各类化学成分分析
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处方 昆明山海棠取昆明山海棠片60片，除去糖衣，研细，取 约相当于25片的量，精密称定，置200ml锥形瓶中，加适量硅藻 土（每1g中加入硅藻±0.2g），混匀，加乙醇70ml，加热回流 40分钟，放冷，滤过，滤渣再加乙醇50ml，加热回流30分钟， 放冷，滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣加盐酸溶液 （1→100）30ml，置水浴上搅拌使溶解，放冷，滤过，残渣再 用盐酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml）， 合并滤液溶于分液漏斗中，加氨试剂使溶液呈碱性，用乙醚振摇 提取4次（40ml、30ml、25ml、25ml），合并乙醚液，用水振 摇洗涤2次，每次10ml，乙醚液滤过，滤液置已在100℃干燥至 恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸去乙醚，残渣中加入少许无水 乙醇，蒸干，在100℃干燥至恒重，称定重量，计算，即得。
2纸色谱法
• 可用于生物碱盐或游离碱的鉴别。
• 主要是以水为固定相的正相纸色谱法，分 离效果常取决 于流动相的性质。BAW系统
• 显色剂：基本和薄层色谱法相同，但含硫 酸的试剂不适用。
3高效液相色谱法
• 依据：tR • 条件不同时，可已知品作内标，
采用峰面积或峰高加大法 • 优点：快速，灵敏、微量等
直接测定法
酸染料比色法
分光光度法
苦味酸盐比色法
离子对萃取比色法
雷氏盐比色法
异羟肟酸铁比色法
酸碱滴定分析法
强碱滴定生物碱盐时，在70％～90％的乙 醇介质中终点比在水中明显，因此常将生 物碱盐溶于70 ％ ～ 90％乙醇，再用标准碱 -乙醇液滴定。
若选择的溶剂及指示终点方法合适，也可 用非水滴定法进行。
变色范围：3.7～ 5.2黄→紫
重量分析法
适用：混合碱、未知结构、M差异大
提取重量法 优点：简便、不用换算因数无需知M
重量分析法
缺点：挥发性、碱性条件下可水解生物 碱不适用；取样大、操作易乳化、费时
优点：取样少、灵敏度高 沉淀法
缺点：计算复杂、操作繁琐
例 昆明山海棠片中总生物碱成分的含量测 定—重量法
例：三妙丸中黄柏及小檗碱的鉴别 (苍术、黄柏、牛膝)
取三妙丸粉末0.1g,加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，弃 去乙醚液，残渣加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓 缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g，同制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液2ml、对照 药材溶液与对照品溶液各1ml，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试剂(12∶6∶3∶3∶1)为展开 剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外 灯(365nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个黄色荧光斑点。
2薄层色谱法
• 吸附剂：硅胶、氧化铝
• 展开剂：多用氯仿、苯等低极性溶剂，加入其它溶 剂调整展开剂的极性。（由于硅胶显弱酸性，强碱 性的生物碱在硅胶板上能形成盐，使Rf值很小或拖 尾，形成复斑。在硅胶吸附薄层中，常用碱性系统 或在碱性环境下展开。）
• 显色剂：改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂 后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更清晰；亦可用 碘蒸气、硫酸铈、碘铂酸等。
四、含量测定
• 生物碱的含量测定方法早期常用酸碱滴定 法、沉淀滴定法等经典的化学方法，近年 来多采用分光光度法、薄层色谱法及高效 液相色谱法等
• （一）总生物碱的含量测定 • （二）生物碱类单体成分的含量测定
（一）总生物碱的含量测定
化学分析法 酸碱滴定法
重量分析法
本法适用于处方药味较少、 内成分较简单的中药制剂
Berberine
O O
N O
O
小檗碱
Aconitine
OH OCH3
OCH3
OC
C2H5 HO
H3CO
N
O
OH O
C CH3
O
乌头碱
Ephedrine hydrochlorede
H
C
CH CH3
OH NHCH3
麻黄碱
O N
O
水苏碱
二、理化性质
• 物理性状 • 溶解性 • 紫外光谱特征 • 显色反应
物理性状
液体状的生物碱及个别小分子生物碱有挥发 性甚至升华性 如：麻黄碱具有挥发性 咖啡因具有升华性
生物碱通常无色，但有长共轭结构，并有 助色团的，可显不同颜色。如：小檗碱黄色
溶Βιβλιοθήκη Baidu性
• 大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、 乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂
• 与酸结合成盐生水溶性增加，但酸不同， 生成的盐水溶性有差异
酸碱滴定分析法
电位法
溴酚蓝
指示终点方法
水溶液中 甲基红 溴甲酚蓝
指示剂
酚酞
溴酚蓝
非水溶液 甲基黄
结晶紫
净化-中性氧化铝；空白试验
例 止喘灵注射液中总生物碱的含量测定—酸 碱滴定法
处方 麻黄 洋金花 苦杏仁 连翘
方法 精密量取止喘灵注射液10ml，置分液漏斗中，加
1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，用三氯甲烷提取4次，
第一节 生物碱类成分分析
• 概述 • 理化性质 • 鉴别 • 含量测定
一、概述
• 生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合 物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之 外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮 原子上的未共享电子对而大多具有碱性。
• 含生物碱成分的常用中药：山豆根、制川 乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、 黄柏、防己等
酸性aq：KI-I2(棕红↓)；BiI3·KI (橘红～黄↓)；HgI2·2KI (类白 ↓)；硫氰酸铬铵(雷氏铵盐NH4[Cr(NH3)2(SCN)4](红↓)
中性：苦味酸(三硝基苯酚)(黄↓)
季铵盐↓
剂
• 中药水浸液中蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可与生物碱
沉淀试剂生成沉淀，需排除干扰，防止出现假阳性结果。
• 季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱 易溶于水。
溶解性
• 液体生物碱及一些小分子固体生物 碱则既溶于水也可溶于有机溶剂
• 含有酸性官能团或酯键的生物碱还 可溶于一些碱液或热苛性碱液
显色反应
• 生物碱在一定pH条件下与一些酸性染料 （多为磺酸肽类）生成有色配合物，可 被氯仿等有机溶剂定量提出。
• 结构中具有酯键的酯碱，如：乌头碱可 与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色
（10ml、10ml、5ml、5ml）合并三氯甲烷液，置具塞锥
形瓶中，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）10ml及新沸过
的冷水10ml，充分振摇，加茜素黄酸钠指示剂1-2滴，用
氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至淡红色，并将滴定
结果用空白实验校正。每1ml硫酸滴定液相当于3.305mg
的麻黄碱（C10H15NO）。
紫外光谱特征
• 结构中具有共轭体系的生物碱均有 紫外吸收。
• 结构中的氮原子与发色团直接连接 或参与发色团的生物碱，其吸收峰 位置与测定时溶剂的pH值有关。
三、鉴别
一般理化鉴别 沉淀法 薄层色谱法
色谱鉴别 气相色谱法 高效液相色谱法
1、沉淀反应
• 大多数生物碱在酸性水溶液可与某些试剂生成不溶于水的 复盐或分子复合物。
2纸色谱法
• 可用于生物碱盐或游离碱的鉴别。
• 主要是以水为固定相的正相纸色谱法，分 离效果常取决 于流动相的性质。BAW系统
• 显色剂：基本和薄层色谱法相同，但含硫 酸的试剂不适用。
3高效液相色谱法
• 依据：tR • 条件不同时，可已知品作内标，
采用峰面积或峰高加大法 • 优点：快速，灵敏、微量等
直接测定法
酸染料比色法
分光光度法
苦味酸盐比色法
离子对萃取比色法
雷氏盐比色法
异羟肟酸铁比色法
酸碱滴定分析法
强碱滴定生物碱盐时，在70％～90％的乙 醇介质中终点比在水中明显，因此常将生 物碱盐溶于70 ％ ～ 90％乙醇，再用标准碱 -乙醇液滴定。
若选择的溶剂及指示终点方法合适，也可 用非水滴定法进行。
变色范围：3.7～ 5.2黄→紫
重量分析法
适用：混合碱、未知结构、M差异大
提取重量法 优点：简便、不用换算因数无需知M
重量分析法
缺点：挥发性、碱性条件下可水解生物 碱不适用；取样大、操作易乳化、费时
优点：取样少、灵敏度高 沉淀法
缺点：计算复杂、操作繁琐
例 昆明山海棠片中总生物碱成分的含量测 定—重量法
例：三妙丸中黄柏及小檗碱的鉴别 (苍术、黄柏、牛膝)
取三妙丸粉末0.1g,加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，弃 去乙醚液，残渣加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓 缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.1g，同制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液2ml、对照 药材溶液与对照品溶液各1ml，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试剂(12∶6∶3∶3∶1)为展开 剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外 灯(365nm)检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个黄色荧光斑点。
2薄层色谱法
• 吸附剂：硅胶、氧化铝
• 展开剂：多用氯仿、苯等低极性溶剂，加入其它溶 剂调整展开剂的极性。（由于硅胶显弱酸性，强碱 性的生物碱在硅胶板上能形成盐，使Rf值很小或拖 尾，形成复斑。在硅胶吸附薄层中，常用碱性系统 或在碱性环境下展开。）
• 显色剂：改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂 后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更清晰；亦可用 碘蒸气、硫酸铈、碘铂酸等。
四、含量测定
• 生物碱的含量测定方法早期常用酸碱滴定 法、沉淀滴定法等经典的化学方法，近年 来多采用分光光度法、薄层色谱法及高效 液相色谱法等
• （一）总生物碱的含量测定 • （二）生物碱类单体成分的含量测定
（一）总生物碱的含量测定
化学分析法 酸碱滴定法
重量分析法
本法适用于处方药味较少、 内成分较简单的中药制剂
Berberine
O O
N O
O
小檗碱
Aconitine
OH OCH3
OCH3
OC
C2H5 HO
H3CO
N
O
OH O
C CH3
O
乌头碱
Ephedrine hydrochlorede
H
C
CH CH3
OH NHCH3
麻黄碱
O N
O
水苏碱
二、理化性质
• 物理性状 • 溶解性 • 紫外光谱特征 • 显色反应
物理性状
液体状的生物碱及个别小分子生物碱有挥发 性甚至升华性 如：麻黄碱具有挥发性 咖啡因具有升华性
生物碱通常无色，但有长共轭结构，并有 助色团的，可显不同颜色。如：小檗碱黄色
溶Βιβλιοθήκη Baidu性
• 大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、 乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂
• 与酸结合成盐生水溶性增加，但酸不同， 生成的盐水溶性有差异
酸碱滴定分析法
电位法
溴酚蓝
指示终点方法
水溶液中 甲基红 溴甲酚蓝
指示剂
酚酞
溴酚蓝
非水溶液 甲基黄
结晶紫
净化-中性氧化铝；空白试验
例 止喘灵注射液中总生物碱的含量测定—酸 碱滴定法
处方 麻黄 洋金花 苦杏仁 连翘
方法 精密量取止喘灵注射液10ml，置分液漏斗中，加
1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，用三氯甲烷提取4次，
第一节 生物碱类成分分析
• 概述 • 理化性质 • 鉴别 • 含量测定
一、概述
• 生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合 物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之 外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮 原子上的未共享电子对而大多具有碱性。
• 含生物碱成分的常用中药：山豆根、制川 乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、 黄柏、防己等
酸性aq：KI-I2(棕红↓)；BiI3·KI (橘红～黄↓)；HgI2·2KI (类白 ↓)；硫氰酸铬铵(雷氏铵盐NH4[Cr(NH3)2(SCN)4](红↓)
中性：苦味酸(三硝基苯酚)(黄↓)
季铵盐↓
剂
• 中药水浸液中蛋白质、多肽和鞣质等成分，也可与生物碱
沉淀试剂生成沉淀，需排除干扰，防止出现假阳性结果。
• 季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱 易溶于水。
溶解性
• 液体生物碱及一些小分子固体生物 碱则既溶于水也可溶于有机溶剂
• 含有酸性官能团或酯键的生物碱还 可溶于一些碱液或热苛性碱液
显色反应
• 生物碱在一定pH条件下与一些酸性染料 （多为磺酸肽类）生成有色配合物，可 被氯仿等有机溶剂定量提出。
• 结构中具有酯键的酯碱，如：乌头碱可 与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色
（10ml、10ml、5ml、5ml）合并三氯甲烷液，置具塞锥
形瓶中，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）10ml及新沸过
的冷水10ml，充分振摇，加茜素黄酸钠指示剂1-2滴，用
氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定至淡红色，并将滴定
结果用空白实验校正。每1ml硫酸滴定液相当于3.305mg
的麻黄碱（C10H15NO）。
紫外光谱特征
• 结构中具有共轭体系的生物碱均有 紫外吸收。
• 结构中的氮原子与发色团直接连接 或参与发色团的生物碱，其吸收峰 位置与测定时溶剂的pH值有关。
三、鉴别
一般理化鉴别 沉淀法 薄层色谱法
色谱鉴别 气相色谱法 高效液相色谱法
1、沉淀反应
• 大多数生物碱在酸性水溶液可与某些试剂生成不溶于水的 复盐或分子复合物。