微生物药敏纸片抗生素标准含量

纸片法抗菌药物敏感实验操作标准

纸片法抗菌药物敏感实验操作标准4.3 标准比浊管用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊标准），标定接种菌液浓度。

比浊管制备方法如下：（1）0.048mol/L BaCl2，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml的0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。

0.5麦氏标准比浊管在625nm波长的吸收光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。

如出现大颗粒，应更换；（6）每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。

5 操作步骤5.1 制备接种菌液5.1.1 增菌法步骤如下：（1）选琼脂平板上形态相同的菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相同。

可用光电比浊。

目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。

5.1.2 直接菌悬液法步骤如下：（1）做常规药敏试验，可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基平板，如普通琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。

菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验；（3）当用此法做复方磺胺药的试验时，从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂，造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。

5.2 接种平板步骤如下：（1）校正的菌液须在15分钟内使用。

用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。

实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。

原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。

应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。

（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。

将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

药敏纸片中药物含量标准

100
9
优立新(氨苄青/舒巴坦) (舒他西林)
10/10
10
特美汀(的卡西林/棒酸)
75/10
11
头孢氨苄(先锋IV) △
30
12
头孢唑林(先锋V) △
30
13
头孢拉定(先锋VI) △
30
14
头孢羟唑（先锋孟多）
30
15
头孢呋新（头孢呋辛钠） (西力欣)(头孢肤肟) △
30
16
头孢西丁(美福仙)
30
20/10
80
甲氧苄胺嘧啶(TMP)
5
81
恩诺沙星
5
82
氟康唑
25
83
酮康唑
15
84
伊康唑
8
85
头孢噻肟+棒酸
30/10
86
头孢他啶+棒酸
30/10
87
头孢匹胺
75
88
加替沙星
5
89
交沙霉素
15
90
呋喃唑酮
100
92
ONPG
80
93
新生霉素
5
94
杆菌肽
0.04u
95
奥普托欣(optochin)
5
96
30
24
噻吗灵(拉他头孢) (拉氧头孢钠)
30
25
舒普深(先锋必/舒巴坦)
75/75
26
头孢克肟(世福素)
5
27
丁胺卡那(阿米卡星) △
30
28
庆大霉素△10Βιβλιοθήκη 29高浓度庆大霉素
120
30
卡那霉素△
30
31

常见药物对常见细菌药敏折点的参考值

DB34/T 3399—20199附录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片药物含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。

药敏试验判定标准

≤12 13-15 ≥16
75
≤15 16-20 ≥21
30
≤14 15-22 ≥23
-- -- ≥26
-- -- ≥31
≤25 26-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
≤23 24-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
-- -- ≥26
-- -- ≥31
30
≤14 15-19 ≥20
≤14 15-19 ≥20
头孢肤肟酯（口服）头孢肤肟（西力欣）测嗜血杆菌
测葡萄球菌
≤19 -- ≥20 测淋病奈瑟菌
测其他菌
≤13 14-17 ≥18
38
测嗜血杆菌
≤19 -- ≥20 氯碳头孢
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
拉氧头孢（噻吗灵）
纸片含量
抑菌环直径
ug/片
耐药 R 中介 I 敏感 S
抗生素
纸片含量
抑菌环直径
耐药 R 中介 I 敏感 S 针对病原菌
ug/片耐药 R 中介 I 敏感 S
氟罗沙星
5
≤15 16-18 ≥19
6 7-9 ≥10 测淋病奈瑟菌
≤27 28-32 ≥33
≤12 13-14 ≥15 左旋氧氟沙星
5
≤13 14-16 ≥17
≤13 14-17 ≥18 测肺炎链球菌
测淋病奈瑟菌
测铜绿假单胞菌测其他革兰氏阴性杆菌
≤13 14-16 ≤19 20-22
≥17 头孢美唑 ≥23 头孢哌酮（先锋必）
美洛西林
75
头孢噻肟（凯福隆）
测铜绿假单胞菌
≤15 --
≥16 测嗜血杆菌

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标1

测其他链球菌≤1718-20≥21
抗菌药物名称含量ug/片大肠杆菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌
ATCC25922ATCC25923ATCC27853
阿莫西林1019-2528-36——
舒普深（先锋必/舒巴坦）75/7528-3424-3323-29
吉他霉素（柱晶白霉素）15——22-30——
罗红霉素15——22-30——
新生霉素30≤1213-16≥17
多粘菌素B300≤88-11≥12
加替沙星5
测葡萄球菌≤1920-22≥23
测肠杆菌≤1415-17≥18
嗜血杆菌≥18敏感
头孢匹胺75≤1516-20≥21
交沙霉素15≤1314-22≥23
氟苯尼考30≤1213-17≥18
测嗜血杆菌≤2526-28≥29
测肺炎链球菌≤20--≥21
测产单核李斯特≤19--≥20
测嗜血杆菌≤1819-21≥22
测β-溶血性链球菌≤1819-25≥26
阿洛西林（Azlocillin）75
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
羧苄西林100
测铜绿假单胞菌≤1314-16≥17
测其他革兰氏阴性杆菌≤1920-22≥23
美洛西林75
测铜绿假单胞菌≤15--≥16
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准
杭州微生物试剂有限公司
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
β-内酰胺类
青霉素类
氨苄西林10
测肠杆菌科细菌≤1314-16≥17
测葡萄求菌≤28--≥29
测肠球菌≤16--≥17

药敏纸片的制备

药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。

通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。

微生物学检验(第3版)药物敏感试验

抗生素的种类一.目的：
四、氨基糖苷类抗生素按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提取获得，有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；②由小单胞菌属发酵滤液中提取，有庆大霉素、福提霉素；③半合成氨基糖苷类，有阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等。
抗生素的种类一.目的：
五、喹诺酮类抗生素第一代为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶酸和恶喹酸。第二代为广谱类抗生素，抗菌强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟沙星。第三代为超广谱类抗生素，有司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等。
纸片的名称，然后用棉试子蘸取菌液，在试管内
壁轻挤去多余菌液后均匀涂布于整个平板表面3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂一周。放置约5分钟后用镊子分别挟取所选择的药敏纸片贴上。室温放置10分钟左右，恒温箱培养24h。
验操实作
• (4)、MH平板涂布均匀，放置5分钟再贴纸片，纸片放置应该迅速准确，不得在平板上拖动纸片，纸片间的距离和位置要均匀。离平板边缘不小于15mm，两纸片间距离不小于24mm。
实验原理 1.原理：
实验操作（接种与培养）
• (1)、取待测菌平板，观察菌落形态，涂片镜检，革兰阴性杆菌做氧化酶试验，革兰阳性球菌做触决定选择何组、何种药敏纸片。
酶实验。并根据实验结果对该菌株作出初步判断，
药敏试验选择纸片
• 触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环
丙沙星、万古、红霉素、头孢唑林庆大、环丙沙星、万古
(一）苛养菌药敏试验抗生素的选用
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如肺炎链球菌用头孢呋辛。

药敏试验判定标准

测嗜血杆菌 ≤25 26-28 ≥29
测肺炎链球菌 ≤20 -- ≥21
测其他链球菌 ≤17 18-20 ≥21
克林霉素（氯洁霉素） 2 ≤14 15-20 ≥21
测链球菌 ≤15 16-18 ≥19
呋喃妥因 300 ≤14 15-16 ≥17
呋喃唑酮（痢特灵） 300 ≤14 15-16 ≥17
利福平 5 ≤16 17-19 ≥20
测淋病奈瑟菌 -- -- ≥36
依诺沙星（氟啶酸） 10 ≤14 15-17 ≥18
测淋病奈瑟菌 -- -- ≥32
氟罗沙星 5 ≤15 16-18 ≥19
测淋病奈瑟菌 ≤27 28-32 ≥33
左旋氧氟沙星 5 ≤13 14-16 ≥17
测肺炎链球菌 ≤13 14-16 ≥17
洛美沙星 18 ≤10 19-21 ≥22
和葡萄球菌 ≤11 12-14 ≥15
测嗜血杆菌 ≤19 -- ≥20
替卡西林/克拉维酸（特美汀）75/10
测铜绿假单胞菌 ≤14 -- ≥15
测其他革兰氏阴性杆菌 ≤14 15-19 ≥20
测葡萄球菌 ≤22 -- ≥23
头孢类（包括头孢菌素，头霉素，碳头孢烯类和氧头孢烯类）
头孢噻吩（先锋Ⅰ） 30 ≤14 15-17 ≥18
测嗜血杆菌 ≤25 26-28 ≥29
测淋病奈瑟菌 ≤30 31-37 ≥38
测链球菌 ≤18 19-22 ≥23
多西环素（强力霉素） 30 ≤12 13-15 ≥16
二甲胺四环素（美满霉素） 30 ≤14 15-18 ≥19
喹诺酮类
环丙沙星 5 ≤15 16-20 ≥21
测嗜血杆菌 -- -- ≥21
测嗜血杆菌 -- -- ≥26

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性1 实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。

该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。

通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。

并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC 愈小，抑菌圈直径愈大。

2 实验材料2.1 菌液江山大农庄拉稀的猪仔肠道黏膜物中提取的大肠杆菌。

2.2药品链霉素、四环素、多粘菌素B、万古霉素、庆大霉素、红霉素、氨苄青霉素、新霉素、利福平、青霉素、菌必治、羧苄青霉素。

3 实验步骤3.1药敏纸片的准备纸片内抗菌药物含量3.2细菌的制备从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。

为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。

因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。

3.3 接种平板制备好的接种菌液必须在15min内使用。

用灭菌好的棉试子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。

然后用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈，保证涂布均匀。

3.4 粘贴药敏试纸待平板上的水分被琼脂完全吸收后开始贴纸片。

用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊子尖轻压，使其贴平，纸片一旦贴上就不能再拿起，因为纸片中的药物已经扩散到琼脂中。

拉氧头孢药敏纸片产品技术要求tt

拉氧头孢药敏纸片
组成：
纯棉滤纸，含拉氧头孢 30μg/片。

适用范围：本产品采用纸片扩散法（K-B法）体外检测细菌对拉氧头孢药物的敏感性。

1.1 产品规格：20片/瓶。

1.2 主要组成成分：纯棉滤纸，含拉氧头孢30μg/片。

2.1 外观
外观应满足如下要求：
2.1.1包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
2.1.2药敏纸片呈圆形，白色、边缘无缺口，表面平整，无裂痕；
2.2 纸片直径
拉氧头孢药敏纸片的直径应为：6.35mm±0.05mm。

2.3 抑菌环直径
用质控菌株进行纸片扩散法试验，95%的结果（抑菌环直径）应符合该质控菌株可接受范围(大肠杆菌ATCC 25922:28～35mm)。

注：抑菌环直径可接受范围参照CLSI M100 规定。

2.4 批内重复性
用同一批号拉氧头孢药敏纸片对质控菌株进行抑菌能力试验检测20个纸片，最大抑菌环与最小抑菌环直径之差不大于2.5mm。

2.5 批间重复性
用3个不同批号的拉氧头孢药敏纸片，对同一质控菌株进行抑菌能力试验，每个批号各检测10个纸片，同一平板上最大抑菌环与最小抑菌环直径之差的平均数不大于4mm。

2.6 稳定性
-20℃～0℃密封贮存。

有效期：12个月。

到失效期的药敏纸片进行抑菌圈直径检测，结果应符合2.3的要求。

药敏试验判定标准

测淋病奈瑟菌≤3031-37≥38
测链球菌≤1819-22≥23
多西环素（强力霉素）30≤1213-15≥16
二甲胺四环素（美满霉素）30≤1415-18≥19
喹诺酮类
环丙沙星5≤1516-20≥21
测嗜血杆菌----≥21
测淋病奈瑟菌----≥36
依诺沙星（氟啶酸）10≤1415-17≥18
测淋病奈瑟菌----≥32
替卡西林75
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测其他革兰氏阴性杆菌≤1415-19≥20
β-内酰胺类/β-内酰酶抑制剂
阿莫西林/克拉维酸20/10
测葡萄球菌≤19--≥20
测其他菌≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤19--≥20
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
氨基糖疳类
丁胺卡那（阿米卡星）30≤1415-16≥17
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
庆大霉素
测肠球菌高水平耐药12067-9≥10
测其他细菌10≤1213-14≥15
卡那霉素30≤1314-17≥18
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢克肟（世福素）5≤1516-18≥19
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢美唑30≤1213-15≥16
头孢哌酮（先锋必）75≤1516-20≥21
头孢噻肟（凯福隆）30≤1415-22≥23
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31

常见药物对常见细菌药敏折点的参考值

DB34/T 3399—20199附录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片药物含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标

大环内酯类
阿齐霉素15≤1314-17≥18
测嗜血杆菌----≥12
测肺炎链球菌以外的
其他链球菌≤1314-17≥18
克拉霉素15≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤1011-12≥13
测链球菌≤1617-20≥21
红霉素15≤1314-22≥23
测链球菌≤1516-20≥21
麦迪霉素30≤1314-17≥18
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
测葡萄球菌≤17--≥18
氨苄西林/舒巴坦（优立新）10/10
测革兰氏阴性肠道菌
和葡萄球菌≤1112-14≥15
测嗜血杆菌≤19--≥20
替卡西林/克拉维酸（特美汀）75/10
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥38
头孢三嗪（菌必治）≤1314-20≥21
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
测肺炎链球菌
以外的其他链球菌≤2525-26≥27
头孢肤肟酯（口服）30≤1415-22≥23
头孢肤肟（西力欣）30≤1415-22≥23
测嗜血杆菌≤1617-19≥20
哌拉西林钠（氧哌嗪）100
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
替卡西林75
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测其他革兰氏阴性杆菌≤1415-19≥20
β-内酰胺类/β-内酰酶抑制剂
阿莫西林/克拉维酸20/10
测葡萄球菌≤19--≥20
测其他菌≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤19--≥20

临床微生物检验常用药敏抑菌圈直径解释标准

肠杆菌科细菌的抑菌圈直径解释标准
注意
1、ESBL阳性的大肠埃希菌、克雷伯菌属，报告青霉素类、头胞菌素类、氨曲南耐药
2、沙门菌和志贺菌不检测1、2代头孢、氨基糖苷类（假敏感）；常规仅测氨苄西林、一种喹诺酮和复方新诺明；肠外分离的沙门菌加氯霉素和一种三代头孢。

3、肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属，间隔3～4天需重复β-内酰胺类药敏试验
4、CSF分离菌应做头孢噻肟或头孢三嗪
5、尿道分离菌不做氯霉素
肺炎链球菌和其它链球菌的抑菌圈直径解释标准
肠球菌的抑菌圈直径解释标准
法检测，如阳性提示对青霉素、酰氨基、羧基和脲基青霉素耐药。

青霉素敏感，预示不产β-内酰胺酶的肠球菌对青霉素类及其加酶抑制剂的复合制剂敏感；氨苄西林敏感，预示对氨苄西林、阿莫西林及其加酶抑制剂的复合制剂敏感。

▲金葡菌：青霉素耐药或β-内酰胺酶阳性表示氨苄西林、阿莫西林、阿洛西林、羧苄西林、美洛西林、哌拉西林、替卡西林耐药
△耐苯唑西林的葡萄球菌(MRS)，对目前所有的β-内酰胺抗生素均耐药
○万古霉素的抑菌圈直径≤14mm,需进行MIC试验
注意：喹诺酮敏感株，在治疗后3-4天需重复测试药敏。

测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)

测定几种抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）实验目的：通过采用常量稀释法, 检测几种抗菌药物对A8、A9、D5菌株的最小抑菌浓度( MIC) , 对临床诊断用药有指导作用。

【试剂与器材】1.试剂⑴主要仪器设备：三角烧瓶、高压灭菌器、内径90mm平皿、试管、0.5麦氏标准比浊管、天平、接种环、吸头、微量加样器、胶布、分光光度计、酒精灯等。

⑵试验药品：培养基基础粉（酸水解酪蛋白/酸水解酪素、牛肉浸膏粉、淀粉、琼脂）、纯水（蒸馏水）、电炉、牛皮纸、线、抗菌药物、无菌生理盐水、蒸馏水、pH6.0 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液。

⑶试验菌株：A8、A9、D5菌株、标准株大肠杆菌。

在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列（对倍）稀释后定量接种待检菌，35℃孵育一定时间后，观察抑制待检菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即为该药物对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）。

【试验方法】肉汤稀释法试管稀释法（常量稀释法）【原理】用MH肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释，再接种待检菌，定量测定抗菌药物抑制或杀灭待检菌的最低抑菌浓度（MIC）。

【操作步骤】①抗菌药物原液制备：配制抗菌药物原液的溶剂和稀释剂大多采用蒸馏水、pH6.0，0.1mol/L磷酸盐缓冲液等。

抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。

溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。

所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。

公式为：质量（mg）=溶剂（ml）x浓度（μg/mg）/分析效能（μg/ mg）表1 稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法②药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。

表2常用药敏纸片试验方法：1.用记号笔在培养基上标记待检菌名。

2.在已分纯的待检菌培养基上取4个～5个菌落，接种在4ml～5ml水解酪蛋白（MH）肉汤中，置35℃培养4h～6h，链球菌、嗜血杆菌等需用加血的肉汤增菌并孵育过夜。

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性(清晰整齐)

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性1 实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。

该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。

通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。

并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC 愈小，抑菌圈直径愈大。

2 实验材料2.1 菌液江山大农庄拉稀的猪仔肠道黏膜物中提取的大肠杆菌。

2.2药品链霉素、四环素、多粘菌素B、万古霉素、庆大霉素、红霉素、氨苄青霉素、新霉素、利福平、青霉素、菌必治、羧苄青霉素。

3 实验步骤3.1药敏纸片的准备纸片内抗菌药物含量抗生素纸片浓度U/μg/片抗生素纸片浓度U/μg /片抗生素纸片浓度U/μg /片氨苄青霉素10μg 链霉素10μg 万古霉素30μg 羧苄青霉素100μg 新霉素30μg 多粘菌素B 300U头孢菌素类30μg 庆大霉素10μg 四环素类30μg菌必治30μg 利福平5μg 红霉素15μg3.2细菌的制备从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。

为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。

因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。

3.3 接种平板制备好的接种菌液必须在15min内使用。

临床微生物学检验之药敏

页眉内容临床微生物学检验一、纸片扩散法又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。

（一）实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。

（二）培养基和抗菌药物纸片1、抗菌药物纸片选择直径为6.35mm，吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐片加样或侵泡方法使每片含药量达规定所示。

含药纸片密封贮存2~8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。

使用前将贮存容器移至室温平衡1~2小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。

2、培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）培养基是CLSI采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基，pH为7.2~7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。

琼脂厚度为4mm。

配置琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃温箱孵育15分钟，使其表面干燥。

（三）实验方法实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用0.5麦氏比浊管标准的菌液浓度，校正浓度后的菌液应在15分钟内接种完毕。

操作步骤如下：1、接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板內缘涂抹一周。

2、贴抗菌药物纸片平板置室温下干燥3~5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距》24mm，纸片距平板內缘》15mm，纸片贴上后不可再移动，因为抗菌药物会自动扩散到培养基内。