人前列腺癌细胞系DU 145中肿瘤干细胞样侧群细胞的分离
肿瘤干细胞的分离培养及生物学特性
肿瘤干细胞的分离培养及生物学特性王瑞海【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)027【摘要】背景:肿瘤干细胞是一类具有自我更新能力、不定分化潜能的种子细胞,可以形成不同分化程度的肿瘤细胞,是恶性肿瘤不断生长、复发转移、无法被传统的放化疗方法彻底杀死的根源.目的:总结肿瘤干细胞的分离培养及其生物学特性.方法:由作者采用电子检索的方式,在万方数据库中检索以"肿瘤干细胞,分离培养,生物学特性" 为中文关键词,计算机检索1990-01/2010-12 有关肿瘤干细胞的分离培养及生物学特性的文章,经检索共查到相关文献45 篇.经阅读标题、摘要、全文后,排除内容重复、普通综述、Meta 分析类文章后,筛选纳入22 篇文献进行评价.结果与结论:在肺癌、胰腺癌、结肠癌、肝细胞癌、神经系统肿瘤等多种脏器肿瘤中,CD133 被作为鉴定肿瘤干细胞的特异性标记物之一.巢蛋白、波形蛋白和CD117 在神经系统肿瘤干细胞中有表达.CD44 及内皮素转化酶在肺癌肿瘤干细胞中的表达具有意义.CD44 和CD24 可作为分选人胰腺癌细胞株PANC-1 中肿瘤干细胞的表面标志.而CD166 在大肠癌肿瘤干细胞中高表达.%BACKGROUND: Cancer stem cells are a kind of seed cells with self-renewal capacity and uncertain differe ntiation potential, and can differentiate into tumor cells to different extents, which are the root cause of continued growth, metastasis and recurrence of malignant tumors which cannot be completely killed by traditional chemotherapy.OBJECTIVE: To review the isolation, culture and biological characteristics of cancer stem cells.METHODS: A computerretrieve of Wanfang database (1990-01/2010-12) was conducted for articles regarding the isolation,culture and biological characteristics of cancer stem cells using the keywords of “cancer stem cells, isolation and culture, biological characteristics” in Chinese. Repetitive articles, reviews and Meta analyses were excluded, and finally 22 of 45 articles were included in result analysis.RESULTS AND CONCLUSION: CD133 is regarded as a specific marker of cancer stem cells in various organ tumors, including lung cancer, pancreatic cancer, colon cancer, hepatocellular carcinoma, nervous system tumors. Nestin, vimentin, and CD117 express in cancer stem cells of the nervous system. Expressions of CD44 and endothelin-converting enzyme in lung cancer stem cells are of significance. CD44 and CD24 can be used as cancer stem cell surface markers for sorting human pancreatic cancer cell line PANC-1. CD166 has a high expression in colorectal cancer stem cells.【总页数】4页(P5087-5090)【作者】王瑞海【作者单位】唐山市开平医院,河北省唐山市063000【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.胶质母细胞瘤肿瘤干细胞的分离培养与生物学特性研究 [J], 牛朝诗;倪永丰;陈建民2.OE19肿瘤干细胞的无血清分离培养以及肿瘤干细胞特性的鉴定 [J], 尹晓然;冯诚;马一楠;高晓燕;刘欣;贾丽君;张寅斌;张军3.卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定 [J], 俞晓毓;吴迪;王净;李菲;白绪乐;赵枫姝;窦骏4.卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定 [J], 俞晓毓;吴迪;王净;李菲;白绪乐;赵枫姝;窦骏;;;;;;;;;5.人结直肠肿瘤干细胞的分离培养与生物学特性 [J], 马丽君;王立斌;李海;叶萍;谢晓亮;李玉奎;杨银学因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肿瘤干细胞的分离培养及其在肿瘤治疗中的应用
肿瘤干细胞的分离培养及其在肿瘤治疗中的应用随着医学技术的不断前进，对肿瘤治疗的研究也越来越深入。
其中，肿瘤干细胞的研究备受关注。
肿瘤干细胞是指在肿瘤中所存在的一小部分细胞，能够不断分裂增殖，并给予肿瘤再生的可能性。
因此，肿瘤干细胞的分离与培养以及在肿瘤治疗中的应用，成为了当今医学研究的热点话题。
一、肿瘤干细胞的分离方法目前，分离肿瘤干细胞的方法主要包括紫杉醇浸润法、细胞表面标记法、限制稀释法等。
其中，限制稀释法是较为常用的一种。
限制稀释法是将单个肿瘤细胞样本通过连续的稀释、培养与观察，逐渐筛选出肿瘤干细胞。
它通过观察单个细胞的生长、分裂、增殖情况，来得出大量肿瘤细胞当中的干细胞。
虽然这种方法过程复杂、费时费力，但是它能够筛选出更加纯度高的肿瘤干细胞。
二、肿瘤干细胞的培养方法早期肿瘤干细胞的培养，主要采用血清补充的液体培养基进行细胞的培养。
但是在这种培养条件下，肿瘤干细胞很容易分化。
因此，近年来，越来越多的实验室采用无血清培养条件进行肿瘤干细胞的培养，以维持肿瘤干细胞的稳定状态。
无血清培养条件下，需要选择不同种类的培养基，添加多种生长因子与细胞基质，来模拟肿瘤干细胞自身的生长环境。
同时，还需注意对细胞的密度、温度、pH 值、CO2浓度等生理性因素的控制。
三、肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的治疗应用肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗中，具有重要的应用价值。
首先，肿瘤干细胞作为肿瘤治疗的靶点，开启了新的临床治疗途径。
其次，肿瘤干细胞可以用于评估肿瘤药物的治疗效果，这一评价标准能够更为准确反映药物的实际效果。
此外，肿瘤干细胞还可以用于评估肿瘤的预后情况，帮助医生选择更加有效的治疗方式。
总之，肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗研究领域，具有非常重要的价值。
分离肿瘤干细胞、培养肿瘤干细胞以及开展针对肿瘤干细胞的治疗策略，将有助于提高肿瘤治疗的效果，为患者带来更好的治疗效果。
谈靶向肿瘤干细胞天然药物的研究进展
谈靶向肿瘤干细胞天然药物的研究进展肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是肿瘤组织中存在的极小部分细胞,通常处于静止状态,当受到细胞因子等影响时会导致肿瘤的发生、转移和复发,这均源于CSC 拥有很强的自我更新及增殖分化的能力。
关于CSC 的来源目前仍存在诸多争议,然而科学家们已相继在多种肿瘤组织中分离得到CSC,比如乳腺、肝脏、结肠、大脑、头颈、胰腺、卵巢及白血病等。
随着手术、化疗、放疗等多种有效疗法的应用,以及疾病的早期筛查,癌症患者的存活率虽有所提高,但仍有50%的患者会遭遇病情复发,而化疗药物的应用也会极大程度地富集CSC。
因此更多的学者认为彻底治愈肿瘤的有效疗法除针对肿瘤组织中的大部分肿瘤细胞, 更重要的是靶向其中的肿瘤干细胞,由此引发靶向干细胞的药物研究成为肿瘤研究领域的热点。
研究发现许多中药、天然药物的有效成分对CSC 有明显的作用,能有效提高CSC 的化疗敏感性,靶向肿瘤发生等过程的分子信号通路,为肿瘤的药物治疗提供了新的途径。
本文对近年来靶向肿瘤干细胞的中药及天然药物进行了总结与分析。
1 小白菊内酯(parthenolide,PTL)由菊科植物艾菊中分离纯化出的倍半萜内酯化合物PTL 能够成为最近的研究热点,得益于其抗肿瘤活性、DNA 抑制及促使肿瘤细胞对抗癌药物产生致敏能力等作用。
作为核转录因子-B(nuclear factor-B,NF-B)的有效抑制剂,PTL 已被证实可诱导人急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia,AML) 干细胞的凋亡并对正常血液细胞无任何损伤效应, 是治疗白血病的潜在药物。
研究发现,PTL能够靶向抑制鼻咽癌侧群细胞并下调增强CSC 特性的环氧酶(cyclooxygenase-2,COX-2), 通过抑制B 抑制因子(inhibitor B,IB)激酶复合体(IB kinase,IKK) 的磷酸化作用和IB 的降解来发挥抗肿瘤干细胞样细胞的作用。
抗原致敏的DC-CIK对前列腺癌细胞DU145杀伤的作用
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司（美国）产品。高速离心机为
每孔加入５酬ＮＴｌ２０１＾崤再培养４ｈ，２（）（舢离心
１０ｍｉｎ，弃上清后加入１５０山二甲基亚砜，室温下震 荡溶解，于酶联免疫检测仪（波长４９２ｎｍ）检测吸光 度（Ａ），计算杀瘤率。计算公式为：杀瘤率＝１１一
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【中图分类号】
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１００６－２９４７（２０１２）０３－０２２２－０５
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（Ａ系伤组一Ａ艘随细腻组）／Ａ宅细胞蜊】×ｔ００％
Ｓｉｇｍａ公司（德国）产品。酶标仪为Ａｎｌｈｏｓ公司（奥 地利）产品。前列腺癌细胞株ＤＵ一１４５购自中国科学 院上海细胞库。 １．２冻融抗原制备 收集对数生长期的前列腺癌ＤＵｌ４５细胞，以ＰＢＳ 制成混悬液，在一８０％与３７。Ｃ条件下反复冻融３次， 低温超声破碎后１ ２０００ｒｐｍ离，Ｌ，３０ｍｉｎ，收集上清，经 ０．２２斗ｍ微孔滤膜过滤后枪测蛋白浓度备用。 １．３ ＤＣ—ＣＩＫ细胞体外诱导与扩增 根据本课题组报道的方法“１，取健康志愿者外周 血５０ｍｌ，以淋巴细胞分离液分离并收集外周血单个 核细胞，以ＧＴ—Ｔ５５１无血清培养基调整细胞浓度为
前列腺癌与肿瘤干细胞的学习研究-11影像
有关前列腺癌与肿瘤干细胞的研究学习卢明波1，徐松城1，陈炎明1，赵杉杉1，王焕鹏1（1汕头大学医学院11影像班，广东汕头，515000）摘要：前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。
在前列腺癌组织中存在着一群肿瘤干细胞，它们既具备正常干细胞无限增殖并且低分化的特点，又能调控着肿瘤细胞的发生、发展和分化方向并且决定肿瘤的良恶性程度。
现今科学发展日新月异，人们已经对肿瘤干细胞和肿瘤有了多方面的认识，立足于调控肿瘤干细胞进而控制肿瘤发生的研究也比较热门。
这篇综述通过阐述肿瘤干细胞在前列腺癌这一疾病的发生发展中所扮演的角色关系，介绍了有关前列腺癌与肿瘤干细胞的研究，为前列腺癌干细胞相关治疗提供了有用的参考与帮助。
关键词：前列腺癌，肿瘤，肿瘤干细胞，上皮内瘤变，治疗应用前列腺癌是发生于前列腺上皮组织的恶性肿瘤。
人类和老鼠的前列腺中都存在腔细胞、基底细胞和神经内分泌细胞。
这三种细胞都属于前列腺上皮细胞，来源相同的干细胞，根据解剖结构把老鼠的前列腺分成4叶，每一叶包含许多导管分支，前列腺上皮干细胞存在前列腺近端区，而转运细胞、分化的细胞存在远端区[1]。
如果我们能够预防前列腺导管近端区上皮细胞干细胞变异成肿瘤干细胞，或是控制肿瘤干细胞的增殖，那么前列腺癌的治疗将达到一个崭新的历史平台。
1.前列腺癌的发生1.1 正常前列腺干细胞变异肿瘤细胞的增殖由干细胞驱动，研究表明，具有角蛋白表达模式的前列腺上皮细胞有干细胞的特性[2].我们知道，前列腺恶性肿瘤起源于前列腺导管近端区上皮干细胞，而细胞内p53基因和Rb基因调控前列腺干细胞增殖，二者缺乏将促进恶性肿瘤的发生[1]。
前列腺滤泡基底细胞被认为是前列腺的干细胞，且前列腺滤泡的基底细胞（干细胞）被认为是前列腺癌的起源细胞。
而基底细胞和内分泌细胞之间的细胞都有转化成恶性肿瘤细胞的可能[3].1.2 前列腺上皮内瘤变当体内或是外界因素导致前列腺上皮干细胞谱系Shh-Gli[4]功能异常时，正常干细胞分化与增殖出现异常，引起内瘤变。
肿瘤干细胞的分离方法
肿瘤干细胞的分离方法肿瘤干细胞（tumor stem cells）是肿瘤组织中一小部分细胞群的亚群，具有自我更新、自我复制和多向分化的能力，能够发起和维持肿瘤的生长和进展。
肿瘤干细胞的存在被认为是肿瘤的一个重要特征，因为它们在肿瘤的发展、转移和复发中起着重要的作用。
因此，肿瘤干细胞的分离与研究对于了解肿瘤的发生机制、寻找新的治疗策略以及改善临床预后具有重要的价值。
下面将介绍几种常用的肿瘤干细胞的分离方法。
1. 黑色素瘤干细胞（melanoma stem cells）分离方法：a. 表面标记法：利用特定的细胞表面标记物，如CD271、ABCB5等，可以通过荧光激活细胞分选（fluorescence-activated cell sorting，FACS）技术，将肿瘤干细胞从肿瘤组织中分离出来。
例如，采用CD271阳性细胞的FACS来分选肿瘤组织，可以得到具有肿瘤干细胞特性的细胞亚群。
b. 功能分选法：通过肿瘤干细胞的自我更新和多向分化能力，可以利用体外球形培养（spheroid culture）技术分离肿瘤干细胞。
相比于非干细胞，干细胞可以形成独立的球形结构，并表达特定的干细胞特性标记物，如ALDH1（aldehyde dehydrogenase 1）等。
2. 乳腺癌干细胞（breast cancer stem cells）分离方法：a. 流式细胞术：利用特定的细胞表面标记物，如CD44和CD24，可以通过流式细胞术将肿瘤干细胞从乳腺癌组织中分离出来。
例如，CD44+/CD24-细胞的分选可以得到乳腺癌中富含干细胞的细胞亚群。
b. 磁性珠分选法：通过特定的标记物，如EpCAM（epithelial cell adhesion molecule）和CD44，可利用磁性珠（magnetic beads）结合的方法将肿瘤干细胞从乳腺癌组织中分离出来。
3. 前列腺癌干细胞（prostate cancer stem cells）分离方法：a. 表面标记法：利用特定的细胞表面标记物，如CD44和CD133，可以通过流式细胞术或磁性珠分选法将肿瘤干细胞从前列腺癌组织中分离出来。
人前列腺癌DU
人前列腺癌DU145细胞中肿瘤干细胞的富集及鉴定目的從人前列腺癌DU145细胞中富集具有干细胞特性的肿瘤细胞，并鉴定其肿瘤干细胞特性。
方法利用流式细胞仪比较人前列腺癌LNCaP细胞、DU145细胞中CD44+细胞所占比例；通过无血清连续传代培养，富集干性肿瘤细胞，计算不同时间点成球率；将无血清悬浮培养的肿瘤微球细胞，再次在含血清培养基中培养，验证肿瘤干细胞的分化特性；利用CCK8增殖试验分别检测DU145细胞和DU145肿瘤微球细胞，比较两者增殖能力的差异；分别以DU145肿瘤微球细胞、DU145细胞为实验组和对照组制备荷瘤裸鼠模型，比较两者体内成瘤能力。
结果流式细胞仪检测显示CD44+LNCaP、CD44+DU145比例分别为04%、976%。
无血清悬浮培养DU145细胞第2日的成球率为（144±78）%，第7日的成球率为（342±87）%，第14日的成球率高达（614±76）%。
悬浮成球DU145细胞在加入含10%胎牛血清培养基24h后，表现出和常规贴壁培养DU145细胞相同形态。
DU145肿瘤微球细胞在铺板后24h其增殖能力就可达到DU145细胞的2倍左右，在第6日之后，DU145肿瘤微球细胞存活率仍高于DU145细胞，组间450nm处吸光度比较差异均有统计学意义（P均60μm定义为成球，连续计数5个视野取平均值计算成球率。
成球率=该视野内成球细胞个数/该视野内总细胞个数×100%。
4SSM和SFM中检测DU145肿瘤微球细胞的分化能力将连续在SFM中培养14d后的DU145肿瘤微球细胞用胰酶消化分离后，用SSM终止反应，1000转/分离心3min后弃上清液，加入新鲜SSM重悬细胞，于37℃、5%CO2培养箱中培养，动态观察并记录细胞形态变化情况。
收集细胞，再次用500μl胰酶消化3min后用1ml胰酶抑制剂终止反应，离心后，用新鲜SFM 重悬细胞并动态观察记录细胞形态变化情况。
肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展
肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展宋东颖;王毅;孙岚;张英鸽【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2012(26)5【摘要】肿瘤是当今社会对人类健康和生命危害最大的疾病之一,即使在人类医学科技迅速发展的今天,对于肿瘤的治疗仍是一大难题,其根本原因是对肿瘤的发生、发展、转移和复发的机制尚不清楚.近些年来,研究人员通过对肿瘤细胞表面标志物、增殖能力和致瘤能力等的深入研究,提出了肿瘤干细胞理论,即肿瘤中存在着少数具有无限自我更新能力和异种免疫缺陷动物致瘤能力的干细胞样肿瘤细胞,它们在肿瘤的发生、生长和转移等生物学过程中起着决定性的作用,该理论的提出给肿瘤治疗提供了新的思路和策略.本文将对肿瘤干细胞理论的形成和发展过程,肿瘤干细胞的特性以及肿瘤干细胞的分离和鉴定最新研究进展进行综述.%Tumors have long threatened human health and life, but the treatment of tumors remains a serious challenge despite the advances in medical science and technology . The most important cause of the incurability of tumors is the lack of knowledge of the mechanisms for the development, progress, metastasis and relapse. Based on extensive investigations into suface markers, proliferation capabilities and tumor generations, scientists have proposeda new theory, known as "tumor-stem-cell theory". Research proved that in tumor cells there is a rare population of stem-like cells which have the ultimate self-renewal, multi-differentiation and tumorrigenic capacity. Scientists found that the tumor-stem cells play a critical role intumorigenesis, tumor-growth, metastasis and relapse. The " tumor-stem cell theory" has provided scientists with a new strategy to research treatment methods of tumors. This review introduces the origin and development of "tumor-stem cell theory" and features of cancer-stem cells, and addresses the latest research on isolation and identification of cancer-stem cells.【总页数】6页(P674-679)【作者】宋东颖;王毅;孙岚;张英鸽【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所纳米药理毒理重点实验室,北京100850;吉林大学药学院,吉林长春130021;吉林大学药学院,吉林长春130021;军事医学科学院毒物药物研究所纳米药理毒理重点实验室,北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所纳米药理毒理重点实验室,北京100850【正文语种】中文【中图分类】R73-3;R965.2【相关文献】1.实体肿瘤干细胞分离鉴定技术的研究进展 [J], 刘平平;李晓明2.肿瘤干细胞分离鉴定方法的研究进展 [J], 程俊美;谢峰;王慧3.OE19肿瘤干细胞的无血清分离培养以及肿瘤干细胞特性的鉴定 [J], 尹晓然;冯诚;马一楠;高晓燕;刘欣;贾丽君;张寅斌;张军4.肿瘤干细胞的起源、分离及鉴定研究进展 [J], 张莉莉;黄青松5.肿瘤干细胞相关机制及靶向肿瘤干细胞治疗研究进展 [J], 马慧;任正刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人前列腺癌DU-145 细胞中肿瘤干细胞的富集及鉴定
人前列腺癌DU-145 细胞中肿瘤干细胞的富集及鉴定吕殷婷;焦举;杨婷;邹琼;江淑琴;张勇【期刊名称】《新医学》【年(卷),期】2018(049)006【摘要】目的从人前列腺癌DU-145 细胞中富集具有干细胞特性的肿瘤细胞,并鉴定其肿瘤干细胞特性.方法利用流式细胞仪比较人前列腺癌LNCaP细胞、DU-145 细胞中CD44 +细胞所占比例;通过无血清连续传代培养,富集干性肿瘤细胞,计算不同时间点成球率;将无血清悬浮培养的肿瘤微球细胞,再次在含血清培养基中培养,验证肿瘤干细胞的分化特性;利用CCK-8 增殖试验分别检测DU-145 细胞和DU-145 肿瘤微球细胞,比较两者增殖能力的差异;分别以DU-145 肿瘤微球细胞、DU-145 细胞为实验组和对照组制备荷瘤裸鼠模型,比较两者体内成瘤能力.结果流式细胞仪检测显示CD44 +LNCaP、CD44 +DU-145 比例分别为0. 4%、97. 6%.无血清悬浮培养DU-145 细胞第2日的成球率为(14. 4 ±7. 8)%,第7 日的成球率为(34. 2 ±8. 7)%,第14日的成球率高达(61. 4 ± 7. 6)%.悬浮成球DU-145 细胞在加入含10%胎牛血清培养基24 h后,表现出和常规贴壁培养DU-145 细胞相同形态.DU-145 肿瘤微球细胞在铺板后24 h其增殖能力就可达到DU-145 细胞的2 倍左右,在第6日之后,DU-145 肿瘤微球细胞存活率仍高于DU-145 细胞,组间450 nm处吸光度比较差异均有统计学意义(P均＜0. 05).与DU-145 细胞荷瘤裸鼠相比,DU-145 肿瘤微球细胞荷瘤裸鼠的移植瘤体积较大、生长速度较快(P均＜0. 05).结论无血清连续传代培养的DU-145 细胞经富集分离可得到具有干细胞特征的前列腺肿瘤细胞,该方法简便易行,具有较理想的应用前景.%Objective To enrich prostate cancer stem cells from human prostate cancer DU-145 cellline and identify the characteristics of tumor stem cells. Method The proportion of CD44 + cells in LNCaP and DU-145 cells was detected by flow cytometry. The spheroidization rates at different time points were calcu-lated by serum-free continuous culture and enrichment of tumor stem cells. The tumor microspheres cultured in the serum-free culture medium were subsequently cultured in the serum-containing culture medium to verify the differentiation ability of tumor stem cells. CCK-8 proliferation assay was adopted to monitor and compare the proliferation ability between DU-145 cells and DU-145 tumor microspheres. The tumor-bearing nude mouse models were established by DU-145 cells as the control group and DU-145 tumor microspheres as the experi-mental group. The tumorigenic ability in vivo was statistically compared between two groups. Results Flow cytometry demonstrated that the proportion of CD44 + LNCaP cells and CD44 + DU-145 cells was 0. 4% and 97. 6%. After cultured in the serum-free suspension,the spheroidization rate of DU-145 cells was (14. 4 ± 7. 8)% on the 2nd day,(34. 2 ±8. 7)%on the 7th day and (61. 4 ±7. 6)%on the 14th day,respectively. Af-ter cultured in the medium containing 10% fetal bovine serum for 24 h,DU-145 tumor microspheres showed the same morphology as DU-145 cells. The proliferation ability of DU-145 tumor microspheres was approximate- ly twice as high as that of DU-145 cells during the first 24 h. On the 6th day,the survival rate of DU-145 tumor microspheres was still higher than that of DU-145 cells. The absorbance values at the wavelength of 450 nm sig-nificantly differed between two groups (all P＜0. 05). Compared with tumor-bearing nudemouse models estab-lished by DU-145 cells,the tumor size was significantly larger and the growth rate was considerably faster in the mouse models by DU-145 tumor microspheres (both P＜0. 05 ). Conclusion Prostate cancer stem cells can be obtained after enrichment and isolation by serum-free continuous passage of DU-145 cells,which is simple and feasible and deserves promising application prospect.【总页数】6页(P405-410)【作者】吕殷婷;焦举;杨婷;邹琼;江淑琴;张勇【作者单位】510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科;510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科;510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科;510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科;510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科;510630 广州,中山大学附属第三医院核医学科【正文语种】中文【相关文献】1.人前列腺癌细胞株PC-3中类肿瘤干细胞的培养分离和初步鉴定 [J], 李曾;王德林;蓝建华;杨宗珂2.人乳腺癌MCF-7细胞系中肿瘤干细胞的富集与鉴定 [J], 孙鑫;李平;张梅;张锋利;单建国3.人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定 [J], 张波;范新兰;林天歆;许可慰;黄健4.人食管鳞癌细胞系EC109中肿瘤干细胞的分离(富集)与鉴定 [J], 崔翔; 张成武; 杨浪; 于茜; 任勇; 郭政军; 刘强; 刘庆; 崔有宏; 卞修武5.碱性成纤维细胞生长因子在富集结直肠癌肿瘤干细胞中的作用 [J], 周国俊; 冯彦超; 黄理政; 孙成杰; 吴妮莎; 侍琳; 雷蕾; 钟晓蓉; 冷政伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双氢青蒿素诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的实验研究
双氢青蒿素诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的实验研究夏金生;陈先国;庄乾元;刘继红;叶章群【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2009(025)015【摘要】目的:观察双氢青蒿素(dihydroarteannuin,DHA)对前列腺癌DU145细胞作用并对其抗癌机制进行初步探讨.方法:进行前列腺癌DU145细胞培养,MTT法测定不同浓度和时间DHA对DU145细胞的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测DU145细胞凋亡率:Western blot检测不同浓度DHA作用48 h凋亡蛋白caspase-3、survivin的表达情况.结果:MTT法显示与对照组比较,各实验组DHA 可显著抑制DUl45细胞增殖(P＜0.01);FCM检测表明DU145细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P＜0.01),且呈时间剂量依赖性;Westem blot显示与对照组相比,各实验组DHA可显著下调DU145细胞survivin的表达(P＜0.01),而caspase-3的表达增加(P＜0.01).结论:DHA可能通过下调survivin的表达,上调caspase-3而诱导DU145细胞凋亡.【总页数】3页(P2418-2420)【作者】夏金生;陈先国;庄乾元;刘继红;叶章群【作者单位】231500,安徽省庐江县人民医院泌尿外科;430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科;430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科;430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科;430030,武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.低频超声增强双氢青蒿素诱导前列腺癌 PC-3细胞凋亡的生物学效应研究 [J], 王婧;罗子国;李剑2.葫芦素B诱导G2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡研究 [J], 张萌;边志刚;张毅;王佳贺;阚亮;何平3.白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制 [J], 李伟;许学芬4.双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡 [J], 李庆春;高小玲;邹聪;李剑;罗子国5.双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的形态学研究 [J], 廖光东;李庆春;高小玲;罗子国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肿瘤干细胞的分离与鉴定
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03 肿瘤干细胞鉴定
(2)异种移植成瘤性实验鉴定
将分离出的肿瘤于细胞，制备成细胞悬液后种植到异种动物体内，如将人的肿瘤 干细胞接种于NOD/SCID小鼠体内，观察其能否形成肿瘤病灶，且异种动物体内形 成的肿瘤病灶在组织学结构上与原发肿瘤病灶类似，则可鉴定为肿瘤干细胞。一 般来说，肿瘤干细胞形成肿瘤病灶所需的细胞密度比普通肿瘤细胞要小。
03 肿瘤干细胞的鉴定
1
利用肿瘤干细胞特异性表面标志物进行鉴定
2
异种移植成瘤性实验鉴定
3
肿瘤干细胞的其他鉴定方法
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03 肿瘤干细胞鉴定
(1) 利用肿瘤干细胞特异性表面标志物进行鉴定
目前，肿瘤干细胞最为广泛且可靠的鉴定方法就是利用肿瘤干细 胞特异性表面标志物。将分离出的肿瘤干细胞通过免疫组织化学 法、流式细胞检测技术等方法测定阳性或阴性细胞表面标志物表 达情况，进而鉴定是否是肿瘤干细胞。下表为几种已鉴定出的肿 瘤干细胞特异性表面标志物。
（2）流式细胞分选（FACS）
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02肿瘤干细胞分离
（3）根据生物学特性分离
根据肿瘤干细胞具有的某些生物学特 性将肿瘤干细胞分离筛选出的方法。 如可以通过细胞核对核染料的拒染性 质、肿瘤干细胞体外培养所需的特殊 条件等特性，分离出肿瘤干细胞 [PMID:14711994 ] 。
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02肿瘤干细胞分离
序，阻断Bid和Bad等促凋亡蛋白引起的线粒体凋亡途径，并进一步阻断胱天蛋白酶凋亡途径，防止肿
曲古菌素A诱导前列腺癌DU-145细胞有丝分裂的灾变
曲古菌素A诱导前列腺癌DU-145细胞有丝分裂的灾变张旭辉;于晓妉;赵名;易欣;杜芝燕;徐元基【期刊名称】《中国肿瘤生物治疗杂志》【年(卷),期】2007(14)3【摘要】目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)曲古菌素(trichostatina A,TSA)对前列腺癌DU145细胞有丝分裂的影响,探讨HDACi杀伤肿瘤细胞的新机制。
方法:将前列腺癌DC-145细胞分成不加药对照组和不同剂量(100、200、300、400nmol/L)TSA加药组,药物作用一定时间后,MTT法检测TSA对DU145细胞的杀伤效应,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术分析细胞周期的改变,免疫荧光染色观察DU145细胞异常的有丝分裂现象,Western blotting检测TSA处理对DU145细胞某些调控蛋白表达的影响。
结果:TSA处理诱导DU145细胞发生有丝分裂,TSA处理24h后多核细胞数目由0.24%增加至1.21%。
细胞周期计数结果显示,TSA处理后有丝分裂各期细胞比例发生明显改变,表现为有丝分裂前中期细胞所占比例增加,后末期细胞所占比例减少。
免疫荧光染色显示,细胞出现多极纺锤体、染色体分离滞后等异常有丝分裂现象。
TSA作用于DU145细胞后,能明显抑制Survivin蛋白的表达,增强细胞骨架蛋白Tubulin的乙酰化,并诱导P21蛋白高表达。
结论:TSA能够诱使DU145细胞发生有丝分裂灾变,其机制可能与TSA降低Survivin蛋白的表达以及增强微管蛋白的乙酰化有关。
【总页数】6页(P206-211)【关键词】组蛋白去乙酰化酶;曲古菌素A;前列腺癌细胞;有丝分裂;灾变【作者】张旭辉;于晓妉;赵名;易欣;杜芝燕;徐元基【作者单位】军事医学科学院基础医学研究所病理生物学研究室【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.曲古抑菌素A阻断Stat3信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究 [J], 马健;赵名;于晓妉2.曲古菌素A诱导Raji细胞和HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其与免疫的关系 [J], 余美霞;刘迅;冯磊;朱鸣;张灵;王洁莲;申晓丽;胡东霞;倪健3.曲古抑菌素A对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究 [J], 孙圣坤;刘兵;李秀森;侯春梅;洪宝发;于晓妉4.曲古菌素A或金雀异黄素增强维生素D对前列腺癌细胞PC-3和DU-145的生长抑制作用 [J], 梁伟;郑杰5.曲古菌素A联合细胞因子体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞 [J], 朱小波;李正欣;顾欣欣;雷卓;张洁;李海涛;周鸣鸣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种肿瘤干细胞的分离方法[发明专利]
![一种肿瘤干细胞的分离方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/fceba9194693daef5ff73d2e.png)
专利名称：一种肿瘤干细胞的分离方法专利类型：发明专利
发明人：王淋立,陈月花,宋立兵
申请号：CN201410543007.8
申请日：20141014
公开号：CN104312976A
公开日：
20150128
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种肿瘤干细胞的分离方法，该方法为将肿瘤细胞消化为单个细胞后，再加入消化酶液孵育数小时；将孵育后的细胞加入含血清的细胞培养液进行贴壁生长；细胞贴壁后换肿瘤干细胞TSC培养基进行培养；当细胞长满后，重复多次前述操作后，将获得的细胞进行微球培养，最终获得的微球即为肿瘤干细胞。
本发明首次使用多种消化酶或者结合其他物理应激条件刺激多种肿瘤细胞，可以稳定地获得不同类型的TSC；本发明分离的MuseTSC拥有极强的肿瘤干性，均质性好，稳定，因此该方法的建立使获得不同类型的TSC得以标准化，并且更加简单经济，适合大规模构建TSC库所用，以满足常规肿瘤生物医学基础研究、临床研究以及药物开发等工作需求。
申请人：广州市搏克肿瘤研究所,王淋立
地址：510663 广东省广州市科学城广州国际企业孵化器D区216、217室
国籍：CN
代理机构：广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：郑莹
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川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制
第46卷第6期2020年11月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.46No.6Nov.2020DOI：10.13481/j.1671‑587x.20200624川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制张阳,姜华茂（锦州医科大学附属第一医院泌尿外科，辽宁锦州121000）［摘要］目的目的：检测川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响，探讨其作用机制。
方法：将培养的人前列腺癌DU145细胞分为对照组和0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6和51.2μmol·L－1川陈皮素组。
MTT法检测各组人前列腺癌DU145细胞的增殖活性，细胞划痕实验分析各组人前列腺癌DU145细胞迁移能力，Transwell实验分析各组人前列腺癌DU145细胞侵袭能力，流式细胞术检测各组人前列腺癌DU145细胞凋亡率，Western blotting法检测各组人前列腺癌DU145细胞中磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶（p-P38）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）蛋白表达水平。
结果结果：与对照组比较，作用24、48和72h时，25.6μmol·L－1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞增殖活性明显降低（P<0.01），川陈皮素对DU145细胞的增殖抑制作用呈现时间和浓度依赖性。
与对照组比较，作用48h后，12.8μmol·L－1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞划痕愈合率和侵袭细胞数明显降低（P<0.01），人前列腺癌DU145细胞中p-ERK蛋白表达水平降低（P<0.01）；25.6μmol·L－1川陈皮素组人前列腺癌DU145细胞中p-ERK蛋白表达水平降低（P<0.01），但细胞凋亡率明显升高（P<0.01），p-JNK和p-P38蛋白表达水平升高（P<0.01）。
干扰Arf6抑制人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭
干扰Arf6抑制人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭武永强; 杨帆【期刊名称】《《基础医学与临床》》【年(卷),期】2019(039)009【总页数】6页(P1310-1315)【关键词】二磷酸腺苷核糖基化因子6; 前列腺癌; 增殖; 迁移; 侵袭【作者】武永强; 杨帆【作者单位】西安工会医院泌尿外科陕西西安 710000; 空军军医大学附属唐都医院泌尿外科陕西西安 710038【正文语种】中文【中图分类】R730.2前列腺癌(prostate cancer)是中老年男性常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤之一，其发病率及病死率均居于男性恶性肿瘤前列，据调查，全球前列腺癌每年新发病例超过百万，死亡约13万例，严重影响男性患者的身心健康[1]。
前列腺癌发病隐匿，确诊时多数患者已至中晚期，导致手术及雄激素剥脱等常规治疗手段对其治疗效果不佳，或经一段时间后发生远处转移，生存期较短[2]。
因此，探索有效抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的药物，对患者治疗及预后生存都十分重要。
近年来研究发现[3-4]，二磷酸腺苷核糖基化因子6(adenosine diphosphate ribosylation factor 6，Arf6)在胰腺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤细胞及组织中呈异常高表达状态，且参与调节多种肿瘤发生发展进程，但关于其参与前列腺癌细胞增殖、迁徙及侵袭的具体机制尚不明确。
为此，本研究应用RNA干扰技术，探索靶向干扰Arf6基因对人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭的影响，并探讨其调控机制。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞及siRNA：人前列腺癌细胞系DU145(中国科学院上海细胞库)；靶向Arf6的特异性siRNA序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成：正义链：5′-CUCAACGUAGCUGAUGCUGdTdT-3′；反义链：5′-dTdTGAGUUGCAUCGACUACGAC-3′。
帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用
帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用戴玲;刘淑俊;宛凤玲;陈捷【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2004(19)5【摘要】目的观察帕米磷酸二钠(PAM)及埃本磷酸二钠(IBN)对体外培养的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP生长的抑制作用,探讨双磷酸盐类药物抑制前列腺癌细胞生长的机制.方法采用MTT法检测不同剂量的PAM、IBN对DU145、LNCaP 细胞系生长的影响,并计算2种药物的IC50值,应用流式细胞仪检测DNA含量以探讨双磷酸盐类药物的作用机制.结果 PAM、IBN对前列腺癌DU145、LNCaP细胞系的生长均有抑制作用,抑制效应与药物剂量、作用时间成正比,150 μg/ml PAM 和100 μg/ml IBN作用72 h后,2种细胞的生存率均低于40.00%(P<0.05).根据IC50值可知IBN对前列腺癌细胞的抑制作用比PAM强.结论 PAM、IBN对体外生长的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP产生剂量、时间依赖性的抑制作用,其抑制细胞的作用机制为促进癌细胞凋亡和干扰DNA合成.【总页数】4页(P474-477)【作者】戴玲;刘淑俊;宛凤玲;陈捷【作者单位】100036,北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤防治研究所;100036,北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤防治研究所;100036,北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤防治研究所;100034,北京大学泌尿外科研究所【正文语种】中文【中图分类】R73-36+1【相关文献】1.三种常见的前列腺癌细胞系LNCap、PC3和DU145的生物学特性 [J], 林艳端;申锷;胡兵2.龙葵碱对前列腺癌LNCaP及Du145细胞系的作用及机制 [J], 李志雄;梁蔚波;唐晖;陈炫;刘玉峰;苏泽轩3.帕米磷酸二钠治疗前列腺癌骨转移的观察及护理 [J], 阎丽4.帕米磷酸二钠治疗前列腺癌骨转移的观察及护理 [J], 阎丽5.MADP-1基因对前列腺癌细胞系DU145体外生长的影响 [J], 孙国锋;张志文;李学松;周利群;那彦群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肿瘤干细胞分离鉴定方法的研究进展
肿瘤干细胞分离鉴定方法的研究进展
程俊美;谢峰;王慧
【期刊名称】《药品评价》
【年(卷),期】2012(000)036
【摘要】早在19世纪中期就有科学家在显微镜下发现肿瘤细胞与干细胞十分形似。
到20世纪50年代前后,Lorentz等的骨髓移植实验成功,表明在造血细胞中存在一类原始的造血细胞即造血干细胞（HSC）,它们具有自我更新或自我复制的能力,能
向骨髓中的各系细胞分化,以维持机体的正常造血功能。
【总页数】3页(P20-22)
【作者】程俊美;谢峰;王慧
【作者单位】山东菏泽医学专科学校病理学教研室;山东菏泽医学专科学校病理学
教研室;山东菏泽医学专科学校病理学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R730
【相关文献】
1.人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制 [J], 刘超群
2.实体肿瘤干细胞分离鉴定技术的研究进展 [J], 刘平平;李晓明
3.肿瘤干细胞分离方法的研究进展 [J], 邓亮
4.膀胱癌肿瘤干细胞筛选方法的研究进展 [J], 刘亚辉;朱永通;罗荣城
5.卵巢癌肿瘤干细胞分离鉴定方法的进展 [J], 杨柳;乔杰;郭红燕
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肿瘤干细胞分离方法的研究进展
肿瘤干细胞分离方法的研究进展邓亮【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2012(018)018【摘要】肿瘤干细胞学说的提出及日渐成熟,使人们对肿瘤的认识有了突破性进展,同时肿瘤干细胞逐渐成为肿瘤治疗的新靶点.肿瘤中存在极少量的与干细胞性质相似,具备极强的自我更新能力、多向分化潜能,并能够导致肿瘤组织产生的肿瘤干细胞.由于肿瘤干细胞含量非常低,快速、有效的分离方法是研究肿瘤干细胞的重要组成部分.现就近年来识别分离肿瘤干细胞的常用方法与技术进行综述.%Along with the proposal and maturing of the cancer stem cells theory, the understanding and treatment of cancer has seen a great breakthrough, including that cancer stem cells could be a new target of the cancer treatment. Cancer stem cells, with similar properties of stem cells, have great self - renewal and differentiation potential, and initiate tumor tissue. The proportion of cancer stem cells in tumors is very low, so rapid and effective isolation of cancer stem cells is an important component of cancer stem cells research. Here is to make a review' on current methods and techniques to detect and isolate cancer stem cells.【总页数】4页(P2982-2985)【作者】邓亮【作者单位】哈尔滨医科大学附属第一医院骨科,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.肿瘤干细胞分离方法的研究进展 [J], 陈颖;沈敏;刘宝林2.肿瘤干细胞分离鉴定方法的研究进展 [J], 程俊美;谢峰;王慧3.肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展 [J], 宋东颖;王毅;孙岚;张英鸽4.肿瘤干细胞分离方法的研究进展 [J], 温超海;朱睿颖;杨渊;5.肿瘤干细胞分离方法的研究进展 [J], 温超海;朱睿颖;杨渊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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殷
波， 等
人前列腺癌细胞系 Ｄ ４ Ｕ １ ５中肿瘤干细胞样侧群细胞 的分离
人前 列 腺癌 细 胞 系 Ｄ ４ Ｕ １５中肿 瘤 干 细胞 样 侧群 细 胞 的分 离
殷 波 ， 岗， 刘 张 辉， 李 明 ， 隋文 印 ， 宋永胜
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【 摘要 】 目的 ： 分离人前列腺癌细胞 系 Ｄ ５中的侧群 （ｉ ｏｕ ｔｎ Ｓ ） Ｕ１ ４ ｓ ｅｐｐｌｉ ， Ｐ 细胞 ， 初步分 析其 生物学 特 ｄ ａｏ 并
性 。方法 ： 采用荧光激 活细胞分类（ｌｏｅｃｎｅａｔ ａ ｄｃｌｓｒｎ ， Ａ Ｓ 技术 ， Ｄ ４ ｆ ｒｓｅｃ ｃｉ ｔ ｅｌ ｏ ｉｇ Ｆ Ｃ ） ｕ ｖｅ ｔ 从 Ｕ １５细胞 中分离出侧
Ｐ ｎ ｃ ｎ ｒ ｓ ｔ ａ பைடு நூலகம் ｔｌ Ｄ １ ５ ｃ ｌ ．Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ：ＤＵ １ ５ ｃ ｌ ｌ ｅ ｃ ｎ ａｎ ｄ Ｓ ｅｌ ｉ ａ ｃ ｒ ｓ ｍ ｅｌ ＣＲ ｉ ｏ ｔ ｔ ｏ ｐ ｒ ｎａ Ｕ ４ ｅｌ ａ ｓ ｎ ｌ ｓｏ ４ ｅｌ ｉ ｏ ｔ ｉｅ Ｐ ｃ ｌ ｗ ｔ ｃ ｎ ｅ ｔ ｃ ｌ ｎ ｓ ｈ ｅ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔｅＴ ｅｔ ｅ ｉ ｐｌｉ （Ｐ ｃｌ ｏ ｕ ａ ｒ ｔｅ ａｃｒｅ ｎ Ｕ１５ａｄ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅ ｉ ：ｏ ｄｎｆｔ ｄ ｐ ｕ ｔｎ Ｓ ） ｅｓｒ ｈｍ ｎ ｏ ａ ｎｅ ｃ ｌ ｅ ｎ ｃｖ ｉ ｉ ｈ ｓ ｅ ｏ ａｏ ｙ ｌｆｍ ｐ ｓ ｔｃ ｌｌ Ｄ ４ ｉ