血清总胆固醇测定PPT课件
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血脂检查PPT课件
②营养不良,吸收不良综合征；③先天性α β脂蛋白血症。④严重肝病。
9
（三）高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定
参考值
1.03～2.07 mmol/L
E
10
2、标本采集及注意事项
同TC测定，患者应在采血前2周内普通饮食， 采血前12小时内禁食，采血前24小时禁止饮 酒，避免剧烈运动。
11
（三）高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定
18
（五）血清载脂蛋白（Apo）测定
【临床意义】 （2）载脂蛋白B大部分分布在低密度脂蛋 白中,一般认为测定血清ApoB水平可间接反 映血清LDL水平,同时通过血清ApoB水平还 可反映LDL颗粒数量.减低见于:肝实质病变 及甲状腺功能亢进;升高见于:冠心病,高脂蛋 白血症,银屑病,肾病及甲状腺功能减低等.
4
（一）血清总胆固醇（TC）的测定
2、参考值： 成人：2.82~5.95mmol/L: 儿童：3.12~5.2mmol/L；
新生儿：1.65~1.95mmol/L:
5
（一）血清总胆固醇（TC）的测定
3、临床意义：
（1）TC增高：见于①生理性增高：主要受饮食 性质、体力劳动量、环境因素、性别和年龄等因 素影响。一般男性高于女性，女性绝经后高于同 龄男性；新生儿低于成人，TC随年龄增长而增高 的趋势，但70岁后减低。②病理性增高：如甲减、 糖尿病、冠心病、高脂血症、肾病综合征、胆总 管阻塞等。
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健康体检
在我国，不管哪家医院，正式检测的血脂 指标只有4项。
血脂高不高，需不需要治疗，用什么样的 降脂药最合适，都是由这4项血脂指标决定 的。
这4项指标就是总胆固醇(TC)、低密度脂蛋 白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和高密度 脂蛋白胆固醇(HDL-C)。
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（三）高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定
参考值
1.03～2.07 mmol/L
E
10
2、标本采集及注意事项
同TC测定，患者应在采血前2周内普通饮食， 采血前12小时内禁食，采血前24小时禁止饮 酒，避免剧烈运动。
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（三）高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定
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（五）血清载脂蛋白（Apo）测定
【临床意义】 （2）载脂蛋白B大部分分布在低密度脂蛋 白中,一般认为测定血清ApoB水平可间接反 映血清LDL水平,同时通过血清ApoB水平还 可反映LDL颗粒数量.减低见于:肝实质病变 及甲状腺功能亢进;升高见于:冠心病,高脂蛋 白血症,银屑病,肾病及甲状腺功能减低等.
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（一）血清总胆固醇（TC）的测定
2、参考值： 成人：2.82~5.95mmol/L: 儿童：3.12~5.2mmol/L；
新生儿：1.65~1.95mmol/L:
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（一）血清总胆固醇（TC）的测定
3、临床意义：
（1）TC增高：见于①生理性增高：主要受饮食 性质、体力劳动量、环境因素、性别和年龄等因 素影响。一般男性高于女性，女性绝经后高于同 龄男性；新生儿低于成人，TC随年龄增长而增高 的趋势，但70岁后减低。②病理性增高：如甲减、 糖尿病、冠心病、高脂血症、肾病综合征、胆总 管阻塞等。
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健康体检
在我国，不管哪家医院，正式检测的血脂 指标只有4项。
血脂高不高，需不需要治疗，用什么样的 降脂药最合适，都是由这4项血脂指标决定 的。
这4项指标就是总胆固醇(TC)、低密度脂蛋 白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和高密度 脂蛋白胆固醇(HDL-C)。
【PPT】高铁-硫酸显色法测定血清总胆固醇(精)
表1-6 标准K2CrO4 在不同波长的标准吸光度值 波长 A 波长 A 波长 A 波长 A 波长 A 220 0.4559 280 0.7235 340 0.3143 400 0.3872 460 0.0173 230 0.1675 290 0.4295 350 0.5528 410 0.1972 470 0.0083 240 0.2933 300 0.1518 360 0.8297 420 0.1261 480 0.0035 250 0.4962 310 0.0458 370 0.9914 430 0.0841 490 0.0009 260 0.6345 320 0.0620 380 0.9281 440 0.0535 500 0.0000 270 0.7447 330 0.1457 390 0.6841 450 0.0325
【计算】血清TC= A测/A标*5.17mmol/L 血清参考值 3.0-5.2mmol/L
【注意事项】 1.抽提液与显色液混合时产生大量的热，影响显色反应。 （1）在测定同一批标本是选用型号一致的试管，口径大的 试管便于快速混合。 （2）加入显色剂时，应使之与异丙醇分两层，然后迅速混 合，是完全显色。 （3）显色剂要逐管加入快速混合，不可成批加入。 2. 反应中所用试管和比色杯应清洁干燥。 3. 防止浓硫酸吸水影响检测结果。
【思考题】 为什么要进行分光光度计的波长校正？如何进行分 光光度计的波长校正？
【目的要求】 1.掌握血浆胆固醇总量的测定方法，包括脂
溶性物质的定量提取，使用易燃有机溶剂 的注意事项及胆固醇的显色。 2.熟悉测定原理及影响因素。 3.了解血浆胆固醇总量的正常范围及临床意 义。
【实验原理】 用以丙醇沉淀血清蛋白质，提取上清液中的 胆固醇，再用氧化铝吸附胆红素、磷脂、 甘油等干扰物，离心后于上清液中加入高 铁-硫酸试剂，反应产物显紫红色，其显色 程度与TC成都成正比。
血清总胆固醇测定PPT课件
-
3
是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料
-
4
胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要 物质，它不仅参与形成细胞膜。
-
5
自然界中的胆固醇主要存在于动物性食 物之中，植物中没有胆固醇，但存在结构上 与胆固醇十分相似的物质——植物固醇。植 物固醇无致动脉粥样硬化的作用。
-
6
正常人体内血液总胆固醇110～220毫克 /100毫升。
-
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四、注意事项
1.强酸注意实验安全 2.这次实验选定35℃水浴锅中显色 3.混合酸自己配制：25毫升浓硫酸缓慢倒入25毫升冰乙 酸中，边加边搅 4.混合酸粘度大，要用封口膜混匀。比色前也需要混匀 5.样品测定中对照不做，用标准曲线中的0号管 6.接触血清戴手套一只，实验结束要洗手
-
14
五、思考题
-
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（三）实验反应原理
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲 醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有 最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的 定量测定。
胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光 吸收值呈良好线性关系。
-
12
三、实验步骤 1、制作标准曲线 2、样品测定,人血清(已经稀释，直接使用)
高密度脂蛋白扮演清道夫角色，它将周边组织 多余的胆固醇送回肝脏，排出体外，达到抗血管硬 化的目的。它还有维护血管内皮细胞功能，及保护 血管免于血栓的形成。高密度脂蛋白增加，动脉壁 被胆固醇囤积的机会就减少。因此它是“好的胆固 醇”。
-
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（二）血液 组成：血细胞（有形体）
血浆（包含血清及纤维蛋白原） 血浆是血液的重要组成分，呈淡黄色液体， 水分占90～92％，溶质以血浆蛋白为主 。 血浆总胆固醇的1/3以游离形式存在，2/3为 与脂肪酸结合之胆固醇酯。
血清胆固醇的测定精品PPT课件
低1%，发生冠心病的危险性可减少2%。但另一
方面，血清总胆固醇降到多低合适？目前认为，
将
血清总胆固醇保持在2.1-5.2mmol/L(90-
200mg/dl)范围内较为合适。对已有动脉粥样硬
化或冠心病者，应将胆固醇降至180mg/dl以下。
2.血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、 甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。
计算公式：Glu含量（mmol/L）=
其中：Cs=5.22 mmol/L
×Cs
三、参考值：
正常：﹤5.17mmol/L 轻度增高：5.17～6.47mmol/L
四、临床意义：
1. 血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合 征、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸及重症糖尿病等。
血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含 胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固 醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是 合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜 的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。 指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。
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Байду номын сангаас
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End 演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
六、注意事项
1. 样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTANa或K 抗凝）； 2. 制备血清时防止红细胞溶血； 3. 样品应在低温条件下运输保存。 4. 试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。 5. 避免误食和皮肤、粘膜接触。
实验三血清中总胆固醇的测定PPT课件
1.0
1.0
标准液(uL)
– 10.0 –
–
–
血清样品(uL) –
– 10.0 10.0 10.0
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min；
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/31
（2）计算：
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘 油三酯污染。
微量移液枪的正确使用
思考题
1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 的基本原理？
2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何 克服？
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/31
标准管胆固醇浓度：
5.17mmol/L
C样=
A样 A标Leabharlann × C标样品管光密度值
样品管胆固醇浓度 ＝
×5.17
(mmol/L)
标准管光密度值
参考值
胆固醇 血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度 光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清
试剂：总胆固醇测定试剂盒
用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂
试剂空 标准 样品管 样品管 样品管
总胆固醇测定.ppt
将酶剂用50ML适量的缓冲液溶解，配成工作液，稳定 10分钟后使用。
实验参数：波长500nm,温度37℃
实验操作
加入物(ml)
U
S
B
血清
0.03
标准液
0.03
蒸馏水
0.03
酶工作液
3
3
3
混匀，置37℃水浴20分钟。 以B管校“0”， 500 nm波长比 色， 取 A值。
三、结果计算： TCHO (mmol/L) = AU / AS × 5.17
四、结果报告： TCHO： mmol/L
五、正常参考值： 3.1～5 .69mmol/L 六、临床意义：
TCHO↑：常见于动脉粥样硬化等。 TCHO↓：甲亢、严重贫血、急性感染等。
七、注意事项：
1、试剂与样品的用量可按其比例放大缩小，计算公式不 变。
2、溶血标本胆红素引起正偏差，维生素C、谷胱甘肽、 氟化物引起负偏差。
T-CHO测定
COD-PAP法测定原理:
测定原理:
胆固醇酯
CEH
胆固醇 ＋ 脂肪酸
胆固醇 ＋ O2
ChOD
H2O2 ＋ 4AAP ＋酚 POD
胆烷-4-烯-3酮 ＋H2O2 红色亚胺醌 ＋ H2O
亚胺醌在下500nm左右有最大吸收峰，吸光度与标本中TC含量成正 比。
实验准备
样品要求：按临床检验常规要求采集处理样本，选用 未溶血的血清或血浆样本。
3、样品中的总胆固醇＞15.5mmol/L, 用生理盐水稀释后 再重新测定，结果乘以稀释倍数。
实验参数：波长500nm,温度37℃
实验操作
加入物(ml)
U
S
B
血清
0.03
标准液
0.03
蒸馏水
0.03
酶工作液
3
3
3
混匀，置37℃水浴20分钟。 以B管校“0”， 500 nm波长比 色， 取 A值。
三、结果计算： TCHO (mmol/L) = AU / AS × 5.17
四、结果报告： TCHO： mmol/L
五、正常参考值： 3.1～5 .69mmol/L 六、临床意义：
TCHO↑：常见于动脉粥样硬化等。 TCHO↓：甲亢、严重贫血、急性感染等。
七、注意事项：
1、试剂与样品的用量可按其比例放大缩小，计算公式不 变。
2、溶血标本胆红素引起正偏差，维生素C、谷胱甘肽、 氟化物引起负偏差。
T-CHO测定
COD-PAP法测定原理:
测定原理:
胆固醇酯
CEH
胆固醇 ＋ 脂肪酸
胆固醇 ＋ O2
ChOD
H2O2 ＋ 4AAP ＋酚 POD
胆烷-4-烯-3酮 ＋H2O2 红色亚胺醌 ＋ H2O
亚胺醌在下500nm左右有最大吸收峰，吸光度与标本中TC含量成正 比。
实验准备
样品要求：按临床检验常规要求采集处理样本，选用 未溶血的血清或血浆样本。
3、样品中的总胆固醇＞15.5mmol/L, 用生理盐水稀释后 再重新测定，结果乘以稀释倍数。
血清总胆固醇浓度测定 PPT课件
• 混匀，37oC保温5分钟
• 在试管中加入1ml蒸馏水
• 500nm波长比色，空白管调零，读出吸光度
• 计算：
血清TC(mmol/L)=
A测定 A标准
×
5.17mmol/L 2
兔血清TC参考值：0.77～2.00 mmol/L
注意事项 1. 最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2.试管在操作前尽量保持干燥； 3.比色应及时，30min内完成;
4.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂
成分中去掉胆固醇酯酶即可。
第3次实验-2
二乙酰一肟法测定血清尿素
实验原理
二乙酰一肟 + H2O
H+
二乙酰＋羟胺
4,5-二甲基-2氧咪唑化合物
二乙酰 + 尿素
H+
△
(红色，520nm波长)
操作步骤
1 按下表加样（试管先做好标记） 加入物(μl) 空白管 标准管 测定管 血清 — — 20 尿素标准液 — 20 — 蒸馏水 20 — — 试剂1 1000 1000 1000 试剂2 1000 1000 1000
苯醌亚胺非那腙＋4H2O
计算：
测定管浓度 标准管浓度 = 测定管吸光度 标准管吸光度
测定管浓度＝ （血清TC）
测定管吸光度 标准管吸光度
× 标准液浓度
操作步骤
1 按下表加样(试管应做好标记) 加入物(μl) 空白管 血清 — 胆固醇标准液 — 蒸馏水 20 酶试剂 1000 标准管 — 10 10 1000 测定管 20 — 1000
2 混匀，沸水浴15分钟 3 常温冷却5分钟 4 520nm波长比色，空白管调零，读出吸光度 5 计算：
血清尿素(mmol/L)=
生物化学-总胆固醇、胆红素、甘油三酯测定PPt课件
CE＋H2O → （CE) FC＋FFA FC＋O2 → (COD) △4-胆甾烯酮＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 → (POD)醌亚胺＋H2O
二、试剂与器材
1、胆固醇液体酶试剂
胆固醇液体酶试剂由GOODS缓冲溶液 （pH=6.7）、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧 化物酶、4-AAP、苯酚组成。
TG明显升高还可使血液凝固性增强，并抑制纤
维蛋白溶解，促进血栓形成，使冠心病诱发心 肌梗死的危险因素，约有80%的心肌梗死患者 TG升高。TG增高同时伴有总胆固醇、低密度脂
蛋白胆固醇增高、高密度脂蛋白胆固醇降低对 动脉粥样硬化和冠心病诊断更有意义。
TG降低：TG小于0.56mmol/L为低脂血症，原发 性TG降低见于遗传性原发性无β脂蛋白或低β 脂蛋白血症；继发性TG降低见于内分泌紊乱 （甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能减退症， 垂体功能减退症）和营养状态不良(如吸收不 良综合征）
7标本密闭保存时，在4℃下可稳定一周，-20℃下可稳定半年以上。
血清甘油三酯(TG)测定
目标： 1.掌握酶法测血清甘油三
酯的基本原理及注意事项。 2.熟练进行实验操作 3.了解甘油三酯测定主
要临床意义
原理：
血清中甘油三酯(TG)经脂蛋白 酶作用，可以水解为甘油和游离脂肪 酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下。 生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化 酶作用氧化生成碳酸二氢丙酮和过氧 化氢,过氧化氢与4-氨基安替比林(4AAP)及4-氯酚在过氧化物酶的作用下 ，生成红色醌类化合物，其显色程度 与TG的浓度成正比。
2、TC降低
TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲亢、肝脏 疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和在药物治疗 中溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。
二、试剂与器材
1、胆固醇液体酶试剂
胆固醇液体酶试剂由GOODS缓冲溶液 （pH=6.7）、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧 化物酶、4-AAP、苯酚组成。
TG明显升高还可使血液凝固性增强，并抑制纤
维蛋白溶解，促进血栓形成，使冠心病诱发心 肌梗死的危险因素，约有80%的心肌梗死患者 TG升高。TG增高同时伴有总胆固醇、低密度脂
蛋白胆固醇增高、高密度脂蛋白胆固醇降低对 动脉粥样硬化和冠心病诊断更有意义。
TG降低：TG小于0.56mmol/L为低脂血症，原发 性TG降低见于遗传性原发性无β脂蛋白或低β 脂蛋白血症；继发性TG降低见于内分泌紊乱 （甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能减退症， 垂体功能减退症）和营养状态不良(如吸收不 良综合征）
7标本密闭保存时，在4℃下可稳定一周，-20℃下可稳定半年以上。
血清甘油三酯(TG)测定
目标： 1.掌握酶法测血清甘油三
酯的基本原理及注意事项。 2.熟练进行实验操作 3.了解甘油三酯测定主
要临床意义
原理：
血清中甘油三酯(TG)经脂蛋白 酶作用，可以水解为甘油和游离脂肪 酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下。 生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化 酶作用氧化生成碳酸二氢丙酮和过氧 化氢,过氧化氢与4-氨基安替比林(4AAP)及4-氯酚在过氧化物酶的作用下 ，生成红色醌类化合物，其显色程度 与TG的浓度成正比。
2、TC降低
TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲亢、肝脏 疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和在药物治疗 中溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。
医学检验·检查项目：血清胆固醇_课件模板
医学检验·各论：血清胆固醇 >>>
简介：
生理功能，是合成肾上腺皮质激素、性激 素、维生素D3、胆汁酸和构成细胞膜的重 要成分，它们对人体生长发育以及新陈代 谢有重要作用。但血液中胆固醇浓度过高， 可造成血管内沉积而损害心、脑血管，形 成动脉粥样硬化，引起心脑血管疾病。肝 脏是参加胆固醇合成、分解的主要调节器 官，故胆固醇测定也反映肝脏类脂质代谢 的功能。
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临床意义：
端肥大症、肥胖症、长期服用类固醇制剂、 口服避孕药、应激反应、肾病综合征、系 统性红斑狼疮、糖尿病性肾小球硬化症、 阻塞性黄疸、胆结石、胆总管瘤、原发性 胆汁性肝硬化症、肝癌、多发性骨髓瘤、 糖原累积病(Von Gier Ke)、回归型发热 性非化脓性结节性脂膜炎(WeberChristia
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临床意义：
n病)、脂肪代谢障碍症、饱和脂肪酸与胆 固醇过量摄取、妊娠等。 (2)降低：原发 性低胆固醇血症、家族性无β脂蛋白血症、 家族性低β脂蛋白血症、Tangier病(家族 性高密度脂蛋白缺乏综合征)、继发性低 胆固醇血症、甲状腺功能亢进症、重症肝 损害(肝硬化、急性肝炎、重症肝炎、原 发性妊娠急性
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相关症状： 啤酒肚、血液粘度增高、老年人高粘血症、 皮下脂肪消失。
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相关疾病：
脑动脉硬化伴发的精神障碍、心血管疾病 伴发的精神障碍、胆汁淤积性黄疽、无机 磷中毒、营养代谢疾病伴发的精神障碍、 老年人高血压、老年急性动脉栓塞、老年 人肥胖症、神经性厌食症与神经性贪食症、 甲状腺功能减退症、慢性自身免疫性甲状 腺炎、老年人甲状腺功能亢进症、糖原贮 积病Ⅰ型、糖原贮积病、黄色
【2021】血清胆固醇定量测定.完整资料PPT
说明： m：100ml血清中胆固醇质量（mg）
A1：样品液吸光度胆固醇标准
硫脲显色液（应用液，4℃，15d）
——
0.1
——
血清 —— —— A1：样品液吸光度
血清总胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化的防治均有意义。
0.1
本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。
硫脲显色剂（快速加入） 4.0 4.0 4.0 血清总胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化的防治均有意义。
血胆固醇。
二、实验原理
血清总胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化的防治均 有意义。血清总胆固醇升高常见于原发性高胆固醇血症、肾病 综合症、 甲状腺机能减退、糖尿病等疾病。 胆固醇的测定临床常用的比色法有两类: （1）胆固醇的氯仿或醋酸溶液中加入醋酐——硫酸试剂，产生蓝绿色。 （2）胆固醇的醋酸、乙醇或异丙醇溶液中加入高铁——硫酸试剂产生 紫红色。 由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其他因 素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定 量。本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。本法测定血清总胆固醇 的正常值为 125～200mg/100ml。 醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结 合生成绿色化合物，反应如下:
血清总胆固醇升高常见于原发性高胆固醇血症、肾病 综合症、甲状腺机能减退、糖尿病等疾病。
立即混匀，37℃ 本法测定血清总胆固醇的正常值为 125～200mg/100ml。
计算纸（9 cm×9 cm）
水浴10min，立即比色
A 620nm
0.000
五、实验步骤
2. 计算
m = A1 C0 × 100 / A0 说明： m：100ml血清中胆固醇质量（mg）
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2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同，
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。如将不同波长的单色 光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光 度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲 线上有极大值 的部分，称为吸收峰。吸收峰所对应的波长， 称为最大吸收波长，以符号λmax表示 ，这是物质定性的依 据之一。
实验五
血清总胆固醇的测定（邻苯二 甲醛法）
-
1
一、试验目的
• 学习分光光度计的原理及操作
• 学习用分光光度法测定胆固醇含量及
标准曲线的制作
-
2
二. 实验原理
• 根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进
行定性和定量的分析方法，称为分光光度法 (spectrophotometry)。该法具有一定的灵敏度和准 确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂， 故应用很广。
4.
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定
条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标
准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐 标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶 液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液
的浓度。
3. 对照法
-
5
• 标准曲线的制作
（1）配置一系列浓度不同的 标准溶液。
（2）在测定条件相同的情况 A 下，分别测定其吸光度。
刻度吸管量取，不要混用。邻苯二甲醛、血清用 移液器量取。
-
10
四、操作步骤 五.实验结果 六.结果讨论
-
11
管号 0
1
2
3
4
X(样品)
醋酸 0.4 0.3 0.2 0.1 0
0.3
液（毫 升）
标准胆 0
固醇
（毫升）
0.1 0.2 0.3 0.4 0.1 血清
邻苯二甲 0.2 0.2 0.2 0.2. 0.2 0.2 醛（毫升）
（3）以标准溶液浓度为横坐 标，以相应的吸光度为纵坐 标，绘制A-C关系图。
（4）在相同条件下测出样品 Ax 溶液的吸光度，从标准曲线 上查出浓度。 0
-
Cx
C
6
• 定性方法
将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分 的溶液，可测得相应的一系列吸光度。如果 以吸光 度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待 测物质的吸收曲线。由于每一种物质均有其特征的 吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。但在实际 工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线 中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待 测物质三种不同浓度的溶液，于1cm吸收池中，在 λmax处分别测定其吸光度，根据A= εbc,即 ε=A/bc，计算出ε，将三次结果平均，即得该物质 的摩尔吸光系数。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。单色光越纯，即经单色器分 光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
-
4
• 定量方法 ：
1. 吸光系数法
2. 标准曲线法
3.
不是任何情况下都能适用的。特别是在单色
光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪
器不同而在一个相当大的幅度内变化 不定，若用 吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
-
7
二、基本原理
• 胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛
作用，产生紫红色物质，此物质在550nm有 最大吸收值，可用比色法测定。
• 胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈
现良好线性关系。
• 本法操作简便，灵敏、稳定。
-
8
三、试剂
• 1. 邻苯二甲醛试剂 • 2. 90%醋酸 • 3. 混合酸：等体积浓硫酸+等体积90%
混合酸 4
4
4
4
4
4
（毫升）
加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测 定吸光值，从标准曲线中-查出相应的浓度。 12
醋酸
• 4. 0.1mg/ml标准胆固醇应用液 • 5. 兔血清
-
9
注意
• 本实验所用的混合酸均为浓酸，使用中一定要注
意安全。
• 测定时比色杯中溶液体积不能超过高度的2/3。 • 不能将测定的反应液洒入分光光度计内。若有洒
落到桌凳仪器上需立即擦除，以免发生伤害
• 胆固醇、醋酸；混合酸分别用0.5mL、5mL干洁的
• 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称
为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收 定律。
-ห้องสมุดไป่ตู้
3
• 吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波
长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的 特性常数。在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显 色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。如将不同波长的单色 光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光 度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲 线上有极大值 的部分，称为吸收峰。吸收峰所对应的波长， 称为最大吸收波长，以符号λmax表示 ，这是物质定性的依 据之一。
实验五
血清总胆固醇的测定（邻苯二 甲醛法）
-
1
一、试验目的
• 学习分光光度计的原理及操作
• 学习用分光光度法测定胆固醇含量及
标准曲线的制作
-
2
二. 实验原理
• 根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进
行定性和定量的分析方法，称为分光光度法 (spectrophotometry)。该法具有一定的灵敏度和准 确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂， 故应用很广。
4.
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定
条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标
准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐 标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶 液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液
的浓度。
3. 对照法
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5
• 标准曲线的制作
（1）配置一系列浓度不同的 标准溶液。
（2）在测定条件相同的情况 A 下，分别测定其吸光度。
刻度吸管量取，不要混用。邻苯二甲醛、血清用 移液器量取。
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10
四、操作步骤 五.实验结果 六.结果讨论
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11
管号 0
1
2
3
4
X(样品)
醋酸 0.4 0.3 0.2 0.1 0
0.3
液（毫 升）
标准胆 0
固醇
（毫升）
0.1 0.2 0.3 0.4 0.1 血清
邻苯二甲 0.2 0.2 0.2 0.2. 0.2 0.2 醛（毫升）
（3）以标准溶液浓度为横坐 标，以相应的吸光度为纵坐 标，绘制A-C关系图。
（4）在相同条件下测出样品 Ax 溶液的吸光度，从标准曲线 上查出浓度。 0
-
Cx
C
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• 定性方法
将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分 的溶液，可测得相应的一系列吸光度。如果 以吸光 度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待 测物质的吸收曲线。由于每一种物质均有其特征的 吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。但在实际 工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线 中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待 测物质三种不同浓度的溶液，于1cm吸收池中，在 λmax处分别测定其吸光度，根据A= εbc,即 ε=A/bc，计算出ε，将三次结果平均，即得该物质 的摩尔吸光系数。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。单色光越纯，即经单色器分 光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
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• 定量方法 ：
1. 吸光系数法
2. 标准曲线法
3.
不是任何情况下都能适用的。特别是在单色
光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪
器不同而在一个相当大的幅度内变化 不定，若用 吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
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二、基本原理
• 胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛
作用，产生紫红色物质，此物质在550nm有 最大吸收值，可用比色法测定。
• 胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈
现良好线性关系。
• 本法操作简便，灵敏、稳定。
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三、试剂
• 1. 邻苯二甲醛试剂 • 2. 90%醋酸 • 3. 混合酸：等体积浓硫酸+等体积90%
混合酸 4
4
4
4
4
4
（毫升）
加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测 定吸光值，从标准曲线中-查出相应的浓度。 12
醋酸
• 4. 0.1mg/ml标准胆固醇应用液 • 5. 兔血清
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注意
• 本实验所用的混合酸均为浓酸，使用中一定要注
意安全。
• 测定时比色杯中溶液体积不能超过高度的2/3。 • 不能将测定的反应液洒入分光光度计内。若有洒
落到桌凳仪器上需立即擦除，以免发生伤害
• 胆固醇、醋酸；混合酸分别用0.5mL、5mL干洁的
• 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称
为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收 定律。
-ห้องสมุดไป่ตู้
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• 吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波
长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的 特性常数。在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显 色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。