浙科版高中生物选修一2.1《实验1：大肠杆菌的分离培养》学案(无答案)
高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1(最新整理)
实验一大肠杆菌的培养和分离1。
培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质.2..本实验用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,用LB固体培养基分离大肠杆菌。
3。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物;而灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
4.。
实验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高一、微生物1．概念：微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。
二、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质.2．营养构成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．培养基的类型(1)按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。
(2）按目的用途分:鉴别培养基、选择培养基。
4．微生物生长对特殊营养物质的要求（1)细菌培养基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置,细菌喜荤.（2)霉菌培养基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可,霉菌喜素。
5．微生物生长对pH的要求细菌要求在中性偏碱（6.5~7。
5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸（5。
0～6.0）的环境中生长。
三、无菌技术1．获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
（2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触. 2．消毒和灭菌(1）概念：[填表］项目方法结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌（2）常用方法：[连线]四、分离细菌的两种方法比较项目划线分离法涂布分离法五、大肠杆菌的培养与分离1．大肠杆菌（1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌.（2)繁殖:以分裂的方式繁殖,分裂速度很快。
2019-2020学年高中生物 第1部分 微生物的利用 第1课时 大肠杆菌的培养和分离学案 浙科版选修1
第1课时大肠杆菌的培养和分离[学习目标] 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
一、微生物培养的基本条件1.微生物(1)概念：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
(2)用途：许多种抗生素来源于放线菌和霉菌；酒由酵母发酵产生；腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物能用于治理环境污染，在新能源领域也将发挥巨大作用。
2.培养基(1)概念：培养基是微生物生存的环境和营养物质。
(2)分类：培养基按物理性质常可分为固体培养基和液体培养基，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养物质，另外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
(3)酸碱性：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长；因此，在制备培养基时需调节培养基的酸碱度。
特别提醒有关培养微生物所需营养的三点提醒(1)不同微生物对营养的需求不同，所以培养不同的微生物所需要的营养可能不同。
(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源又是氮源、能源。
(3)培养微生物时营养物质要协调。
营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微生物的生长有抑制作用。
3.灭菌操作(1)常见灭菌方法①对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
②对于不能加热灭菌的化合物，如尿素等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
③实验操作过程中，一般采用灼烧的方法对接种环进行灭菌。
(2)高压蒸汽灭菌操作的要求①灭菌前各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，在121℃下灭菌15min，实验过程中所需的棉花不能用脱脂棉，因为其易吸水，吸水后容易引起污染。
浙科版选修1实验1大肠杆菌的分离和培养
B）
3、在平板划线操作中，错误的是 ( C ) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却 C．接种环在平板上的划线位置是随机的 D．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰
在适当的稀释浓度下， 可以培养到相互分开的单菌落
倒平板
制斜面
（五）、 纯化 分离 方法
划线分离法和涂布分离法
（一）划线分离法（接种环）
操作： 用蘸有菌液的接种环（只蘸一次）在固体培养 基表面连续划线。 结果： 接种环上菌液减少 细菌分散 单细菌 细菌间距离加大 单菌落
（二）涂布分离法（玻璃三角刮刀）
操作：先将菌液稀释，然后将0.1ml不同稀 释度的菌液涂布到固体培养基上。 结果：适当的稀释度 单细菌
细
毒
菌
2.微生物包括五类
放线菌 真 菌
原生动物
大肠杆菌
酵母菌
放线菌
链球菌
艾滋病病毒
肺炎双球菌
曲霉菌
菌落 （1）概念 P20第七行
（2）菌落形状、颜色、大小 等特征是鉴定菌种的重要依 据。
培养皿涂布杂菌形成的菌落
实验器材
洗耳球
移液管
移液枪
玻璃刮刀（涂布棒）
接种环
超净工作台
摇床
(一)培养基
(三)无菌操作
•
1、获得纯净培养物的关键: 防止外来杂菌的入侵
•菌
（1）灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 ② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
浙科版高二生物选修1_《大肠杆菌的培养和分离》教案
实验1 大肠杆菌的培养和分离【学习目标】1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的化纤培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
【教学重点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。
【教学难点】大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读。
【实验教材分析】本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。
本次课程主要包括了本次实验的目的、大肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实验步骤等内容。
在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。
并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。
故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化，同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。
因此，本节课起着承前启后的重要作用。
【学情分析】本节课的教授对象是选了选修1这门课的高二学生，在实验前，学生已经学习过了革兰氏阳性菌与阴性菌的相关知识，本次实验主要是学生在掌握细菌的相关知识后学习大肠杆菌的分离与鉴定，很好地实现了将所学知识与实践相联系，易引起学生的兴趣，学生的积极性较高，从而有利于实验教学的展开。
但学生对于实验原理、实验方法和实验技术等方面还不熟悉，需要教师对此进行详细的讲解，在讲解过程中注意运用适宜的教学方法，引导学生将所学知识运用到具体的实验实践中。
同时，教师需严格要求学生在操作上符合实验室规范，将实验操作过程中的注意事项对学生进行逐一说明，保证实验的有序性与安全性。
【实验教学过程】（一）创设情境，导入新知【教师活动】教师展示饮用水净化、消毒灭菌、检测、出品的简略过程，抛出在检测这一过程中主要是以某一微生物作为指标来进行检测，从而引出本次实验的材料—大肠杆菌（展示图片）。
浙科版选修1学案
选修1 《生物技术实践》实验1 大肠杆菌的培养和分离1、细菌:细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核。
有一大型环状DNA分子（拟核）和多个小型环状DNA(质粒)，以分裂（二分裂）的方式繁殖。
大肠杆菌是: 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，代谢类型: 异养兼性厌氧型。
( 菌体:指细菌细胞单菌落:单个细菌细胞在固体培养基形成的细胞群。
芽孢:细菌细胞休眠体) 2、培养基（1)培养基的基本成分：水、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)、无机盐。
（2）培养基的类型(按物理形态):①LB液体培养基(用于菌种的扩大培养) ②LB固体培养基（用于分离菌种和保存菌种）（3）培养条件: 适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等（4）培养基的配置:“细菌喜荤，霉菌喜素”①细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压，PH为中性偏碱；②霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可，PH为中性偏酸。
(5)培养条件:适宜的PH、温度、溶氧量、渗透压等3、无菌操作(1)目的要求:防止所利用的微生物被其他微生物(杂菌)污染(2) 无菌操作过程:①各种器皿和培养基必须是无菌的，用高压蒸气锅灭菌[121 0C，1kg/cm2，15min] 灭菌；接种环也必须无菌,可以灼烧灭菌②转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无杂菌污染，在超净台（打开紫外灯和过滤风，灭菌30min）上酒精灯火焰旁操作。
转移时培养基不能沾在皿壁和瓶口上。
③棉花塞的制作标准:棉塞周围没有皱褶和缝隙，容易拔出，但手提棉塞时，三角瓶或试管不能落下来。
其中棉花用非脱脂棉（为什么?）。
④实验中使用过的器皿、培养基都需经过灭菌后才能清洗。
4、细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。
这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
(1) 划线分离用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上连续划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1
高中生物第一部分《实验一大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1微生物的利用大肠杆菌的培养和分离学案一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2和实验3不作要求。
三、知识要点：1、微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2、细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3、培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
有的还需要在培养基中加入特殊营养物质。
4、在培养微生物时，必须进行。
高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修12
大肠杆菌的培养和分离1. 微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系? （1）概念内涵：其关系图解见下（2）结构上：三者都是结构简单， 形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的， 具体如下：（「由直核谿胞构戚的宜核生樹〔既有|醉母爾 单细胞生物’也宥窑细胞生物）I 痘亀「放线菌 由原核细胞枸戚的原核" 生物〔莉悬单细砲生物）［»细菌、I 无细胞站构的生物——病垂2. 培养大肠杆菌的LB 培养基中有各种物质， 为什么选择这些物质， 这些物质有什么作 用呢？ （1）人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质一一培养基。
虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源（提供碳元素）、氮源（提供氮元素）和生长因子（不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质）。
见下表：微生物的营养要素定义功能类型 化合物类型常用物质碳源凡可构成微生物细 胞和代谢产物中碳 架来源的营养物质 称为碳源构成细胞物质，供给微生物生长发育所需要的能量无机 碳（自养型 微生 物 用） 无机物CO 、 NaHCO CaCO 等有机蛋白 牛肉膏、蛋'硝化细菌 肺炎规球菌 大肠杆菌 亂酸窗……(2)大肠杆菌的LB培养基此外配方中还要注意等。
3. 该实验中这些操作的原因(1) 三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 C左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 C以上熔化，在44 C以下凝固，当冷却到60 C左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。
简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 C左右了。
2018-2019学年浙科版选修1 第一部分 第1课时 大肠杆菌的培养和分离 学案
探究 2——归纳概括
2018-2019 学年
1．培养基的成分
营养物质
定义
作用
主要来源
碳源
能提供碳元素的物质
构成生物体的细胞物质和 一些代谢产物，有些也是 异养生物的能源物质
无机碳源：CO2、 NaHCO3 等；有机碳 源：糖类、脂肪酸、 石油等
氮源
能提供氮元素的物质
合成蛋白质、核酸及含氮 的代谢产物
常用方法
消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭
消毒
灭菌
较为温和
强烈
煮沸消毒、化学药剂消 灼烧灭菌、干热灭菌、
毒、紫外线消毒
高压蒸汽灭菌
部分生活状态的微生物
全部微生物
不能
能
2．几种消毒和灭菌方法及其适用范围
类型
适用范围
操作方法
煮沸 消毒法
日常生活
100 ℃煮沸 5～6 min
消毒 方法
巴氏 消毒法
化学 药剂
分，就不能用此方法，A 项错误；超净工作台或接种箱用紫外灯灭菌 30 min，同时还需打开
过滤风，C 项错误；灭菌后的培养基、器具不一定达到了完全无菌，而且要防止二次污染，
D 项错误。
生物浙科版学案：课堂探究实验大肠杆菌的培养和分离
课堂探究核心解读HEXINJIEDU1．微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？（1）概念内涵：其关系图解见下（2）结构上：三者都是结构简单，形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的，具体如下:2．培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质，为什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢？（1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质——培养基.虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。
见下表：(2）大肠杆菌的LB培养基3．该实验中这些操作的原因(1）三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度?因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固,当冷却到60 ℃左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。
简易估计温度的方法:可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶,感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 ℃左右了.(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖子上;如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。
如果培养皿中已形成菌落,则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。
（3）将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养失败。
高中生物选修1生物技术实践学案大肠杆菌的培养和分离
实验1大肠杆菌的培养和分离1．消毒和灭菌的常用方法举例？2．3．2．划线分离法和涂布分离法的优缺点？4．3．划线分离法中，第一次灼烧、之后每次划线前灼烧和划线结束后灼烧的目的？班级___________ 姓名___________·题组训练1．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（）A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上2．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
回答下列问题。
（1）该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为个。
（2）该小组采用划线分离法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌。
在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。
这样做的目的是 .。
（3）示意图A和B中，表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。
3．利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。
但现有野生菌株对淀粉转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。
（1）实验步骤：①配制含有玉米淀粉的（固体、液体）培养基。
②在上的酒精灯火焰旁，将接种至已灭菌的平板上。
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行诱变。
实验1大肠杆菌的培养和分离浙科版选修一
微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理……
历史小资料
19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业 曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出 现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究， 法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源 在于发酵物中混入了杂菌。
称量
酵母提取物
蛋白胨
NaCl
液体LB培养基的配方
培养基成分 蛋白胨
酵母提取物
各成分的量 0.5g 0.25g
NaCl
0.5g
H2O加至50ml来自固体LB培养基 每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭菌。
灭菌
培养皿壁上 不能沾有培 养皿，否则 容易污染。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
清洁和消毒灭菌酒精灯火焰附近微生物实验室培养的基本操作程序培养基配制器具和培养基灭菌倒平板微生物接种斜面液体恒温箱中培养分离纯化液体平板划线培养菌种的保存斜面准备阶段培养阶段准备阶段lb培养基用于培养细菌11
微生物(microorganism)
结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物。
酒精灯火焰附近 进行。 4、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周
围的物品相接触。 ……
微生物实验室培养的基本操作程序
培养基配制
准备
器具和培养基灭菌
阶段
倒平板
微生物接种（斜面→液体）
培养 阶段
恒温箱中培养 分离纯化（液体→ 平板划线）
培养，菌种的保存（斜面）
准备阶段
LB培养基（用于培养细菌）
培养基的分类
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和在生物技术中的重要性。
2、掌握大肠杆菌培养的基本原理和操作方法。
3、学会大肠杆菌分离的技术和方法。
4、培养无菌操作的意识和实验技能。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌培养的条件和培养基的制备。
（2）无菌操作技术在大肠杆菌培养和分离中的应用。
2、难点（1）大肠杆菌的分离和纯化方法。
（2）如何确保实验操作的无菌环境。
三、知识准备1、微生物的基本概念微生物是指肉眼难以看清，需要借助显微镜才能观察到的微小生物，包括细菌、真菌、病毒等。
2、细菌的结构和生理特点细菌通常具有细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等结构。
其生理活动包括营养摄取、代谢、生长和繁殖等。
3、培养基的类型和作用培养基是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
常见的培养基类型有固体培养基、液体培养基和半固体培养基等，它们分别适用于不同的实验目的。
四、学习过程1、大肠杆菌的培养（1）培养基的制备首先，准备LB培养基（LuriaBertani培养基）的成分，包括胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
按照一定的比例将这些成分溶解在蒸馏水中，调节pH值至适当范围。
然后，将培养基进行高压蒸汽灭菌，以杀灭其中的微生物和芽孢。
（2）接种在无菌环境下，使用无菌接种环或移液器，从保存的大肠杆菌菌种中吸取少量菌液，接入已灭菌的液体培养基中。
接种过程要迅速，避免杂菌污染。
（3）培养条件将接种后的培养基置于恒温培养箱中，在37℃下进行振荡培养。
振荡培养可以增加培养基中的氧气含量，促进大肠杆菌的生长。
2、大肠杆菌的分离（1）平板划线法在无菌操作台上，将已灭菌的固体培养基倒入培养皿中，待其冷却凝固。
用接种环蘸取少量大肠杆菌培养液，在固体培养基表面进行连续划线。
通过多次划线，将细菌逐步稀释，最终在培养基表面形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法首先，将大肠杆菌培养液进行一系列梯度稀释。
然后，取适量不同稀释度的菌液，分别涂布在固体培养基表面。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和培养要求。
2、掌握大肠杆菌培养和分离的基本方法和操作技能。
3、理解无菌操作的重要性，并能在实验中正确执行。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌的培养方法，包括培养基的制备、灭菌和接种。
（2）大肠杆菌的分离方法，如平板划线法和稀释涂布平板法。
2、难点（1）无菌操作技术的规范执行。
（2）对大肠杆菌培养和分离结果的分析与判断。
三、知识准备1、微生物的特点微生物通常具有个体微小、结构简单、生长繁殖快等特点。
大肠杆菌作为一种常见的原核微生物，具有典型的细菌结构。
2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
（2）按化学成分可分为天然培养基和合成培养基。
3、无菌技术（1）消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
（2）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
四、学习过程（一）培养基的制备1、配方确定根据实验目的和大肠杆菌的生长需求，确定培养基的配方。
通常使用LB培养基，其成分包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
2、称量按照配方准确称量所需的各种成分。
3、溶解将称量好的成分加入适量的蒸馏水中，搅拌溶解。
4、调节 pH使用 pH 试纸或 pH 计测定溶液的 pH，并使用盐酸或氢氧化钠溶液调节至合适的 pH（通常为 70 72）。
5、分装将配制好的培养基分装到不同的容器中，如三角瓶、培养皿等。
6、灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中，在 121℃、105 kg/cm²的压力下灭菌 15 20 分钟。
（2）干热灭菌：对于一些不能进行高压蒸汽灭菌的物品，如玻璃器皿、金属用具等，可采用干热灭菌法，在 160 170℃下灭菌 1 2 小时。
（二）大肠杆菌的接种1、接种工具的准备常用的接种工具包括接种环和接种针，在使用前需要进行灭菌处理。
高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离教案浙科版选修1
实验1 大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌1．大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
2．在肠道中，大肠杆菌一般对人无害，但也有一些菌株可以侵袭肠黏膜并产生毒素，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。
3．大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。
二、实验内容1．本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
2．本实验用LB液体培养基(通用的细菌培养基)扩大培养大肠杆菌。
培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上便会形成一个个单独的菌落。
三、细菌的培养和分离1．细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。
人们在培养细菌时，一般用接种环转移带菌的培养物。
接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，再操作。
2．细菌的分离(1)划线分离法：在液体培养基中，只要接种后培养8 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。
可用接种环蘸菌液在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
在固体培养基培养10～20 h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。
如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
这种方法也可用于分离细菌，将污染的杂菌除去。
接种环在取菌种前和划线前都要灼烧、而后都要冷却、操作完毕后又要灼烧的原因是什么？【提示】取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍，然后取0.1 mL不同稀释度的稀释菌液加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
浙科版高中生物选修一2.1《实验1：大肠杆菌的分离培养》练习-精选文档
《大肠杆菌的培养和分离》练习一、单选题1．下列有关平板划线接种法的操作错误的是（）A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连2．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。
如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活？（）A．大肠杆菌B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌 D．鼠伤寒沙门氏菌3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）A.接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅4．可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的物质依次是（）A.含碳有机物、氨、光B.含碳无机物、氮、氮C.含碳有机物、氨、氨D.含碳无机物、氨、氨5．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。
甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。
下列说法正确的是（）A．甲、乙、丙都是异养微生物B．甲、乙都足自养微生物、丙是异养微生物C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙足自养微生物D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物6.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。
下列叙述正确的是（）A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次7.伊红—美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是（）A．大肠杆菌在该培养基中形成特定的菌落B．大肠杆菌能使培养基改变颜色C．大肠杆菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色，并有金属光泽D．大肠杆菌能在该培养基中很好生活，其余微生物不能很好生活8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．其核心是防止杂菌污染，保证培养液的纯度D．结果都是可在培养基表面形成单个的菌落二、非选择题9．有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。
实验1大肠杆菌的培养与分离(浙科版选修1)
灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。 ② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
b.干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
大肠杆菌的培养和分离
培养基的 配制 灭菌
超净工件台 倒平板
接种液体 培养
划线分离 培养
菌种保存
3.微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
• 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 • 2纯化大肠杆菌 • 3将接种后的培养基和一个未接种的培 养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h 后，观察并记录
1-3 现代生物技术
• • • • • • 一般而言，現代生物技术可以分成以下五种： 一、细胞工程 二、发酵工程 三、蛋白质工程 四、酶工程 五、基因工程
现代生物技术与传统生物技术的本质区别是 现代生物技术中用到了基因工程。
一、细胞工程
按照人们的需要和科学设计改变细 胞的遗传基础，并通过细胞(组织)培 养，细胞杂交(融合)，核移植和胚胎 移植等技术，重组细胞的结构和内含 物，以改变生物的结构和功能，快速 繁殖和培养出人们所需要的新物种的 生物工程技术。
8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌 锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌 15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干 热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用 来接种.
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实验2 分离以尿素为氮源的微生物
【学习目标】
1.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。
2.利用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。
【教学重点】
对土样的选取和选择培养基的配置
【教学难点】
选择培养基的配置
【知识链接】
1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。
2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、；按照化学性质分为和；按照用途分为和。
3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。
4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：
（1）；（2）。
【导学过程】
（一）筛选菌株
1.原理：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
2.方法：选择培养基
定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
配制的依据：
①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。
加入高浓度的食盐可得到。
这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。
②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。
如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。
③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。
④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境
中培养只能得到耐高温的微生物。
讨论1：怎样寻找耐高温的酶呢？
讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？
（二）设置对照
设置对照的主要目的
对照试验的定义：
（三）实验设计
实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。
（1）土壤取样
从富含有机物、潮湿、pH≈ 的土壤中取样。
铲去，在距地表约cm的土壤层取样。
（2）制备培养基
准备牛肉膏蛋白胨培养基和用作为氮源的选择培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
（3）微生物的培养与观察
将土样以1、10-1、10-2……依次等比稀释至10-7稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，（是否）更换移液管。
对于不同的微生物要选择不同的稀释浓度，测定细菌一般选择，测定真菌一般选择，测定放线菌一般选择。
注明培养基种类、培养日期以及平板培养样品的稀释度。
将涂布好的培养皿放在℃温度下培养。
随着培养时间的延长，会有不同的菌产生。
比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。
讨论3.为什么分离不同的微生物需要不同的稀释浓度？
（四）操作提示
1.本实验中要注意那些无菌操作？
2.在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是什么？应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？
3.如何对分离的菌种作进一步的鉴定？。