盐析
盐析法
图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图
不同蛋白质的溶解度曲线
蛋白质的盐析分布曲线
溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)
盐析影响因素
对β影响 对Ks影响 盐种类 盐浓度 温度 pH值
无机盐种类的影响
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系(25℃) (○)NaCl; (▼)KCl; ()MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■) 柠檬酸三钠
沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类
沉淀法分类
盐析法 有机溶剂沉淀法 选择性变性沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 高价金属离子沉淀法
Байду номын сангаас
蛋白质的理化性质的回顾
活性蛋白 非活性蛋白 理化性质 溶解度 提取方法
2. 盐析沉淀
盐析沉淀步骤 加沉淀剂方式 陈化条件 脱盐处理
盐析机理示意图
温度的影响
pH对β的影响
蛋白质起始浓度的影响
二次盐析
盐析操作
3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原:胰蛋白酶原的pI=8.9,可 先于pH 3.0左右进行等电点沉淀,除去共存的许多酸性蛋白 质(pI=3.O)。工业生产胰岛素(pI=5.3)时,先调pH至8.0 除去碱性蛋白质,再调pH至3.0除去酸性蛋白质(同时加入一 定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取:发酵液调pH 4.0后出现含碱 性磷酸酯酶的沉淀物,离心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解,加入20~40%饱和度的硫 酸铵分级,离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀,即得 较纯的碱性磷酸酯酶。
盐析法的原理和操作步骤
盐析法的原理和操作步骤
盐析法是一种常用的分离和纯化离子的方法,其原理是利用溶液中的电解质满足不同反应条件时,产生不溶于溶液的离子或分子的特性,通过沉淀的形式将目标物质从溶液中分离出来。
操作步骤如下:
1. 准备样品溶液:将含有目标物质的溶液准备成一定浓度,如果需要调整pH 值,可以添加与之相应的酸或碱。
2. 选择沉淀剂:根据溶液中目标物质的离子性质,选择合适的沉淀剂,使其与目标物质发生反应生成不溶于溶液的沉淀物。
3. 沉淀反应:将沉淀剂逐滴加入样品溶液中,并充分搅拌,直到溶液中出现明显的沉淀形成。
4. 沉淀分离:使用过滤纸或者离心机将溶液中的沉淀物与溶液分离,可以通过重力过滤或离心分离来实现。
5. 洗涤沉淀:用少量的清洗溶液多次洗涤沉淀物,以去除残留的杂质。
6. 干燥收集:将洗涤后的沉淀物放置于干燥器中或加热干燥,直至得到干燥的
沉淀物。
盐析法常用盐
盐析法常用盐
盐析法是一种化学分离方法,通常使用一些特定的盐来进行分析。
以下是一些常用的盐析法中常见的盐:
1.氯化银(AgCl):
用途:常用于检测银离子的存在。
原理:当银离子与氯离子结合形成沉淀,即氯化银。
2.氯化铅(PbCl2):
用途:用于检测铅离子。
原理:铅离子与氯离子结合形成沉淀,即氯化铅。
3.氢氧化铁(Fe(OH)3):
用途:常用于分析铁离子的存在。
原理:铁离子与氢氧根离子结合形成沉淀,即氢氧化铁。
4.硫酸铜(CuSO4):
用途:常用于检测铜离子。
原理:铜离子与硫酸根离子结合形成沉淀,即硫酸铜。
5.氢氧化铜(Cu(OH)2):
用途:用于检测铜离子。
原理:铜离子与氢氧根离子结合形成沉淀,即氢氧化铜。
这些盐通常在盐析法中被引入,通过与待测离子反应产生沉淀,从而实现对离子的分离和检测。
具体使用哪种盐取决于待测物质的性质和分析的目的。
在实际分析中,还可以根据需要选择其他盐类,以满足特定实验条件。
胶体的“盐析”
胶体的“盐析”:加盐而使胶粒的溶解度降低,形成沉底析出的过程,是胶体的聚沉现象的一种如向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用就叫做盐析。
这样析出的蛋白质仍可以溶解在水中,而不影响原来蛋白质的性质。
因此,盐析是一个可逆的过程。
利用这个性质,可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。
从分子的角度上看,可以说改变了溶解度。
另一说是同时有温度的变化下面是百度百科的“盐析”:1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。
如:加浓(NH4)2SO4使蛋白质凝聚的过程;在乙酸的酯化反应中加入饱和碳酸钠溶液,降低乙酸乙酯溶解度,使其分层现象更明显的过程。
2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。
2.(2)向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。
3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热,反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。
往锅内加入食盐颗粒,搅拌、静置,使高级脂肪酸钠与甘油、水分离,浮在液面。
(该反应用以制肥皂)盐析法的原理蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目,亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
蛋白质溶液中加入中性盐后,由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质,致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。
同时,中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变,蛋白质表面的电荷大量被中和,更加导致蛋白质溶解度降低,之蛋白质分子之间聚集而沉淀。
由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同,不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同,从而使之从其他蛋白中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。
盐析作用吸附
盐析作用吸附一、引言盐析作用是指在溶液中,当盐的浓度超过一定值时,会发生沉淀反应的现象。
这种现象在化学实验中经常出现,也广泛应用于工业和环境领域。
二、盐析作用的原理1. 盐析作用的定义盐析作用是指在溶液中,当溶液中某种离子的浓度达到饱和时,会发生沉淀反应的现象。
这种反应是由于离子之间相互作用力的改变而引起的。
2. 盐析作用的影响因素盐析作用受多种因素影响,包括温度、pH值、离子浓度等。
其中离子浓度是最重要的因素之一。
3. 盐析作用的机理当溶液中某种离子浓度达到饱和时,该离子开始聚集形成微小晶核。
这些晶核会不断增大,直到足够大以至于可以沉积到容器底部形成固体沉淀。
三、盐析作用在实验中的应用1. 分离纯化蛋白质利用盐析作用可以分离纯化蛋白质。
在蛋白质溶液中加入适量的盐,可以使蛋白质分子聚集形成团簇,从而沉淀下来。
2. 制备纯净盐利用盐析作用可以制备纯净的盐。
将海水等含有杂质的溶液加热浓缩,使盐的浓度达到一定值后,就会发生盐析作用,从而将杂质沉淀下来。
3. 测定离子浓度通过观察溶液中是否出现沉淀反应,可以推断出离子浓度是否达到饱和。
这种方法被广泛应用于环境监测和水质检测等领域。
四、盐析作用在工业中的应用1. 水处理利用盐析作用可以去除水中的杂质和重金属离子。
这种方法被广泛应用于工业废水处理和饮用水净化等领域。
2. 纺织品染色在纺织品染色过程中,利用盐析作用可以使染料分子聚集形成团簇,并与纤维表面结合,从而实现染色效果。
3. 药物制剂在药物制剂中,盐析作用可以用于分离纯化药物分子。
将药物分子溶于适量的盐水中,可以使药物分子聚集形成团簇,从而沉淀下来。
五、盐析作用在环境领域的应用1. 油污处理利用盐析作用可以去除油污中的杂质和重金属离子。
这种方法被广泛应用于海洋环境治理和油田开采等领域。
2. 大气污染治理利用盐析作用可以去除大气中的有害气体。
将适量的盐水喷洒在空气中,可以使有害气体聚集形成团簇,并沉降到地面上。
现实生活中盐析的例子
现实生活中盐析的例子
1. 咱平时做豆腐的时候,把豆浆煮开,然后点入卤水,那蛋白质不就慢慢析出来变成豆腐啦,这就是盐析呀!你说神奇不神奇。
2. 还有啊,你知道腌咸鸭蛋吧?把鸭蛋放在盐水里,一段时间后,里面的蛋白质就发生盐析了,蛋清和蛋黄的状态就变了呢。
3. 咱洗羊毛的时候,用一些特定的盐溶液,就能让羊毛上的杂质通过盐析分离出来,这不就把羊毛洗得干干净净啦。
4. 你想想,做肉松的时候,不也是通过加盐让肉里的一些物质盐析出来,然后才能做出美味的肉松呀!
5. 制作奶酪的过程中,不也利用盐析吗?真的很有意思呀,就这么神奇地发生了变化。
6. 在提取一些生物活性物质的时候,也会用到盐析呢,就好像变魔术一样,把需要的东西析出来。
7. 染布的时候也有盐析的身影呢,加了盐能让染料更好地固定在布上,这也是盐析的功劳呀!
8. 污水治理中也会用到盐析呀,能把一些污染物分离出来,让水变得干净一些,多厉害呀。
9. 榨果汁的时候加点盐,能让果汁更澄清,这里面也有盐析在起作用呢。
盐析在我们生活中真是无处不在呀,它虽然不显眼,却默默地发挥着重要的作用呢!。
盐析的原理
盐析的原理
盐析是一种利用离子间吸引力进行沉淀实验的方法。
其原理是通过加入一种能够与溶液中存在的离子反应生成固体沉淀物的反应物,从而使溶液中的离子形成可见的固体沉淀。
该方法常用于检测和分离溶液中的离子。
盐析方法的主要步骤如下:
1. 首先,将待检测的溶液加入到一个容器中。
2. 接下来,选择一种能与溶液中的离子反应生成固体沉淀物的反应物,通常是一种盐酸或硫酸盐。
3. 将反应物加入到溶液中,并充分搅拌或搅动溶液,以促进离子的反应和沉淀物的形成。
4. 当溶液中的离子与反应物反应生成固体沉淀物时,沉淀物会逐渐聚集并沉淀到溶液的底部。
5. 后续可以通过离心或过滤等方法将沉淀物与溶液分离。
可以使用化学方法或仪器进行沉淀物的进一步分析和鉴定。
盐析方法可以用于检测和分离不同离子,例如钠离子、钾离子、铜离子等。
其基本原理是根据离子之间的反应性差异进行选择性沉淀。
由于不同离子的反应性不同,盐析方法可以通过选择合适的反应物,将目标离子从溶液中沉淀出来,并通过沉淀物的形貌、颜色等特征进行识别和检测。
总之,盐析方法通过利用离子之间的反应生成固体沉淀物的特性,实现了对溶液中离子的检测和分离。
这种方法简单、快捷,并且可以用于各种离子的分析和鉴定。
盐析透析的原理
盐析透析的原理盐析透析是一种分离混合溶液中不同分子的方法。
其原理基于溶质分子在溶液中的不同亲水性或亲油性,通过半透膜的选择性渗透性来分离。
盐析透析的原理可以从以下几个方面来阐述:1. 渗透力:盐析透析的基本原理是利用溶液中的离子或分子的渗透力差异实现分离。
在溶液中,溶质分子(如蛋白质)和溶剂分子(如水)之间会发生各种相互作用,其中包括静电相互作用、范德华力、氢键等。
这些相互作用导致溶质分子与水分子之间的结合力不同,从而产生了不同的溶液渗透力。
在盐析透析中,通过改变溶液中盐的浓度,调节了离子或分子与水分子之间的结合力,使得溶质与溶剂之间的作用力发生变化,进而产生了渗透压差。
2. 半透膜:盐析透析通常需要使用一个半透膜来实现分离。
半透膜是由合成材料或生物材料制成的,具有特定的孔径和渗透性。
这种半透膜可以选择性地允许某些分子通过,而阻碍其他分子的通过。
半透膜的选择性渗透性主要基于两个因素:孔径大小和亲水性。
一般来说,孔径较小的半透膜可以阻挡较大的分子通过,而孔径较大的半透膜则允许较大的分子通过。
同时,由于半透膜表面的亲水性与溶质分子的亲水性和溶液渗透力有关,因此选择合适的半透膜可以实现对不同分子的有效分离。
3. 盐析作用与溶液调节:在盐析透析中,通过改变溶液中盐的浓度来引起盐析作用,进而实现溶质的分离。
当溶液中加入足够多的盐时,离子和水分子之间的相互作用将被破坏,使得水分子与溶质分子之间的结合力减弱。
这种结合力减弱导致了溶液的渗透力差异,从而使得不同分子可以通过半透膜的选择性渗透。
同时,通过适当调节盐的浓度,还可以改变溶液的pH值和离子强度,进一步影响溶质分子与溶剂之间的相互作用,从而实现对溶质的选择性分离。
盐析透析在生物化学、分离纯化等领域得到了广泛的应用。
它可以用于分离蛋白质、核酸、多肽等生物大分子,也可以用于去除溶液中的盐和其他杂质。
在实际应用中,盐析透析通常需要结合其他技术来进行,如电泳、层析技术等。
蛋白质的盐析原理
蛋白质的盐析原理蛋白质的盐析原理是指通过向蛋白质溶液中加入适当的盐类,使得溶液中的盐浓度超过蛋白质溶解度,从而使蛋白质发生沉淀析出的过程。
盐析是一种常用的蛋白质纯化方法,其原理基于蛋白质溶解度的变化。
当溶液中的盐浓度增加时,盐的离子将与蛋白质的水合层相互作用,导致蛋白质的水合层被破坏,使蛋白质失去溶解的能力,从而发生沉淀析出。
蛋白质的溶解度受到多种因素的影响,包括溶剂的种类、溶液的p H值、温度和盐浓度等。
在蛋白质溶液中加入合适的盐类,可改变溶液中的离子浓度,并影响蛋白质的溶解度。
通常情况下,当溶液中加入足够多的盐类后,蛋白质溶解度会降低,使其发生沉淀析出。
蛋白质的盐析过程受到溶剂的影响较大。
蛋白质溶解度通常受溶剂的极性和离子强度的影响。
在水溶液中,离子和极性溶剂分子互相作用,形成水合层,并稳定蛋白质分子的结构,使其保持溶解状态。
而加入盐类后,盐的离子会与水分子或溶剂分子形成水合层,取代蛋白质分子周围的水分子,导致蛋白质的水合层破坏,从而使蛋白质发生沉淀析出。
盐析过程的关键是选择合适的盐类和浓度。
一般来说,常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。
选择合适的盐类和浓度取决于目标蛋白质的特性和希望得到的纯度。
常见的策略是先选择低浓度的盐溶液,使蛋白质末能发生沉淀。
然后逐渐增加盐浓度,直到蛋白质开始发生沉淀为止。
通过逐渐增加盐浓度,可以实现分级纯化,分离不同的蛋白质组分。
除了盐类的选择和浓度的控制,溶液的p H值和温度也会影响盐析的效果。
溶液的p H值会改变蛋白质的电荷状态,从而影响其与盐的相互作用。
温度的变化会影响水合层的稳定性,进而影响蛋白质的溶解度和盐析效果。
盐析的优点包括简单、快速、操作方便和可扩展性强。
然而,它仅适用于具有明显的溶解度差异的蛋白质。
在选择盐及控制盐浓度时需要根据蛋白质的特性进行优化。
总之,蛋白质的盐析通过改变溶液中的盐浓度,在使得蛋白质溶解度降低的条件下,使蛋白质发生沉淀析出。
盐析
由于盐是强电解质,解离作用强,盐的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离,使蛋白质带电荷减少,更容易聚 集析出。
剂
剂
在中性配合萃取和离子缔合萃取体系中,使用盐析剂可提高被萃取组分的分配系数。盐析剂是一种不被萃取、 不与被萃物结合,但与被萃物有相同的阴离子从而使分配系数显著提高的无机化合物。通常盐析剂的阳离子在盐 析过程中,因在水溶液中有强烈的水合作用,能吸引大量自由水分子,降低水溶液中自由水分子浓度,可相对增 加被萃物在水相中的浓度,有利于被萃物萃入有机相。一般来说,盐析剂中的金属阳离子的电荷数越大,盐析作 用越强。在阳离子的电荷数相同的情况下,盐析作用与阳离子的半径成反比,这是因为价态高半径小的阳离子的 水化能力较强,所以使自由水分子减少的作用较大。一般金属离子的盐析效应按下列次序递减:
应用
应用
可以把发黄的白衬衫放在5%食盐水中浸泡1小时,再慢慢搓干净;或将衣服浸于10%的浓盐水中,泡1-2小时, 取出用清水漂洗干净。衣领部位的污渍可以单独加一些细盐粒轻轻搓洗效果更佳。应当注意的是衣服应当用凉水 浸泡,切勿使用热水。
谢谢观看
Al3+>Fe3+>Mg2+>Ca2+>Li+>Na+>NH4+>K+
盐析剂的选择除应考虑盐析作用外,还要考虑不影响下一步的分离和提纯、价格便宜、来源充足、水中溶解 度大等因素。通常以NH4NO3的应用最为普遍。
优点
优点
不会引起蛋白质变性,经透析去盐后,能得到保持生物活性的纯化蛋白质。
注意事项
结晶原理
ห้องสมุดไป่ตู้晶原理
盐析结晶是指在盐溶液体系中,加入某种电解质盐析剂,这种加入的盐析剂,其离子的水合作用比原溶液中 其它盐较强,它使溶液中自由水分子数减小,从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度,使欲结晶物质在 溶液中结晶析出,这就是盐析结晶。
盐析法原理
盐析法原理
盐析法是一种常用的分离和提纯生物大分子的方法,它利用盐的溶解度随温度
变化的特性来实现对生物大分子的分离。
盐析法的原理基于生物大分子在高盐浓度下会发生沉淀,而在低盐浓度下会重新溶解的特性。
通过控制盐浓度和温度的变化,可以实现对生物大分子的有效分离和提纯。
首先,盐析法的原理基于生物大分子与盐之间的相互作用。
在高盐浓度下,盐
会与生物大分子发生离子间相互作用,使得生物大分子发生聚集并沉淀。
而在低盐浓度下,这种相互作用减弱,生物大分子重新溶解于溶液中。
因此,通过控制盐浓度的变化,可以实现对生物大分子的分离和提纯。
其次,盐析法的原理还与温度的变化有关。
随着温度的升高,盐的溶解度会增加,从而使盐溶液中的盐浓度降低。
在这种情况下,生物大分子会重新溶解于溶液中。
而在温度降低的情况下,盐的溶解度减小,盐溶液中的盐浓度增加,从而导致生物大分子发生沉淀。
因此,通过控制温度的变化,也可以实现对生物大分子的分离和提纯。
综上所述,盐析法的原理是基于盐和生物大分子之间的相互作用,以及盐溶液
中盐浓度随温度变化的特性。
通过合理控制盐浓度和温度的变化,可以实现对生物大分子的分离和提纯。
盐析法在生物大分子的分离和提纯过程中具有重要的应用价值,为生物大分子研究提供了重要的技术手段。
盐溶和盐析名词解释
盐溶和盐析名词解释盐溶和盐析是化学中常用的两种实验操作,它们主要用于分离混合物中的溶质和溶剂。
本文将围绕着“盐溶”和“盐析”这两个名词,进行详细的解释和探讨。
一、盐溶盐溶是指将一种或多种有机物或无机物加入到水或其他溶剂中形成的溶液,其特点是不结晶产生透明的溶液。
在化学实验中,盐溶一般用于分离混合物中的溶质。
因为当溶液中的溶质与溶剂结合时会产生离子,离子之间的相互作用力使得分子发生分解,从而导致各种物理与化学变化。
盐溶可以分为两类:无机盐溶和有机盐溶。
无机盐溶指的是通过将金属离子的化合物放入溶剂中,使其形成离子的溶液,例如二氧化硅盐溶、氯化钠盐溶、氢氧化钠盐溶等;有机盐溶指的是将含有羧酸或胺基的有机物分散到水或其他有机溶剂中形成的溶液,例如乙酸盐溶、丙酮盐溶等。
盐溶也可以用于检测有机物和无机物的性质与化学反应。
对于有机物,盐溶可以作为反应液中的催化剂,帮助加快反应的速度;而对于无机物,盐溶则可以用于检测金属离子的存在和数量。
二、盐析盐析(也称为萃取)是将混合物中的溶质用反应溶剂提取出来并形成沉淀的过程。
盐析是一种重要的分离技术,可以在不破坏混合物中的物质得到分离的效果。
在实际应用中,盐析常用于药物分离、化学制剂、食品加工及纯化等方面。
盐析的原理是利用化学反应的原理,在反应过程中通过充分搅拌和沉淀沉淀物使其从溶液中分离出来。
当提取溶剂与混合物中的溶质反应时,会生成物质的沉淀。
这种反应通常通过加入沉淀剂实现,例如盐析中常用的盐酸、氯化铵等。
盐析可以分为两种类型:酸盐析和碱盐析。
酸盐析适用于物质中有含电的阴离子,可以将它们从溶液中分离出来,并结合成固态物质。
碱盐析适用于物质中有含电的阳离子,可以将它们从溶液中分离出来,并结合成固态物质。
盐析与盐溶的区别盐析与盐溶虽然都是实现溶液中物质分离的技术,但它们的实现原理和应用范围有很大区别:1. 盐析依赖化学反应,而盐溶主要是靠物质的溶解来实现。
2. 盐析能够分离离子物质,而盐溶只能分离分子物质。
名词解释盐析
名词解释盐析嘿,你知道盐析不?这可是个超神奇的现象呢!咱先来说说啥是盐析。
就好比你在做一锅汤,本来汤里的各种东西都好好地混在一起。
可当你往汤里加了一把盐,哇哦,神奇的事情发生了!一些东西就开始慢慢沉淀下来。
盐析呢,差不多就是这个道理。
在某些溶液里,当加入一定量的盐之后,原本溶解在里面的物质就会因为盐的作用而分离出来。
这难道不奇妙吗?你想想看,这就像一场魔法表演。
溶液就像是一个大舞台,各种物质在上面欢快地跳舞。
可盐一出现,就像是施了一道魔法咒语,让一部分物质不得不停下舞步,乖乖地沉淀下来。
这画面感是不是超强?盐析在生活中其实也有不少用处呢。
比如说在蛋白质的分离纯化中,盐析可是个得力的小帮手。
蛋白质就像是一群调皮的小精灵,在溶液里跑来跑去。
但当我们加入合适的盐,这些小精灵就会被“抓住”,沉淀下来。
这样我们就能把它们从复杂的混合物中分离出来啦。
这多厉害呀!难道你不想知道科学家们是怎么巧妙地利用盐析来研究和生产的吗?还有啊,盐析也可以用在一些化工生产过程中。
就好像是一位聪明的工匠,知道什么时候该用盐这个神奇的工具来打造出自己想要的东西。
通过盐析,可以把一些有用的物质提取出来,让生产过程更加高效和纯净。
这可不是一般的厉害哦!盐析的原理其实也不难理解。
盐加入溶液后,会改变溶液的离子强度和酸碱度等性质。
这就像是给溶液来了一场小小的“变革”。
那些对盐比较敏感的物质,就会在这种“变革”中受到影响,从而发生沉淀。
就好比有些人在环境变化的时候会做出不同的反应一样,这些物质也会根据溶液的变化而改变自己的状态。
而且,不同的物质在盐析中的表现也不一样呢。
有的物质很容易就被盐“抓住”沉淀下来,而有的则比较顽固,需要更多的盐或者特定的条件才会沉淀。
这就像是不同性格的人面对同样的情况会有不同的反应一样。
是不是很有趣呢?盐析也不是随便就能成功的哦。
要掌握好盐的种类、用量和加入的时机等因素。
如果用得不好,可能就达不到想要的效果。
就像做饭一样,调料放得不对,味道就会大打折扣。
盐析的特征
盐析的特征
盐析是由溶解中一种离子的沉淀而形成的物质。
它在生活中处处可见,比如细小的盐析可以在海水的表面形成,也有大的盐析排放在陆地上。
从结构上看,盐析具有一定的复杂性,但它有很多共同的特征,而这些特征正是使它们得以存在的原因。
首先,盐析是由溶解中一种离子的沉淀而形成的,它们是由通过析出而形成的水溶液物质,这种水溶液可以是由生物体产生的,也可以是在环境中形成的,这些离子可以是金属离子,也可以是其它的非金属离子。
其次,盐析是由溶解中的离子沉积而形成的,沉淀现象是由于溶液中某些离子在某种条件下会积累到一起而形成沉淀,当离子在特殊环境中相互作用时,它们会积累起来而形成沉淀,这种环境可以是温度、湿度和气压等条件下。
此外,研究表明,盐析的种类跟组成有关,因此可以分为无机盐析和有机盐析。
其中,无机盐析由无机离子的沉淀而形成,包括金属离子和非金属离子;有机盐析则是由有机物质的沉积形成的,它们的分子结构是由碳原子和氢原子组成的。
最后,盐析的形成是多种因素作用的结果,它们可以是湿度或其它环境因素,而这些因素也会影响盐析的大小、数量以及组成,因此不同的盐析可以具有不同的形状、大小和粒径。
总之,盐析是由某种离子沉淀而形成的,其种类及组成极为复杂,而多种酸碱环境因素也可以影响它们的形成,从而形成具有不同形状
大小的盐析。
盐析法的基本原理及其应用
盐析法的基本原理及其应用1. 盐析法的基本原理盐析法是一种常见的分离和富集技术,其基本原理是利用盐的溶解度随温度变化的特点,将目标物质从溶液中沉淀出来。
通过调节温度,使溶液中的盐溶解度发生变化,从而实现目标物质的分离和提取。
盐析法通常涉及以下几个步骤:1.1 样品制备首先,需要将待分离的样品制备成溶液。
这一步骤可以通过溶解、浸泡或反应等方式完成。
样品的溶解度、反应性质和目标物质的性质等因素将影响样品的制备方法。
1.2 选择适当的盐接下来,需要选择适当的盐进行盐析。
选择盐时,应考虑到盐的溶解度、稳定性和对目标物质的影响。
常用的盐包括硫酸铅、硫酸铜、氯化银等。
1.3 调节溶液温度为了实现目标物质的分离,需要逐渐调节溶液的温度。
随着温度的升高或降低,溶液中的盐的溶解度也会发生相应的变化。
当溶液中的盐溶解度低于其饱和溶解度时,盐将会从溶液中沉淀出来,从而分离目标物质。
1.4 分离和富集目标物质当盐析过程完成后,可以通过滤纸、离心机或其他分离装置将沉淀和溶液分离。
沉淀物可以进一步处理,用于分析、检测或提取目标物质。
2. 盐析法的应用盐析法在化学、生物化学、环境科学等领域有着广泛的应用。
以下是盐析法的常见应用:2.1 蛋白质分离和提取在蛋白质分离和提取中,盐析法是一种常见的技术。
通过调节溶液中的盐浓度和温度,可以将蛋白质从溶液中分离出来,得到纯净的蛋白质样品。
2.2 离子交换盐析法还可以用于离子交换过程中。
通过将样品与具有特定固定相的离子交换树脂接触,然后调节溶液的盐浓度和温度,可以实现离子的分离和富集。
2.3 药物分析盐析法在药物分析中也得到了广泛应用。
通过调节溶液的盐浓度和温度,可以分离出复杂药物中的具体成分,用于药物药效评价、质量控制等方面。
2.4 水处理盐析法在水处理中也起到重要的作用。
通过调节水中盐的浓度和温度,可以将水中的悬浮固体和杂质沉淀下来,从而实现水的净化和处理。
3. 总结盐析法是一种常见的分离和富集技术,通过调节溶液中盐的溶解度随温度变化的特点,实现目标物质的分离和提取。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
盐析主要内容:1.盐析原理2.盐析的优缺点3.盐析实验步骤4.分段盐析5.盐析曲线的制作6.盐析注意事项7.盐析的影响因素8.盐析法应用9.盐析常见问题分析盐析原理一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。
如:加浓(NH 4)2SO 4使蛋白质凝聚的过程。
蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。
同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。
盐析的优缺点1.成本低,不需要特别昂贵的设备。
2.操作简单、安全。
3.不会引起蛋白质变性,经透析去盐后,能得到保持生物活性的纯化蛋白质。
4.效果不理想,通常只是作为初步的分离纯化,还需要结合其它的纯化。
盐析实验步骤蛋白质盐析常用的中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。
其中应用最多的硫酸铵,由下表可以看出:它的优点是温度系数小而溶解度大(20℃时饱和溶液为754克/升;0℃时饱和溶解度为706克/升),在这一溶解度范围内,许多蛋白质和酶都可以盐析出来;另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好,不易引起蛋白质变性。
硫酸铵溶液的pH 常在4.5-5.5之间,当用其他pH 值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节。
表1几种盐在不同温度下的溶解度(克/100毫升水)饱和硫酸铵法1.取x ml 血清加x ml 生理盐水,于搅拌下逐滴加入2xml 饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。
0℃20℃80℃100℃(NH 4)2SO 470.675.495.3103Na 2SO 4 4.918.943.342.2NaH 2PO 41.67.893.81012.4℃,3h以上,使其充分沉淀离心(3000rpm),20min,充上清,以xml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。
3.置4℃3h以上,此时,(NH4)2SO4的饱和度为33%,重复上述第二步过程1~2次。
末次离心后所得沉淀物为蛋白,以0.02%mol/L pH7.4PBS溶解至xml装入透析袋。
4.对PBS充分透析、换液3次,至萘氏试剂测透析外液无黄色,即无NH4+为止。
蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入透析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。
此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短。
5.取透析袋内样品少许作适当倍数稀释后,以751型紫外分光光度计测定蛋白含量。
方法如下:蛋白含量(mg/ml)=(1.45×OD280nm-0.74×OD260nm)×样品稀释度。
注:式中1.45与0.74为常数,nm为波长分段盐析对分离目的蛋白的盐析,最好采用分段盐析。
由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同,沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同,改变盐的浓度与溶液的pH值,可将混合液中的蛋白质分批盐析分开,这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout)。
如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白,饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白在内的全部蛋白质。
1.分段盐析的条件先需要进行小实验探索,如:先进行0%-30%的硫酸铵沉淀,再进行30%-60%的硫酸铵沉淀,最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀。
2.每一段盐析静置之后都将离心取沉淀,透析并检测活性。
通过实验结果可以看出哪一段盐析出来的目的产物最多,相对来说杂质就更少。
3.比如实验中的活性物质主要在60%-80%这段出来,在以后的实验中,就可以首先进行0%-60%的硫酸铵沉淀,这段沉淀物可以抛弃(去处大多数杂质);然后进行60%-80%的硫酸铵沉淀,这段沉淀出来是物质是所需要的目的物质含量比较高的物质,将其收集进行下一步纯化工作。
盐析曲线的制作如果要分离一种新的蛋白质和酶,没有文献数据可以借鉴,则应先确定沉淀该物质的硫酸铵饱和度。
具体操作方法如下:取已定量测定蛋白质或酶的活性与浓度的待分离样品溶液,冷至0℃~5℃,调至该蛋白质稳定的pH值,分6~10次分别加入不同量的硫酸铵,第一次加硫酸铵至蛋白质溶液刚开始出现沉淀时,记下所加硫酸铵的量,这是盐析曲线的起点。
继续加硫酸铵至溶液微微混浊时,静止一段时间,离心得到第一个沉淀级分,然后取上清再加至混浊,离心得到第二个级分,如此连续可得到6~10个级分,按照每次加入硫酸铵的量,查出相应的硫酸铵饱和度。
将每一级分沉淀物分别溶解在一定体积的适宜的pH缓冲液中,测定其蛋白质含量和酶活力。
以每个级分的蛋白质含量和酶活力对硫酸铵饱和度作图,即可得到盐析曲线。
盐析注意事项1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,溶液pH值越接近蛋白的等电点,蛋白质越容易沉淀。
2.盐析一般用的硫酸铵,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平铺放入烤箱内60℃烘干后再称量,这样更准确。
3.在加入盐时应该缓慢均匀,搅拌也要缓慢,越到后来速度应该更注意缓慢,如果出现一些未溶解的盐,应该等其完全溶解后再加盐,以免引起局部的盐浓度过高,导致酶失活。
4.盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。
为了避免盐对酶的影响,一般脱盐处理后再测酶活性。
5.盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理,以免变性,透析较慢,一般可用超滤或者G-25,G-50处理。
6.一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右。
盐析影响因素1.蛋白质的浓度:中性盐沉淀蛋白质时,溶液中蛋白质的实际浓度对分离的效果有较大的影响。
通常高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度即可将其沉淀下来,但若蛋白质浓度过高,则易产生各种蛋白质的共沉淀作用,除杂蛋白的效果会明显下降。
对低浓度的蛋白质,要使用更大的硫酸铵饱和度,但共沉淀作用小,分离纯化效果较好,但回收率会降低。
通常认为比较适中的蛋白质浓度是2.5%~3.0%,相当于25mg/mL~30mg/mL。
2.离子强度:各种蛋白质的沉淀要求不同的离子强度。
3.盐的性质:最有效的盐是多电荷阴离子。
4.p H值:一般说来,蛋白质所带净电荷越多,它的溶解度就越大。
改变pH值可改变蛋白质的带电性质,因而就改变了蛋白质的溶解度。
远离等电点处溶解度大,在等电点处溶解度小,因此用中性盐沉淀蛋白质时,pH值常选在该蛋白质的等电点附近。
5.温度:除对温度敏感的蛋白质在低温(4℃)操作外,一般可在室温中进行。
一般温度低蛋白质溶介度降低。
但有的蛋白质(如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白)在较高的温度(25℃)比0℃时溶解度低,更容易盐析。
蛋白质沉淀后宜在4℃放3小时以上或过夜,以形成较大沉淀而易于分离。
盐析时,分子量较小的蛋白质逐步沉淀下来可能就值得怀疑。
具体的蛋白需要具体的摸索,当然,对肽来说,结论也是一样的。
盐析法应用1.免疫球蛋白和酶提取、分离纯化、浓缩等。
2.中药的提取盐析法是在中草药的水提液中、加入无机盐至一定浓度,或达到饱和状态,可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出,而与水溶性大的杂质分离。
例如三七的水提取液中加硫酸镁至饱和状态,三七皂甙乙即可沉淀析出,自黄藤中提取掌叶防己碱,自三颗针中提取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸按盐析制备。
有些成分如原白头翁素、麻黄碱、苦参碱等水溶性较大,在提取时,亦往往先在水提取液中加入一定量的食盐,再用有机溶剂萃取。
盐析常见问题分析1.硫酸铵沉淀到底能否把蛋白按分子量分开?硫酸氨沉淀的机理其实就是盐析(salt out)。
一般而言蛋白质在溶液里面溶解度和盐浓度有关系。
在低盐浓度下,如果增加盐浓度,会增强蛋白质的溶解,这是因为,盐的离子与蛋白质表面的正负电荷配对,减少了蛋白质电荷表面相互作用的机会。
当盐浓度高到一定程度的时候,过多的盐会跟蛋白质疏水表面争夺水分子,以至于蛋白质疏水表面倾向于相互作用形成聚合物沉淀下来。
相对来说,分子量大的蛋白质量比较容易发生沉淀,但实际上影响因素很多,比如溶液pH,蛋白浓度,有无非蛋白质成分等,而分子量只是众多影响因素之一。
因此,想根据蛋白质分子量的不同利用硫酸氨沉淀将其分开,不是可取的方法。
盐析法是利用抗体与杂质蛋白对盐浓度的敏感程度的差异来进行分离。
实际上就是利用溶解度的差异进行分离。
拿抗体溶液来说,当硫酸铵饱和溶液达到20%时,纤维素蛋白首先析出,当28%-33%大部分优球蛋白析出当33%-50%时球蛋白析出,大于50%其他杂蛋白析出。
从这几种蛋白的析出顺序看,好像与蛋白的分子量有一定的关系,优球蛋白分子量达到上千亿,球蛋白(IgG)十几万,分子量相差太悬殊了,从化学的角度看,对于同数量级别的分子来说,其溶解度与分子量是没有太大关系的。
所以想把不同分子量的蛋白分离开比较费劲。
2.酶在盐析时上清和沉淀中酶活差不多一样高;在与酶等电点相同的缓冲液中透析24hrs 后,酶活基本丧失;还有,对透析后的沉淀用提取液溶解,有不溶物,为什么?缓冲液pH选的对不?沉淀是用提取液溶解吗?酶在盐析时上清和沉淀中酶活差不多一样高,说明盐浓度不够,应增加盐的浓度,使酶大部分沉淀下来,直到上清中检测不到该酶为止。
或者考虑一下过高的盐离子会不会影响酶活测定。
盐浓度越高,对蛋白质活性的影响越大,也会有越多的不溶蛋白质(当然也包括杂蛋白和其他杂质),这是计算收率时需要考虑的。
缓冲液的pH值和体积也会影响蛋白质的溶解度。
酶在等电点最易沉淀,应选离等电点较远的缓冲液进行透析,而且要保证缓冲液的pH值在该酶的稳定pH范围内,这样才不易使酶失活。
盐析沉淀的蛋白质最好立即进行脱盐处理(超滤或者G25),透析好像太慢了,特别是对于酶)。
沉淀用提取液溶解是可行的,但是选的提取液必须要是正确的才行,即能够提出目的酶!酶的透析也可在提取液中进行!3.盐析用盐的Ks值顺序是硫酸钠>硫酸铵,可是又在盐析感胶离子序中写到钠离子>铵离子,这是怎么回事呢?Ks值与两个因素有关,一个是盐的性质,包括盐离子的离子价数和半径;一个是与蛋白质的性质有关,还与温度、pH值有关。
所以感胶系数是单谈离子性质,而Ks就广泛多了。
公式:Ks=lgS/(beta*I),其中S是在离子强度为I时该蛋白的溶解度。
beta是在纯水中该蛋白的溶解度,在一定温度和pH值下是常数。
4.如何使沉淀更加完全?沉淀要想比较完全,那需要在低温下放一段时间,只有这样那些小的沉淀才会很好聚集而上面的完全澄清,此外这也和浓度有关,浓度低些这样的现象更明显,沉淀后放4℃过夜,那沉淀应该更完全了。