏染色均为红色，三糖铁试验和赖氨酸脱羧酶试验结果均为阳性，尿素酶试验和靛基质（吲哚）试验结果均为阴性。
药敏性试验结果显示，该地区禽场沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的敏感率超80%,属高度敏感，而对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐药性。
结论：禽沙门氏菌对鸡群的危害较大，鸡场需要定期进行沙门氏菌的药敏性试验才能更好地了解菌株耐药性，为合理选择抗菌药物和防治沙门氏菌感染提供参考依据遥关键词：禽沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验沙门氏菌为肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物肠道内，是一种人畜共患性致病菌，严重威胁食品安全，国际兽疫局将其定为B类传染病。
鸡群感染沙门氏菌后可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒等疾病，且可通过垂直感染影响产蛋率和雏鸡存活率。
随着我国养鸡业的现代化和规模化发展，鸡群免疫力逐步下降，依赖疫苗免疫或抗生素药物来防治，虽然抗生素能有效控制禽沙门氏菌，但由于药物使用不当造成菌株耐药性越来越严重。
本文对贵德县青源土鸡养殖场沙门氏菌进行分离鉴定，并对分离到的菌株进行多种药物的敏感性试验，为当地鸡场抗菌药物的合理使用提供依据。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，三糖铁琼脂，尿素酶生化鉴定管，蛋白胨水培养基，赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管均购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
1.1.2病料来源试验所用菌株来自贵德县青源土鸡养殖场所饲养的病死鸡，取其病料组织分离菌株共6株。
鸡大肠杆菌病病原菌的分离鉴定及耐药性分析研究
鸡大肠杆菌病病原菌的分离鉴定及耐药性分析研究对发病鸡病料进行大肠杆菌病原菌的采集分离鉴定，并进行动物试验及药敏试验。
结果表明，该菌为革兰氏阴性短小杆菌，为致病性大肠杆菌;药敏试验显示沙拉噤吹对该菌全部敏感，对痢特灵、利福平、氛派酸、头抱噢味和卡那霉素庆大霉素部分敏感，其他抗菌药物完全没有抑制效果。
标签：鸡大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型菌株所引起的-类传染病的总称。
它是条件性致病菌，只有-些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，该病的临诊病型复杂多样，包括大肠埃希氏菌性败血症、气囊炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、关节炎、挤炎、眼炎、肠炎、脑病、肿头综合征等许多病型。
该病常易成为其他疾病的并发病或继发病，各种应激特别是环境卫生及饲养管理条件不良，均可加剧该病的发生。
大最抗生素长期使用和滥用，导致耐药菌珠的出现，使药物的控制难度越来越大，同时药物的残留也直接影响到蛋、肉鸡食品的安全。
鸡大肠杆菌病给养鸡业的发展带来了巨大的经济损失。
能否有效防治鸡大肠杆菌病，已成为决定养鸡业成败的关键问题。
因此本试验通过对发病鸡进行大肠杆菌的分离鉴定、药敏试验和动物试验，为该病的有效防治提供依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1药品与试剂药敏试纸、普通肉汤培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基、草酸按结品紫、革兰氏稹液、石炭酸复红染液，革兰氏染色剂均由河南科技学院临床兽医学实验室提供;硫化氢、葡萄糖蛋白陈水、蛋白脉水、庶糖、尿素、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、拧檬酸盐、棉子糖、山梨醇和甘露醇12种细菌微量生化反应管，购自杭州天河微生物试剂有限公司。
1.1.2仪器设备HG1Ol-2型电热鼓风干燥箱，南京实验仪厂;HH？B11型电热恒温培养箱，厦门建红医疗器械厂;OLYMPWS-CH型显微镜。
1.1.3病料来源由河南科技学院兽医院提供的初步确诊为大肠杆菌病病鸡4家病料。
主要表现为急性败血症型、心包炎、输卵管腹膜炎、肝周炎、肠炎和气囊炎6等种病型。
滨州地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
杭州天和微生物试剂有限公司。 １ ． 药敏试 纸 红霉 素、环 丙沙星 、青霉 素、氟苯尼 ．３ １
考 、 链 霉 素 、 庆 大 霉 素 、 氟 呱 酸 、 丁 胺 卡 那 霉 素 、 强 力 霉 素 、 新 霉 素 等 １ 种 药 敏 试 纸 片 购 自杭 州 天 和 微 生 物 试 ０
后 对 可 疑 菌 株 再进 行操 作 。 １ ＿ 染 色镜 检 ．３ ２ 按 常规 步 骤 进 行 染 色 。 取 病 料 无 菌 接 种
１１ 培养基 ．． ２
营 养琼 脂、营养 肉汤 、麦 康凯琼 脂均购
１ － 病原 菌的分 离纯化及 生化试验 ．４ ２
于 上海 伯 奥 生 物 科 技 有 限 公 司 。 微 量 生 化 发 酵 管 ， 购 于
血琼脂平板 的制备 ：按常 规法（ 谢
死 亡 鸡 的 心 、肝 中 回 收接 种 菌 。
正 肠 等 ， １９ ） ￣ ，加 入 ５ ９ ４￥ 备 ％的 绵 羊 血 ，冷 却 后 置 于４Ｃ ＂
’ ： 一 ： 一 １ ．Ｐ ： ： ：’；’： ： ’ Ｔ
１ ． 分 离茵的血清型鉴 定 （ ）抗原 的制 备。将纯培 ．６ ２ １
１ ． 细菌分 离鉴定 ．２ ２
选择 疑似大肠 杆菌病 死鸡 的病 料
１１１ 病料来 源 病 料来源 于滨州 地区各养 殖场 及养殖 ．． 户送检 的病 、死鸡 ，临床剖 检有典 型心包 炎 、肝 周炎 、 气囊炎或卵黄性腹膜 炎，疑似 为大肠杆菌病 。
接种 于普通 营养 琼脂平板 上 ，经 过３ ￣ 养 １ ４ ，然 ７Ｃ培 ６ ２ｈ
冰箱 中备用 。营养琼 脂平板和 麦康凯 琼脂平板 的制备 ：
按 常 规 法 （ 正 肠 等 ，１９ ） ￣ ， 冷却 后 于 ３ 谢 ９ ４￥ 备 ７Ｃ温 箱 培 养
鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析
表 ５用 药前 后 死 淘情 况 表 ４判 定 标 准
注： Ｒ： 耐药， Ｉ ： 中敏 ， ｓ ： 敏 感
３ ６
下降 （ 表５ ） ， 治疗 结果 明显 。
４讨 论
４ ． １随着 养殖 设 备 的更新 换代 ． 饲 养 技术 的提 高， 饲 养密 度也 越来 越 大 ． 这对 鸡 舍 环境 和 生 物安
表 ２疑 似 沙 门 氏 杆 菌 的 生 化试 验结 果
序号 生化项 目 反 应 结 果
高
酸 盐试 验 、靛基 质 试验 、 ＭＲ试 验 、 Ｖ Ｐ试 验等 生化 试验 。 均符 合大肠 杆 菌 的生化 特性 （ 见表 １ ） 。
２ ． ３ ． ２挑取 疑似 沙 门 氏杆 菌 的细菌 分 别做 色氨 全要 求 越来 越 高 ． 否则 鸡 群极 容 易发 生 细 菌感 染 ．
造成 损失 ４ ． ２近 年 来 ． 为 了 防治 某 些 细 菌 感 染 ． 在 饲 料
以上 出现 心包 炎 、 肝周 炎 。 肠 黏膜 脱 落 。 其他 无 明显 病变。 初 步 诊断 为大 肠杆 菌 、 沙 门氏菌 感染 ， 取 四 只 死鸡 送 至实 验室 进行 检测 １ ． １ ． ２材 料 准备 麦 康 凯培 养 基 ， 自制 药敏 片 ． 解剖刀 ， 解剖剪 ， 镊子 ， 显 微镜 ， 细 菌生 化反 应管 ， ３ ７ ℃温箱 。
２ ． ３ 生 化 试 验
表 １鉴 定疑 似 大 肠杆 菌 生化 试 验 结 果
序 号 生化项 目 反 应 结 果
１ ． ２ ． １ 细 菌 分离 培养
将 送 检 的 ４只 死鸡 进行 剖 检 ． 取肝 脏 无菌 接 种 到麦康 凯 培养 基上 ． 经过 ３ ７ ℃培养 ２ ４小时 。
鸡源性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
山东畜牧兽医
２１ 年第 ３ 卷 ０１ ２
无角陶赛特 杂交藏 系羊 பைடு நூலகம்效果分析
岳 炳 辉 张 丽 （ 青海畜牧兽 医职业技术学院 湟源 ８２０ ） １１０
摘要 本研究通过２ 个试验测定无 角陶赛特 与藏 系羊 杂交的效果。结果表明 ，在放牧条件下 陶藏Ｆ初生重３ １ｇ １ ． ｋ ，较 ６
一
１ 生 化试 验 取 待检 菌 纯培 养 物分 别 接种 在 蛋 白胨 ． ２ 水 、缓 冲 蛋 白胨 水 、枸 橼 酸 盐 、 葡萄 糖 、乳 糖 、麦 芽 糖 、甘 露醇 、蔗 糖 、尿素 琼脂 、三糖铁 琼脂 、半 固体琼 脂 培 养 基 上 ，置 ３ ＂ ７Ｃ恒温 箱 中 ，培 养 １ ￣ ４ ，观 察 结 ８２ｈ
引起 的大肠 杆菌病 。大肠 杆菌病 型 复杂 。病原与 某些血 清型 有关 ，不 同的部位可 分离 到不 同血清 型的菌 株 ，而
２ 结果与分析 ２１ 细菌 的分 离培养 与鉴定结 果 ． 在 营养琼脂平 板上经
过３ ＂ ７Ｃ培养 １～ ４ ，革兰 氏染色 后 ，镜 下可 见大量 散在 ８２ｈ
的红色、 中等大小 、两端钝 圆的无芽孢直杆菌【。初步断 ４ 】 定为 大肠杆 菌 。分 离菌株 生化 实验结 果显示 ：能发 酵葡 萄糖 、乳 糖 、麦 芽 糖 、甘 露醇 ，产酸 。尿 素 酶试 验 阴
性，不产生Ｈ２ ，有鞭毛 ，能运动 。生化 实验 结果表 明， Ｓ
不 同的血清 型菌株 可 引起 不 同的症状 ，且 易与慢 性呼 吸 道病 、新城 疫、传 染性支 气管 炎 、传 染性法 氏囊病 、葡
不敏 感。 关键 词 鸡 致 病Ｉ 大肠杆 菌病 ｉ 生 药敏试验 文献标 识码 ：Ａ 文章编号：１０ —７ ３２ １）７０ ０ ．２ ０ ７１ ３ （０ １０ ．０ ９０ 养基 上 ，同 时等 距离 放置若 干种 药敏片 。置恒温 箱 中培
毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验
毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验河南科技学院2013届本科毕业论文（设计）鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验学生姓名：时科所在院（系）：动物科学学院所学专业：动物医学导师姓名：常新耀完成时间：2013年5月鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验摘要鸡大肠杆菌感染是危害养鸡业的主要细菌性传染病，无菌采取南阳市唐河县某鸡场中疑似大肠杆菌病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，通过结合综合流行病学、临床学、病理学、生物化学和传染病学，进行分离与鉴定，最终确诊为鸡大肠杆菌病。
从部分养鸡场分离出的细菌进行药敏试验，通过药敏试验筛选出敏感药物，为治疗与预防提供理论依据和实际应用参数。
关键词：大肠杆菌，分离，鉴定，药敏试验The Separation,Identification And Antimicrobial SusceptibilityTest Of Chicken ColibacillosisAbstractChicken colibacillosis infection is the major infectious diseases in poultry industry. Sterilely resorting to visceral organs, such as livers ,spleens, lungs of illness, chicklings that are suspected colibacillosis of each large chicken places in Shanxian,by the means of combing with epidemiology,clinical, pathology, biochemistry and epidemiology,we can separate and identificate to diagnose whether it is colibacillosis or not. By the means of form dyeing and Biochemical tests and then antimicrobial susceptibility test on bacterium that is separated from part chicken places,we can screen some Sensitive drugs and find more effective proprietary to Provide theoretical basis and practical parameters of treatment and prevention.Key words: Colibacillosis，Separation，Identification，Antimicrobial Susceptibility Test目录前言 01 材料与方法 01.1 材料 0病料来源 0仪器及设备 0培养基与试剂 0试验动物 (1)1.2试验方法1病理剖检 (1)大肠杆菌的分离鉴定 (1)病料采集 (1)分离培养 (1)镜检 (2)生化鉴定 (2)致病性试验 (2)药敏试验 (2)2结果与分析 (2)2.1病理剖检 (2)2.2大肠杆菌的分离培养 (3)2.3形态学观察 (3)2.4生化鉴定 (4)2.5致病性试验 (5)2.6药敏试验 (5)3讨论 (6)3.1注意种蛋卫生 (7)3.2加强卫生管理 (7)3.3适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵抗力 (7)3.4免疫预防接种 (7)4结论 (8)参考文献 (8)致谢 (10)前言鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株引起的一类疾病的总称[1]。
葫芦岛地区鸡大肠杆菌分离鉴定及药物敏感性试验
１ 材 料 和方 法
２１ 形 态及染 色特征 ．
效率为 ｌＬｈ ｍ ， Ｏ ／・ 将该结果放大 到 Ｇ Ｐ车间生产 中 ， Ｍ 如果引
进 １ｍ 的大型设备 ， ０ 则预期浓缩能力为 １０ ／ ， ０ Ｌｈ 这对于琼扩 抗原的生产来说 ， 浓缩能力是足够大 的。而传统的浓缩方法 需要过夜处 理 ， 二者的生产效率一 目了然。
３２ 效价 检测 ． 从 检 测 结 果 可 知 ， 缩样 品 比浓 缩 前 样 品 的 浓
露 醇 ，对 蔗 糖 的 发 酵 因 菌株 而 异 ，吲 哚 试 验 、 Ｒ 试 验 阳 性 ， Ｍ
１１ 试验 材料 ．
１１ 病 ．１ ．
料
病料采 自葫芦岛地 区（ 高桥 、 昌 、 建 葫芦 岛、
兴城 、 中） 绥 部分鸡场 中临床症状 和病 理剖检初步诊 断为大 肠杆菌病 ， 死时间冬 季不超过 ２ ｈ 夏季不超过 ４ ， 病 ４， ｈ 或濒死 鸡的肝脏 、 心血 、 、 脾 气囊等 。 １ ． 药敏纸片 ．２ １
器 械 有 限公 司 。
１ ． 试验 方 法 ２
Ｖ Ｐ试验 、 柠檬酸盐试验 阴性 ， 不产生 Ｈ：。 Ｓ 符合大肠 杆菌的生
化 特征 。 ２４ 药幸 验 ．
标准药敏纸片 ｌ ，购 自北京宝特 医疗 ２种
药敏试验结果表 明葫 芦岛地 区大肠杆菌对 头孢菌素 、 左 以无菌操作的方法 ， 采取病死鸡 的
１ ． 病原的分离培养 ．１ ２
肉鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
上 皮 性 器 官 。是 血 清抗 体 生 成 系统 细 胞 生 长 和 分 化 的 部 位 。 微 生 态 制 剂 中 的乳 酸 菌 、双 歧 杆 菌 和 芽 孢 杆 菌 等 益 生 菌 在 发 酵 过 程 中 能 够 产 生 具 有 免 疫 活 性 成 分 的 物 质 ．促 进 免 疫 器 官 的 分化 、 发 育 和 成熟 ［ ６ － ９ １ 。 本 研 究 表 明使 用 微 生 态 制 剂 在 一 定 程 度 上 能 提 高 肉鸡 免疫 器 官 （ 脾脏 、 法氏囊） 的生长发育。
下 降 ．给 养 鸡 业 造 成 了严 重 的 经 济 损 失， 同时 ， 抗 菌 药 物 在 畜 禽 体 内 的残 留 给养 禽 业 的持 续 发 展 和人 类 的 身体 健 康 带 来 潜在 危 害… ２ １ 。 因此 ， 分 离 鉴 定 鸡 大 肠 杆 菌 血 清 型 及 耐 药性 现 状 ， 以
中 图分 类号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ３ １ 文献 标 志 码 ： Ａ
文 章 编号 ： １ ０ ０ ８ — ０ ４ １ ４ （ ２ ０ １ ３ ） １ ２ － ４ ３ ０ ２ ０ — ０ ３
摘 要 从 大同市周边几个肉鸡场疑似大肠杆 菌病死鸡的心血 、 肝脏 、 肾脏 进
行 病原茵的分离． 鉴 定， 生化 试 验 、 动 物 试 验 和 药敏 试 验 。 结 果 显 示 ， Ｉ 起 这 些 鸡 场 发
量 生 化 反 应 管 均 购 于 杭 州 天 和 微 生 物
标 和 免 疫 功 能 的 影 响 ．动 物 营 养 学பைடு நூலகம் ， ２ ０ １ ２
（ ２） ： ３ ３ ４— ３ ４１ ．
季 均有 发 生 ． 没有明确的季节性 ， 尤 其 冬 季 和春 季 多发 ．该 病症 状 一般 均 呈
鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
性 以 及 预 防 机 制 ，以便 获 得 更 好 的 临 床应 用 效 果 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料
１ ． １ ． １ 病料 来 源
所 有 病 料 均 来 自于 临 朐 县 畜 牧 局 检 测 中心 门诊 日常 诊 断
将 获 得 的 致 病 菌 株 菌 液 均 匀 涂 抹 于 营 养 琼 脂 平 板 ．每 菌
取 伊 红 美蓝 琼 脂 平 板 上 紫 黑 色 带 金 属 光 泽 的 单 个 菌 落 涂 片 ，革 兰 氏染 色 镜 检 ，观 察记 录菌 体 形 态 和 染 色 特 征 。
１ ． ２ － ３ 生 化 鉴 定
取 微 量 生化 管 及 各 种 生 化 培 养 基 ．将 分 离 菌 纯 培 养 物 的 菌 种 接 人后 封 口 ，置 于 ３ ７ ℃培 养 箱 中 培 养 １ ８ ～ ２ ４小 时 ， 观察
组 ６只 颈 部 皮 下 注 射 灭 菌 肉 汤 。 及 时 剖 检 死 亡 鸡 ， 分 离 细 菌 。判 定 标 准 ：能 使 试 验 鸡 在 ２ ４小 时 内 全 部 死 亡 或 在 ４ ８小 时 内死 亡 ２ ／ ３以上 的菌 株 作 为 致 病菌 株 。
１ ． ２ ． ５ 药 敏 试 验
株 ２板 ，然 后 将 药 敏 纸 片 平 均 分布 ，３ ７ ℃培 养 ２ ４小 时 。
２ 结 果 与 分 析 ２ ． １ 大肠 步 确 诊 为 大 肠 杆 菌 病 的 病 鸡 ６ ８只 ， 其 中 肉 仔 鸡 、
蛋雏鸡 ４ １ 只 ，育 成鸡 ２ ７只 。 １ ． １ ． ２ 培 养 基 与试 剂
光 学 显 微 镜 、恒 温 箱 、高 压 灭 菌 器 、无 菌 实 验 台 、微 量
一起蛋鸡大肠杆菌感染的分离鉴定与药敏分析
2020年第8期（总第277期） 疾病防治31一起蛋鸡大肠杆菌感染的分离鉴定与药敏分析李玉杰 邢林林 陈 静* 姜秀云 徐 鸿 徐 聪（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南 250000）中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1007-1733(2020)08-0031-02 2020年3月13日，山东省德州市某规模化蛋鸡场出现病鸡，表现为精神不振、食欲不佳、呼吸困难，后又出现腹泻，饮水量增加等症状，出现死亡。
通过病理解剖，结合实验室检测，鉴定出该养殖场感染病原菌为大肠杆菌，根据药敏结果对于该养殖场进行科学用药指导，并且药敏结果显示该大肠杆菌已表现为耐药。
禽大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌所引起的细菌性疾病，这是一种急性且主要是系统性疾病，在全球范围内给家禽业造成了巨大的经济损失。
禽大肠杆菌病是一种复杂的综合症，其特征是多器官损伤伴有气囊炎和相关的心包炎，最典型的是肝炎和腹膜炎[1]。
实验性感染研究表明，在感染初期，肺部和气囊的空气交换区域是大肠杆菌进入禽类血液的重要部位[2]。
禽大肠杆菌病可通过多种方式进行传播，极易引起鸡大肠杆菌感染。
本病最主要的传播途径是口和呼吸道，由呼吸系统进入血液循坏，引发全身反应，或通过蛋裂隙使胚胎发生感染。
大肠杆菌感染是禽类中最常见的细菌性疾病，而抗菌药物是降低发病率和死亡率的主要手段。
但是，滥用抗生素可能会导致治疗失败并给养殖者造成经济损失，因此，进行药敏试验是科学的使用抗生素的方式。
1 材料与方法1.1 试验材料 荧光定量PCR 仪、禽流感病毒荧光定量PCR 试剂盒、新城疫病毒荧光定量PCR 试剂盒、鸡传染性支气管炎病毒荧光定量PCR 试剂盒、革兰氏染色液、梅里埃生化及药敏仪。
1.2 临床症状 2020年3月13日，山东德州某规模化养殖场出现发病情况，整体采食量下降，病鸡精神不振、食欲不佳、呼吸困难，后又出现腹泻，饮水量增加等症状，发病1周，每天死亡10~ 15只，使用5d 阿莫西林+黄芪多糖，效果不明显。
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鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析
作者：陈巨清，杨振燕
来源：《兽医导刊》 2016年第7期
陈巨清/ 石家庄市牧工商杨振燕/ 河北蔚县农牧局
大肠杆菌病和沙门氏菌病，是目前危害养鸡业最常见的细菌性疫病。
大肠杆菌和沙门氏菌
混合感染是目前禽病流行中的主要趋势，一旦感染死亡率较高，从而引起更为严重的经济损失。
两种细菌血清型种类较多，不同地区差别较大，不同菌株之间不产生交叉保护作用，极易产生
耐药性。
本文针对山东省某一养殖户发病鸡群，根据临床症状和剖检病变初步诊断为大肠杆菌
和沙门氏菌感染，为了进一步确诊送检病料至实验室检测。
一、材料与方法
（一）材料
1. 病料来源。
山东某养殖户鸡群23 日龄，出现死淘增加，日死淘1‰～2‰，鸡群有部
分鸡出现羽毛蓬松，精神不振，拉白色稀粪。
剖检死鸡80% 以上出现心包炎、肝周炎，肠黏膜
脱落，其它无明显病变。
初步诊断为大肠杆菌、沙门氏菌感染，取四只死鸡送至实验室进行检测。
2. 材料。
麦康凯培养基，自制药敏片，解剖刀，解剖剪，镊子，显微镜，细菌生化反应管，37℃温箱。
（二）方法
1. 细菌分离培养。
将送检的只死鸡进行剖检，取肝脏无菌接种到麦康凯培养基上，经过37℃培养24 h。
2. 细菌形态学观察。
取在麦康凯培养基上培养24 h 可疑菌落，抹片，进行革兰氏染色镜检。
3. 生化试验。
挑取疑似大肠杆菌和沙门氏菌菌落经过纯化培养后，用细菌生化反应管进行生化鉴定。
4. 药敏试验。
将10% 氨苄西林钠、5% 恩诺沙星、5% 阿莫西林、10% 强力霉素、10% 氟
苯尼考、10%粘杆菌素、硫酸头孢噻呋钠、10% 林可霉素8 种抗生素制成药敏片，将被检细菌
涂布接种于普通琼脂平板上，间隔一定距离贴上各种药敏片，于37℃温箱培养24 h，结果判断依据《纸片法抗菌药物敏感试验操作标准( 第四版)》进行。
二、结果
（一）细菌分离培养
麦康凯培养基上1#、2#、3#、4# 均长出米粒大小，桃红色菌落及淡橘黄色菌落（见图1）。
（二）细菌形态学观察
挑取可疑菌落革兰氏染色，400倍镜检，可见G- 中等杆菌，疑似大肠杆菌（见图2），G- 短杆菌，疑似沙门氏菌（见图3）。
（三）生化试验
1. 挑取疑似大肠杆菌的细菌分别做枸橼酸盐试验、靛基质试验、MR 试验、VP 试等生化试验，均符合大肠杆菌的生化特性（见表1）。
2. 挑取疑似沙门氏杆菌的细菌分别做色氨酸肉汤、赖氨酸、氨基酸对照、尿素、氰化钾、氰化钾对照、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、ONPG 等生化试验，均符合沙门氏杆菌的生化特性（见表2）。
（四）药敏试验
药敏试验表明：分离出的大肠杆菌、沙门氏菌对恩诺沙星、头孢噻呋敏感，对氨苄西林钠、粘杆菌素中敏，其它低敏或耐药。
见表3，表4。
三、方案制定及效果
方案：10% 氨苄西林钠1 g 兑水1.5 L 水，配合10% 粘杆菌素1 g兑水1.5 L 水，连用
四天。
效果：连用四天后，粪便明显好转（见图4，图5），死淘也有所下降（表5），治疗结果
明显。
四、讨论
1. 随着养殖设备的更新换代，饲养技术的提高，饲养密度也越来越大，这对鸡舍环境和生物安全要求越来越高，否则鸡群极容易发生细菌感染，造成损失。
2. 近年来，为了防治某些细菌感染，在饲料和治疗中常盲目使用一些抗菌药物，以致产生许多耐药菌株。
大肠杆菌和沙门氏菌易产生对抗生素的耐受性，而且多重耐药现象严重。
因此，有条件的应做药敏试验，根据药敏试验结果选择敏感药物。
3. 从药敏试验结果可以看出该鸡群对很多药物产生耐药性，恩诺沙星敏感，但目前屠宰企业已将氟喹诺酮类列为禁用药，所以该病例不能使用恩诺沙星。
头孢噻呋钠也是敏感药物，但
是鸡群23 日龄，使用成本较高，因此选择10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素配伍使用。
4.10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素配伍使用，从鸡只死淘情况以及粪便改善情况来看取得较好效果，10% 氨苄西林钠与10% 粘杆菌素在鸡上的休药期是7 d，不会造成药物残留，且成本不高。