常见曲霉菌鉴定
如何识别毛霉.根霉.曲霉.青霉
如何识别毛霉.根霉.曲霉.青霉?毛霉又叫黑霉、长毛霉.菌丝为无隔膜的单细胞,多核,以孢囊孢子和接合孢子繁殖.毛霉的菌丝体在基质上或基质内能广泛蔓延,有假根和匍匐枝,孢囊梗直接由菌丝体生出,一般单生,分枝较少或不分枝.分枝顶端都有膨大的孢子囊,囊轴与孢囊梗相连处无囊托.根霉根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根,营养菌丝体上产生匍匐枝,匍匐枝的节间形成特有的假根,从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗,顶端膨大形成圆形的孢子囊,囊内产生孢囊孢子.孢子囊内囊轴明显,球形或近球形,囊轴基部与梗相连处有囊托.根霉的孢子可以在固体培养基内保存,能长期保持生活力.根霉在自然界分布很广,用途广泛,其淀粉酶活性很强,是酿造工业中常用糖化菌.我国最早利用根霉糖化淀粉（即阿明诺法）生产酒精.曲霉广泛分布在谷物、空气、土壤和各种有机物品上.生长在花生和大米上的曲霉,有的能产生对人体有害的真菌毒素,如黄曲霉毒素B1能导致癌症,有的则引起水果、蔬菜、粮食霉腐.曲霉菌丝有隔膜,为多细胞霉菌.在幼小而活力旺盛时,菌丝体产生大量的分生孢子梗.分生孢子梗顶端膨大成为顶囊,一般呈球形.项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗).最上层小梗瓶状,顶端着生成串的球形分生孢子.以上几部分结构合称为'孢子穗'.孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色.这些都是菌种鉴定的依据.分生孢子梗生于足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连.曲霉孢子穗的形态,包括分生孢子梗的长度、顶囊的形状、小梗着生是单轮还是双轮,分生孢子的形状、大小、表面结构及颜色等,都是菌种鉴定的依据.曲霉属中的大多数仅发现了无性阶段,极少数可形成子囊孢子,故在真菌学中仍归于半知菌类青霉菌属多细胞,营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色.菌丝有横隔,分生孢子梗亦有横隔,光滑或粗糙.基部无足细胞,顶端不形成膨大的顶囊,其分生孢子梗经过多次分枝,产生几轮对称或不对称的小梗,形如扫帚,称为帚状体.分生孢子球形、椭圆形或短柱形,光滑或粗糙,大部分生长时呈蓝绿色.有少数种产生闭囊壳,内形成子囊和子囊孢子,亦有少数菌种产生菌核.青霉的孢子耐热性较强,菌体繁殖温度较低,酒石酸、苹果酸、柠檬酸等饮料中常用的酸味剂又是它喜爱的碳源,因而常常引起这些制品的霉变.。
黑曲霉鉴定操作规程
黑曲霉鉴定操作规程黑曲霉（Aspergillus niger）是一种广泛存在于自然环境中的真菌，常见于土壤、植物和食物中。
它具有强大的分解能力，可以分解有机物质并产生许多有用的代谢产物。
然而，黑曲霉也是一种致病菌，特别是在患有免疫系统抑制的人群中。
因此，快速准确地进行黑曲霉的鉴定非常重要。
下面是黑曲霉鉴定的操作规程。
1. 样品准备- 从疑似受污染的土壤、食物或其他材料中采集样品，将样品放入密封的容器中。
注意避免任何可能的交叉污染。
- 将样品送至实验室进行进一步处理。
2. 样品处理- 将样品进行适当的粉碎或稀释。
对于固体样品，可以使用食品搅拌器或研钵进行粉碎。
对于液体样品，可以直接使用适当的稀释液进行稀释。
- 将样品制备成适当的稀释液，以便于后续的实验操作。
3. 培养基选择- 选择适当的培养基来培养黑曲霉。
黑曲霉常见于一般的富含碳水化合物和氮源的培养基，如马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）或麦芽提取物琼脂（MEA）。
也可以使用含有指示剂的培养基，如酚红琼脂葡萄糖培养基，以便于观察黑曲霉的生长情况。
4. 接种- 使用无菌技术将样品接种至培养基上。
可以使用无菌的棉签或针头，将样品均匀地涂抹在培养基表面上。
- 根据需要，可以在培养基上划出不同的区域，以便于对不同样品进行观察和比较。
5. 培养条件- 将培养皿或培养瓶密封并放置在适当的温度下培养。
黑曲霉通常在25-30摄氏度下生长最佳，但可以进行不同温度的培养来筛选黑曲霉菌株。
- 在培养过程中，注意观察并记录菌落形态、颜色和生长速度等特征。
6. 鉴定- 观察在培养基上生长的菌落形态，黑曲霉的菌落通常呈黑色，有时也可以呈灰色、绿色或棕色。
- 进一步进行显微镜观察，观察菌丝及分生孢子的形态和结构特征。
黑曲霉的菌丝通常呈无色，分生孢子呈黑色，形状多样，有时具有规律的排列方式。
7. 鉴定结果确认- 根据观察到的菌落特征和显微镜观察结果，结合已知的黑曲霉的形态特征进行鉴定。
食品安全微生物检测专题培训教材之常见霉菌的分类鉴定
第三节
霉菌分类鉴定的培养时常因不同的培养基而 在生理和形态方面表现出极大的差异，故 描述菌种时应注明鉴定培养基。最为常 用 的是察氏琼脂（Czapek Agar）和马 铃薯葡萄糖琼脂（PDA），通常青霉、 曲霉 用察氏琼脂培养，其他霉菌则应 选用 PDA。
待鉴定菌株的分离和纯化
另外，如采用倾注法，长在琼 脂深处的霉菌发育不良，无法观察其 菌 落特征。可改用表面涂布法。此 方法 手续繁琐，但所得种类较多。
待鉴定菌株的分离和纯化
直接点种法将食物小颗粒直接种于 分离培养基上，25℃培养2 d～3 d后，用 接种针挑取孢子或菌丝，转接于适当 的 琼脂斜面上待鉴定。此方法分纯效 果略 逊。
青霉、曲霉用察氏琼脂培养
青霉和曲霉在察氏琼脂上颜色 和形态分化较好。通用的察氏培养基 有 三种：原配方、Dox修改和Thom 修改配方。三者的差别在于硝酸钠添 加量 分别是3.0 g、3.5 g和2.0 g。
青霉、曲霉用察氏琼脂培养
尽管Dox氏和Thom氏均称自己 修改后的配方青霉、曲霉生长良好， 重 复性高，但国家标准仍以原配方 为鉴 定培养基。我们认为Dox氏配 方可以 试用。
霉菌分类鉴定培养基
对于镰刀菌属的菌种，必要时 要选用六种以上的不同培养基来分别显 示 它的不同培养特征。对有特殊要 求的 霉菌，培养时也应满足其条件 ，低水 活度食品如果酱、粮食中的 嗜干霉菌 ，应使用大量添加蔗糖或 食盐的高渗 培养基。如高盐察氏琼 脂。
待鉴定菌株的分离和纯化
常用方法有直接点种法、 划线法、稀释平板法。稀释平板 法 同常规检验，除了培养基用 具选 择性的外，还要求每皿中 长出的 霉菌菌落在十个左右， 太多则影 响分离效果。
曲霉形态特征
几种曲霉的形态特征常见曲霉困鉴定：菌落：菌落生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类 的依据之一② 分生抱子头：分生抱子头的形状、颜色和大小。
分生抱子头由顶囊、瓶梗、梗 基和分生抱子链组成，为曲霉的特征性结构③ 分生抱子梗或分生抱子柄：注意分生抱子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、 是否有隔等1、烟曲霉困在SDA 培养基上菌落生长快，棉花 样，开始为白色，2~3天后转为绿 色， 数日后变为深绿色，呈粉末 状。
分生抱子头的顶囊烧瓶状，小 梗单层，排列成 木栅状，布满顶囊 表面3/4，顶端有链形分生抱子，分生抱子球形，有小棘， 绿色烟曲霉菌菌落2、黄曲霉菌④ 具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳：为封闭式的薄壁子囊果，含子囊和子囊抱子; ⑤足细胞，也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。
分生抱子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形抱子黄曲霉菌菌落黄曲霉菌分生抱子头3、土曲霉困在SDA培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。
分生抱子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布顶囊表面2/3，顶端有链形抱子土曲霉菌落F列图片为分生抱子头4、黑曲霉困在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。
分生抱子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形抱子黑曲霉菌洛黑曲霉分生抱子头5、杂色曲霉困在SDA培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。
分生抱子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短, 呈放射状排列，布满顶囊4/5 ,顶端有链形抱子杂色曲霉菌菌落杂色曲霉菌分生抱子头下图为杂色曲霉菌分生抱子头电镜。
常见曲霉菌简介ppt课件
土曲霉—菌落及镜下表现
黑曲霉
4
黑曲霉
黑曲霉广泛分布于土壤、空气和谷物上； 可引起食物、谷物和果蔬的霉腐变质。
黑曲霉—镜下表现
分生孢子头开始为球形，逐渐变为放射状，黑褐 色，分生孢子梗无色或上部为浅黄色，光滑。
顶囊有单层和双层瓶梗，无色或黄褐色。双层小 梗布满顶囊，呈褐色，梗基呈放射状，有时有横现
黑曲霉—临床意义
黑曲霉能引起曲霉菌病，还能产生黑曲霉毒素。
谢谢聆听！
常见曲霉菌简介
概述
曲霉菌是一种典型的丝状菌，占空气中真菌的 12%左右；
主要以枯死的植物、动物的排泄物及动物尸体为 营养源，为寄生于土壤中的腐生菌。
概述
典型镜下表现：
1. 曲霉菌丝有隔膜，直径3-6um； 2. 分支呈锐角45°； 3. 菌丝两侧平行。
1
3
2
荧光显微镜下曲霉菌图（40倍镜）
电镜下曲霉菌示 意图
黄曲霉
2
黄曲霉
黄曲霉最为常见的曲霉菌，属于腐生真菌； 多见于发霉的粮食、粮制品及其他霉腐的有机物
上； 菌落生长快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色
或略呈褐色。
黄曲霉—镜下表现
✓ 分生孢子头疏松放射状，随后可变为疏松柱状； ✓ 小梗为单层、双层或单、双层同时着生于一个
顶囊上，呈放射状。 ✓ 小分生孢子呈球形或洋梨形，表面粗糙，有些
CONTEN T 目录
Part 01 Part 02 Part 03 Part 04
烟曲霉 黄曲霉 土曲霉 黑曲霉
烟曲霉
1
烟曲霉
➢烟曲霉存在于：谷物、污染的食品、土壤和霉腐物 中；
➢是引起人和动物曲霉病的重要病原菌； ➢感染肺部和其他器官，也能引起敏症。
鉴定黄曲霉和青霉属的主要特征
鉴定黄曲霉和青霉属的主要特征
黄曲霉和青霉属是两种常见的霉菌，它们具有一些主要特征可以用来进行鉴定。
黄曲霉的主要特征包括：
1. 菌丝呈现灰黄色、暗黄色或淡黄色；
2. 菌丝较细，直径通常在2-4微米之间；
3. 子实体通常为粉红色、橙黄色或黄色；
4. 生长速度较快，可在温度为25-37摄氏度下生长。
青霉属的主要特征包括：
1. 菌丝呈现淡蓝色、绿色或灰绿色；
2. 菌丝较粗，直径通常在3-6微米之间；
3. 子实体通常为蓝色或绿色；
4. 生长速度较慢，通常需要较长时间才能发育成熟。
需要注意的是，这只是对黄曲霉和青霉属的一般特征进行的简要描述，实际上，黄曲霉和青霉属下面还存在许多不同种类的菌株，其特征可能会有所不同。
因此，进行具体鉴定时可能需要结合更多的检测方法和技术来确定其种类。
米曲霉菌种种曲杂菌的鉴定方法
米曲霉菌种种曲杂菌的鉴定方法
米曲霉菌属是一种常见的真菌，包括多种曲杂菌。
鉴定米曲霉菌种类和曲杂菌的方法主要包括以下几种：
1. 外部形态观察：观察菌落的形态特征，包括颜色、形状、大小和表面纹理等。
不同菌种的菌落形态差异较大，可以帮助鉴定种类。
2. 微观形态观察：通过显微镜观察菌丝的形态特征，包括菌丝的直径、分枝情况、孢子形态和孢子产生的结构等。
不同菌种的孢子形态和产生结构有所不同，是鉴定的重要依据。
3. 生理和生化特性：通过菌落的生长特性、产生的酶活性、代谢产物和化合物分析等，来判断菌株的代谢类型和产物特征。
例如，一些曲杂菌能够产生青霉素，可以通过鉴定其生理特性来确定菌种。
4. 分子生物学方法：使用分子生物学技术，如PCR、DNA测
序和分子标记等，对米曲霉菌的特异基因序列进行分析和比对，从而精确鉴定种类和亲缘关系。
以上是常用的米曲霉菌种种曲杂菌的鉴定方法，不同的方法可以结合使用，以提高准确性。
常见曲霉菌鉴定
【转帖】常见曲霉菌鉴定真菌2006-11-25 17:13:51 阅读798 评论2 字号：大中小订阅作者：龙太郎鉴定依据：①菌落：菌落生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类的依据之一②分生孢子头：分生孢子头的形状、颜色和大小。
分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成，为曲霉的特征性结构③分生孢子梗或分生孢子柄：注意分生孢子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、是否有隔等④具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳：为封闭式的薄壁子囊果，含子囊和子囊孢子；⑤足细胞，也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构：1、烟曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，棉花样，开始为白色，2~3天后转为绿色，数日后变为深绿色，呈粉末状。
分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗单层，排列成木栅状，布满顶囊表面3/4，顶端有链形分生孢子，分生孢子球形，有小棘，绿色：烟曲霉菌菌落：下列图片为烟曲霉分生孢子头：2、黄曲霉菌：在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。
分生孢子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子。
黄曲霉菌菌落：黄曲霉菌分生孢子头：3、土曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。
分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布顶囊表面2/3，顶端有链形孢子。
土曲霉菌落：土曲霉分生孢子头：4、黑曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。
分生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形孢子。
黑曲霉菌落：黑曲霉分生孢子头：5、杂色曲霉菌在SDA培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。
分生孢子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短，呈放射状排列，布满顶囊4/5，顶端有链形孢子。
杂色曲霉菌菌落：杂色曲霉菌分生孢子头：杂色曲霉菌分生孢子头电镜下图片：6、构巢曲霉菌在SDA培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒毛状。
霉菌的分离纯化和鉴定
3、目的菌的充分释放
——使目的菌与样品基质分离：加入活化剂或乳化剂；震荡及超 声波处理，DDC技术；酶法或研磨等组织破碎法；
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三、初筛
设计选择性培养基，稀释涂布，挑选目标菌株。
1、培养基设计原则
合适的营养物质及浓度配比，如不同的C/N源；各无机盐比例适 当；合适的渗透压或水分活度；适宜的pH等；
1、培养基设计原则；
初筛 2、分离方法介绍；
1、获得纯培养； 2、选择目的菌株；
复筛
3、培养条件； 1、霉菌简介；
形态学观察 2、菌落形态；
1、真菌的系统发育谱；
2、微生物快速鉴定技术； 生理生化实验
3、霉菌制片观察；
18SrRNA
分子生物学方法
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一、微生物资源的分布及样本的采集
土壤环境：
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⑵分类
目前，真菌学仍然是微生物学的薄弱环节，还有待进一步深 入研究。在系统学方面，受到公认的分类体系不多。
真菌的类群：
接合菌纲：代表种—毛霉、根霉 子囊菌纲：代表种—酵母菌、羊肚菌 担子菌纲：代表种—鹅膏菌、伞菌 卵菌纲：代表种—异水霉属 半知菌纲：代表种—青霉属、曲霉属、假丝酵母
烧试管口及棉塞； 应斜持试管呈45度角，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养
基表面，造成污染；
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3、霉菌的制片观察
⑴培养方法
①插片法 ②搭片法 ③玻璃纸法 ④印片法 ⑤小室培养
((11))制开平槽板及、接接种种：用无菌打孔器在凝 (子表留(涂接(小块(盖插1培(及稀◆征固将(放培(置中放成◆然察◆以自◆定晾1232323/)))将面气布种滴，2))))直玻入养盖疏可，后孢一养于的在水用后菌注防然反，干插培搭水玻涂长已，泡在平蒸移接片培3片,观且的子无3载盖载封镊用的意载形转用；片养片封璃布度～且～灭用，铺板馏至玻，养上察便平划菌玻玻玻片子此平将玻态有石及后及片纸菌。7易7菌无每有倒水载璃在基。到于板线盖片片片，取微皿载片；印炭dd培的培观前液将产；；的菌个玻置玻，纸已内在菌观培接玻中取上用洁热上玻水痕酸养菌养察期及插生涂平璃于片小将观接，缺体察养种片央出，高净载，片平的复：丝：：准培片抱布板纸上块2含察种 插 少 自 不 基 至 ， ， ， 浸 倍 载 玻 轻 垂移 载 红用体在取备养8平子棒可的，玻菌℃：平人营然同上洞平将将在镜玻片轻直动玻染无生接一：：板,铺平并璃将玻，于板深养生生打内板搭染观片压而片有盖放色便菌长种滴以取倒板使纸玻5璃培载上度长长洞边倒片色察并破微的菌在一下1于镊在后美无0-置m1培片璃纸有.养玻以约状期数缘置法液，坏微盖面微长下和l镜0子培的蓝菌于imn块养铺纸片菌片占态的个；培中并菌加4片2朝微有；取5检，取养洞染操2l58～孢玻基在压剪面8上盖形，养，绘体热上下下加待出°℃。水无基面色作℃7子璃表培平下向放玻态并皿制图的菌的，热观，固角，d洗菌上液用，悬纸面养，一上；一片。。丝特，斜，镊液；，基不小， 注◆意用不油能镜有观气察泡，。并于绘显图微。镜下观察，先 用低倍镜观察菌的立体生长状况，再用 高◆倍印镜片仔法细主观要察用。于观察孢子形态、 排列及其形状等，方法简便。
产毒霉菌的鉴定
黄曲霉形态特征
•
•
•
黄曲霉菌污染的玉米：
黄曲霉
• • 属于黄曲霉群。在察氏琼脂培养基上菌落生长较快，10～14 d直径3～4 或 4～7 cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老后颜色变暗，平坦或有放射状 沟， 反面无色或带褐色。在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状，继变 为疏 松柱状。分生孢子梗多从基质生出，长度一般小于 1 mm。有些菌丝产生带 褐色 的菌核。制片镜检观察可见分生孢子梗极粗糙，直径10～20μm。顶囊烧瓶形 或 近球形，直径10～65μm，一般多为 25～45μm。全部顶囊着生小梗，小梗单 层、 双层或单、双层同时生在一个顶囊上；梗基6～10μm4～5.5μm。小梗 6.5~10μ m×3~5μm。分生孢子球形、近球形或稍作洋梨形，3～6 μm，粗糙（见 图 1）。 黄曲霉产生典曲霉毒素，该毒素能引起动物急性中毒死亡，如长期食用含微 量黄曲霉毒素的食物，能引起肝癌。
鉴别器材：
• 1 显微镜。 2 目镜测微计。 3 物镜测微计。 4 温箱。 5 冰箱。 • 6 无菌接种罩。 7 放大镜。 8 酒精灯。 9 接种钩针。 • 10 分离针。 11 滴瓶。 12 载物玻片。 13 盖玻片 • 14 小刀。
鉴别方法：
• 1. 菌落的观察：为了培养完整的巨大菌落以供观察记录，可将纯培养物点植 于平板上。方法是：将平板倒转，向上接种一点或三点，每菌接种两个平板，倒 置于 25～28℃温箱中进行培养。当刚长出小菌落时，取出一个平皿，以无菌操 作，用小刀将菌落连同培养基切下1 cm×2 cm 的小块，置菌落一侧，继续培养， 于 5～14 d 进行观察。此法代替小培养法，可直接观察子实体着生状态。 斜面观察：将霉菌纯培养物划线接种（曲霉、青霉）或点种(链刀菌或其 他菌）于斜面，培养5～14 d，观察菌落形态，同时还可以将菌种管置显微镜下 用低倍镜直接观察孢子的形态和排列。 2. 制片：取载玻片加乳酸-苯酚液一滴，用接种针钩取一小块霉菌培养物， 置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开成小块，切忌涂沫，以免破坏霉 菌结构。然后加盖玻片，如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接 种罩内操作，以防孢子飞扬。 3.镜检：观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，幷做详细记 录。 4.报告：根据菌落形态及镜检结果，参照以下各种霉菌的形态描述及检索表， 确定菌种名称。
常见曲霉菌鉴定
【转帖】常见曲霉菌鉴定真菌2006-11-25 17:13:51 阅读798 评论2 字号：大中小订阅作者：龙太郎鉴定依据：①菌落：菌落生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类的依据之一②分生孢子头：分生孢子头的形状、颜色和大小。
分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成，为曲霉的特征性结构③分生孢子梗或分生孢子柄：注意分生孢子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、是否有隔等④具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳：为封闭式的薄壁子囊果，含子囊和子囊孢子；⑤足细胞，也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构：1、烟曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，棉花样，开始为白色，2~3天后转为绿色，数日后变为深绿色，呈粉末状。
分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗单层，排列成木栅状，布满顶囊表面3/4，顶端有链形分生孢子，分生孢子球形，有小棘，绿色：烟曲霉菌菌落：下列图片为烟曲霉分生孢子头：2、黄曲霉菌：在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。
分生孢子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子。
黄曲霉菌菌落：黄曲霉菌分生孢子头：3、土曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。
分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布顶囊表面2/3，顶端有链形孢子。
土曲霉菌落：土曲霉分生孢子头：4、黑曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。
分生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形孢子。
黑曲霉菌落：黑曲霉分生孢子头：5、杂色曲霉菌在SDA培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。
分生孢子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短，呈放射状排列，布满顶囊4/5，顶端有链形孢子。
杂色曲霉菌菌落：杂色曲霉菌分生孢子头：杂色曲霉菌分生孢子头电镜下图片：6、构巢曲霉菌在SDA培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒毛状。
两种酒曲中霉菌的分离与鉴定_李艳
对每种形态类型的霉菌选取一株代表菌株进行 5 d 的观察分析，图 1 至图 5 展示了 5 种形态类型的 霉菌培养至第 1 d、3 d、5 d 时的菌落形态图片结果。
图 1 形态 1 菌落形态
形态 1： 培养 1 d 内中心呈灰色边缘白色棉絮 状，干燥，菌丝体疏松，生长速度较快。
培养到 3 ～ 4 d 内长满培养基表面，后期菌丝体 极发达呈现灰白色。
将固体曲块打碎混匀，取 1 g 曲粉置于加有 100 mL 无菌水的三角瓶中，将三角瓶放入摇床中 150 r / min 震 荡 30 min，对曲粉液进行梯度稀释，对 10 － 2 、10 － 3 、 10 － 4 三个稀释梯度的菌液，分别取 200 μL 涂布于 PDA 培养基上，置于培养箱中 28 ℃ 下培养 2 d，挑取 疑似霉菌菌落划线于 PDA 培养基上 28 ℃ 下培养 2 d 进行分离纯化，纯化完全后采用三点法接种于 PDA 培养基 28 ℃ 下培养 5 d 进行菌落观察与显微形态观 察，从而在形态水平上进行分类。取纯化完全的菌体 接入 25% 甘油水溶液当中，－ 20 ℃ 下进行保藏。 1． 2． 2 霉菌鉴定
曲霉的鉴定方法
曲霉的鉴定方法
曲霉的鉴定主要包括培养和镜检两个步骤。
在培养方面，曲霉菌落生长快，黑色或黑褐色，1-4天即可进行鉴定。
顶囊球形或近球形，小梗双层、密生于顶囊全部表面。
在镜检方面，应注意与亮白曲霉进行区分，后者菌落颜色为白色，生长慢。
幼龄时黄色菌落注意与黄曲霉相区分：前者菌落表面黄色颗粒稀疏、为淡黄色，后者黄色颗粒较粗、密，为金黄色，两者镜下差异显著。
此外，曲霉菌广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中，是重要的发酵工业菌种，可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等。
有的菌株还可将羟基孕甾酮转化为雄烯。
总的来说，曲霉的鉴定需要综合考虑其培养和镜检特征，以及其在不同环境中的分布和生长情况。
常见曲霉的分类鉴定
常见霉菌的分类鉴定福建省疾病预防控制中心马群飞目录•霉菌鉴定的意义•霉菌鉴定的依据•霉菌鉴定的基本材料•常见霉菌分类鉴定程序•现行国家标准的曲霉分群第一节霉菌鉴定的意义霉菌分类鉴定的意义在食品中能分离出各种霉菌，但它们很可能没有什么意义，因为其中多数来源于外界的偶然污染。
仅有非常有限的几个霉菌属可使经过加工并正常生产工艺包装的食品腐败。
霉菌分类鉴定的意义当然，如果不按照标准的生产程序进行食品生产，那么许多外界污染的霉菌都将在食品中大量繁殖，这种情况下，就谈不上优势菌群问题了，也不必进行霉菌的分类鉴定。
处理方法只有一个，恢复正常的生产程序。
霉菌分类鉴定的意义霉菌中的多数种类不会产生有害的霉菌毒素，危害较小，而少数菌株即使污染数量不多，产生的霉菌毒素却有极大的危害，因此单纯的霉菌计数并不能反映食品的安全性，只有知道了食品的污染菌菌相，才能更准确地判断。
分类鉴定的意义就在于此。
第二节霉菌分类鉴定的依据霉菌分类鉴定的依据霉菌和酵母这种称谓仅是为了方便起见，将小型真菌有真正菌丝的称为霉菌，没有菌丝的称酵母，并没有分类学上的依据。
霉菌的分类鉴定十分繁琐。
真菌分类系统全世界已知真菌有上千属，十万种。
五十年来，对于真菌的研究飞速发展，主要研究热点问题集中在以下几个方面。
真菌的分类系统①真菌超微结构的研究，主要是电镜应用②生理生化的研究③医学真菌学、药用真菌学研究④真菌毒素研究⑤真菌分类学及真菌地位研究⑥食用真菌人工培养开发真菌的分类系统目前，真菌学仍然是微生物学的薄弱环节，还有待进一步深入研究。
在系统学方面，受到公认的分类体系不多。
真菌分类系统酵母分类以荷兰Lodder J.主编《The Yeast -A Taxonomic Study》(罗德，酵母菌—分类研究)1970年再版本为比较完整的系统。
常见霉菌的分类丝状真菌没有完整的分类系统。
常用Smith系统。
•藻状菌纲•子囊菌纲•担子菌纲•半知菌类霉菌分类鉴定的依据目前国内最常用的鉴定依据，就是中国科学院微生物研究所主编的《常见与常用真菌》，1973年，科学出版社第三节霉菌分类鉴定的基本材料霉菌分类鉴定培养基霉菌培养时常因不同的培养基而在生理和形态方面表现出极大的差异，故描述菌种时应注明鉴定培养基。
常见产毒霉菌的鉴定.
显微镜下的黄曲霉毒素
在低倍显微镜 下观察可见分生 孢子头疏松放射 状、继变为疏松 柱状。分生孢子 梗多从基质生出， 长度一般小于 1mm
菌丝体
有些菌丝产生带褐色的菌核
※下面以黄曲霉为例、介绍有 毒霉菌的鉴定
黄曲霉形态特征：
属于黄曲霉群，在察式琼脂培养基上 菌落生长较快，10-14天直径3-4cm或47cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老 后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面 无色或带褐色
中国农业大学教授何计国说，容易受黄曲霉
毒素污染的食品包括玉米、花生、大米、其次是 大麦小麦等。
黄曲霉毒素危害性有多大呢？据专家介绍， 黄曲霉毒素的毒性是氰化钾的１０倍，砒霜的６ ８倍。误食了黄曲霉毒素污染的食品的患者，轻 则可能出现发热、腹痛、呕吐、食欲减退等症状， 重则可能出现肝区疼痛、下肢浮肿及肝功能异常 等中毒性肝病症状。广州市奶业协会会长王丁棉 说，在自然条件下，即使用１００℃的温度进行 ２０个小时的灭菌，也不一定能将其彻底杀灭或 去除
培养物，置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开
成小块，切记涂抹，以免破坏霉菌结构。然后加盖玻片，
如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接种
罩内操作，以防孢子飞扬。
4.镜检
观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的摆列等，并
做详细记录。
二、鉴别方法
预先将检验中的霉菌或检验中分离出的霉菌孢子培养
后的霉菌进行纯培养。
1.平板菌落观察
﹙1﹚制备平板 准备两个灭菌的察氏琼脂平板。
﹙2﹚接种
用点植法将纯培养基物接种于察氏琼脂
平板，霉菌接种两个平板。
﹙3﹚培养 将接种的平板于25-28摄氏度温箱中培养5-14
天。
霉菌的分离纯化和鉴定
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斜面接种法
斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种； 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面的纯培养物 接种到斜面培养基上，称为斜面培养； 霉菌的斜面接种：适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛 霉、根霉等）。常用点接法，即点接在斜面中部偏下方； 接种室避免碰到试管壁，防止污染；超净台酒精灯附近操作，注意灼 烧试管口及棉塞； 应斜持试管呈45度角，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养 基表面，造成污染；
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⑵分类
目前，真菌学仍然是微生物学的薄弱环节，还有待进一步深 入研究。在系统学方面，受到公认的分类体系不多。
真菌的类群：
接合菌纲：代表种—毛霉、根霉 子囊菌纲：代表种—酵母菌、羊肚菌 担子菌纲：代表种—鹅膏菌、伞菌 卵菌纲：代表种—异水霉属 半知菌纲：代表种—青霉属、曲霉属、假丝酵母
低等真菌特有
高等真菌特有
根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型： 无隔膜菌丝：无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核，这 是低等真菌所具有的菌丝类型； 有隔膜菌丝：有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个 细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。在隔膜上有1至多个小孔，使细胞 之间的细胞质和营养物质可以相互沟通，这是高等真菌所具有的菌丝类型；
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⑵用液体培养基获得纯培养
稀释法：
方法：接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀 释的效果，使一支试管中分配不到一个微生物；
特点：工作量大，是否获得纯培养依靠统计学的推测；
应用：用于不能或不易在固体上生长的菌落；
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3、培养条件
曲霉菌的鉴定与应用
曲霉菌的鉴定与应用曲霉菌以腐物寄生的形式广泛存在于自然界中，为条件致病菌。
引起人类感染的约20多种，常见的有8种。
烟曲霉菌、黄曲霉菌是引起肺曲霉病最重要的两个菌种。
近几年，由于广谱抗生素的广泛使用及联合使用是造成肺曲霉病的重要原因之一。
特别是2008年以来，肺曲霉病的发病率突然在全国范围内迅速上升。
临床上治疗时机的延误是造成死亡的主要原因。
对于曲霉病的诊断，找到病原体为金标准。
检验科微生物工作者如何配合临床应对这种突如其来的事件，迅速制定和建立实验室的快速检测方法成为当务之急。
多年培养出的应急意识及工作经验，使我们在短时间内迅速制定出了曲霉菌实验室快速鉴定的最有效、最可靠的检测方法。
1 方法1.1标本留取真菌的菌丝分为两种：一种为气中菌丝，另一种叫营养菌丝。
这种营养菌丝与组织结合非常牢固，因此在留取标本时，一定要嘱咐病人要用力咳痰并要咳到带盖的容器中。
1.2培养曲霉菌的培养一般接种在沙保弱培养基中，但实践经验告诉我们，接种在血平板中最好。
因为在血平板中培养18～24小时后生长出的菌落会产生特殊的颜色，它是鉴别曲霉菌的重要特征之一。
如，曲霉菌的菌落为灰绿色，黄曲霉菌的菌落呈棕黄色，菌落的背面还可见到皱褶。
1.3涂片由于营养菌丝与组织粘膜结合牢固，直接留取痰液涂片检查很难查到。
即使找到了也只是一些子囊及壳细胞，而被误认为是酵母菌。
这也是造成临床治疗延误的重要原因，因此涂片检查应在培养后进行，挑取菌落时一定是刮取而不是沾取，染色后应先用低倍镜找视野（即蒲公英花样结构），再换油镜观察。
各种曲霉菌有它特有的形态特点。
正确留取标本是曲霉菌能够检出的前提条件，培养选择血平板是24小时内出现典型曲霉菌菌落的保障，镜下查到完整曲霉菌结构是一步鉴定到种的关键。
掌握了这三个方面，实验室查到病原体就有了可靠的依据。
2 结论为什么肺曲霉菌病比以往以8倍的速度上升，最重要的原因就是抗生素的广泛使用和联合应用后细菌，甚至是正常菌群被抑制或杀死使真菌得以生长繁殖导致菌群失调，造成真菌感染。
黑曲霉孢子质量鉴定方法
黑曲霉孢子质量鉴定方法
黑曲霉是一种引起害虫的有毒病原菌，对环境、人类和动物健康都具有危害性。
黑曲霉孢子质量鉴定是识别黑曲霉污染、监测食品中害虫和评价农业生产中毒性孢子活力的重要手段。
本文着重介绍了黑曲霉孢子质量鉴定的方法。
首先，要准备好收集样品材料，如粮食、土壤、蔬果及其他可能含有黑曲霉污染的物质;在细胞遗传学上检测样品，以确定是否含有黑曲霉孢子；如果含有黑曲霉孢子，就可以开展进一步检测，如光学显微镜确定孢子形态及其多样性；运用放射性核素法检测孢子质量，可以判断孢子死活；检测孢子染色体，了解孢子性状特征等都有助于进一步评估食品中活性的有害孢子。
其次，要利用序列分析手段，如PCR-RFLP等，对样品中的毒素和有害孢子种进行检测，通过检测和识别B-Trichothecenes类毒素及黑曲霉孢子，以确定其含有毒性及致病性；通过PCR反应对样品中的有毒成分进行指纹图谱分析，判断有害孢子质量。
例如可利用DArT（重叠相关型指纹图谱）技术进行有害孢子质量分析;利用ELISA来判定样品中黑曲霉孢子毒素的检测;利用AFLP和PCR/RFLP（限制性片段长度多态性）方法，充分发挥有毒孢子的分子鉴定特性。
最后，可以采用标准试剂进行对比测定，以及利用不同技术对黑曲霉孢子的遗传稳定性的特征进行检测，以全面识别和定量分析黑曲霉孢子质量。
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【转帖】常见曲霉菌鉴定
真菌 2006-11-25 17:13:51 阅读798 评论2 字号：大中小订阅
作者：龙太郎
鉴定依据：
①菌落：菌落生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类的依据之一
②分生孢子头：分生孢子头的形状、颜色和大小。
分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成，为曲霉的特征性结构
③分生孢子梗或分生孢子柄：注意分生孢子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、是否有隔等
④具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳：为封闭式的薄壁子囊果，含子囊和子囊孢子；
⑤足细胞，也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构：
&
1、烟曲霉菌
在SDA培养基上菌落生长快，棉花样，开始为白色，2~3天后转为绿色，数日后变为深绿色，呈粉末状。
分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗单层，排列成木栅状，布满顶囊表面3/4，顶端有链形分生孢子，分生孢子球形，有小棘，绿色：
烟曲霉菌菌落：
下列图片为烟曲霉分生孢子头：
)
2、黄曲霉菌：
在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。
分生孢子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子。
黄曲霉菌菌落：
黄曲霉菌分生孢子头：
)
3、土曲霉菌
在SDA培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。
分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布顶囊表面2/3，顶端有链形孢子。
土曲霉菌落：
土曲霉分生孢子头：—
4、黑曲霉菌
在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。
分生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形孢子。
、
黑曲霉菌落：
黑曲霉分生孢子头：
5、杂色曲霉菌
在SDA培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。
分生孢子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短，呈放射状排列，布满顶囊4/5，顶端有链形孢子。
}
杂色曲霉菌菌落：
杂色曲霉菌分生孢子头：
杂色曲霉菌分生孢子头电镜下图片：
~
6、构巢曲霉菌
在SDA培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒毛状。
分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，布顶囊1/2，顶端有链形孢子。
构巢曲霉菌落：
构巢曲霉分生孢子头：。