炎调方干预脓毒症大鼠模型的效果研究

炎调方干预脓毒症大鼠模型的效果研究

发表时间：2019-09-23T16:25:49.893Z 来源：《医师在线》2019年5月9期作者：张燕婷1 朱佳琳1 李淑芳2 熊旭东2 [导读] 目的探讨炎调方对脓毒症大鼠的作用机制。张燕婷1 朱佳琳1 李淑芳2 熊旭东2通讯作者（1上海三林康德社区卫生服务中心，中医科；2上海中医药大学附属曙光医院，感染科；上海200000）摘要：目的探讨炎调方对脓毒症大鼠的作用机制。方法将SD雄性88只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、炎调方组、对照组(炎调方减去大黄、芒硝)，采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型。术后分别于12h、24h、36h致死大鼠，测定血清IL-1β水平及观察各组肺病理切片的变化。结果血清方面：假手术组与正常组相比，血清IL-1β水平无统计学意义(P>0.05)；与正常组相比，12h模型组的血清IL-1β水平与24h的血清IL-1β水平比较升高 (P<0.05)；造模后12h炎调方组血清IL-1β水平和模型组对比，有显著降低(P<0.01)，差异在24h 无统计学意义(P>0.05)；对照组(炎调方去掉大黄和芒硝)与模型组对比，12h和24 h均无统计学意义(P>0．05)；炎调方组血清IL-1β水平和对照组对比在12 h水平显著降低(P<0.01)，24 h但是未见明显差异(P>0.05)；肺病理切片方面：正常对照组及假手术组肺组织未见明显病理

学损伤性变化。CLP术后12h,模型组的肺组织轻微充血，CLP手术后24h，与12h对比，模型组肺组织损害更甚，充血更明显，减方对照组肺组织病变情况较模型组无明显改变。炎调方组和模型组相比，病变范围略小。结论炎调方能明显下调脓毒症大鼠血清IL-1β水平，并且能减轻脓毒症大鼠肺组织损伤。

关键词:炎调方脓毒症肺病理切片脓毒症（sepsis）是指由感染导致的全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS），进一步发展可以成急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和脓毒症休克（septic shock），甚至可导致多脏器功能障碍综合征（MODS）[1]。严重的脓毒症患者和脓毒性休克目前仍然是作为ICU内患者死亡的主要原因，其病死率达2８％~５０％。脓毒症一直以来都作为危重病、急救医学领域临床和基础科研的难点和热点 [2]。本研究是通过经典的盲肠结扎穿孔(CLP)术制作脓毒症大鼠模型，以通腑活血法治疗脓毒症，通过检测大鼠部分炎症介质变化和肺组织的变化及观察大鼠的死亡情况，进一步探讨并丰富炎调方对脓毒症干预的效果研究，为诊疗脓毒症疾病的发展提供研究证据。

1 实验材料

1.1动物来源与分组 88只雄性SD大鼠，购自上海中医药大学的实验动物中心，购回后所有大鼠均作适应性饲养一周后随机分为正常组、假手术组、模型组、炎调方组、对照组（炎调方减去大黄和芒硝）。

1.2 药物炎调方组：玄参l5g，当归15g，生大黄10g(后下)，芒硝10g(冲)，桃仁10g，赤芍15g。对照组：玄参l5g，当归15g，桃仁10g，赤芍15g。中药均由上海曙光西院中药房提供。按常规的煎煮方法来煎煮，最后将芒硝充分溶解于药液中，将药液浓缩为含生药1.0 g ／ml，放入4℃冰箱备用。对照组（炎调方减去大黄和芒硝）煎煮方法同前，药液被浓缩为含生药1.0g／mL，保存备用于4℃冰箱。

1.3 仪器 Multiskan MK3 酶标仪（赛默尔上海世飞仪器厂）；501C超级恒温水域槽（上海精宏实验设备公司）；台式离心机(microfuge lite)(Beckman 公司)；OLYMPLUS BH2 显微镜（PHILIP）；石蜡全自动切片机(德国CUT6062切片机)；低温冰箱（-70℃）(Forma scientific公司)。

2 方法

2.1 脓毒症模型的制备

参照相关文献[3-5]，采用盲肠结扎穿孔(cecal ligationand puncture，CLP) 法制造脓毒症大鼠模型，实验鼠术前禁食12小时，腹腔注射2﹪的戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，安尔碘消毒皮肤，沿中下腹做大约1.5cm的切口，提出盲肠，用4号线把盲肠根部结扎，将18号针把盲肠穿通3次后将肠还纳于腹腔，并逐层缝合皮肤。术后注射生理盐水（30mg/kg）于皮下抗休克。待麻醉清醒后可自由活动、喝水、进食。假手术组仅仅切开腹腔并翻动肠道，不去结扎穿刺，剩下的操作同模型组。

2.2 分组按随机方法将实验大鼠分成5个组，正常组8只，麻醉并腹主动脉取血和肺部组织后处死；假手术组8只，麻醉后开腹翻动肠道，关闭腹腔，12h后麻醉并腹主动脉取血和肺部组织后处死；模型组24只，CLP术后12h、24h、36h分别麻醉然后腹主动脉取血和肺部组织后处死，每个组各8只；炎调方组，将炎调方于术前灌胃（9.9g/kg），每天一次，连续3天，灌胃3次后2h予以造模，CLP术后各时间点分别麻醉并腹主动脉取血和取肺部组织后处死，每个组各8只；对照组（炎调方减去大黄和芒硝）24只，该方造模前灌胃（9.9g/kg），每天一次，连续3天，灌胃三次后2h予以CLP造模，术后各时间点分别麻醉和腹主动脉取血致死，每组各8只。

2.3 标本采集与检测

腹腔注射2％戊巴比妥钠(40mg／kg)麻醉大鼠，安尔碘消毒皮肤后逐层开腹，予以腹主动脉抽血．取血后静置30min于室温下，离心（3000转／rain15min）后血清存于4℃冰箱，备测白细胞介素1β（IL-1β），然后快速打开大鼠左右胸腔，取出左右两边肺叶。切取左肺和右肺的病理组织，左肺固定于福尔马林10％液体，酒精极度脱水，石蜡包埋并切片，常规HE染色，在光镜下对比肺组织的变化。右肺迅速置于液氮中备用，然后转入-70℃冰箱冻存。

3 统计学方法统计软件用于SPSS 19.0，计量资料的数据以Mean±SD（x±S)来表示，采用单因素方差分析方法。（P<0.05是差异具有统计学意义）

4 实验结果

4.1 多组大鼠死亡情况观察实验中,实验鼠共死亡19只（其中模型组8只，炎调方组4只，减方炎调方组7只），进入后续实验共69只。正常组、假手术组大鼠活动无异常。模型组的手术之后都有脓毒症严重现象，如手术结束后清醒推迟，呼吸变快明显，腹部向下膨隆，精神不振，少动等现象，剖开腹腔发现脓血和浑浊性恶臭液体，肠管可见肿胀，肺部明显淤血，CLP+减方对照组大鼠与模型组相比未见明显变化。CLP+炎调方组大鼠精神明显好于CLP组，术后表现较轻。取材前，各组大鼠的死亡情况（只）(见表1)。正常组和假手术组全部存活，模型组12h,24h分别死亡2，5只（死亡率8.3％,3

5.7％），炎调方组12h,24h分别死亡1,2只（4.17％,13.3％），减方炎调方组12h, 24h分别死亡1,4只（4.17％,2

6.67％）。

4.2各组大鼠血清IL-1β的比较