食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌

观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分
解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色
的混浊带。
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产气荚膜梭菌的检验
菌数计算 根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，
计算每克（毫升）食品检样的含菌数。
例如：10-4稀释液的平板长有黑色菌落100个， 而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为
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产气荚膜梭菌纯培养的镜下形态 医电学镜ppt 下的产气荚膜梭菌（C.perfringens）5
产气荚膜梭菌的生物学性状
2.培养特性 生长活跃，代谢迅速。 血琼脂平板：双层溶血环（靶形溶血）
内环完全溶血 外环不完全溶血 含铁牛奶培养基： “汹涌发酵” （stormy fermentation）
2.食物中毒 食入被大量细菌污染的食物（肉类） 临床表现：剧烈腹绞痛、腹泻；可自愈
3.坏死性肠炎
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三、产气荚膜梭菌的流行病学
在世界各地出现，但血清型分布不同。 可以引起地区性流行，也有散发性报道。 中毒最常发生于儿童和老人。 多发生在夏、秋季。
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四、产气荚膜梭菌的检验
设备和材料
冰箱：0 ℃-4℃。 恒温培养箱：36℃士1℃ 恒温水浴锅：46℃士1℃ 显微镜：10×～100 × 均质器或灭菌乳钵
厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式
灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度），10mL（具0.1mL刻度） 灭菌试管：16mmX160mm 灭菌平皿：直径90mm 灭菌锥形瓶：500mL
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产气荚膜梭菌的检验
培养基和试剂
1.疱肉培养基：GB/T4789.28-2003中4.67 2.亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺嘧啶琼脂(SPS) ：
GB/T4789.28--2003中4.69 3.液体硫乙醇酸盐培养基(FT) ： GB/T4789.28-2003中4.70 4.动力一硝酸盐培养基：GB/T4789.28-2003中4.72 5.含铁牛奶培养基：GB/T4789.28-2003中4.71 6.卵黄琼脂培养基：GB/T4789.28-2003中4.68 7. 0.1％蛋白陈水：GB/T4789.28-2003中4.85 8.硝酸盐还原试剂：GB/T4789.28-2003中3.17 9.革兰氏染色液：GB/T4789.28-2003中2.2
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六、产气荚膜梭菌的污染及控制
掌握产气荚膜梭菌血清型在我国地区流行的 分布以及在不同动物的感染致病情况是采取预 防控制措施的前提。
防治原则 及时清创，破坏和消除厌氧微环境 食物加热彻底
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多种外毒素、肠毒素； 侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质
酸酶和胶原酶等。
分成A、B、C、D、E5个毒素型。 A型主要引起气性坏疽和食物中毒。C型则
引起坏死性肠炎。
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9所致疾病Fra bibliotek1.气性坏疽 致病条件与破伤风梭菌相同
潜伏期短，发病迅速，病情险恶，死亡率高。 以组织坏死、气肿和全身中毒为特征。
产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含 产气荚膜梭菌数为：
100X0.7X104＝7X105
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五、产气荚膜梭菌快速检测方法
随着产气荚膜梭菌分子生物学研究的深入， 该菌的毒素基因相继被克隆测序，在此基础上 出现了许多鉴定菌型和判断致病性的方法。
缩短了时间，能够较快得到结果，操作简单 比如PCR、LAMP等。
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确证实验
3.取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基， 46℃水浴中培养2h，观察有无“暴烈发酵”现象， 5h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固 酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基 不变黑。
4.用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平
板至少可接种10点），于36℃士1℃厌氧培养24h，
食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验
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Introduction
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏
氏梭菌(C．welchii)，为厌氧芽孢杆菌属成员。
广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠 道之中。
条件致病菌，主要引起人的食物中毒、气性坏 疽和动物猝死症等疾病。毒性作用较肉毒梭菌 和破伤风梭菌要弱， 但产生毒素种类繁多。
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血琼脂平板上的菌落形态
含铁牛奶中的产气荚膜梭菌
疱肉培养基中的产气荚膜梭菌
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产气荚膜梭菌的生物学性状
3.生化特性 能发酵多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和
乳糖，产酸产气； 不发酵甘露糖或水杨酸。 能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的
蛋白质和血清。
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二、产气荚膜梭菌的致病性
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Contents
产气荚膜梭菌的生物学性状 产气荚膜梭菌的致病性 产气荚膜梭菌的流行病学 产气荚膜梭菌的检验 产气荚膜梭菌的快速检测方法 产气荚膜梭菌的污染及控制
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一、产气荚膜梭菌的生物学性状
1.形态与染色
革兰氏阳性粗大杆菌，专性厌氧。 无鞭毛，体内有明显荚膜。 芽孢椭圆形，不大于菌体，位于次极端。 单独或成双排列，有时也呈短链排列。
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产气荚膜梭菌的检验
活菌计数培养检验程序
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产气荚膜梭菌的检验
确证试验检验程序
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确证实验
1.革兰氏染色镜检：产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大 杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或 近末端，其宽度一般不大于菌体。
2.动力-硝酸盐还原实验
用接种环（针）穿刺接种动力一硝酸盐培养基，于 36℃士1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断 有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各 0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动 力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。