化学发光免疫检测PPT演示幻灯片

异鲁米诺发光
原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更 快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯 在缓冲液不稳定、易水解的缺点
delay 2.5s
delay 0.1s
+ NaOH
+ H2O2
激发底物1
激发底物2
发光
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异鲁米诺发光
代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业MAGLUMI 2000/4000
1. 酶促化学发光
酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶HRP和ALP
HRP
辣根过氧化物酶 常用的底物为鲁米诺或其衍生物
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碱性磷酸酶 常用的底物为AMPPD和4-MUP
ALP
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1. 酶促化学发光
鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应
鲁米诺
H2O2 /OH — HRP
化学发光免疫检测
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学习目标
1. 化学发光检测的分类及原理 2. 了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理
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化学发光免疫检测分类
辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（ALP）
01
酶促化学发光
02
吖啶酯发光 异鲁米诺发光
直接化学发光
电化学发光
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罗氏 电化学发光
雅培
化学发光微 粒子
贝克曼
微粒子酶促 化学发光
LIAISON
索灵 磁性微粒子 化学发光
三联吡啶钌 直接发光
吖啶酯衍生 物 直接发光
金刚烷
AMPPD AKP，酶促发 光
异鲁米诺衍 生物ABEI 直接发光
ADVIA Centaur
西门子 固相磁粉化 学发光
吖啶酯,直接 发光
链霉亲和素 －生物素间 接包被
HRP
200T/H
MAGLUMI 4000 ABEI+NaOH、H2O2
IS 1200
HRP
240T/H 120T/H
AutolumiS 2000 ABEI+NaOH、H2O2 220T/H
长光华医 博奥塞斯
EVERESYS A1800 Axceed 260
吖啶酯 鲁米诺衍生物
180T/H 180T/H
2020/5/16 底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3]、三丙胺(TPA)
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电化学发光
代表仪器：罗氏e601、e411
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进口全自动化学发光仪
仪器型号
生产厂家 反应原理 标记物
包被方式 测试速度
cobas® e601 ARCHITECT® Unicel® i 2000 SR DxI800
记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。
吖啶酯
CH3
N+
- HO2
CO
O
CH3 N
O CO O
R R
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CH3 N
O CO O
+ CO2+ 光
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吖啶酯发光
代表仪器：拜耳公司的ACS180 西门子的ADVIA Centaur 雅培的ARCHITECT
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电化学发光
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质 • 特点：①反应在电极进行；
②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
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N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N O
O
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电化学发光反应原理
这一过程可在电极表面周而复始地进行， 产生许多光子，使光信号增强
测试项目数 20 65 95 17 42
34 35
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测试题与讨论
1. 酶促化学发光是发光底物经
的降解作用而
发出光,常用的酶有：
和
。
2. 雅培ARCHITET i2000采用
标记的标记
分子，专利的
衍生物，具有更高的发光效
率以及稳定性。
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170T/H
磁珠包被 200T/H
常规单克隆 磁性微粒子 磁性微粒子
Ag/Ab包被 包被技术
包被技术
400T/H
180T/H
240T/H
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国产全自动化学发光仪
企业 迈瑞 安图 新产业 迈克 威高
仪器型号
发光机制
测试速度
CL-2000i
ALP+AMPPD
240T/H
Autolumo A2000
+N2 + H2O + 光
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1. 酶促化学发光
AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子， 其有2～30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在 15min时其强度达到高峰，15～60min内光强度保持相对稳定
AMPPD
ALP /OH —
OO O CH3
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1. 酶促化学发光
代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图Autolumo A2000
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2. 直接化学发光
不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质
1 反应迅速
2 背景低
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3 信比高 10
吖啶酯化学发光
• 吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见， 特点 • 发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标
光
OHPO4 2—
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反应原理图
1. 酶促化学发光
利用酶对发光底物催化作用而直接发光，
2020/5/16 通过光强度的测定而直接进行定量。
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1. 酶促化学发光
• 特点：激发发光时间长，测试速度慢，因ຫໍສະໝຸດ Baidu酶易受环境温度的影响，试剂的 稳定性不如直接化学发光好。
• 代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS 2、 DXI800