六种基因多态性对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响

Ｙｉｎ９１，Ｈａｎ Ｌｕｌｕｌ，Ｌｉ Ｙａｈｌ，Ｚｈａｎｇ Ｘｉａｏｘｉｎ９１，Ｌｉｕ Ｚｈｉｈｏｎｇ ２，Ｔａｎｇ Ｘｕ Ｊｉａｎｐｉｎｇ ４，Ｌｉｕ Ｈｏｎ９１，Ｌｉ Ｙｉｓｈｉｌ． Ｄｒｕｇｓ ｏｆ Ｃａｒｄｉａｃ
Ｍｉｎ ３，ｈ
３。Ｗａｎｇ肌ｉ
４，
（１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ丁ｒ妇￡Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｖｅｓｓｅｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ，３ Ｃａｒｄｉａｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ Ｃｅｎｔｅｒ．４ Ａｄｕｌｔｓ Ｃｅｎｔｅｒ
较罕见，在本研究人群中仅检测到杂合变异３例；在本 研究人群中有９．４％的患者携带至少１个ＣＹＰ２Ｃ９’＊ ３变异，基因；各基因位点检测结果均符合Ｈａｒｄｙ— Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡定律，说明本研究人群符合群体基 因遗传平衡。
ＤＮＡ提取抽取患者外周静脉血４ ｍＬ用于
基因检测。用全血ＤＮＡ提取试剂盒（天根生化科技
通信作者：刘红，Ｅｍａｉｌ：ｗｉｎｔｅｒｌｉｕｃｎ＠１２６．ｃｏｍ
万方数据
中华医学遗传学杂志２０１４年６月第３１卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ
２０１４，Ｖ０１．３１，Ｎｏ．３
华法林是目前临床上应用最广泛的口服抗凝药， 主要应用于肺栓塞、深静脉血栓等血栓性疾病的治疗， 以及人工心脏瓣膜置换术后、心房颤动等疾病的血栓 栓塞预防’１一。由于华法林抗凝效果存在很大个体差 异，达到相同的抗凝强度，不同患者所需要的华法林剂 量可达２０倍以上［ｚ］。其中遗传因素是影响华法林剂 量的主要因素。近年的研究发现，维生素Ｋ环氧化物 还原酶复合体亚基１（ｖｉｔａｍｉｎ
ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ
结果
２．１
基因检测结果
ＶＫＯＲＣｌ、ＣＹＰ２Ｃ９、ＧＧＣＸ、
ＰＲＯＣ、ＥＰＨＸｌ及ＣＹＰ４Ｆ２基因９个ＳＮＰ位点等位 基因及基因型分布频率，见表２。
结果显示，ＶＫＯＲＣｌ基因一１６３９和１１７３位点的
多态性存在强烈连锁不平衡（ｒ２＞０．９）。因此仅分析 ＶＫＯＲＣｌ—１６３９Ｇ／Ａ位点基因型对华法林剂量的影 响，在本研究人群中有１９．１％的患者携带至少１个
１９．０，
Ｉｎｃ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＵＳＡ）进行统计学处理；所有数据
均先进行正态性检验；对于正态分布样本，两独立样本 之间的均值比较采用ｔ检验；三样本之间的均数比较 采用方差分析。单因素及多元回归分析ＶＫＯＲＣｌ、 ＣｙＰ２Ｃ９、ＧＧＣＸ、ＰＲＯＣ、ＥＰＨＸｊ、ＣｙＰ４Ｆ２基因多态 性以及非遗传因素与华法林稳定日均剂量的相关性。
ＣＹＰ４Ｆ２ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
Ｆｏｕｒ
Ｗａｒｆａｒｉｎ
ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｄｏｓｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ ｈｅａｒｔ ｖａｌｖｅｓ，ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ
１０００３７，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）
ＣｏｒｒＰ５户Ｄｎｄｉ理ｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉｕ Ｈｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｗｉｎｔｅｒｌｉｕｃｎ＠１２６．ｃｏｍ
［Ａｂｓｔｒａｅｔｌ
０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ
ｏｎ
ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ＶＫＯＲＣｌ，ＣＹＰ２Ｃ９，ＧＧＣＸ，ＰＲｏＣ，ＥＰＨＸｌ ａｎｄ
ｏｒ
ｏｒ
ｈｕｎｄｒｅｄ
ｅｉｇｈｔｙ－ｅｉｇｈｔ
ｐｕｌｍｏｎａｒｙ
ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｓｔａｂｌｅ Ｗａｒｆａｒｉｎ ｄｏｓｅ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ．ＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅ ｕｓｅｄ
ｔｏ
ｄｉｒｅｃｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｗｅｒｅ
ｇｅｎｏｔｙｐｅ似０ＲＣ】，ＣＹＰ２Ｃ９，ＧＧＣＸ，ＥＰＨＸ】ａｎｄ
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，２ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ
Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｕｗａｉ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｐｅｋｉｎｇ
ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ
Ｕｎｉｏｎ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅ（ｉｉｎｇ
【关键词１ ＶＫＯＲＣｌ基因； ＣＹＰ２Ｃ９基因； ＧＧＣＸ基因；ＰＲＯＣ基因； ＥＰＨＸｌ基因；
ＣＹＰ４Ｆ２基因；基因多态性；华法林
Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｓｉｘ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
ｏｎ
Ｗａｒｆａｒｉｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ
ｄｏｓｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ’Ｌｏｕ Ｈａｉｗｅｎ
人群华法林稳定剂景的影响。方法随机选取４８８例服用华法林抗凝且国际标准化比值均稳定达标的中 国汉族患者，抗凝指证包括人工瓣膜置换术后、房颤及肺血栓栓塞症，对所有入选患者进行上述６种基因多 态性检测，并记录患者平均每日华法林稳定剂量、人口学信息及合并用药情况等；分析ＶＫＯＲＣｌ、ＣＹＰ２Ｃ９、 ＧＧＣＸ、ＰＲＯＣ、ＥＰＨＸｌ及ＣＹＰ４Ｆ２基因多态性、人口学信息及合并用药对华法林稳定剂量的影响。结果
ａｎｄ
ＣｙＰ４Ｆ２ ｇｅｎｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ．Ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃ
ｗｅｒｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｓｔａｂｌｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｏｓｅ ｏｆ Ｗａｒｆａｒｉｎ
ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ
ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ
ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ｆｏｒ
ａｌｌ
ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＶＫｏＲＣｊ，ＣＹＰ２Ｃ９，ＧＧＣＸ，ＰＲｏＣ，ＥＰＨＸｌ ａｎｄ ＣｙＰ４Ｆ２ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ， ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ
（ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｔ位点，应用直接测序法检测，各检测位点的引物见表
１。 １．２．２
Ｃ，ＰＲＯＣ）、环氧化物水解酶
１ ４Ｆ２
临床资料的收集
Fra Baidu bibliotek
收集所有入选患者人口学
（ｅｐｏｘｉｄｅｈｙｄｒ０１ａｓｅｌ，ＥＰＨＸｌ）及细胞色素Ｐ４５０
特征及临床信息，包括性别、年龄、身高、体重、平均每 日华法林服用剂量、吸烟、饮酒史以及合并用药情况
ｒａｔｉｏ，ＩＮＲ）值均在
目标范围内。（２）排除标准为年龄＜１８岁；ＩＮＲ未稳 定达标；严重肝肾功能不全、严重感染、严重心力衰竭 （心功能ＮＹＨＡ分级Ⅲ级以上）、重度肺动脉高压、甲 状腺功能异常、呼吸衰竭、贫血、恶性肿瘤、血液疾病及 妊娠的患者；出现严重出血或栓塞等不良事件。 １．２方法
１．２．１
似０ＲＣ】一１６３９Ｇ等位基因；ＣＹＰ２Ｃ９＊２位点变异
ｒｓ２０６９９１９ ｒｓｌ８７７７２４
１，ＶＫＯＲＣｌ）和细胞色素Ｐ４５０
Ａ／Ｇ位点（简称ＰＲＯＣｌ）、ＥＰＨＸｌ基因 Ｃ／Ｔ位点以及ＣＹＰ４Ｆ２基因ｒｓ２１０８６２２ ｃ／
（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０
２Ｃ９，ＣＹＰ２Ｃ９）基因多态性与华法
林稳定剂量的个体差异密切相关。另有研究发现７一谷 氨酰羧化酶（－／一ｇｌｕｔａｍｙｌ ｃａｒｂｏｘｙｔａｓｅ，ＧＧＣＸ）、蛋白Ｃ
ｈａｖｅ
ｇｒｅａｔｅｒ
ｉｍｐａｃｔ
ｏｎ
Ｗａｒｆａｒｉｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｄｏｓｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ
ＶＫＯＲＣｌ ａｎｄ ＣＹＰ２Ｃ９ ｇｅｎｅ
ｗｉｔｈ ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｈａｖｅ
ａ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍｐａｃｔ
ｇｅｎｅ；
ｏｎ
Ｗａｒｆａｒｉｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｄｏｓｅ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．
ＥＰＨＸｌ
ｇｅｎｅ；
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＶＫＯＲＣｌ
ＣＹＰ４Ｆ２ ｇｅｎｅ
ｌ
ＣＹＰ２Ｃ９ ｇｅｎｅ；ＧＧＣＸ ｇｅｎｅ；ＰＲＯＣ ｇｅｎｅ；
Ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：
ｇｅｎｅ
Ｗａｒｆａｒｉｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ
ｅｘｐｌａｉｎ １％．ＧＧＣＸ，ＰＲｏＣ ａｎｄ ＥＰＨＸｌ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｈａｄ
ａ
ｎｏ
ｉｍｐａｃｔ
ｎｏ
Ｗａｒｆａｒｉｎ
ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｄｏｓｅ．
ＶＫＯＲＣｌ ａｎｄ ＣＹＰ２Ｃ９ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
等。
（ＣＹＰ４Ｆ２）的基因多态性也可能影响华法林剂量的个 体差异，而有关这几种基因多态性与中国人华法林剂 量的关系目前报道还较少。我们对上述基因多态性对 中国汉族人群华法林稳定剂量的影响进行了研究，为 指导华法林个体化用药提供依据。
ｌ对象与方法
１．２．３数据及统计学处理用ＳＰＳＳ（ｖｅｒｓｉｏｎ
ＳＰＳＳ
ＶＫＯＲＣｌ和ＣＹＰ２Ｃ９基因多态性共解释了５０％以上的中国汉族患者华法林稳定剂量的个体差异，其影响
程度大于人口学特征、合并用药等因素；ＣＹＰ４Ｆ２基因多态性仅能解释１％中国汉族患者的华法林稳定剂
量的个体差异；ＧＧＣＸ、ＰＲＯＣ及ＥＰＨＸｌ基因多态性不影响中国汉族患者的华法林稳定剂量。结论
ＶＫＯＲＣｌ和ＣＹＰ２Ｃ９基因多态性是影响中国汉族人群华法林稳定剂量的主要遗传因素。
ｃｏｍｐｌｅｘ Ｋ ｅｐｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ
２Ｃ９
有限公司）提取ＤＮＡ。基因检测位点及检测方法对７ 个与华法林剂量相关基因的９个位点进行了检测，其 中ＶＫＯＲＣｌ基因的一１６３９ Ｇ／Ａ（ｒｓ９９２３２３１）及１１７３ Ｃ／Ｔ（ｒｓ９９３４４３８）位点、ＣＹＰ２Ｃ９基因的ＣＹＰ２Ｃ９＊２ （ｒｓｌ７９９８５３Ｃ／Ｔ）及ＣＹＰ２Ｃ９＊３（ｒｓｌ０５７９１０Ａ／ｃ）位 点和ＰＲＯＣ基因（ｒｓ５９３６ Ｇ／Ｔ）位点（简称ＰＲｏＣ２）应 用Ｔａｑｍａｎ探针法检测（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ公司，美国）。 ＧＧＣＸ基因ｒｓ６９９６６４ Ａ／Ｇ位点、ＰＲＯＣ基因
表１
４个ＳＮＰ位点的引物序列
万方数据
中华医学遗传学杂志２０１４年６月第３１卷第３期Ｃｈｉｎ
Ｊ
Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ ２０１４，Ｖ０１．３１，Ｎｏ．３
・３６９・
２．２
中华医学遗传学杂志２０１４年６月第３１卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ，Ｊｕｎｅ ２０１４，Ｖ０１．３１，Ｎｏ．３
・３６７・
Ｉ临床遗传学论著
六种基因多态性对中国汉族人群华法林
稳定剂量的影响
娄莹
禹海文
韩璐璐
王巍
李彦 许建屏
张晓星 刘红
柳志红
唐闽
李一石
【摘要】
目的评价ＶＫＯＲＣｌ、ＣＹＰ２Ｃ９、ＧＧＣＸ、ＰＲＯＣ、ＥＰＨＸｌ及ＣＹＰ４Ｆ２基因多态性对中国汉族
Ｗａｒｆａｒｉｎ
Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（２０１１ｚｘ０９３０４。２０１２ｚｘ０９３０３００８—００１）
＊Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｋｅｙ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—９４０６．２０１４．０３．０２４
基金项目：国家科技重大专项（大品种药物ＩＶ期临床试验研究技术平台２０１１ＺＸ０９３０４；心血管创新药物临床研究技术平台２０１２ＺＸ０９３０３００８—００１） 作者单位：１０００３７北京，中国医学科学院北京协和医学院阜外心血管病医院卫生部心血管药物ｌ临床研究重点实验室（娄莹、韩璐璐、李彦、张晓 星、刘红、李一石）、肺血管病诊治中心（柳志红）、心律失常诊治中心（唐闽、禹海文）、成人外科中心（王巍、许建屏）
２
１．１对象
随机选取２００９年５月至２０１２年３月在
阜Ｐｂ，５，血管病医院住院或门诊就诊的正在服用华法林 抗凝的中国汉族患者，抗凝指证包括人工瓣膜置换术、 房颤及肺动脉血栓栓塞。受试者均签署知情同意书。 该试验方案通过阜外医院伦理委员会批准。（１）人选 标准为年龄≥１８岁；坚持服用华法林纳片剂治疗至少 ２月以上；所有患者均获得华法林稳定剂量即在相同 剂量下，患者至少连续３次，每次间隔１周以上国际标 准化比值（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
ｗｉｔｈ
ｏｎ
Ｗａｒｆａｒｉｎ ｄａｉｌｙ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｄｏｓｅ
ｗｅｒｅ
ａｎａｌｙｚｅｄ
ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ。Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｄｏｓｅ
ＶＫＯＲＣｌ ａｎｄ ＣＹＰ２Ｃ９ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｃｏｕｌｄ ｅｘｐｌａｉｎ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ５０％ ｒｅｃｒｕｉｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｉｌｅ ＣＹＰ４Ｆ２ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｃｏｕｌｄ ｏｎｌｙ