最新《分子生物学检验技术》基本知识点合集

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分子生物学基础知识

前言中心法则：第一章PCR一、概念：PCR(聚合酶链式反应，Polymerase Chain Reaction）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

二、原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。

因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至95℃左右一定时间后，使模板DNA 双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对原则与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

三、引物PCR反应中有两条引物，即5′引物和3′引物。

设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA 序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。

临床分子生物学检验技术

04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术，检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果，提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果，制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技术相结合，如人工智能、大数据等，为分子生物学检验技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展：通过血液样本检测肿瘤细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用：用于基因表达分析、基因分型等，提高了检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展：实现了对单个细胞的基因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因编辑技术的出现，为基因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康重视程度的提高，分子生物学检验技术在医疗领域的应用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学技术的不断发展，检验技术将更加精准、高效，为市场带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域的投入加大，为分子生物学检验技术的发展提供了有利的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子生物学检验技术需要利用工程学原理和方法，如微流控芯片、纳米材料等，进行生物大分子的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检测准确性有待提高

分子生物学检验技术复习题与答案

分子生物学检验技术复习题与答案一、单选题（共80题，每题1分，共80分）1、世界上首次用已经分化成熟的体细胞核通过克隆技术培育的动物是A、克隆猪B、克隆绵羊C、克隆鼠D、克隆猴E、克隆奶牛正确答案：B2、检测靶序列是DNA的技术是A、Norther杂交B、Southern杂交C、Western杂交D、Eastem杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：B3、有关核酶的恰当解释是A、它是RNA分子，但具有酶的功能B、它是蛋白质C、是专门水解核酸的蛋白质D、它是由RNA和蛋白质构成的E、它是由DNA和蛋白质构成的正确答案：A4、下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板：A、单链DNAB、RNAC、cDNAD、肽链E、双链DNA正确答案：D5、双链DNA的Tm值主要与下面哪项有关A、C-T含量B、A-T含量C、T-G含量D、A-G含量E、C-G含量正确答案：E6、寡核苷酸芯片主要采用A、原位合成法制备B、杂交技术C、探针固化技术D、显微光蚀刻技术E、DNA微阵列的制作方法正确答案：A7、在已知序列信息的情况下获取目的基因的最方便方法是：A、聚合酶链反应B、组织细胞提取C、cDNA文库法D、基因组文库法E、化学合成法正确答案：A8、凝胶色谱分离蛋白质的依据是A、等电点B、亲和作用C、固定相对蛋白质的吸附作用不同D、分子大小E、疏水作用正确答案：D9、α互补筛选法属于：A、免疫化学筛选B、酶联免疫筛选C、原位杂交筛选D、标志补救筛选E、抗药性标志筛选正确答案：D10、关于DNA双螺旋结构模型的叙述中，除了哪一项外其余都是正确的A、螺旋直径为2nmB、两股链间有严格的碱基配对关系C、两股核苷酸链呈反向平行D、为右手螺旋，每个螺距含10对碱基E、极性磷酸二酯键位于双螺旋内侧正确答案：E11、DNA变性的本质是下列哪种键的断裂？A、氢键B、二硫键C、离子键D、盐键E、共价键正确答案：A12、从细菌体内分离出的质粒DNA，在体外的状态是A、线性B、开环C、多聚体D、单链E、超螺旋正确答案：E13、下述双链DNA序列（仅列出其中一条链序列）中，不属于完全回文结构的是A、AAGATCTTB、AGAATTCTC、GGAATTCCD、CGTTAAGCE、TGAATTCA正确答案：D14、在基因工程中所使用的质粒DNA通常存在于：A、酵母染色体外B、哺乳类细胞染色体外C、细菌染色体上D、细菌染色体外E、酵母染色体上正确答案：D15、目前常用的基因表达体系细胞包括A、以上都是B、昆虫细胞C、大肠埃希菌D、哺乳动物细胞E、酵母细胞正确答案：A16、EB溴化乙锭作为核酸电泳指示剂的原理是A、EB是一种可视物质B、EB特异性结合核酸分子C、EB插入核酸分子之间并在紫外光下产生荧光D、EB在紫外光下放射荧光E、EB是核酸转性染料正确答案：C17、EB溴化乙锭作为核酸电泳指示剂的原理是A、EB特异性结合核酸分子B、EB在紫外光下放射荧光C、EB是核酸传性染料D、插入核酸分子之间并在紫外光下产生荧光E、EB是一种可视物质正确答案：D18、DNA提取中不能有效去除蛋白质的是A、RNaseB、酚-氯仿抽提C、蛋白酶KD、SDSE、高盐洗涤正确答案：A19、下列几种DNA分子的碱基组成比例,其中Tm值最高的是A、G+C-40%B、G+C=60%C、G+C=25%D、A+T=80%E、A+T=15%正确答案：E20、DNA超螺旋结构中哪项恰当A、核小体由DNA和非组蛋白共同构成B、以上都不恰当C、核小体由DNA和H1，H2，H3，H4各二分子构成D、组蛋白的成分是H1，H2A，H2B，H3和H4E、核小体由RNA和H1，H2，H3，H4各=分子构成正确答案：D21、最早发现的抑癌基因是A、VHLB、p53C、DCD、RbE、APC正确答案：D22、Southem杂交通常是指A、RNA与RNA杂交B、DNA与RNA杂交C、DNA与蛋白质杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA与DNA杂交正确答案：E23、在已知序列信息的情况下获取目的基因的最方便方法是：A、聚合酶链反应B、cDNA文库法C、组织细胞提取D、基因文库法E、化学合成法正确答案：A24、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为A、0.5-2mmol/LB、0.3-1mmol/LC、0.5-1mmol/LD、2-2.5 mmol/LE、0.3-2mmol/L正确答案：A25、DNA双螺旋结构模型的描述中哪一条不恰当A、体内以B构型最常见B、腺嘌呤的克分子数等于胸腺嘧啶的克分子数C、DNA双螺旋中碱基对位于外侧D、同种生物体不同组织中的DNA碱基组成极为相似E、二股多核苷酸链通过A与T或C与C之间的氢键连接正确答案：C26、一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以像核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。

分子生物学基础知识(两篇)2024

引言概述：分子生物学是一个关于生物体内分子结构、功能和相互作用的研究领域。

它涵盖了遗传物质DNA与RNA的复制、转录和翻译过程，以及蛋白质的合成、修饰和功能调控等方面。

在本文中，我们将继续探讨分子生物学的基础知识，为读者提供更深入的了解。

正文内容：一、DNA复制1.DNA复制的意义和基本原理2.DNA双螺旋结构的解开3.DNA复制酶的作用和分类4.模板链与新合成链的配对规则5.DNA复制的错误修复机制二、转录和RNA合成1.转录的基本概念和意义2.RNA聚合酶的作用和机制3.RNA合成的调控方式4.剪接和RNA后修饰5.转录的异质性和后转录调控三、翻译和蛋白质合成1.翻译的基本原理和意义2.tRNA的结构和功能3.翻译的起始、延伸和终止机制4.翻译后修饰和蛋白质的折叠5.翻译的调控途径和功能多样性四、蛋白质的修饰和功能调控1.蛋白质修饰的类型和作用2.磷酸化和酶的调控3.乙酰化和转录因子的激活4.泛素化和蛋白降解的调控5.蛋白质的定位和分子交互作用五、分子生物学技术1.聚合酶链式反应（PCR）和其应用2.荧光标记和共定位技术3.基因克隆和基因工程的原理4.单细胞测序和组学研究方法5.CRISPRCas9基因编辑技术和应用总结：分子生物学是现代生命科学领域中至关重要的一个分支，它研究了生物体内分子水平上的各种基本过程和调控机制。

本文逐一介绍了DNA复制、转录和RNA合成、翻译和蛋白质合成、蛋白质的修饰和功能调控以及分子生物学技术等方面的基础知识。

通过深入了解这些内容，读者将能更好地理解生物体的基本生命过程，并为进一步的研究和应用奠定扎实的基础。

引言概述：分子生物学是研究生物体内的分子结构、生物的化学组成、分子间相互作用以及分子在生物体内的功能和调控的学科。

对分子生物学基础知识的理解是理解生物学的基础，它涵盖了DNA的结构和功能、RNA的生物合成、基因表达调控、蛋白质合成等重要内容。

在本文中，我们将深入探讨分子生物学的基础知识。

分子生物学知识点必背

一、名词解释1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。

2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。

3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。

该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。

4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反子。

5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。

包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。

6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。

7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。

8、增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列。

它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。

9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。

10、信息分子：调节细胞生命活动的化学物质。

其中由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。

11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发生生物学效应的的特殊蛋白质。

12、分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。

13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的一大类酶。

14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。

分子生物学知识点汇总

分子生物学知识点汇总一1、分子生物学：研究核酸等生物大分子的功能、形态结构等特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动的适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科2、基因：是合成一种功能蛋白或RNA分子所必需的全部DNA序列。

一个典型的真核基因包括：编码序列-外显子；含子；5’端和3’端非翻译区UTR；调控序列3、基因组：某一特定生物体的整套遗传物质的综合。

基因组的大小用全部的DNA的碱基对总数表示5、分子生物学发展史1869年Miesher首次从莱茵河鲑鱼精子中提取了DNA。

1910年，德国科学家Kossel第一个分离了腺嘌呤、胸腺嘧啶和组氨酸。

1953年，Watson和Crick提出DNA反向平行双螺旋结构模型，为充分解释遗传信息的传递规律铺平了道路。

1961年，法国科学家Jacob和Monod提出并证实了操纵子作为调节细菌细胞代的分子机制。

此外，他们还首次提出存在一种与染色体DNA序列相互补、能将编码在染色体DNA上的遗传信息带到蛋白质合成场所并翻译产生蛋白质的信使核糖核酸。

这一学说对分子生物学的发展起到了十分重要的作用。

1968年，美国科学家Nirenberg由于在破译DNA遗传密码方面的贡献，与Holley 和Khorana等人分享了诺贝尔生理医学奖。

Holley的功绩在于阐明了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸序列，并证实所有tRNA具有相似结构，而Khorana第一个合成了核苷酸分子，并且人工复制了酵母基因6、中心法则容DNA是自身复制的模板DNA通过转录作用将遗传信息传递给中间物质RNARNA通过翻译作用将遗传信息表达成蛋白质在某些病毒中，RNA也可以自我复制，并且还发现在一些病毒蛋白质的合成过程中，RNA可以在逆转录酶的作用下合成DNA.7、分子生物学的3条基本原理：构成生物体各类有机大分子的单体在不同生物中都是相同的；生物体一切有机大分子的构遵循共同的规则；某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质分子决定了它的属性。

分子生物学检验技术

1、分子生物学检验技术:就是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因得结构、表达得变化与由此而导致得基因功能得改变,为疾病得研究与诊断提供更准确、更科学得信息与依据得一门学科。

2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中得应用。

(1)感染性微生物得检测。

如:用PCR技术进行甲型肝炎病毒得检测、乙型肝炎病毒得检测与解脲脲原体得检测等。

(2)基因突变得检测。

如:用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。

(3)法医学检测。

如:用PCR微卫星检测技术进行亲子关系得鉴定与个体识别。

(4)基因异常表达得检测。

如:用cDNA表达得芯片技术进行基因异常表达得检测。

(5)基因定位。

如:用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达得定位。

3、基因组:就是一个细胞或一种生物体得整套遗传物质。

4、基因:就是基因组中一个功能单位,就是贮存有功能得蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需得全部核苷酸序列。

5、原核生物:就是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌与蓝绿藻等原始生物得总称,就是最简单得细胞生物体。

6、操纵子结构:就是原核生物基因组得功能单位。

7、质粒:就是指细菌细胞染色体外,能独立复制并稳定遗传得共价闭合环状分子。

8、转座因子:又称为转座元件,就是一类在细菌染色体、质粒与噬菌体之间自行移动并具有转位特性得独立得DNA序列。

9、原核生物基因组得结构特征:(1)原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成,基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。

(2)具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA。

编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组。

在基因组中存在多功能得识别区域,如复制起始区、转录启动区与终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。

(3)结构基因通常为单拷贝基因,编码顺序一般不重叠。

(4)具有编码同工酶得基因。

(5)含有可移动得DNA序列。

10、病毒基因组得结构特点:(1)与细菌与真核生物基因组相比,病毒基因组结构简单,基因数少,所含信息量也少。

分子生物学的基础知识与实验技术

技术进展：随着科技的发展，基因克隆和测序技术不断进步，提高了实验效率和准确性
基因克隆：将目的基因从原基因组中分离出来，插入到载体中，形成重组DNA分子
测序技术：通过分析DNA分子的碱基序列，确定基因的遗传信息
基因表达分析技术
基因表达分析技术的应用：研究基因表达调控、疾病诊断和治疗等
基因表达分析技术的发展趋势和挑战
环境保护：利用分子生物学技术，处理环境污染问题
食品工业：利用分子生物学技术，改进食品生产工艺和品质
在基础科学研究中的应用
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分子生物学实验技术在蛋白质结构研究中的应用
分子生物学实验技术在基因编辑中的应用
分子生物学实验技术在细胞信号传导研究中的应用
分子生物学实验技术在药物研发中的应用
基因表达分析技术的定义和目的
基因表达分析技术的主要方法：RT-PCR、Western Blot、Northern Blot等
蛋白质分离和鉴定技术
蛋白质的分离技术：包括盐析、沉淀法、层析法等
蛋白质的鉴定技术：包括质谱分析、免疫印迹法、电泳法等
蛋白质的分离和鉴定在分子生物学实验中的应用：如蛋白质相互作用研究、蛋白质结构分析等
基因诊断：通过分子生物学实验技术，可以检测出基因突变、基因缺失等疾病
基因治疗：利用分子生物学实验技术，可以将正常的基因导入到患者体内，治疗基因缺陷引起的疾病
药物研发：分子生物学实验技术可以帮助研究人员发现新的药物靶点，加速药物研发进程
个性化医疗：分子生物学实验技术可以分析患者的基因信息，为患者提供个性化的治疗方案
分子生物学实验技术的挑战与展望
PART 05
当前面临的主要挑战
实验成本的高昂：分子生物学实验需要昂贵的仪器设备和试剂，增加了实验成本。

2024版临床分子生物学检验技术

信号分子异常
信号分子的合成、分泌、运输或降解异常均可影响细胞信号传导，导致细胞功能紊乱和疾病发生。
信号通路异常
信号通路中关键分子的基因突变、表达异常或相互作用异常均可破坏信号通路的平衡，导致细胞增殖、分化、凋亡等异常，进而引发疾病。
2024/1/30
17
细胞信号传导检测技术及应用
免疫学检测技术
利用荧光共振能量转移（FRET）、生物发光等成像技术，实时监测活体内细胞信号传导的动态过程。
18
2024/1/30
05
CATALOGUE
免疫分析技术
19
抗原抗体反应原理及特点
2024/1/30
抗原抗体反应原理
基于抗原与抗体之间的特异性结合反应，形成抗原-抗体复合物。
特点
高度特异性、敏感性和可逆性，受多种因素影响如温度、pH值等。
2024/1/30
25
组织芯片和细胞芯片的原理及应用
原理
组织芯片和细胞芯片是一种高通量的组织或细胞分析技术，通过将大量组织或细胞样本固定在固相支持物上，利用组织学、免疫组化、原位杂交等方法对组织或细胞进行染色和分析，实现对组织或细胞的形态、功能和基因表达的研究。
应用
组织芯片和细胞芯片在疾病病理研究、药物筛选、生物标志物发现等领域具有广泛应用。例如，在肿瘤研究中，可以利用组织芯片对大量肿瘤组织样本进行高通量的病理分析和基因表达研究，为肿瘤的分子分型、预后评估和个性化治疗提供重要依据。
蛋白质分离与鉴定方法
01
02
03
双向凝胶电泳技术
通过等电聚焦和SDSPAGE两步电泳，实现蛋白质的分离。
2024/1/30
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行鉴定，包括MALDI-TOF、 ESI等。

分子生物学检验完整版

1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。

特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。

功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。

临床特征：生长发育障碍，智力低。

呆滞面容，又称伸舌样痴呆。

40%患者有先天性心脏畸形。

肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。

核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX(XY),+212.5%患者为嵌合型：46，XX(XY)/47，XX(XY),+215%患者为易位型：46，XX(XY),-14，+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。

2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。

3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。

分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。

分子生物学实验基础知识

分子生物学实验基础知识分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。

其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也是分子水平研究疾病发生机制、基因诊断和基因治疗的方法。

转化（trans formation）、转染、转导、转位等是自然界基因重组存在的方式，也是人工基因重组常采用的手段。

基因重组的目的之一是基因克隆（gene clone），基因克隆可理解为以一分子基因为模板扩增得到的与模板分子结构完全相同的基因。

使需要分析研究的微量、混杂的目的基因易于纯化，得以增量，便于分析。

外来基因引起细胞生物性状改变的过程叫转化（transformation），以噬菌体把外源基因导入细菌的过程叫转染（transfection）。

利用载体（噬菌体或病毒）把遗传物质从一种宿主传给另一种宿主的过程叫转导（transduction）。

一个或一组基因从一处转移到基因组另一处的过程叫转位（transposition），这些游动的基因叫转位子。

一、基因工程的常用工具（一）载体载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。

载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。

载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。

质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。

质粒有严紧型和松弛型之分。

严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。

而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一个细胞可复制30-50个质粒，如果用氯霉素可阻止蛋白质合成，使质粒有效利用原料，复制更多的质粒。

临床医学检验：分子生物学检验技术题库考点三

临床医学检验：分子生物学检验技术题库考点三1、单选关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确()A．溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体B．溶液Ⅱ的作用是使DNA变性C．溶液Ⅲ的作用是使DNA复性D．质粒DNA（江南博哥）分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性E．该方法简单，重复性好，在实验中经常使用正确答案：A2、判断题pMT2表达载体有两个复制起始位点，故复制时速度很快()正确答案：错3、判断题人及哺乳动物是真核细胞生物体()正确答案：对4、填空题致病微生物基因DNA提取方法有________________，RNA提取法有________________。

正确答案：酚提取乙醇沉淀法；氧化钒核糖核苷复合物酚提取法5、单选下列有关YAC描述，错误的是()A．为线状DNA分子B．由着丝粒、端粒、复制子和外源DNA构成C．培养方便D．可表达真核细胞基因E．装载容量少是它的缺点正确答案：E6、名词解释DNA重组正确答案：不同来源的DNA分子，通过磷酸二酯键连接而重新组合的过程。

7、单选松弛型质粒()A．在宿主细胞中拷贝数较多B．可用氯霉素扩增C．复制时受宿主染色体的控制D．一般没有选择标记E．上述A、B两项正确正确答案：E8、单选非复制转座()A．复制转座子，即在原位点上留有一个拷贝B．移动元件到一个新的位点，在原位点上不留元件C．要求有转座酶D．涉及保守的复制，在这个过程中转座子序列不发生改变E．要求解离酶正确答案：B9、问答题简述DNA病毒基因组的一般特点。

正确答案：DNA多为双链，少数为单链；可以表现为线形，也可以为环状分子。

(1)在转录中，如是双链则两条链都可以作为转录的模板。

(2)在活宿主细胞核内复制，且能利用宿主细胞的复制、转录和翻译系统。

(3)较大的双链DNA病毒往往具有比较复杂的生活周期；并可侵袭多种脊柱类动物，引起严重疾病。

较小的DNA病毒则会更依赖宿主细胞来完成复制，这些病毒常常能反式激活复制系统，导致病毒和宿主都进行复制，故可能引发肿瘤。

分子生物学与检验技术

• 1954年，Gamov提出密码子是三联体。 • 1961年，Crick等证实密码子是非重叠、无标点的三联体。 • 1966年，在Nirenberg、Khorana 等的努力下，完成了全部64个遗传密码子的解码。
40
第一章绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（三）深入发展阶段
20世纪70年代以后 1.重组DNA技术的建立和发展 2.后继研究和持续发展阶段
• Oswald Avery （1877-1955）
• 1944年证实DNA是遗传信息的载体。
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第一章绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（二）建立与发展阶段
20世纪50年代到70年代 Watson和 Crick DNA双螺旋结构模型意义：确立了核酸作为信息分子的结构基础；提出了碱基配对是核酸复制、遗传信息传递的基本方式；最终阐明了遗传的物质基础是核酸。这三点为认识核酸与蛋白质的关系及其在生命中的作用打下了最为重要的基础。
2. 熟悉分子生物学与检验技术的发展及主
要里程碑
3. 了解分子生物学检验技术的临床应用前
景
Introduction
第一节
第二节
第三节
中英文
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第一章绪论
绪论
现代分子生物学兴起的标志：20世纪50年代Watson 和 Crick DNA双螺丝结构
分子生物学以揭示生命现象本质为目的，以
研究生物分子的结构与功能为对象，为
分子生物学与检验技术
• 徐美兰
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• 黄金大米（Golden Rice）是一种转基因大米，它通过转基因技术将β-胡萝卜素转化酶系统转入到大米中而获得，外表为金黄色，故称黄金大米。 • 苏黎世瑞士联邦理工学院的 Ingo Potrykus 教授和德国弗赖堡大学的Peter Beyer（分别为育种专家和分子生物学家）是这一大米作用机制的创始人。 • 1999年，研发此大米，并于2004年在美国进行试验。

分子生物学检验

第二章临床分子生物学检验标志物1.分子生物标志物：指可以反映机体生理,病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型;2.中心法则：指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程;也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程;这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则;在某些病毒中的RNA自我复制如烟草花叶病毒等和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程某些致癌病毒是对中心法则的补充;3.基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质,包括基因和非编码DNA;4.原核生物基因组特征：1原核生物基因组较小：大小一般在106—107碱基对之间；2原核生物的类核结构：原核生物基因组DNA位于细胞中央的核区,没有核膜将其与细胞质隔开在蛋白质的协助下,以一定的形式盘曲,折叠包装起来,形成类核；3原核生物的操纵子结构：原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上;结构基因同其上游的调控区以及下游的转录终止信号,共同组成了一个基因表达单位,即操纵子结构；4原核生物的结构基因：原核生物的结构基因中无内含子成分,多数是单拷贝基因,基因与基因之间有重复序列存在；5具有编码同工酶的基因：这类基因表达产物的功能相同,但基因结构不完全相同；6含有可移动DNA序列：可移动的DNA序列通过不同的转移方式发生基因重组,改变生物体的遗传性状,使生物体更适应环境的变化；5.质粒：指细菌细胞染色体以外,能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子；6.人类基因组包括细胞核内的核基因组3X109bp和细胞质内的线粒体基因组16569bp,人类基因组中存在大量的非编码序列和重复序列；7.小卫星DNA：由10—100bp组成的重复单位重复几十到几百甚至几千次,形成的1—5bp的短DNA,又称可变数目串联重复；8.微卫星DNA：核心序列为1—6bp,可以重复上百次,又称短串联重复；9.多基因家族：指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因,在多基因家族中,某些成员并不产生有功能的基因产物,这些基因称为假基因；10.多态性：当某种变异相对常见,在群体中的频率高于1%时,则称为多态性,频率低于1%的变异称为突变；错义突变,无义突变,RNA加工突变；11.多态性类型：限制性片段长度多态性；小卫星和微卫星多态性；单核苷酸多态性主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性；拷贝数多态性指基因组中较大的片段200bp—2Mb发生了拷贝数的变化；12.DNA甲基化：1定义：指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S—腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程；2作用位点：腺嘌呤的N—6,胞嘌呤的N—4,鸟嘌呤的N—7,胞嘧啶的C—5；3作用机理：13.微小RNA：是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸,在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用；14.长链非编码RNA：长度大于200bp的非编码RNA；第四章：核酸杂交技术1.融解温度Tm：DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生,这一温度范围的中点被称为融解温度；Tm值的大小取决于核酸分子的G-C含量;G-C碱基含量越高,Tm值越高；2.变性：在一定条件下,双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA分子成为单链,形成无规则线团的过程；3.复性：变性DNA只要消除变性条件,具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链的过程；4.Southern印迹杂交：过程：1将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物硝酸纤维素膜或尼龙膜上,即印迹；2固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程；原理：利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量；特点：特异性和灵敏度高；5.Northern杂交靶核酸是RNA,Southern杂交靶核酸是DNA；第五章：核酸扩增技术1.聚合酶链反应技术PCR：由美国Cetus公司K.Mullis博士于1983年建立,它是一个能在试管内模仿细胞内核酸复制过程,也就是能在体外特异地扩增一段特定核酸序列的技术；2.PCR的基本原理：根据DNA半保留复制的机理和体外DNA分子于不同温度下可变性,复性的性质,通过人为控制体外合成系统的温度,通过变性、退火、延伸三个步骤扩增目的DNA 片段；3.PCR的基本过程：1变性：将被复制的DNA片段在高于其熔点温度Tm的条件下94~95℃加热,使DNA双螺旋结构的氢键断裂而解螺旋,形成两条单链分子作为扩增反应的模板,以便与引物结合；2退火：将反应体系的温度降低至引物的熔点温度以下<Tm5℃,以便使引物能与模板DNA序列互补结合,形成杂交链；3延伸：将反应体系的温度升至72℃,此时反应体希按照模板链的序列以碱基互补配对的原则依次把dNTP加至引物的3’端,在TaqDNA聚合酶的存在下,杂交链不断延伸,直至形成新的DNA双链；4.当温度升至其熔点温度Tm时荧光量急剧下降而形成熔点曲线,其波峰所在温度即代表被检DNA分子的Tm值;Tm值的大小取决于DNA分子的长度和其序列中G/C碱基含量；第六章：核酸实时定量检测技术1.实时荧光定量PCR技术：指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应过程,最后通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术；2.扩增曲线：指在实时荧光PCR扩增过程中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,检测到的荧光信号的变化可以绘制成一条以循环数为横坐标,以PCR反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线；3.荧光阈值：指在实时荧光定量PCR扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在指数扩增阶段的任意位置上；4.循环数：PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值所经过的循环次数；5.扩增效率：指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的模板量的比值,其值在0~1之间；6.7.第七章：核酸序列分析1.双脱氧链终止法测序原理：ddNTP比普通的dNTP在3’位置缺少一个羟基,可以通过其5’三磷酸基因掺入到正在增长的DNA链中,但由于缺少3’-OH,不能同后续的dNTP形成3’,5’-磷酸二酯键;因此,正在增长的DNA链不在延伸,使这条链的延伸终止于这个异常的核苷酸处；2.人类基因组测序的步骤：第八章：蛋白质组学技术1.蛋白质组：包括一个细胞或一个组织或一个机体的基因所表达的全部蛋白质；2.蛋白质组学：以蛋白质为研究对象,从整体水平揭示细胞内动态变化的蛋白质组成、结构、表达水平和修饰状态,研究蛋白质间,蛋白质与生物大分子之间的相互作用,揭示蛋白质的功能与生命活动的规律；3.双向凝胶电泳：第一向电泳是依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成分离的蛋白质区带;第一向等电聚焦完成后,将凝胶包埋在SDS—PAGE凝胶板上端,依据蛋白质分子量的不同,在垂直或水平方向进行SDS—PAGE,即第二次分离；4.双向凝胶电泳用于确定差异,质谱法用于鉴别结构；第十三章：单基因遗传病的分子生物学检验1.单基因遗传病分类：常染色体遗传,X连锁遗传,Y连锁遗传；2.在分析基因结构的变化时,通常用DNA作为检测材料；在检测转录水平异常时在,将RNA作为检测材料；当基因较大时,突变区不甚明了时,也可直接从cDNA水平开始进行筛检；3.镰刀细胞贫血的分子机制：患者由于β珠蛋白基因中第6位密码子存在单个碱基的突变,由原来的GAG变为GTG,结果使β珠蛋白链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸变为缬氨酸,红细胞发生镰状；4.β珠蛋白生成障碍性贫血的分子机制：第十五章：线粒体病的分子生物学检验：1．母系遗传：在一个家系中,有缺陷的遗传性状通过母系成员从亲代连续稳定传递到子代的现象,即母亲可以将有缺陷的遗传性状传递给子代,男性子代个体不再继续传递,而女性子代个体可继续将此有缺陷的遗传性状往下一代传递；2．遗传早发：指越是严重的线粒体功能异常,其个体发病的年龄也将越早；3．遗传瓶颈：线粒体在卵母细胞成熟时数目会出现锐减的现象；4．线粒体基因表达系统及特点：第十六章：肿瘤的分子生物学检验1.原癌基因：指人类或其他动物细胞固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称；2.原癌基因激活机制：1插入激活,2基因重排/染色体易位；3基因点突变/移码突变；4基因扩增；5基因转录改变；3.抑癌基因：是一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因,正常情况下负责控制细胞的生长和增殖；4.肿瘤基因表现遗传学异常的分子机制：1基因组印记丢失；2DNA甲基化；3组蛋白修饰与染色质重塑；。

临床医学检验：分子生物学检验技术

临床医学检验：分子生物学检验技术1、多选对核酸一蛋白质杂交实验的描述，正确的是()A．又称为Southwestern杂交B．可鉴定蛋白质与DNA的特异结合C．可以大概确定结合蛋白质的分子量D．该技术（江南博哥）最先由中国人应用E．蛋白质-DNA复合物经紫外线照射后可分离正确答案：A, B, C2、单选?女，45岁，由于低热、盗汗、感冒、咳嗽并带血丝入院。

实验室检查：痰普通培养无致病菌生长；X片见肺纹理增粗，肺门有发光点状物。

初步考虑为()A．矽肺B．肺结核C．肺出血D．COPDE．肺炎正确答案：B3、单选Southern印迹的DNA探针可与以下何种成分杂交()A．只与完全相同的片段B．可与任何含有相同序列的DNA片段C．可与任何含有互补序列的DNA片段D．可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段E．以上都是正确答案：C4、单选编码蛋白质都能与GTP结合的癌基因家族为()A．mybB．mycC．sisD．rasE．erb正确答案：D5、判断题蛋白质的溶解度随温度的增高表现为增加()正确答案：错6、单选下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组()A．球蛋白基因B．组蛋白基因C．rRNA基因D．肌动蛋白基因E．线粒体基因正确答案：B7、名词解释核酸分子杂交正确答案：单链的核酸分子在合适的温度和离子强度下，通过碱基互补形成双链杂交体的一类技术。

8、配伍题断裂基因指()假基因指()A．由不连续的几个编码序列组成的基因B．一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA和一条多肽链C．编码与生物氧化有关的一些蛋白质和酶的基因D．失去表达活性的基因E．基因家族成簇地分布在某一条染色体上，可同时合成某些蛋白质正确答案：A,D9、单选?男，45岁，发现有动脉硬化症状。

查体：见角膜有老年性色素环。

查血：TC12.00mmol/L，TG2.6mmol/L。

如果需要进一步确诊并明确病因，需要进行()A．VLDL基因检测B．查找家族遗传史C．CETP基因检测D．ApoB基因分型E．LDL基因检测正确答案：D10、名词解释DNA芯片正确答案：DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。

分子生物学检验技术第1章

壹
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二、基因变异与单基因病
多基因病的发病机制十分复杂，遗传因素和环境因素共同起作用。
01
这些病的发病有一定遗传基础，常表现出家族倾向，但却又不符合一般的遗传方式。
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三、基因变异与多基因病
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多基因病的发生涉及诸多因素，某一因素的变异不足以解释多基因病的发病机制。
01
参与多基因病发生的基因被称为疾病相关基因。
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生物芯片必将在基因功能研究、基因诊断、药物筛选和个体化药物治疗等方面扮演重要角色，具有重大的应用潜力。
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二、生物芯片
三、蛋白质组学
当今的研究重点已经开始从揭示生命的遗传信息过渡到对生命活动的直接执行者——蛋白质进行整体水平的研究，蛋白质组学正成为目前揭示生命规律的新的重大热点领域。
三、基因变异与多基因病
线粒体DNA突变使线粒体功能发生障碍，直接影响人体组织和细胞的各种生物学功能，导致线粒体遗传病。
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它具有母系遗传、基因突变具阈值效应以及多系统受累等遗传学特征。
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四、线粒体基因变异与线粒体遗传病
肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。
癌基因包括病毒癌基因和细胞癌基因,它们具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。
编者（以姓氏笔画为序）
卫生部“十一五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材
唐冬生（佛山科学技术学院）钱晖（江苏大学）倪培华（上海交通大学）黄迪南（广东医学院）彭颖（温州医学院）樊绮诗（上海交通大学）
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编者（以姓氏笔画为序）
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卫生部“十一五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材
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分子生物学知识点总结

分子生物学重要知识点名词解释半保留复制：指新老搭配，由1条母代DNA链和1条子代DNA链配对产生自带双螺旋DNA。

冈崎片段：DNA复制时，1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，这条链叫前导链，而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反，不能连续复制，只能分成几个片段合成，故称为滞后链，滞后链片段又叫冈崎片段。

复制体：在DNA合成的生长点（growth point），即复制叉上，分布着各种各样与复制有关的酶和蛋白质因子，它们构成的复合物称复合体。

C值：是指某物种单倍体基因组的全部DNA含量的总和。

不同物种的C值差异很大。

C值矛盾：：①与预期相比，C 值明显过大；②同一物种，C 值相差很大。

这种C值与生物进化复杂性不相对应的现象称为C值矛盾或C值悖理启动子：是基因转录起始所必须的一段DNA序列，一般位于结构基因的上游，是DNA 分子上与RNA聚合酶特异性结合而使转录起始的部位，启动子本身不被转录。

hnRNA:在真核生物中，最初转录生成的RNA称为不均一核RNA(heterogeneous nuclear RNA,hnRNA)，然而在细胞浆中起作用，作为蛋白质的氨基酸序列合成模板的是mRNA(messenger RNA)。

hnRNA是mRNA的未成熟前体。

两者之间的差别主要有两点：一是hnRNA核苷酸链中的一些片段将不出现于相应的mRNA中，这些片段称为内含子(intron)，而那些保留于mRNA中的片段称为外显子(exon)。

转录：是以DNA中的一条单链为模板，游离碱基为原料，在DNA依赖的RNA聚合酶催化下合成RNA链的过程。

SnRNA:真核细胞有细胞核和细胞浆中都含有许多小RNA，它们约有100到300个碱基，每个细胞中可含有105-106个这种RNA分子。

它们是由RNA聚合酶Ⅱ或Ⅲ所合成的，其中某些像mRNA一样可被加帽。

在细胞核中的小RNA称为snRNA，而在细胞浆中的称为scRNA。

最新《分子生物学检验技术》基本知识点合集

最新《分⼦⽣物学检验技术》基本知识点合集分⼦⽣物学基本知识点⼀、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。

2、基因病分为单基因病和多基因病。

3、分⼦杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。

4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个⼯作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区；③扩增反应区；④产物分析区。

5、肿瘤发⽣分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。

6、⽣物芯⽚技术是根据⽣物分⼦之间特异性相互作⽤的原理，如DNA-DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发⽣的复性与特异性结合，设计其中的⼀⽅为探针。

7、核酸分⼦杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和⾮同位素杂交。

8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA。

9、DNA芯⽚技术可应⽤于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。

10、质粒提取⽅法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它⽅法。

11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。

12、在试管中进⾏的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退⽕（杂交）和延伸。

DNA双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中。

13、基因重组中⽤来识别和切割双链DNA分⼦中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产⽣的缺⼝错开突出，称为粘末端。

若产⽣的缺⼝不错开，称为平末端。

14、国家级的蛋⽩质数据库有蛋⽩质序列数据库、蛋⽩质结构数据库、蛋⽩质直系同源簇数据库和DIP数据库。

15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引⼈新的基因。

16、根据杂交核酸分⼦的种类，可以将核酸分⼦杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂交和RNA与RNA杂交。

17、常⽤的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和⼈⼯染⾊体。

18、基因⼯程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和⼈⼯接头法三种⽅法。

19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数。