第二章 试管苗快速繁殖.

②蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。 ③激素和有机添加物有明显影响。但激素
浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。
培养条件
①光强：1000－3000lx；光照时间：16h。
②温度：25℃左右
③ 昼夜温差有或无，以植物或培养过程来定 ④ 干燥季节注意保湿。
2.2.3 茎段的培养
2.2.3.1 材料选择与处理

嫩枝去叶，剪3-4cm长 水冲洗1-3h,75%酒精30-60s， 0.1% 升汞3-8min(饱和漂白粉液10-20min，

无菌水冲洗数次。
2.2.3.2 接种与培养
培养基：MS
腋芽增殖效果 ：BA KT、ZT，生长素改
善苗生长，GA促芽伸长。注意激素配比。
继代增殖途径：促腋芽快速生长；诱导形
③75%酒精迅速漂洗30s ④0.1%升汞或稀释20倍的次氯酸钠液消毒 5-8min(取自老枝条上的可适当延长时间）
2.2.2.3 接种
接前可再剥去一些 叶片。然后随切随 接，动作迅速。亦 可将切下茎尖材料 在1-5% VC液中浸一 下。
2.2.2.4 培养
培养基
①基本培养基：MS、White、B5、Heller。
2.3.2.2 影响试管苗生根的因素
植物材料
基本培养基
Байду номын сангаас
植物生长调节剂
培养条件 其它物质
2.4 试管苗的驯化与移载
试管苗生态环境与自然环境的差异
试管苗的特点
试管苗的驯化
试管苗的移栽
2.4.1 试管苗的特点 2.4.1.1试管苗的生态环境
（1）高温且恒温 （2）高湿 （3）弱光 （4）无菌
第2章 植物快速繁殖技术
2.1 试管苗快速繁殖意义和一般程序
2.1.1 试管苗快速繁殖意义
试管苗快速繁殖，是指利用植物组织培 养技术对外植体进行离体培养，使其短期 内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。 试管苗快速繁殖是植物组织培养技术在 农业生产中应用最广泛、产生经济效益最 大的研究领域，涉及的植物种类繁多，技 术日益成熟并程序化。
2.2.4.4 植株再生途径

直接产生不定芽
形成愈伤组织


形成胚状体
其他途径
2.3 壮苗和生根培养
2.3.1 试管苗的壮苗培养
较高浓度的生长素与较低浓度的细胞分裂 素组合有利于形成壮苗. 在生产实际中，增殖系数控制在 3.0-5.0时 可实现增殖和壮苗的双重目的。另外，改善 培养室环境条件，如增加光照强度、降低湿
2.2.2 茎尖培养
概念：切取茎的先端或茎尖分生组织进
行无菌培养。
意义：微茎尖培养可获得脱毒苗；茎尖
培养技术简单，操作方便，易成活，成
苗时间短，加快繁殖。
茎尖培养的类型
类型：根据培养目的和取材大小分为： 微茎尖培养;普通茎尖培养
普通茎尖指几毫米到几 十毫米的芽尖及侧芽。
微茎尖为0.3-0.5mm
成不定芽。
2.2.3 叶的培养
1.成苗途径与意义 2.材料选择与消毒 3.接种 4.培养
2.2.3.1 材料选择与灭菌

幼嫩叶片流水冲洗 70-75%酒精漂洗10s 饱和漂白粉液浸3-15min（或在0.1%升汞 液5-8min） 无菌水冲洗多次后，用无菌滤纸吸干水分

2.2.3.2 接种
2.1.2 试管苗快速繁殖的一般程序
一般选择根、茎、叶器官为培
养材料进行培养、壮苗与生根培养、
试管苗驯化与移栽几个环节。
2.2 器官培养
2.2.1 根的培养
①研究根系生理代谢的优良实验体系
②研究营养吸收、生长和代谢的变化规律
③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种
2.2.1.1 根无性繁殖性的建立
度等对培养壮苗也有一定帮助。
2.3.2 试管苗的生根培养
生根培养基：1／2或1／4MS基本培养
基；不加或少加CTK，适量添加NAA； 糖浓度1-1.5%。
培养条件：增加光强，达3000-
10000lx。
2.3.2.1 生根方法与途径

将新梢基部浸入50 ppm或100 ppm IBA溶液中处 理 4-8h； 在含有生长素的培养基中培养 4-6d 直接移入含有生长素的生根培养基中。 容易生根的植物，延长在增殖培养基中的培养 时间即可生根； 适当降低增殖倍率，减少细胞分裂素的用量， 即可增殖又可生根； 对易生根植物，切割粗壮的嫩枝用生长素溶液 浸醮处理后在营养钵中直接生根，此方法省去 了生根阶段，但只适于一些容易生根的植物。
接后1周 侧根
无菌种子
1.2cm
反复转接
根 无 性 繁 殖 系
2.2.1.2 培养
多为无机离子浓度低的怀特培养基。也可用2 ／3 MS或1／2MS、B5培养基 注：离体根生长要求 提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好， 培养温度25－27℃，暗光培养。
加入B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。
2.4.3 移栽基质的选配
河砂:河砂分为粗砂、细砂两种类型。 粗砂即平常所说的河砂，其颗粒直径 为1-2mm。 草炭土:草炭土是由沉积在沼泽中的植 物残骸经过长时间的腐烂所形成，其 保水性好，蓄肥能力强 腐殖土:腐殖土是由植物落叶经腐烂所 形成。
茎尖培养的方法
取 材
消材 毒料 处 理 及 接 种
培 养
2.2.2.1 取材
①直接取材：在生长旺
盛、枝条健壮、无病的母 株上选生长不久、杂菌污 染少的顶梢（1－2cm） （取前可喷杀菌药，可顶 芽或侧芽）。
取1-2㎝顶梢
②从试管苗获取。
2.2.2.2 材料处理及消毒
①顶梢切割成0.5-1.0cm的茎尖（除叶,剥 去休眠芽的鳞片） ②茎尖流水冲洗2-4h
2.4.1.2 试管苗的特点
（1）生长细弱，角质层不发达 （2）光合作用差 （3）叶片气孔数少，活性差 （4）根吸收功能弱
2.4.2 试管苗的驯化
目的：提高试管苗的适应性，促其健壮，最 终提高移栽成活率 原则：从温、光、湿度及有无杂菌等环境因 素考虑。驯化开始数天内，与培养环境条 件相似；后期与预计栽培条件相似，逐步 适应。 方法：即炼苗。不开口自然光下2-3天，然 后开口1-2天。
外植体大小： 5×5mm薄片
上表皮朝上接种
培养基。最好带 叶脉，注意极性
2.2.3.3 培养
培养基：MS、B5、White 、N6；蔗糖3%；
2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形 成，利于根发生，KT、6BA利于芽形成。
培养条件：25－28℃，10－14h光照，
1500-3000lx （不定芽分化和生长再强 些）。