三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定
三聚氰胺人工抗原合成与鉴定
２０ 年 ３月 ， 国发生 ４０ ０７ 美 ０ ０多起猫 狗中毒死亡事件 ； ２０ ０８年我国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染事件 ， 导致食用
三 聚氰胺 一甲醛 树脂 法 成功 合 成 了三 聚氰 胺 免 疫 原 与包
被原 ， 为后续三聚氰胺特异性抗体制备与三聚氰胺免疫快
速分 析方法 的建 立奠定 了研究 基础 。
ｌ 材料 与方 法
１１ 主 要试 剂 三 聚 氰胺 （ ｅ ｍｎ ， 度 ９ ．％ ） 辣 ． Ｍｌ ｉ 纯 ａ ｅ ９５ 、 根过 氧化物 酶 （ Ｒ ） 牛血 清 白蛋 白 （ Ｓ 和 卵清 蛋 白 Ｈ Ｐ、 Ｂ Ａ）
中图分 类号
Ｔ ２８ Ｑ ４
文献标识码
Ａ
文章编 号
１０ ７ ３ （０ １ ２ ４ ｏ ０ ７— ７ １ ２ １ ）３— ３一 ３
Ｐｒ ｐａ ａ ｉ ｎ ｎｄ Ｉ ｄｅ ｉ ｃ ｔｏ ｏ ｒｉ ｃａ ｔｇ ｎ ｆＭ ｅａ ｉ ｅ ｅ ｒ ｔｏ ａ ｎ ｎｔｆ ａ ｉｎ ｆＡ ｔｆ ｉ ｌＡｎ ｉ ｅ ｏ ｌ ｍ ｎ ｉ ｉ
ｌ ｋ ｄ ｔ ｏ ａ ｕ ｉ Ｏ Ａ）ｂ ｅ ｍｉ ｆｒ ａ ｅ ｙ ｅｒｓ ｅ ｏ ｅ ｅａｅ ｏ ｔ ｇａ ｔ ｅ ｌ Ｖ ．Ａ ｉ ｃ ｎ ｉ ｅ ｖ ｂ ｍ ｎ（ Ｖ ｎ ｏ ｙｍ ｌ ｎ ａ ｏ— ｏｍ ｄ ｈ ｄ ｅｉ ｍ ｔ ｄｔ ｇ ｎ ｒｔ ｃ ａｉ ｎｉ ｎＭｅ —Ｏ Ａ ｒ ｆ ｉ ａ — ｌ ｎ ｈ ｏ ｎ ｇ ｔｉ ａ ｌ
ａｔ ｅ ．Ｍｅ ｍ ｎ ａ ｎ ｅ ｏｉｅｓｌｍ ｏａｕ ｎ Ｂ Ａ）ｔ ｇｎｒｔ ｉ ｍ ｎｇｎ ｎｉ ｎ（ ｌ Ｂ Ａ）ａｄｗ ｓ ｌ ｎｉ ｎ ｇ ｌ ｉｅｗ ｓ ｉ ｄｔ ｂｖｎ ｅ ｖｂ ｍｉ（ Ｓ ａ ｌｋ ｏ ｕ ｏ ｅｅａｅ ｍ ｕ ｏｅｉ ａｔ ｅ Ｍｅ — Ｓ ｃ ｇ ｎ ａ ｓ ａｏ
三聚氰胺人源scFv抗体筛选与鉴定
ｃｏ ｅ ， ｓｎ ｎ ｙ ｑｉｋ ｄｉ ｌｎ ｓ ｕ ｉｇｅｚ ｍｅ ｎ ｅ ｍｍｕ ｏ ｏ ｂ ｎ ｓａ ｔ ｏ （ Ｓ ，ｃｏ ｓｒａ ｔ ｅａ ｄｃ ｍｐ ｔｔ ｅｉ ｉｉｏ ｘ ｅ ｉ ｎ ｓ ｎ ｓ ｒ ｅ ｔａ ｓｙｍｅｈ ｄ ＥＩ Ａ） ｒｓ—ｅ ｃｉ ｎ ｏ ｅｉｉ ｈｂｔ ｎｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ， Ｉ ｖ ｖ ｎ ｉ
关键 词 ： 体 ； 菌体表 面展 示技 术 ； 抗 噬 三聚氰 胺 中图分 类号 ： ３ ２ １ 文献 标 志码 ： 文 章编号 ：６ １７ １ （ ０ ２ ０ —１ —４ Ｒ ９． １ Ａ １ ７ —４ ４ ２ １ ） ３０ ００
ｄ ｉ１ ． ９ ９ｊ ｉ ｎ １ ７— ４ ４ ２ １ ． ３ ０ ３ ｏ ： ０ ３ ６ ／． ｓ ． ６ １ ７ １ ． ０ ２ ０ ． ０ ｓ
三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定
三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定王旻子;应永飞;龚云飞;方结红;陈宗伦;张明洲【摘要】[Objective] To prepare the anti-melamine monoclonal antibodies and determinate their titer,sensitivity and specificity. [ Method] The spleen cells of BALB/c mice immunized by MEL-BSA were fused with SP2/0 myeloma cells,and hybridomas secreting monoclonal antibodies a-gainst melamine were selected and cloned. The titer,sensitivity and specificity of the monoclonal antibodies were determined by indirect ELISA method. [Result] Two stable hybridoma cell lines, named 1B12 and 2H9 were established. The titer of the monoclonal antibodies secreted by 1B12 and 2H9 determined by indirect ELISA were 1:25 600 and 1:12 800, respectively. The monoclonal antibodies had a good sensitivity with an ICX of 8.0 ng/ml and 8.3 ng/ml and 100% cross-reactivity to melamine,and scarcely showed cross-reactivity to others. [Conclusion] The anti-melamine special monoclonal antibodies with high titer and sensitivity were obtained, which laid foundation for future research.%[目的]制备抗三聚氰胺单克隆抗体,并对其效价、敏感性与特异性进行测定.[方法]通过三聚氰胺人工抗原MEL-BSA免疫BALB/c小鼠以及细胞融合等方法,获得分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用小鼠体内腹水诱生法制备抗三聚氰胺单克隆抗体；采用间接竞争ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、敏感性与特异性.[结果]经小鼠免疫、细胞融合与亚克隆后获得了2株分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B12和2H9；间接ELISA检测结果显示,杂交瘤细胞1B12和2H9腹水型单抗的效价分别为1∶25 600与1∶12 800,IC50分别为8.0 ng/ ml与8.3 ng/ml,且该2种单抗只与三聚氰胺有反应,与三聚氰胺类似物无交叉反应.[结论]该研究获得了高效价、高灵敏度的三聚氰胺特异性单克隆抗体,为后续研究提供了良好基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】3页(P2574-2576)【关键词】三聚氰胺;单克隆抗体【作者】王旻子;应永飞;龚云飞;方结红;陈宗伦;张明洲【作者单位】杭州迪恩科技有限公司,浙江杭州 310013;浙江省畜产品质量安全检测中心,浙江杭州 310020;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018;杭州迪恩科技有限公司,浙江杭州310013;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018【正文语种】中文【中图分类】TS201.6三聚氰胺(Melamine)是一种三嗪类含氮杂环有机化工原料，广泛应用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气等行业［1］，其含氮量极高，不法商贩把廉价的三聚氰胺添加入食品中，以虚假提高食品中的蛋白质含量。
三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定
Ｂ ／ ＡＩ ｃ小鼠 ， Ｂ 用常规 单 克隆 制 备技 术 筛选 获得 ｌ株 稳 定 分 泌 抗 三 聚 氰 胺 单 克 隆 抗 体 的 细 胞株 ６３ Ｅ 。腹水 经纯化 后 ， 究 了抗 体效 价 、 争抑 制 能 力及 与 结构 类似 物 的 交 叉反 应 率 ， 中抗 体 效 研 竞 其
ａ ｔｇｅ ｓ （ ＥＩ一 ｎｉ ｎ Ｍ ＢＳＡ ， Ｍ ＥＬ— Ｖ Ａ ） ｗｅ ｅ ｐｒ ｐａ ｅ ｙ ｇｌ ｔ ｒ ｌ ｈ ｅ ｃ ｏ ｓｉ ｉ ｇ ｍ ｅ ｈｏ Ｏ ｒ ｅ ｒ ｄ ｂ ｕ ａ ａｄｅ ｙｄ ｒ ｓ ｌｎｋ ｎ ｔ ｄ，ｗ ｈｉｈ ｃ
ｗｅ ｅ ｉ ｎｔｆｅ ｙ Ｕ Ｖ ｂ ｏ ｂ ｎｃ ｐ ｃ ｒ ｒ ｄｅ ｉｉｄ ｂ ａ ｓ ｒ ｅ ｙ ｓ ｅ ｔ ｕｍ． Ｍ ＥＩ一 Ａ ｗａ ｓ ｄ ａ ｉ ｍｕｎ ｏ ｅ ｏ ｐｒ ｕｃ ＢＳ ｓｕ ｅ ｓ ｍ ｅ ｇ ｎ ｔ ｏｄ ｅ ａ
ｎａ；２． Ｈ ａｎ ｚ ｕ Ｎａ ａｉＢｉ ｔ ｃ ．，Ｌｔ ．， Ｈ ａ ｇｚ ｏｕ ３１ ０２ ｇ ｈｏ ｎｋ ｏ ｅ ｈ Ｃｏ ｄ ｎ ｈ ０ ２，Ｃｈｉ ） ｎａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｉ ｏｒ ｅ ｔ ｅ ｔ ｂｌ ｈ ｈｅ ｍ ｍｕ ａ ｓ ｙ ｓｒｃ ：ｎ ｄ ｒ ｏ ｓ ａ ｉ ｔ ｉ ｓ ｎｏ ｓ ａ ｍｅ ｈｏ ｏｆ ｔ ｄ ｍｅ ａ ｎ ｌ ｍｉ ｅ（Ｍ ＥＬ ）， ｔ ａ ｔｆｃａ ＷＯ ｒ ｉｉｉ ｌ
第 ３ Ｏ卷 第 １期
２１ ０ １年 １月
食 品 与 生 物 技 术 学 报
Ｊ ｕ ｎａ ｆＦｏ ｄ Ｓ ｉｎｃ ｎ ｏ ｅ ｈｎ ｌ ｇ ｏ ｒ ｌｏ ｏ ｃｅ ｅ ａ ｄ Ｂｉｔ ｃ ｏ ０ ｙ
Ｖｏ１ Ｏ ＮＯ ．３ ．１
Ｊｎ ２ － ａ． ０１ １
食品中三聚氰胺的检测方法进展
食品中三聚氰胺的检测方法进展摘要:三聚氰胺是一种用途十分广泛的有机化工产品,由于其含氮量高达66%,因此近年来被不法商家利用。
国内外三聚氰胺的分析方法很多,本文综述了三聚氰胺的各种检测方法,并且比较了不同方法的优缺点及其实用性,意在找出最快速、便捷、成本低的检测方法。
关键词:三聚氰胺检测食品方法三聚氰胺作为一种重要的化工原料,常用于制造三聚氰胺树脂该物质,是建筑业中常用的防火阻燃燃料[1]。
三聚氰胺既不是食品原料,也不是食品添加剂,但与蛋白质相比其含氮量更高,并且价格较蛋白质便宜很多,因此一些不法商家将其添加在食品或饲料中,钻国家目前蛋白质检测方法的空子,以形成产品中蛋白质含量高的假象[2],从而获得更高的利益。
这种手段造成了极其恶劣的社会影响,也给国家带来了严重的经济损失。
如今三聚氰胺的分析检测问题已成为一个热点问题,受到广泛的关注。
本文对三聚氰胺的各种检测方法进行归纳总结,为三聚氰胺的快速检测提供理论依据。
近几年三聚氰胺的检测方法发展迅速,已经由早期的苦味酸法和升华法到后来的高效液相色谱法、液相色谱法-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法,到现在的酶联免疫法、金纳米粒子光度法和胶体金免疫层析法等。
三聚氰胺的分析检测方法在仪器上不断提高,在精确度上也是逐步提升,时间上不断缩短。
1 重量法重量法包括苦味酸法和升华法,其反应原理简单,但精确度不高。
苦味酸法方法原理是将水加入试样,加热溶解后,加人苦味酸溶液,称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量,即测得三聚氰胺纯度含量。
升华法测定原理是在升华装置中将试样在负压下进行加热,让三聚氰胺完全升华后,称其残渣量,即测得三聚氰胺纯度[3]。
2 高效液相色谱法(HPLC)国家标准GB/T 22400-2008[4]公布了原料乳中三聚氰胺快速检测的高效液相色谱法,采用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂,0.2μm微孔滤膜过滤后供HPLC测定。
采用紫外/二极管阵列检测器检测,该方法的检出限为0.05 mg/kg,重复性好,再现性强。
三聚氰胺IgG型单克隆抗体醛制备及鉴定
此研制操作简单 ， 敏感性高 ， 建立特异性强 的检测 方 法成 为科 研人 员关 注 的焦 点 。本 实验 建立 的高亲 和 力 抗 三 聚 氰 胺 单 克 隆 抗 体 为研 制 高 敏 感 的
Ｅ ＩＡ试剂 盒提 供 了基 础 。 ＬＳ
１ 材 料 与方 法
图１ 。将偶联反应产物于 ４ ℃下用 １ 倍体积 的 Ｐ Ｓ Ｏ Ｂ
摘
要 ： 用改进 的 重 氮法合成 三 聚氰胺 免 疫抗 原 （ 采 三聚氰 胺 一 Ｓ 和 三 聚氰 胺 包被 抗原 （ 聚氰 Ｂ Ａ） 三
胺 一 Ａ） 以三 聚 氰 胺 － Ｓ 免 疫 Ｂ Ｌ ／ 鼠 ，选 取 间接 Ｅ ＩＡ 测 定 效 价 达 ８ ０ ＯＶ ， ＢＡ Ａ Ｂ ｃ小 ＬＳ ０ ０以上 的
透 析 ７ｈ 每 隔 ６ ｈ换液 一 次 ， ２， ～８ 除去 未反 应 的小 分
１１ 实验 材料 ．
绵 乖 矫 乖 乖 毋 乖出
Hale Waihona Puke 子物质 。 将透析后得到的偶联产物进行 Ｓ Ｓ Ｐ Ｇ Ｄ—Ａ Ｅ 电泳 鉴 定 ， 偶联 产物 分装 存放 于 一 ０Ｃ。 将 ２￣
尔 乔 不 ． ． ！ 铆 ！ ； ． ’ ； ． ； ！． ！ ；
胱癌。
目前 用 于 检 测 食 品 、 饲料 、 制 品 中三 聚氰 胺 乳
胎牛血清为 ＧＢｏ ｉｃ 公司产 品 ； 单克隆抗体分型试剂 盒 为 ＳｕｈｒＢｏｅｈ公 司 产 品 ， 他化 学试 剂 均 为 ｏｔｅｎ ｉ ｃ ｔ 其
国产分 析 纯 。
１ ＭＡ ． ２ ｂ的制备 及鉴 定
・● ●
大学 出版 社 ，０ ５３ ２０ ． ．
［】于洪彦．ｘｅ 统计分析与决策［ ． ： ４ Ｅ ｃｌ Ｍ】 北京 高等教育出版社 ，
三聚氰胺单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定
文 章 编 号 ： ６ ３ １ ８ （ ０ １ ０ — ８ ４０ １ ７ ６ ９ ２ １ ） ６ ０ ８ — ３
三聚氰胺单 克隆抗体 的制备及其免疫学特性鉴定
钮 伟 民 何 恩 奇 戴 维 杰 ， 赵春 城。 刘 文 卫 杨婷 婷 ， ， ， ，
（． １ 无锡 市疾 病预 防控 制 中心 ， 苏 无锡 ２ ４ ２ ，．江苏省 苏微微 生物研 究所 ， 江 １０ ３２ 江苏 无锡 ２ ４ ３ ） １０ ６ 摘 要 ：采用 牛血 清 白蛋 白偶 联 的三 聚氰 胺 （ ｌ ｎ —Ｂ Ａ） ｍｅ ｍｉｅ Ｓ 完全 抗原 免 疫 Ｂ ／ 小鼠 ， 用 ａ ＡＩ Ｃ Ｂ 应 杂 交瘤技 术制备 抗三 聚氰胺 的特 异性 单克 隆抗体 。所得 单克 隆抗体 效 价 可达 ５ ０ ０ ， 抗体 的 ． ×１ 且
ｍ ｅａ ｉ ｅ ｓ ｂｓ ａ ｅ ． ｌｍ ｎ ｕ ｔ ｎｃ ｓ
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｓ ｄ ：ｍｅ ａ ｉ ｅ，ｍｏ ｃｏｎ ｌａ ｔｂ ｙ，ｃ ａ ａ ｔ ｒｚ ｔｏｎ，ｉ ｌｍ ｎ ｎｏ ｌ ａ ｎ ｉ ｏｄ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉａ ｉ ｍｍｕｎ ｏ ｉ ａ ｅ ｅ ｔｏｎ ｏｌ ｇ ｃ ｌｄ ｔ ｃ ｉ
ｌ 。Ｌ／ １ Ｔｈ ｒ ｓ —ｅ ｃ ｉｉｙ ｗｉｈ Ｃｙ ｎ ｒｃ ａ ｉ ，ｃ ａ ｕ ｏ ｉｍｉ ｅ ａ ｄ ａ Ｏ ｍｏ ． ｅ ｃｏ ｓｒａ ｔ ｔ ｔ ａ ｕ ｉ ｃｄ ｙ ｎ ｒ ｄａ ｄ ｎ ｍｍｅｉｅ ｗａ ０ ， ｖ ｌ ｓ３ ｄ
９ ３ ａｄ ６ｎ ４ ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ． Ｔｈｅ ｅ ｐ ｃｉｅｙ ｍｏｎ ｌ ｎａ ａ ｉ ｄｙ ａ ｂ ｕ ｅ ｆ ｒ ａ ｔ ｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ Ｏ ｏｃｏ ｌ ｎｔｂｏ ｃ ｎ ｅ ｓ ｄ ｏ ｆ ｓ ｄ ｔ ｒ ｎ ｔｏｎ ｆ
三聚氰胺检测技术二
● 3-制备胶体金
● 柠檬酸三钠还原法[13]：将 1℅ HAuCl4 溶液（20 mL）加热至沸后快速加入 0.5 mL 1℅ Na3C6H5O7·2H2O，待溶液变 红时停止加热，持续搅拌，冷却；
● 4-标记单克隆抗体
组装试纸条
检查结果判断
结果分析
重复性实验
特异性
与仪器法对比
结论
● 基于竞争抑制免疫层析原理，以胶体金为标 记物，建立了一种快速检测乳制品中三聚氰 胺（MA）的方法，所研发的胶体金免疫层 析试纸的检测时间为5~8 min、检出限为 40~160 μg/kg，批间、批内重复性良好。
收的，不同的物质对不同波长的光的吸收不 一样的。
试剂与仪器
实验方法
● 显色剂的配制
● 0.1％茜素红溶液：称取0.1g茜素红溶 于水，由蒸馏水定容至100mL，混匀备 用。1.2.2三聚氰胺标准液的配制
● 三聚氰胺溶液标准溶液的配制
● 50 mg 三聚氰胺加入50 mL 水中定容1 mg / mL 的三聚氰胺在容量瓶里。原液 稀释1万倍﹣0.1 ug / mL 三聚氰胺，作 为 A 溶液（水）
● 相关系数R2=0.9999；对于强阳离子柱,三聚 氰胺在浓度为0.4-4mg／L范围内线性关系良 好，回归方程为Y=37379X-2440.5,相关系 数0.9983。
加标回收与重复性实验
结论
● 本研究所确立的超高效液相色谱检测动物源性食品中三聚氰胺残留最的方法，样品的预处理 简单，相关线性、回收率及相对标准偏差均能取得很好的效果。本方法快速、准确、灵敏度 高、干扰少、选择性好，在定性和定量分析方面都能满足动物源性食品中三聚氰胺残留的分 析要求Galve 分子建模法，对 MA 类似物与CAAT 进行修饰，生成 MA 衍 生物；借助二亚胺酯法BSA 偶联，得到 MA-BSA 偶联物（免疫原）；与OVA 偶 联，得到 MA-OVA 偶联物（检测原）。
农畜产品中三聚氰胺间接竞争ELISA检测方法的建立
时将 单 克 隆 抗 体 稀 释 成 １：５ ０ １：１ ０ ０ １： ０、 ０、
２ ０ ０、 ：４ ０ ０ １ ０ ０、１ ：８ ０ ０ ０、１ ： １ ００、 ： ３ ０ ０、 ６０ １ ２ ０
１： ４０ ０共 ８ 梯 度 ， ６ ０ 个 然后按照 以下 间接 Ｅ ＩＡ步 ＬＳ
值 为３ ３ ～１ ． ２ ， 定此 方法精 确度 良好 。利 用建 立的 间接 竞争 Ｅ Ｉ Ａ 方法 ， 定添加 有三 聚氰胺 标 ．３ １ ９ 确 ＬＳ 测
准溶液 的样 品 （ 宠物食 品 、 小麦 面筋 、 料 、 饲 牛乳 、 鸡蛋 ） 得 到 三聚 氰 胺在 各样 品 中的 回收 率 范 围分 别 为 宠物 ， 食 品 ７ ． ～８ ． ２ ， ３ ８／ ９ ６ ４ ３ 小麦 面 筋 ６ ． ～ ８ ． ７ ， 料 ７ ． ～ ８ ． ， 乳 ８ ． ７ ～８ ． ６ ， 蛋 ７３ ８ ２ 饲 Ｏ３ ５９ 牛 ３ ４ ９ ７ 鸡 ７ ． ～８ ． ９ 。确定 可以利 用此 间接 竞争 Ｅ ＩＡ 方 法检 测样 品 中的三聚 氰胺含 量 。 ６２ ７ ２ ＬＳ 关 键词 ： 聚氰胺 ；单克 隆抗体 ；间接 竞争酶 联免 疫吸 附 法 三
司产 品 ； ＶＡ、ｉ、 氨酸 、ＤＳ为 Ｓ ｌｒ ｉ 公 司产 Ｏ Ｔｒ 甘 ｓ Ｓ ｏａｂｏ 品 ； Ｐ标 记 山羊抗 鼠二 抗 、 ｉｍｓ ＨＲ Ｇ ｅ ａ染 色 液 为美 国
动物 长期摄 入 则会 造 成 泌 尿 生 殖 系 统 的损 伤 、 胱 膀
和 肾脏结石 ｕ 。 Ｊ
食 品安全 事件 的频 繁 出现 ， 了监 管 体 系 依 然 除
（ ． 阳 出入 境 检 验 检 疫 局 ， 宁 沈 阳 １ ０ １ ； ． 阳农 业 大学 ， 宁 沈 阳 １ ０ １ ） １沈 辽 １０ ６２ 沈 辽 １ ０ ６
抗生物素化三聚氰胺人源单链可变区抗体筛选与鉴定
抗生物素化三聚氰胺人源单链可变区抗体筛选与鉴定马巍娜;刘雪林;宋宏彬;沈建良;黄友章;刘毅;向丹【摘要】目的筛选生物素化三聚氰胺人源单链可变区(scFv)抗体,为研究相关快速检测试剂盒创造条件.方法本试验利用生物素化三聚氰胺为包被抗原,从半合成噬菌抗体库中筛选其特异性噬菌体抗体片段.即采用菌噬体表面展示技术,以链亲和素-生物素标记的三聚氰胺为固相包被靶抗原,把靶抗原包被在免疫平板上,加入噬菌体抗体库,则头部带有能与靶抗原特异性结合的抗体分子的噬菌体就被固定在免疫平板上,不能特异结合的噬菌体则被漂洗掉;将特异结合的噬菌体洗脱下来,侵染大肠杆菌,就可以得到含抗体基因的噬菌粒.结果从半合成的菌噬体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程后,获得抗原特异性和结合性较强的生物素化三聚氰胺scFv片段.结论酶联免疫吸附试验等进行鉴定后,筛选得到了抗生物素化三聚氰胺的噬菌体抗体基因片段,为下一步亲和力鉴定、蛋白表达及开发相关检查试剂盒奠定了基础.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)012【总页数】3页(P1608-1610)【关键词】噬菌体表面展示技术;筛选;三聚氰胺;人源单链可变区抗体;生物素化【作者】马巍娜;刘雪林;宋宏彬;沈建良;黄友章;刘毅;向丹【作者单位】中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军军事医学科学院十所,北京100039;中国人民解放军军事医学科学院十所,北京100039;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037【正文语种】中文·论著·近年对制备化学物质抗体的研究很多，而利用噬菌体抗体库表面展示技术完成制备的报道少见[1-2]。
农药、兽药和食品添加剂抗体制备技术平台的建设是标准抗体资源库和快速检测方法建立的基础和关键。
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Ａｂｔａ ｔＭｏｏ ｌ ａ ａｔ ｏ ｙ ｍ ｂ ｇｉｓ ｍ ｌ ｎ ａ ｒｐｒｄ ｉ ｍｍ ｎｔ ｃ ａ ｃ ｒ ｗ ｒ ｓｒｃ ： ｎ ｃ ｎｌ ｎｉ ｄ （ Ａ ）ａａ ｔ ｅａ ｅｗ ｓｐｅ ａｅ ， ｓｉ ｕ ｉ ｈ ｒ ｔ ｓ ｅ ｏ ｂ ｎ ｍｉ ｔ ｙ ａｅ ｅ
文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ：６ ４— ４ ５ ２ １ ）４～ ０ ０— ５ １７ ８ ２ （ ０ ０ ０ ０ ３ ０ 中图分 类号 ： ３ ２ Ｒ ９
Ｄｅ ｅｏ ｖ ｌｐｍ ｅ ｄ Ｃｈａ ａ ｔ ｒｚ ｔｏ ｆＨ ｙ ｒｄ ｍ ａ ＣｅｌＬｉ ｅ Ｈ２Ｃ６ ｎｔＡｎ ｒ ｃ ｅ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｎ
Ｓ ｃ ｅ ｉ ｇ Ｍ ｏ ｏ ｌｎ ｌＡｎ ｉ ｏ ｙ Ｇｇ ｉ ｓ ｅａ ｎ ｅ ｒ ｔｎ ｎ ｃｏ ａ ｔｂ ｄ ａｎ ｔＭ ｌ ｍｉ ｅ
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（ ． ｈ ｎｑ ｇＵ ｉ ｒｉ ｆ ｅｈ ｏ ｇ ， ｈｎｑｎ ０ ０ ０ Ｃ ｉａ １Ｃ ｏｇｉ ｎ ｅｓｙｏ ｃｎｌ ｎ ｖ ｔ Ｔ ｏ Ｃ ｏ ｇｉｇ ０ ５ ， ｈ ； ｙ ４ ｎ
ａ ｐ ａｓ ｄ ｎ ｌ ｍｉ ｅ ｃ ｌ ｒ ｔ ｎ ｒ ｓ ａｎ ｎ ｕ ｖ ｓ ｍａ ｅ Ｔ ｅ ｓ ｌｅ ｅｌ ｏ ＡＬ ／ Ｃ ｐ ｒ ｉｅ ，ａ ｄ ａ ｍｅａ ｎ ａ ｉ ａｉ ｅ ｔ ｉ ｉ ｇ ｃ ｒ ｅ ｗａ ｄ ． ｈ ｐ ｅ ｎ ｃ ｌ ｆ Ｂ Ｂ ｂ ｏ ｒ ｓ
２１ ００年 ４月
Ａｐ ． ２ ０ ｒ ０１
三聚 氰胺 单 克 隆抗 体 的制 备 及 鉴定
蔡 家利 陈 昕 徐 社会 ， ， ，
（． １ 重庆理工大学 ， 重庆 ４ ０ ５ ；． ００ ０ ２ 广州瑞森生物科技有 限公 司， 广州 ５ １０ ） １４ ０
摘
要： 制备 了抗 三聚 氰胺 （ ｌｍｎ ） 克 隆抗 体 ， ｍｅ ｉｅ 单 ａ 鉴定 了其 免疫 学特 性 并 建立 三聚 氰胺 标
第２ ４卷 第 ４期
Ｖ １２ ｏ． ４
Ｎｏ ４ ．
重 庆 理 工 大 学 学 报 （自然科学）
Ｊｕｎｌ ｆ ｈｎ ｑｎ ｎ ｅｓｙｏ Ｔ ｃｎｌ ｙ Ｎ ｔｒｌ ｃ ｎｅ ｏ ｒａ ｏ ｏｇｉｇＵ ｉ ｒｉ ｆ ｅｈ ｏ ｇ （ ａ ａ Ｓｉ ｃ ） Ｃ ｖ ｔ ｏ ｕ ｅ
准抑制 曲线 。 Ａ Ｂ ｃ小 鼠 ， 用 杂 交瘤技 术建 立 分泌 抗 三 应
聚氰胺单克隆抗体的细胞株 ， 以体 内诱 生腹水法生产三聚氰胺单抗 ， 用硫酸钠 盐析法提纯 ， 以直
接 竞争 Ｅ ＩＡ 法建立 三聚氰 胺标 准抑 制 曲线。获得 了 １株 能稳 定分 泌抗 三 聚氰 胺 单 克隆抗 体 的 ＬＳ 杂交瘤 细胞株 Ｈ Ｃ 。用 间接 Ｅ ＩＡ 方法 测 定腹 水 单 抗 效价 为 ２×１ ２６ ＬＳ ０一。经 金 标 免 疫层 析 实验 鉴 定单抗 与 三聚氰 胺特 异性 结合 ，２ ６杂 交瘤 细胞 株单 抗 对三 聚氰 胺 的半 数抑 制 浓度 （Ｃ。 为 ＨＣ Ｉ５） ４ １ ￣ ｍ 。除 与三 聚氰酸 交 叉反 应 性 为 ７ ％ 外 ， ．５ｐ／ Ｌ ｇ ２ 与三 嗪 及 各 类 抗 生 素 等 交 叉反 应性 都 小 于 ５ 。体 外 多次传代 培养 和反 复冻存 复 苏后 抗 体分 泌稳 定 。 ％ 关 键 词 ： 聚氰胺 ； 克隆抗 体 ； 疫 学特性 鉴 定 三 单 免
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