总抗氧化能力测定(FRAP法)

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小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）

一、实验原理

FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-

tri-pyridyl-tria-zine（Fe 3+-TPTZ）产生蓝色的 Fe2+-TPTZ,随后在 593nm测定蓝

色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10側，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样

品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

Antioxidant

Fe3+-TPTZ （橘黄色）---------- >Fe2+-TPTZ （蓝色）

二、实验步骤

1. FRAPT作液配制：

0.3 M pH 3.6醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL 用1M HCl

调节pH至3.6 ;

10mmol/L TPTZ溶液25mL 0.078g TPTZ 用40mM盐酸溶液定容至25mL 20mmol/L FeCl

3溶液 50mL 2.78g 用 RO水定容至 50mL

上述溶液以 10:1:1 的比例混合（现配现用）。

2. 取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取 1.5mL 12000g离心10min

（4°C）,取上清液。

3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37°C条件下水浴10min, 于593nm

处测定吸光度，

4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSQ的标准液替代样品绘制标准曲线。

三、结果计算

以1.0mmol/L的FeSQ为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP fi，

计算结果。

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2.8.2. Ferric Reducing/Antioxidant Power (FRAP) assay

Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L_1

TPTZ solution in 40 mM L1HCI plus 2.5 mL 20 mM L1 FeCI^ and 25 mL 0+3 M L1acetate buffer, pH 3*6 was prepared freshly and warmed at 37°C・After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incubation at 37°Cfor 5 min, absorbance of the reaction mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4based on the standard curve for FeSO4 x 7H.0 at a concentration range between 100 and 1000 pM L_1 [3 口

[1] Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a

Measure of “ntioxidant Power”： The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.

[2] Katarz yna Szafra nska, Rafa? Szewczyk, Kryst yna Maria Jan as. In volveme nt of

melat onin applied to Vig na radiata, L. seeds in pla nt resp onse to chilli ng stress[J].

Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.

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