发光细菌法急性毒性实验课件PPT

合集下载

天津市地表水水体污染发光细菌的急性毒性表征研究

② ＭｃｏｏｃｔｅｇｎｉｒｔｘＡｕｅＲａｅｔ试剂在４ ℃左右回温，水合后
Ｂ＠
圆ｏ
囝ｏ
ｏ
●
空自
Ｉ￣ｌ蕞ｔａ
发光菌在进行新陈代谢时会发光，当某种因素影响其正常新陈代谢
Ｃｏ０ｏｏ
线（范围），作为水质突变和毒性应急的指导依据。关键词：地表水：发光细菌；急性毒性中图分类号：Ｘ文献标识码：Ａ文章编号：Ｉ７一７９２１）０１１２９６｜５７（００４０３ —０Ｔ
０曹畜
２）测定条件。室温要求：１—０Ｃ５３＂
４结累厦讨论我们在４ｉ月期间通过对地表水发光细菌的急性毒性试验发光损失～１
率测定结果见表ｉ，通过计算初始算术平均值Ａｏｃ及标准偏差值Ｓｏｃ，得控制
范围ＡｏＳｏｃ ±３ｃ。建立综合毒性基准线，作为应急（发地控制：培养块１＋． ℃，５０５读数井１＋Ｙ。５Ｉ￣
３）步骤。① 将ＭｃｏｏｉｒｔｘＡｏｏ０ｏｏ №ｄｌ５０析仪模式钮调置 “ ｅ０分
Ａｕｅ模式，使用８．％ｃｔ” １９ＳｒｅｉｇＴｓ实验检测方式。ｃｅｎｎｅｔ
尔弧菌为弧菌属发光细菌。细菌发光可概括为细菌体内合成的细菌发光酶催化还原型的黄素单核苷酸（ＭＩ）和长链脂肪醛（ＣＯ至少含８ｃＦＮ１２ＲＨ，个）并在０的参与下发生氧２化还原反应而放出光子。细菌的发光涉及多种物质的参与。而且这些物质的合成或产生是细菌的生理代谢的一个组成部分，因此，只有在外界条件适宜时。发光才比较理想。所以发光细菌的发光状况对外界条件的变化极为敏感，并可通过发光强度的改变很快反映出来，这就是为什么可以利用发光细菌来检测环境中有毒、有害物质的基本原理，也是发光细菌能应用于快速的环境污染监测的根本原因。此方法利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。毒物的毒性可以用发光损失率表示，也

毒性试验整理

实验一发光细菌的急性毒性评价试验一、实验器材1.菌株明亮发光杆菌（Photobacterium phosphoreum）2.培养基酵母膏0.5%，胰蛋白胨或多聚蛋白胨（Polypetone）0.5%，甘油0.3%，NaCl 3%，Na2HPO4 0.5%, KH2PO4 0.1%，pH6.5。

固体培养基再加琼脂2%。

3.溶液、试剂及待测物质酵母粉，蛋白胨，NaCl（AR），Na2HPO4（AR），KH2PO4（AR），甘油（AR），二甲基亚砜（AR），乙酸乙酯（AR），HCl（1M），去离子水。

4.仪器及其他用品生物毒性测试仪；电热恒温鼓风干燥箱；振荡培养箱；DELTA 320pH计；氮吹仪；镊子，移液枪，三角锥形瓶等。

二、目的要求1.学习了解发光细菌的急性毒性评价试验的基本原理。

2.掌握发光细菌的急性毒性评价试验的操作要领和评价方法。

三、基本原理发光细菌是指在正常的生理条件下能够发射肉眼可见的蓝绿色荧光的细菌，这种可见荧光波长在450-490 nm之间，在黑暗处肉眼可见。

不同种类发光细菌的发光机理是相同的，都是由特异性的荧光酶(LE)，还原性的黄素(FMNH2)，八碳以上长链脂肪醛(RCHO)，氧分子(O2)所参与的复杂反应，大致历程如下：FMNH2+LE→FMNH2·LE+O2→LE·FMNH2·O2+RCH→LE·FMNH2·O2·RCHO→LE+FMN+ H2O+RCOOH+光具体来说，生物发光反应由分子氧作用，胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为FMN及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为407-409 nm处的蓝绿光。

发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。

发光细菌含有荧光素、荧光酶、ATP等发光要素，在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。

当细胞活性升高，处于积极分裂状态时，其ATP含量高，发光强度增强。

发光细菌法急性毒性实验课件PPT

图 (1) 发光细菌的发光反应模式。E1: 细菌荧光素酶，由α、β 2个亚基组成，α为40000~42000D，β为37000~39000D。单独α、β亚基均无发光活性，只有α、β共存时才有活性。E2: NADH：FMN氧化还原酶，分子量为 3000D，对FMN有高度特异性。E3: 脂肪酸还原酶。
发光细菌的培养：
(1)培养液：酵母浸出汁5.0g，胰蛋白胨5.0g，NaCl 30.0g， NaHPO4 5.0g，KH2PO4 1.0g，甘油3.0g，加蒸馏水至 1000ml,pH调至7±0.5，趁热分装于150ml三角瓶中，每瓶约
50ml，塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经115℃、20-30min高
实验目的与内容
一、实验目的
1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；
2. 根据发光细菌发光强度的变化判断
受试化合物的毒性；
3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
二、实验内容
1. 发光细菌的复苏；
2. 发光细菌发光强度的测定；
3. 受试化合物毒性的计算。
实验目的与内容
发光细菌是一种非致病性的普通细菌，具有发光能力，在正常条件下经培养后能发出肉眼可见的兰绿色光，这种发光过程是细菌体内一种新陈代谢反应，是氧化呼吸链上的一个侧支。发光细菌的发光反应模式图(1)所示。发光细菌发光反应途径可简单概述为： FMNH2＋O2＋RCHO→荧光＋FMN＋H2O+RCOOH （1）这个发光现象是呼吸代谢耦合，作为光能被散发。当细菌体内合成萤光酶、萤光素、长链脂肪醛时，在氧的参与下发生生化反应，反应的结果便产生光。
实验原理
发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物等) 接触后, 其发光强度即有所改变。变化的大小与受试物的浓度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。通常认为外来受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如细胞呼吸等)。毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系。因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。

北方某制药废水对发光细菌的急性毒性研究

ＺＨＡＮＧＪｉｅ
（
Ｕｎｉｖｅ￣ｉ＠ｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，既
１００１２４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐａｐｅｒｕｎｄｅａａｋｅｓｔｈｅｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｓｔｕｄｅｎｔｓｏｆｔｗｏｃｏｌｌｅｇｅｓ，ａｎａｌｙｚｅｓｈｅｔｅｎｅｒｇｙ－ｓａｖｉｎｇｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｅｎｔｓ，ａｎｄｐｏｉｎｔｓｏｕｔｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｅｎｅｒｇｙ — ｓａｖｉｎｇｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｉｓｓｔｒｏｎｇｂｕｔｔｈｅｉｒｅｎｅｒｙ— ｇｓａｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒｓｌａｇｂｅｈｉｎｄ，ａｎｄｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈｅｅｎ－ｅｒｙ— ｇｓａｖｉｎｇａｎｄｅｍｉｓｓｉｏｎｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓｈｏｕｌｄｂｅｉｍｐｒｏｖｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｌｌｅｇｅｓｔｕｄｅｎｔｓ，ｅｎｅｒｇｙ — ｓａｖｉｎｇｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，ｅｎｅｒｇｙ — ｓａｖｉｎｇｂｅｈａｖｉｏｒ

《急性毒性试验》课件

食品安全性评价
急性毒性试验：评估食品中化学物质的急性毒性
应用：用于食品添加剂、农药残留、食品包装材料等安全性评价
意义：保障食品安全，降低食品安全风险
法规要求：各国食品安全法规对急性毒性试验有明确要求
Part Six
急性毒性试验的局限性
实验动物和人体的差异
物种差异：实验动物与人类在生理、生化、遗传等方面存在差异
急性毒性与其他毒性试验的整合
整合目的：提高毒性试验的准确性和效率整合方法：采用多学科、多领域的交叉研究整合优势：降低试验成本，提高试验质量整合挑战：需要解决不同毒性试验之间的差异和矛盾
急性毒性试验在特殊领域的应用
药物研发：评估药物的毒性和副作用
环境监测：评估化学物质对环境的影响
食品安全：评估食品添加剂的安全性
代谢差异：不同物种对同一种物质的代谢能力可能不同生理差异：不同物种的生理结构、功能可能不同，对同一种物质的反应可能不同
实验条件和实际条件的差异
单击添加项标题
实验条件：实验室环境，可控因素较多
单击添加项标题
实验条件：单一剂量，单一时间
单击添加项标题
实验条件：单一物种，单一环境
单击添加项标题
实验条件：短期观察，短期影响
毒性反应的机制分析
毒性反应的类型：急性、亚急性、慢性毒性反应的机制：细胞毒性、组织毒性、器官毒性毒性反应的影响因素：剂量、时间、个体差异毒性反应的检测方法：生物标志物、病理学检查、生理学检查
Part Five
急性毒性试验的应用和意义
药物研发和安全性评价
药物研发：急性毒性试验是药物研发过程中的重要环节，用于评估药物的安全性和有效性

发光细菌

优点：由于发光细菌具有生长迅速、周期短、测试费用低、同高等动物有着类似的理化特性和酶作用过程，使其具有因快速、简便、费用低廉、灵敏度高的特点，能在短时间内得到可靠的毒性资料的优点，因此被较多地用于毒性检测。
发光细菌的发光原理
• 在这些特殊的氧化反应过程中能够产生自由能，这些自由能能够使最后的产物处于激发态，从而能够产生光子。 • 发光细菌生长初期发光很弱，对数生长中期发光强度达到高峰，稳定期时发光强度下降。
发光细菌法简介
发光细菌检测原理
• 发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。 • 发光细菌含有荧光素、荧光酶、ATP等发光要素，在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。当细胞活性升高，处于积极分裂状态时，其ATP含量高，发光强度增强。
发光细菌的分类
• 明亮发光杆菌（Photobacterium phosphoreum）可在牛马的死尸和肉中繁殖；它侵入人体则会产生发光尿。
发光细菌的发光原理
• 一般来讲，在所有的生物发光细菌系统中，分子态的氧是直接或间接地参与其生物化学反应的。 • 在细菌发光体中，分子态的氧氧化FMNH (还原态的黄素单核苷酸)和长链脂肪醛，在这些反应中生成的能量不是用来质子梯度的建立、渗透反应以及ATP的合成，而是直接以光的形式释放出来。 • 在这个反应模式中共有3种酶参与，分别为FMN还原酶，荧光素酶和脂肪酸还原酶。
发光细菌法
• 一、发光细菌简介
1.发光细菌的分类 2.发光细菌的发光原理
• 二、发光细菌法简介
1.发光细菌检测原理 2.发光细菌检测方法仪器与材料测定步骤 3.发光细菌法的应用
测定工业废水的毒性测定水域(水体)的毒性

发光菌的生物毒性测试方法

结果与数据处理
Байду номын сангаас1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量再求相对发光度平均值 2 建立并检验HgCl2浓度与其相对发光度均值的相关关系先求出线性回归方程，再在一定的P值条件下查表进行r检测，验证相关方程成立，然后做出两者的关系曲线，按照同样的方法检测样品浓度与其相对发光度均值的相关性。
发光菌的生物毒性测试方法
实验原理
1 发光菌的发光机理细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为450-490nm处的蓝绿光。 2 实验原理当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影响,发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发光检测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大小与发光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过发光细菌来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最多的是明亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶性有毒物质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其对发光细菌的影响。
仪器介绍
DXY-2型生物毒性测试仪是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。
实验步骤
1 仪器的预热15min和调零 2 试管排列和滴加3%Nacl及样液
取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和 Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温 3 细菌冻干菌剂复苏瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复取2ml测试管加2mlNacl3%溶液，10μ L复苏苏发光发光菌液，颠倒摇匀，测试发光量，倍率 4仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量调至X2，发光量高于600mv，此冻干粉可用发光菌液复苏满15min，用10μ L微量注射器准确吸取10μ L复苏菌液，逐一加入各管 5 给各测试液加复苏菌液摇匀（精确计时，记录到秒）拔出样品室的盖子（红指示灯亮），将待测样品液比色管放入，盖好盖子，抓住盖子顺时针旋转（此时只绿指示灯亮）约16 读数 2s读数，抓住盖子顺时针旋转至原处（只红指示灯亮）向上拔出盖子，取出样品。

化学发光法检测传染病优秀课件优选ppt资料

第十一页，共48页。
AutolumiS2000微粒子化学发光仪
第十二页，共48页。
第十三页，共48页。
全自动化学发光免疫分析(fēnxī)系统开发及其产业化，在2021 年12月通过国家科学技术委员会的鉴定，鉴定委员会认为：
该项目具有创新性和自主(zìzhǔ)知识产权，整体达到国际先进水平。
❖ 批内、批间的分析重现性。
第二十二页，共48页。
微粒子化学发光试剂(shìjì)的精密度
HCV
1
2
3
4
5
…… Mean SD CV
批内 86.11 86.36 88.40 87.90 86.43 …… 86.27 1.55 1.79%
批间 74.59 73.63 69.64 71.90 71.96 …… 71.01 3.20 4.50%
S1, S2阴性, S3,S4,S5,S6阳性
L1、L2阳性， L3阴性，L4阴性
传统酶免法特异性
(-/-)20/20 (+/+)3/3
(-/-)20/20 (-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)14/15
(-/-)29/30 (+/+)29/30 (-/-)18/20 (+/+)20/20 (-/-)20/20 (+/+)10/10
4.91% 2.14%
HBsAg
试剂(shìjì)性能多中心临床评估
HIV
HCV
相关性显著相关显著相关
相关系数 0.99 0.93
线性系数 0.98 0.99

发光细菌法测生物毒性

主要任务1.对常用钻井液材料进行生物毒性分析，遴选出符合环保要求的材料。

2.通过进行生物毒性分析，对不符合环保要求的钻井液材料，如果是必备材料而且目前又找不到相同功能的替代品，则研制新型的符合环保要求的替代品材料。

3.在遴选出的钻井液材料中，择优选用价格性能比较好的材料，通过室内钻井液性能综合试验研究，研制出一种钻井液性能优良，能保证钻探施工顺利进行，符合环境保护要求的新型钻井液体系。

4.现场试验两口井，通过实践检验其钻井液综合性能，整理试验数据，编写研究报告。

一、完成了符合环保要求的钻井液材料的遴选1．生物毒性测定方法的选择（1）糠虾生物试验法（2）微毒性分析法（3）发光细菌法通过对发光细菌法与糠虾法试验结果对比，我们发现发光细菌法的EC50值与糠虾生物试验法的LC50值之间具有一定的相关性：EC50值总是小于LC50值，实验结果见表1。

这说明相同数值的EC50值和LC50值相比，EC50值比LC50值对环境的毒性污染更小，更安全可靠。

表1 四种钻井液体系的EC 50值与LC 50值比较因此本项目采用发光细菌法，测定钻井液单剂及体系的生物毒性，用EC50(相对发光率50%时)来表征被测物的生物毒性，EC50值越大，表明被测物的生物毒性越小；EC50值越小，表明被测物的生物毒性越大。

我们参照糠虾法的排放标准，以EC50＞30000ppm 作为钻井液单剂及体系允许排放的标准。

并参照糠虾生物毒性试验法的生物毒性分级标准，将生物毒性等级划分为六个等级(表2)，以此作为本项目的环境可接受性评价方法和标准。

表2 生物毒性等级分类2．常用钻井液材料的生物毒性评价按发光细菌法对常用钻井液材料进行毒性评价，结果见表3表3 常用钻井液材料生物毒性结果二、完成环保型高效润滑剂的研制和应用在地质调查金刚石取心钻探中，因转速较高，要求钻井液具有良好的润滑性；在石油天然气钻探中，定向井、水平井和深井所占的比例日益增加，钻井液的润滑性成为关键指标之一，因此，钻井液用润滑剂成为一种重要的常用的钻井液材料，其市场需求量日益增加，在钻井液化学处理剂中呈大幅度增长趋势，而目前的润滑剂仍在使用有毒性的矿物油材料（如柴油等）作基础原料，必然会被日益严格的环境保护要求所限制。

《环境微生物检测》PPT课件

331133发光细菌法的应用在水质监测中的应用在工业废水固体废物废气的急性毒性检测中的应用对重金属急性毒性效应的测定和评价对化学品的毒性评价和安全性评价34114污染物致突变性检测ames试验该试验是通过测定有污染物存在时鼠伤寒沙门菌salmonellatyphimurium的组氨酸营养缺陷型his菌株发生回复突变的概率来判断污染物的致癌致突变效应
传播方式：除了饮水不卫生外，更多的是通过食物以及昆虫血液传播
如疟疾是蚊子传播，食用生肉感染肉类寄生虫等
精选ppt
15
11.2.2 水质指示微生物——大肠菌群
大肠菌群是人肠道中正常的寄生菌，是一群需氧和兼性厌氧的，能在37℃，24h内使乳糖发酵产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，又称总大肠菌群。
Ames试验就是通道在培养物中加入待测物，根据不含组氨酸的培养基上组氨酸营养缺陷型茵株长出回复突变菌落数目的多少判断待测物的致突变性。
精选ppt
35
(1)试验菌株
采用鼠伤寒沙门菌变异株TA97，TA 98， TAl00，TAl02四种菌种，又增加了TA1535， TA1537，TA1538共七株。
20
A.初发酵
方法为将水样置于糖类液体培养基中，在一定温度下，经一定时间培养后，观察有无酸和气体产生，即有无发酵，而初步确定有无大肠菌群存在。如采用含有葡萄糖或甘露醇的培养基，则包括副大肠杆菌；如不考虑副大肠杆菌，则用乳糖培养基。由于水中除大肠菌群外，还可能存在其它发酵糖类物质的细菌，所以培养后如发现气体和酸并不一定能肯定水中含有大肠菌群，还需根据这类细菌的其它特性进行下两阶段的检验。
病症：伤寒或副伤寒。表现：持续发烧，牵涉
到淋巴组织，脾脏肿大，躯干上出现红斑，胃肠

发光菌的生物毒性测试方法

精品
仪器介绍
DXY-2型生物毒性测试仪是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。
精品
实验步骤
1 仪器的预热15min和调零
2 试管排列和滴加3%Nacl及样液
取出含有0.5g发光细菌冻干粉的安瓿瓶和
发光强度减弱或熄灭,发光细菌发光强度变化可用发光检
测仪测定出来。在一定浓度范围内,有毒物浓度大小与发
光细菌光强度变化成一定比例关系,因此可通过发光细菌
来监测环境中的有毒污染物。发光细菌应用最多的是明
亮发光杆菌,可以监测各种水体,对气体中可溶性有毒物
质,可先通过吸收、溶解在溶液中,再来观察其对发光细
菌的影响。
3 细菌冻干菌剂复苏 Nacl溶液，将安瓿瓶置于含有冰块的保温
瓶中，注入Nacl溶液混匀，2min后菌即复
苏取发2m光l测试管加2mlNacl3%溶液，10μ L
4仪器检验复苏发光细菌冻复倍苏率干发调粉光至质菌X2液，量，发颠光倒量摇高匀于，60测0m试v发，光此量冻，干
粉可用
发光菌液复苏满15min，用10μ L微量注射
发光菌的生物毒性测试方法
精品
实验原理
1 光菌的发光机理
细菌生物发光反应是由分子氧作用，胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为 FMN 及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为450-490nm处的蓝绿光。
2 实验原理
当发光细菌接触有毒污染物时,细菌新陈代谢则受到影响,
1 相对发光度的平均值
相对发光度（%）=Hgcl2管或样品管发光量/CK管发光量再求相对发光度平均值

lecture 11 - 发光细菌

氧化逆境的侦测
细胞代谢或紫外光照射时, 细胞代谢或紫外光照射时, 细胞内部会产生超氧离子与自由基, 生超氧离子与自由基, 造成细胞老化与伤害以遗传工程技术, 以遗传工程技术, 将发光基因与对过氧化物敏感的基因结合起来细胞遭遇过氧化物时, 会发出萤光, 细胞遭遇过氧化物时, 会发出萤光, 因而可以侦测氧化逆境
指标微生物与发光菌
大纲
指标生物指标生物在环境监测上的应用发光生物发光细菌发光细菌如何应用於环境监测发光细菌在研究与其他生物科技上的应用
近代化学污染特性
化学物成分复杂与多元化难分解化学与物理法分析困难不易鉴定毒性物质对生物之加乘效应
加乘效应: 毒物毒性单位为1 加乘效应 A 毒物毒性单位为 B 毒物毒性单位为毒物毒性单位为1 A+B 同时对生物的毒性 > 1+1
指标藻类
- 污染水域指标藻种
单胞藻 Chlamydomonas 是污染水中常出现的藻种
指标藻类
- 污染水域指标藻种
眼藻 Euglena 亦是污染水中常出现的藻种
指标藻类
- 污染水域指标藻种
颤藻 Oscillatoria (一种蓝绿藻) 是污染水中常出现的藻种, 不但产一种蓝绿藻) 是污染水中常出现的藻种, 生臭味影响水质, 而且会阻塞滤床, 生臭味影响水质, 而且会阻塞滤床, 是自来公司的头痛人物
生物发光反应 (Bioluminescence)
萤火虫
发光基质 + 氧气 + ATP 萤光
发光酵素
氧化态基质 + ADP +
发光细菌
发光酵素
醛类基质 + 氧气 + FMNH2 光
酸类基质 + FMN + 萤

发光细菌

发光细菌发光细菌，进行生物发光的细菌。

多数为海生，与发光浮游生物同是引起海面发光的原因。

此外，在空气中，死鱼及水产加工食品的表面于暗处也会发光，这种发光现象是海生菌第二次生长繁殖的结果。

用加有3％NaCl，1％甘油的普通肉汁蛋白胨培养基可以培养。

发光菌形态虽多种多样，但生理特性却非常相似。

一般对明胶不产生液化，分解蛋白质后不形成毒物，常寄生在各种动物体上引起“发光病”，即寄生发光。

这些细菌通常经由寄主的卵传递给后代寄主。

有些发光鱼类和乌贼是和发光细菌共生而利用了细菌的发光。

近年来，水污染问题日益严重，与此同时也开发出许多灵敏、有效的环境监测方法，这些方法可以划分为两类：分析技术和生物监测。

其中分析技术常常用于废水常规指标的测试，但不能反应水质综合毒性的大小。

传统的生物监测以水蚤、藻类或鱼类为受试对象，虽然能反映毒物对生物的直接影响，但是这些方法的最大缺点是实验周期长，实验过程比较繁琐。

针对传统生物毒性检测方法的不足，研究和开发新型生物毒性监测技术——发光细菌法。

该方法以简便的操作方式、测量结果一目了然，受到了科研单位和企业的青睐。

随着人们环保意识的增强，原有污染物排放标准的常规污染指标已不能全面说明污染物对生存环境造成的危害程度。

无法反映出有毒化合物相互作用的影响，发光细菌法则不然，既可以测定废水的综合毒性，也可以测定单一污染成分的毒性。

工业废水是水体污染的重要原因之一，当受纳水体的污染物达到一定浓度时，会引起生物中毒反应，使之行为异常，生理功能紊乱，组织细胞病变，甚至死亡。

国外在20世纪70年代和80年代做过大量用发光细菌法则测定废水综合毒性的研究。

Bolich根据采用发光细菌方法和采用鱼类测定工业废水的急性的实验结果，提出了3个毒性比较方法标准：1、有毒/无毒，2、百分数等级，3、对数等级。

自1672年R．Boyle观察到发光的菌体所发出的光易被化学物质抑制后，许多科学家相继对细菌的发光效应进行了大量的研究。

水质急性毒性的测定发光细菌法

结果计算
• 计算样品相对发光度(%)，并算出平均值。 • 符合条件1者，建立并检验氯化汞浓度(C)与其相对发光度(T)%均值的相关方程，也可以绘制关系曲线。 • 符合条件2者，建立并检验样品稀释浓度(C) 与其相对发光度(T)%均值的相关方程，关系曲线。
根据测试结果表达样品急性毒性
• 符合条件1者，测试结果报告同时列举样品相对发光度及其相当的氯化汞浓度值。 • 符合条件2者，测试结果报告列举样品的 EC50值。
பைடு நூலகம் 实验步骤
• 1.样品处理 • 样品的采集和保存
• 样品液的稀释：样品液预试验取事先加氯化钠至3 g/100 ml浓度的样品母液2 ml装入样品管，并设一支CK管(氯化钠3 g/100 ml溶液)，测定相对发光度，分两类情况：1，相对发光度低于 50%乃至零，欲以EC50表达结果，则须稀释； 2，，相对发光度在1%以上，欲以与相对发光度相当的氯化汞浓度表达结果，则不须稀释。
• 2.相对发光度测定： • 用 5m l 的定量加液瓶给每支CK管加2或5 ml 氯化钠3 g/100 ml(据仪器型号而定) • 用 2或 5m l吸管给每支样品管加2或5m l样品液
• • • • •
3：发光细菌冻干菌剂复苏 4：仪器的预热和调零 5：仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量 6：给各测试管加复苏菌液 7：发光细菌与样品反应达到终止时间的读数 • 8：有色样品测定干扰的校正
样品稀释
• 探测实验： • 按对数系列将样品液稀释成5个浓度:100%,10%，1%，O.1 %,0.01 粗测一遍看1% 一100%相对发光度落在哪一浓度范围。 • 在 1 % -100%相对发光度所落在的浓度范围内再增配6-9个浓度(例如，若落在0.1%-10%之 • 间，则应稀释成。 1%,0.25%,0.5%,0.75%,1%,2.5%,5%,7.5%,10%;若落在1%-10%之间，则 • 应稀释成1%,2 %,4%,6%,8 %,10 %)，再测一遍相对发光度

发光细菌-PPT精品文档

发光细菌的作
FMN+H2O+RCOOH
发光细菌的应用举例
• 1.环境毒性检测 • 细菌发光会被毒性物质所抑制，发光强度变化与有毒物质毒性及浓度正相关。
发光细菌的应用举例
• 2.发光基因的应用 • 发光细菌所含的发光基因可作为标记基因和报告基因来研究基因的转导、表达和调控。
发光细菌的介绍
发光细菌是一类在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌，这种可见荧光波长在450-490nm之间，在黑暗处肉眼可见。
发光细菌介绍
多数为海生，许多鱼类和乌贼是由于发光器中与发光细菌共生而发光。
生物学意义：捕食、恐吓、求偶、种群联系
发光细菌的分类
• • • • • 异短杆菌属发光异短杆菌发光杆菌属明亮发光杆菌希瓦氏菌属羽田希瓦氏菌弧菌属费氏弧菌、青海弧菌、哈维氏弧菌等其中异短杆菌和青海弧菌属于淡水发光细菌
发光细菌的应用举例
• 3.生物灯 • 荷兰飞利浦电子公司设计了一种“生物灯”，能够为任何房间提供温馨惬意的照明光源。这种生物灯是由一组玻璃容器组成，容器内包含着生物发光细菌，当它们接触沼气时就会发出绿色荧光。
谢谢！
澳潘大多利拉亚星球
" "
之湖
日本荧光海
它们为什么会发光？
发光细菌
LUMINOUS BACTERIA
成员：袁婷婷苏欣莹
目录
• 发光细菌的发现
• 发光细菌及作用机理 • 发光细菌的应用举例
发光细菌的发现
原苏联作家西蒙诺夫在他的《战争日记摘录》中，曾记述了这样一件事：第二次世界大战后期，他乘坐一艘战舰随军远航。军舰上灯光管制，周围漆黑一片。他对舰长说：“我们运气很好，夜色这样黑，敌机是发现不了我们的。”舰长把他领到舰尾，这时他看到军舰竟在海水中留下了一条长长的发光磷光的水带，且此时敌机已循着这条银白色的亮迹追了上来。原来，当军舰的螺旋浆把水搅动时，海水中的发光生物就靠这种波动为动力和氧气的来源纷纷放光发亮，这就是俗话说的“海火”。

急性毒性实验内容ppt课件

6
10 15 18 19
四 3 11 16 17
26
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一4 7
9 12 19
二1 三2
5
8 13 14
6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
27
随机区组设计将动物称重，按体重顺序依次排列编号，分成若干个区组，每一区组的动物体重相近，每一区组的动物数即为组数。再从随机数字表上任意抄下随机数字，依次标在每个动物的编号下，如欲将动物分为４组，则将每一区组动物编号下的随机数字，按顺序分别用４、３、２、１除之，根据余数大小将动物分入各组。
15
16
染色法优点：简单方便，不痛苦，无损伤。缺点：时间较长时，染色剂易褪色；标记容易模糊不清。
17
耳缘孔口法：在耳缘先用针穿孔和用剪刀剪口，再用酒精墨汁涂抹，使黑色渗入孔口，伤口愈合后不易脱落，这种标号亦可标号１～９９。适用于大、小鼠。
18
烙印法：将铸铁号码加热后，在动物体表部位烧烙，以破坏毛囊，留下印记。适用于大动物。
38
曲线：中间高、两侧低，右侧延长较远
剂量
中点
正态曲线中点
对数剂量
39
计算LD50的常用方法: 概率单位法 Bliss法改良寇氏（Kärber）法等
40
LD50的计算公式
41
校正公式
42
LD50的标准误
43
LD50 的95 %可信限 LD50 的95 %可信限 =log-1(log LD50±1.96×Sx50)
变色、呼吸。体重：隔日测量死亡和死亡时间病理学检查及其他指标
37
LD50的计算 LD50测定是以动物死活为指标的质反应，当死亡呈正态分配时，一般具有以下

化学发光法检测传染病.ppt

典》规定反应时间至少要2小时30分钟；而全自动微粒子化学发光
试剂则不到30分钟即可完成。 ❖ 稳定性更好 ❖ 特异性更好
大部分国际一流厂家也都采用直接发光法：
罗氏西门子雅培
…….
方法学项目
HBsAg
HBsAb HBeAg
HBeAb
HBcAb
HCV HIV TP
传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比
4、光信号检测，提高信噪比
信号放大代替靶标放大，减少靶标放大带来的非特异性反应，远远大于ELISA的信噪比。
60 50 40 30 20 10
0 ELISA
CLIA
本底噪音信号
新型丙肝化学发光试剂---降低漏检率
1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基础上增加了E1区，保证抗原片段的齐全
精密度
13.21% 12.05% 12.04%
12.31%
14.03%
10.05% 14.34% 11.26%
微粒子发光法
分析敏感度
特异性
adr 0.1IU/mL adw 0.1IU/mL ay 0.2IU/mL
10 mIU/mL 1# ≥1:64 2# ≥1:128 3# ≥1:32 1# ≥1:32 2# ≥1:64 3# ≥1:64 1# ≥1:128 2# ≥1:128 3# ≥1:256
1、关于灵敏度的两个概念
（1）分析灵敏度决定因素： a.单个抗原决定族的抗原性强弱。 b.试剂盒的信号放大能力
（2）流行病学敏感度决定因素： a.抗原片段的种类是否齐全。 b.是否含构像抗原。 c.分析灵敏度的高低。
• 2、抗原片段种类不全
C E1E2/NS1 NS2 NS3 NS4a NS4b NS5a NS5b

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

发光细菌法急性毒性的测定
主要内容
一、简介二、实验目的与内容三、实验原理四、实验材料与方法五、实验步骤
六、注意事项
七、习题与思考
简介
发光菌毒性测试是20世纪70年代后兴起
的一种微生物监测环境污染及检测污染物毒性的新方法。 1978年美国 Beckman 公司即推出功能完备的生物发光光度计“Microtox”，自此，这一急性毒性测试技术在世界范围内迅速推广。因此人们也将发光菌毒性测试称为 Microtox测试。
实验材料与方法
1. 试剂：氯化汞（分析纯）；氯化钠（化学纯）；蒸馏水。氯化钠溶液，2.0 g/100 ml (3.0 g/100 ml)，称取2.0 g (3.0 g)
氯化钠溶于100ml蒸馏水中，置于2-5℃冰箱备用。
氯化汞母液，2 000 mg/L，万分之一分析天平精称密封保存良好的无结晶水氯化汞0.1000 g于50 ml容量瓶中，用3.0
发光细菌的培养：
(1)培养液：酵母浸出汁5.0g，胰蛋白胨5.0g，NaCl 30.0g， NaHPO4 5.0g，KH2PO4 1.0g，甘油3.0g，加蒸馏水至 1000ml,pH调至7±0.5，趁热分装于150ml三角瓶中，每瓶约
实验目的与内容
一、实验目的
1. 掌握发光细菌毒性测试的标准方法；
2. 根据发光细菌发光强度的变化判断
受试化合物的毒性；
3. 初步了解发光细菌毒性测试的影响因素。
二、实验内容
1. 发光细菌的复苏；
2. 发光细菌发光强度的测定；
3. 受试化合物毒性的计算。
实验目的与内容
发光细菌是一种非致病性的普通细菌，具有发光能力，在正常条件下经培养后能发出肉眼可见的兰绿色光，这种发光过程是细菌体内一种新陈代谢反应，是氧化呼吸链上的一个侧支。发光细菌的发光反应模式图(1)所示。发光细菌发光反应途径可简单概述为： FMNH2＋O2＋RCHO→荧光＋FMN＋H2O+RCOOH （1）这个发光现象是呼吸代谢耦合，作为光能被散发。当细菌体内合成萤光酶、萤光素、长链脂肪醛时，在氧的参与下发生生化反应，反应的结果便产生光。
表1 氯化汞工作液稀释配制系列(稀释至50 ml容量瓶中)
氯化汞工作液体积，ml
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
配制氯化汞浓度， mg/L
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
0.12
0.14
0.16
0.18
0.20
0.22
0.24
2. 明亮发光杆菌T3小种 (Photobacterium phosphoreum T3 spp.)冻干粉，安培瓶包装，在2-5℃冰箱内有效保存期为6个月。新制备的发光细菌休眠细胞(冻干粉)密度不低于每克800 万个细胞；冻干粉复苏2 min 后即发光，可在暗室内检验，肉眼可见微光，稀释成工作液后，经稀释平板法测定，每毫升菌液不低于 1.6万个细胞(5毫升测试管)或2万个细胞(2毫升测试管)。在 DXY-2型毒性测试仪上测出的初始发光量应在600-1900 mV之间，低于600 mV允许将倍率调至“X2”档，高于1900 mV允许将倍率调至“X0.5”档。仍达不到标准者，更换冻干粉。发光细菌的毒性实验在美国Maxwell（MSI.） LuminMax-C 冷光仪完成。
g/100ml氯化钠溶液稀释至刻度，置于2-5℃冰箱备用，保存
期6个月。

氯化汞工作液，2.0 mg/L，用移液管吸取氯化汞母液10 ml
入1000 ml容量瓶，用3.0 g/100ml氯化钠溶液定容。再用移液
管吸取氯化汞20 mg/L 液25 ml入250 ml容量瓶，用3.0 g/100 ml氯化钠溶液定容，将此液倒入配有半微量滴定管的试液瓶，然后，用3.0 g/100 ml氯化钠溶液将氯化汞2.0 mg/L溶液按表1 稀释成系列浓度(稀释至50 ml容量瓶中)。配制的稀释液保存期不超过24小时。
图 (1) 发光细菌的发光反应模式。E1: 细菌荧光素酶，由α、β 2个亚基组成，α为40000~42000D，β为37000~39000D。单独α、β亚基均无发光活性，只有α、β共存时才有活性。E2: NADH：FMN氧化还原酶，分子量为 3000D，对FMN有高度特异性。E3: 脂肪酸还原酶。
简介
采用现代光电检测手段(生物发光光度计)的发光菌生物毒性实验是毒理学中生物测定的方法之一。该方法快速、
简便、灵敏、廉价,在有毒物质的筛选，环境污染生物学评
价等方面有重要的意义，因而备受各国有关研究者的关注。 1995年3月，国家环境保护局、国家技术监督局将发光菌毒性测试定为水质监测标准方法(GB/T 15441-1995)。
NAD E2 NADH
+
FMNH2 O2 FMN H2O2 E1
E1 FMNH2 RCHO
O2
E1 FMNHOOH NADPH RCHO E3 RCOOH
E1+FMN+H2O2
E1 FMNH2 RCHO NADP+
E1 FMN 呼吸产能 H2O2 E1 FMN HOH hv RCOOH
O2 E1 FMNHOOH RCHO (Lump)
发光细菌的复苏
从冰箱内取出含有0.5 g 发光细菌冻干粉和氯化钠溶液，置于含有冰块的小号保温瓶，用1 ml注射器吸取0.5 ml冷的氯化钠2.0 g/100 ml溶液(适用于5ml的测试管)或1 ml 冷的氯化钠2.5
％溶液(适用于2 ml的测试管)注入冻干粉中，充分混匀。2 min
后菌即复苏发光，可在暗室观察，肉眼可见微光。备用。
实验原理
发光菌的发光现象是其正常的代谢活动, 在一定条件下发光强度是恒定的, 与外来受试物(无机、有机毒物, 抑菌、杀菌物等) 接触后, 其发光强度即有所改变。变化的大小与受试物的浓度呈相关关系, 同时与该物质的毒性大小有关。通常认为外来受试物通过下面两个途径抑制细菌发光: (1) 直接抑制参与发光反应的酶类活性; (2) 抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程(如细胞呼吸等)。毒物的毒性可以用EC50表示, 即发光菌发光强度降低50% 时毒物的浓度。实验结果显示, 毒物浓度与菌体发光强度呈线性负相关关系。因而可以根据发光菌发光强度判断毒物毒性大小, 用发光强度表征毒物所在环境的急性毒性。