大鼠脂肪肝 文档

清脂益肝汤对非酒精性脂肪肝大鼠治疗

的实验研究

1．2．1 动物分组与模型建立：43只大鼠在动物房内适应性喂养1周后，随机分为4组：正常对照组(I组)10只，模型组(1I 组)l1只，清脂益肝汤组(Ⅲ组)11只、二甲双胍组(Ⅳ组)11只。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲以高脂饲料，配方为：普通饲料+1％胆固醇+ 14％猪油，由天津市华容实验动物中心饲料厂配制；正常对照组饲以普通饲料，实验动物自由饮水和进食。4周后随机抽取Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三组中各一只大鼠脱颈处死，病理证实脂肪肝已形成。清脂益肝汤组给生药16 g·ks ·d～，灌胃治疗；二甲双胍组给170 mg·ks～·d (按成人剂量1．5 g／d折算)溶于5 rnl蒸馏水中

灌胃。正常对照组、模型组给予同量蒸馏水灌胃，各组按原饲料进行饲养。8周后，全部脱颈处死，取血及肝组织待测。1．2．2 观察指标及检测方法：(1)观察大鼠食欲、体重、毛发及死亡情况。(2)血清指标测定：测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、

空腹血糖(FBS)、游离脂肪酸(FFA)；放免法测定空腹胰岛素(FINS)。胰岛素抵抗指数计算：胰岛素抵抗指数(HOME-IR)：

(~33s×F~NS)／22．50。(3)取肝组织一块马上置于液氮中用RTPCR 法检测肝组织中瘦素mRNA(1eptin mRNA)的表达。

1．3 组织病理学标本的制备取肝左叶用10％甲醛溶液固

定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察组织学改变。

2、化痰泄浊方对脂肪肝模型大鼠胰岛素抵抗及瘦素

的影响

1．2．1 分组与模型制作 SD大鼠48只，常规饲养1周后随机分为5组：正常对照组、模型组、DBGTT组、HTXZR高剂量和低剂量组，其中正常对照组8只，其余4组各1O只。正常对照组予以基础饲料喂养，其余4组均以高脂饲料(84 9／6基础饲料+1o猪油+5 蛋黄粉+1 胆固醇)喂养，并于造模第1天予以腹腔注射四环素150 mg／kg，后每隔6 d腹腔注射四环素110 mg／kg 1次，共6次。

1．2．2 给药方法自造模第1天起，除正常对照组外，其余各组均按5 ml〃kg 〃d一，1次／d，分别灌服生理盐水或相应的药物溶液。HTXZR高剂量和低剂量组的给药浓度分别为HTXZR 2 g／ml和1 g／ml(相当于成人用药剂量的2O倍和1O倍)；DBGTT溶于蒸馏水中，制成浓度为0．06 g／ml的溶液，给药浓度为0．225 g〃kg。〃d (相当于成人用药剂量的1O倍)。连续7周。4种中药复方对大鼠脂肪肝模型胰岛素抵抗及瘦素的影响

1．2．1 分组与模型制备：SD雄性大鼠，1 10只，随机分为空白组、模型组、东宝肝泰组(东宝组)、

化痰祛浊高剂量组(化痰高组)、化痰祛浊低剂量组(化痰低组)、疏肝健脾高剂量组(疏肝高组)、疏肝

健脾低剂量组(疏肝低组)、凉血活血高剂量组(凉血高组)、凉血活血低剂量组(凉血低组)、滋阴补肾

高剂量组(补肾高组)、滋阴补肾低剂量组(补肾低组)等

1 1组各10只；常规饲养1周后，除空白组给予基础饲料外，其余10组均饲以高脂饲料(质量分数84％

基础饲料+质量分数10％猪油+质量分数5％蛋黄粉+质量分数1％胆固醇)，并于造模第1 d腹腔注射

四环素150 mg／kg，其后每6 d 1次腹腔注射四环素1O0 mg／kg，计6次。

1．2．2 给药方法：自造模第1 d起，除空白组外，各组分别灌服生理盐水及相应药物，东宝肝泰溶

于蒸馏水中，制成0．06 g／ml的混悬液，灌服剂量为0．225 g／(kg·d)，相当于成人用药量的10倍。高剂量组按10 ml／(kg·d)灌胃，相当于成人用药量的20倍，低剂量组按5 ml／(kg·d)灌胃，相当于成人用药量的10倍。

1．2．3 标本采取：于造模第7周结束时采集标本。方法：隔夜禁食，次日以20 g／L戊巴妥钠溶液1 ml ／kg腹腔内注射麻醉后，从腔静脉采血，然后迅速取出肝脏称肝湿重，计算肝湿重／体重比值，即为肝指数。所采血在30 min内离心取血清待检。

1．2．4 指标测定：瘦素及空腹胰岛素定量采用放1．6 标本采取于实验造模第7周结束时处死各组动物，方法：隔夜禁食，次日以2％戊巴妥钠溶液1ml／kg体重腹腔内注射麻醉后，迅速取出肝脏称肝湿重，并取肝左叶0．1cm x 0．1cm x 0．6cm 标本2～4块经戊二醛锇酸固定、然后取同部位肝左叶1块0．5cmX 1cm X 0．3cm 组织置于l0％磷酸缓冲甲醛液

固定。

1．7 指标涸定

1．7．1 瘦素及空腹胰岛素定量采用放射免疫方法，

单位以 g／ml表示。根据_5】推荐公式计算胰岛素抵抗

指数(胰岛素抵抗指数=空腹血糖含量X空腹胰岛

素含量／22．5)。

1．7．2 肝脏病理光镜：取肝左叶，中性甲醛固定肝标本，肝组织石蜡切片HE染色观察肝脏病理学改变。电镜：标本经戊二醛锇酸固定，环氧树脂包埋，超薄切片透射电镜观察肝组织超微结构变化。光镜下评估肝脂肪变性程度，判断标准按照脂变细胞占肝细胞的百分比进行脂变程度分级_5】。

三七总皂苷对大鼠非酒精性脂肪肝模型

胰岛素抵抗及瘦素受体表达的影响

1．1 实验动物及饲料选取Wi~ar雄性大鼠40只(由山西医

科大学实验动物中心提供)，体重(180±20)g，实验室温度

(18-22)℃，湿度45％～65％，各组动物单笼喂养，自由饮水。基础饲料(山西医科大学实验动物中心提供)；高脂饲料：基础饲

料84．5％、蛋黄粉10％、猪油5％，猪胆盐0．5％。

1．2 试验用药品及试剂三七总皂苷粉剂(云南玉溪市维和制1．4 动物模型分组及标本制备适应性饲养7 d后，按体重编

号，完全随机分组，正常组10只、造模组30只，均自由进食、进水。正常组喂养基础饲料，造模组喂养高脂饲料。3个月后随

机解剖正常组大鼠2只和造模组大鼠6只，取肝组织，HE染色。

造模成功后，造模组停喂高脂饲料，改为普通饲料喂养，剩余32 只大鼠再随机分为4组，每组8只。正常组：纯净水4 mL／d灌

胃30 d；模型组：纯净水4 mL／d灌胃30 d；三七总皂苷低剂量组：三七总皂苷100 mg／(kg·d)灌胃30 d；三七总皂苷高剂量组：三七总皂苷200 mg／(kg·d)灌胃30 d。各组大鼠药物干预

30 d后，禁食、禁水12 h，次日称体重，注射25％乌拉坦0，4 mL／kg，

麻醉后腹主动脉取血每只4 mL，室温下2 000 r／min离心15

mln，分离血清，一40℃冰箱保存。迅速取出肝脏，称湿重，并取肝右叶2块用10％甲醛固定，分别用于HE 染色和瘦素受体免

疫组化染色。

1．5 指标测定