银杏叶总黄酮提取工艺
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［收稿日期］ 2011－ 12－ 22
［基金项目］ 济南市科技局高校院所自主创新计划项目（编号： 201004032）
［通 讯 作 者 ］ 李 峰 （1957－ ），男 ，山 东 安 丘 人 ，教 授 ，博 士 研 究 生 导 师，研究方向：中药质量控制研究，E－ mail：ly0123＠hotmail．com。
水平
1 2 3
表1 溶剂浓度 A
（％） 60 70 80
正交试验考察因素表
料液比 B
提取时间 C （t/h）
提取次数 D
1∶40
1
1
1∶50
2
2
1∶60
3
3
360 nm；进样量：20 μL；用高效液相色谱 法 测 定 ，以 甲醇 － 0．2％磷酸（52∶48，V/V）为流动相，在 360 nm 处 进 行 测 定 ［7］，以 槲 皮 素 的 塔 板 理 论 数 不 少 于 2 500， 测定总黄酮的含量。
第 36 卷 第 5 期 201220年12 9年月9 月
山东中医药大学学报
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM
Vol．36，No．5 第 36 S卷ep第.2051期2
银杏叶总黄酮提取工艺研究
王 心 1，李 峰 2
（1．山东中医药大学 2009 年级硕士研究生，山东 济南 250355； 2．山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）
［摘要］ 目的：筛选银杏叶总黄酮最佳提取工艺，以银杏叶总黄酮的提取率为指标进行研究。 方法：运用正交设
计法，系统考察料液比、乙醇浓度、提取次数和提取时间 4 个因素对银杏叶总黄酮提取工艺的影响，并用高效液相
法 （HPLC）测定银杏叶总黄酮的含量。 结果：以乙醇浓度 80％，料液比 1∶50，提取 1 次，每次提取 1 h 为最佳提取条件。
峰 面 积 （A）
1600000 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000
0
0
0．1
0．2
0．3 0．4
浓 度 （ρ/μg·mL－1）
449
2012 年 9 月
山东中医药大学学报
第 36 卷第 5 期
素 回 归 方 程 为 A＝3×106C－ 98967（r＝0．9993）；异 鼠 李素回归方程为 A＝2×106C－ 52648（r＝0．9996）。 在 0．06～0．36 mg 范围内，槲皮素、山柰素、异鼠李素的 线性关系良好。 见图 1～3。
总黄酮醇苷含量 ＝（槲皮素 ＋ 山柰素 ＋ 异鼠李 素）×2．51 2．3 溶液的制备 2．3．1 银杏叶提取物的制备 将采摘的新鲜银杏叶 自然晾干，粉碎后过 40 目筛。 取银杏叶粉末 10 g 置 于 1 000 mL 圆底烧瓶中，加不同浓度乙醇加热回流 提取，过滤。 滤液浓缩，回收乙醇至无醇味，减压干 燥，即得。 2．3．2 供试品溶液的制备 将干燥后所得的粉末， 精密称取 35 mg，加甲醇 － 25％盐酸（4∶1）的混合溶液 25 mL，至水浴中恒温加热回流 30 min，迅速冷却至 室温，转移至 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2．3．3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素 1．65 mg、 山柰素 1．57 mg、异鼠李素 1．18 mg，置于 50 mL 容量 瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为每 1 mL 中含有 30，30，20 μg 的标准储备液。 2．4 标准曲线的 制备 精密吸取对照品溶液 100， 200，400，500，600 μL 分 别 置 于 编 号 1、2、3、4、5 号 的 1 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 以满 样进量法精密吸取 20 μL 进样，在波长 360 nm 处测 定峰面积。 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得槲 皮 素 回 归 方 程 ：A＝4×106C－ 90933（r＝0．9996）；山 柰
结论：该方法操作简便，结果准确可靠，成本低，毒性小，适用于工业化生产。
［关键词］ 银杏叶；总黄酮；正交设计；高效液相色谱法
［中图分类号］ R284．2
［文献标识码］ A
［文章编号］ 1007－ 659X（ Nhomakorabea012）05－ 0449－ 03
银杏叶（Ginkgo biloba L．）为银杏叶科银杏叶属 植物银杏干燥的叶。 其主要成分为银杏酸、银杏内 酯 和 黄 酮 类 等 化 合 物 ，其 中 总 黄 酮 的 含 量 最 高 ［1－3］。 银杏叶中黄酮类化合物具有保护血管、防止动脉硬 化、扩张毛细血管、活化大脑等功能，用于治疗心绞 痛、冠心病、高血压、支气管等疾病。 此外，在食品工 业上也应用广泛，可用作抗氧化剂、天然添加剂和功 能性食品的原料。 其提取方法常见报道，本实验经 参 考 相 关 文 献 ［4－6］，采 用 乙 醇 为 溶 剂 ，通 过 正 交 设 计 方法，考察提取物中总黄酮的含量，以确定银杏叶的 最佳提取工艺，为含有银杏叶提取物的饲料添加剂 建立相应质量标准提供可靠依据。 1 仪器与试剂 1．1 仪器 旋转蒸发器 RE－ 52AA，SHZ－ D（Ⅲ）循环 水式真空泵，电子天平 FA2004，电热恒温水浴锅，超 声 波 清 洗 器 KQ2200 ， 减 压 干 燥 器 ，HSⅢ－ 日 立 L－ 2000 高效液相色谱仪，抽滤装置，万能粉碎机等。 1．2 试剂 银杏叶，槲皮素、山柰素、异鼠李素标准 品（中国食品药品检定研究院），无水乙醇（分析纯）、 甲醇（色谱纯、分析纯），磷酸水溶液，纯净水。 2 研究方法 2．1 研究因素及方案 参考相关文献研究结果，确 定了影响总黄酮提取率的 4 个考察因素，分别为溶 剂浓度 A、料液比 B、提取时间 C、提取次数 D，正 交试验考察因素见表 1。 考虑各种影响因素，选择 L9（34）的正交试验方案。 2．2 色 谱 及 检 测 条 件 色 谱 柱 ：Agilent ZORBAX SB－ C18；（4．6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇 － 0．2％ 磷 酸 （52/48，V/V）； 流 速 ：1．0 mL·min－1； 检 测 波 长 ：
［基金项目］ 济南市科技局高校院所自主创新计划项目（编号： 201004032）
［通 讯 作 者 ］ 李 峰 （1957－ ），男 ，山 东 安 丘 人 ，教 授 ，博 士 研 究 生 导 师，研究方向：中药质量控制研究，E－ mail：ly0123＠hotmail．com。
水平
1 2 3
表1 溶剂浓度 A
（％） 60 70 80
正交试验考察因素表
料液比 B
提取时间 C （t/h）
提取次数 D
1∶40
1
1
1∶50
2
2
1∶60
3
3
360 nm；进样量：20 μL；用高效液相色谱 法 测 定 ，以 甲醇 － 0．2％磷酸（52∶48，V/V）为流动相，在 360 nm 处 进 行 测 定 ［7］，以 槲 皮 素 的 塔 板 理 论 数 不 少 于 2 500， 测定总黄酮的含量。
第 36 卷 第 5 期 201220年12 9年月9 月
山东中医药大学学报
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM
Vol．36，No．5 第 36 S卷ep第.2051期2
银杏叶总黄酮提取工艺研究
王 心 1，李 峰 2
（1．山东中医药大学 2009 年级硕士研究生，山东 济南 250355； 2．山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）
［摘要］ 目的：筛选银杏叶总黄酮最佳提取工艺，以银杏叶总黄酮的提取率为指标进行研究。 方法：运用正交设
计法，系统考察料液比、乙醇浓度、提取次数和提取时间 4 个因素对银杏叶总黄酮提取工艺的影响，并用高效液相
法 （HPLC）测定银杏叶总黄酮的含量。 结果：以乙醇浓度 80％，料液比 1∶50，提取 1 次，每次提取 1 h 为最佳提取条件。
峰 面 积 （A）
1600000 1400000 1200000 1000000 800000 600000 400000 200000
0
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0．1
0．2
0．3 0．4
浓 度 （ρ/μg·mL－1）
449
2012 年 9 月
山东中医药大学学报
第 36 卷第 5 期
素 回 归 方 程 为 A＝3×106C－ 98967（r＝0．9993）；异 鼠 李素回归方程为 A＝2×106C－ 52648（r＝0．9996）。 在 0．06～0．36 mg 范围内，槲皮素、山柰素、异鼠李素的 线性关系良好。 见图 1～3。
总黄酮醇苷含量 ＝（槲皮素 ＋ 山柰素 ＋ 异鼠李 素）×2．51 2．3 溶液的制备 2．3．1 银杏叶提取物的制备 将采摘的新鲜银杏叶 自然晾干，粉碎后过 40 目筛。 取银杏叶粉末 10 g 置 于 1 000 mL 圆底烧瓶中，加不同浓度乙醇加热回流 提取，过滤。 滤液浓缩，回收乙醇至无醇味，减压干 燥，即得。 2．3．2 供试品溶液的制备 将干燥后所得的粉末， 精密称取 35 mg，加甲醇 － 25％盐酸（4∶1）的混合溶液 25 mL，至水浴中恒温加热回流 30 min，迅速冷却至 室温，转移至 50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2．3．3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素 1．65 mg、 山柰素 1．57 mg、异鼠李素 1．18 mg，置于 50 mL 容量 瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，得浓度为每 1 mL 中含有 30，30，20 μg 的标准储备液。 2．4 标准曲线的 制备 精密吸取对照品溶液 100， 200，400，500，600 μL 分 别 置 于 编 号 1、2、3、4、5 号 的 1 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 以满 样进量法精密吸取 20 μL 进样，在波长 360 nm 处测 定峰面积。 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得槲 皮 素 回 归 方 程 ：A＝4×106C－ 90933（r＝0．9996）；山 柰
结论：该方法操作简便，结果准确可靠，成本低，毒性小，适用于工业化生产。
［关键词］ 银杏叶；总黄酮；正交设计；高效液相色谱法
［中图分类号］ R284．2
［文献标识码］ A
［文章编号］ 1007－ 659X（ Nhomakorabea012）05－ 0449－ 03
银杏叶（Ginkgo biloba L．）为银杏叶科银杏叶属 植物银杏干燥的叶。 其主要成分为银杏酸、银杏内 酯 和 黄 酮 类 等 化 合 物 ，其 中 总 黄 酮 的 含 量 最 高 ［1－3］。 银杏叶中黄酮类化合物具有保护血管、防止动脉硬 化、扩张毛细血管、活化大脑等功能，用于治疗心绞 痛、冠心病、高血压、支气管等疾病。 此外，在食品工 业上也应用广泛，可用作抗氧化剂、天然添加剂和功 能性食品的原料。 其提取方法常见报道，本实验经 参 考 相 关 文 献 ［4－6］，采 用 乙 醇 为 溶 剂 ，通 过 正 交 设 计 方法，考察提取物中总黄酮的含量，以确定银杏叶的 最佳提取工艺，为含有银杏叶提取物的饲料添加剂 建立相应质量标准提供可靠依据。 1 仪器与试剂 1．1 仪器 旋转蒸发器 RE－ 52AA，SHZ－ D（Ⅲ）循环 水式真空泵，电子天平 FA2004，电热恒温水浴锅，超 声 波 清 洗 器 KQ2200 ， 减 压 干 燥 器 ，HSⅢ－ 日 立 L－ 2000 高效液相色谱仪，抽滤装置，万能粉碎机等。 1．2 试剂 银杏叶，槲皮素、山柰素、异鼠李素标准 品（中国食品药品检定研究院），无水乙醇（分析纯）、 甲醇（色谱纯、分析纯），磷酸水溶液，纯净水。 2 研究方法 2．1 研究因素及方案 参考相关文献研究结果，确 定了影响总黄酮提取率的 4 个考察因素，分别为溶 剂浓度 A、料液比 B、提取时间 C、提取次数 D，正 交试验考察因素见表 1。 考虑各种影响因素，选择 L9（34）的正交试验方案。 2．2 色 谱 及 检 测 条 件 色 谱 柱 ：Agilent ZORBAX SB－ C18；（4．6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇 － 0．2％ 磷 酸 （52/48，V/V）； 流 速 ：1．0 mL·min－1； 检 测 波 长 ：