交联透明质酸体外降解和细胞毒性研究

透 明质 酸 （ ａｕ ｏ ｉ ａｉ ， 下 称 ＨＡ） 一 Ｈｙ ｌｒｎｃ ｃ 以 ｄ 是
充 剂 ， 入后 可维持 一定 的前 房深度 ， 注 不仅 便 于手术 操 作 ， 有保 护角膜 内皮 细胞及 眼 内组织 ， 还 减少 手术
种独 特 的线 性大 分子 粘多 糖 ， 由葡 萄糖 醛 酸 和 Ｎ 乙 一
衍 生物 ， 具有 良好 的 生 物相 容 性 及具 有 较 好 的 流变
与蛋 白质共 价结 合 ， 不存 在易 引发抗 原反应 的基 团． 近 年来 ， ＨＡ作 为一种 高相 容性 可 吸收 的生 物材 料 ， 广 泛应 用于 临床 医学 各 个 领 域 ， 作 为 眼科 前 房 填 如
ＦＥＮＧ ｌ ，Ｈ ＵＡＮＧ ｎ ，Ｓ Ｌｉ ，Ｚ ＡＮＧ ｕ ｅ ｅ ｇ ，Ｈ Ｕ ｎ ｐ ｎ Ｈａ Ｘｉ Ｕ Ｈ Ｈ ｉｈ ｎ 。 Ｙｏ ｇ ｉ ｇ
（ ． ｏｌ ｅｏ ｈ ｒ ｃ 。Ｚ ｅ ａ ｇＵｎｖ ｒ ｉ ｆ ｃ ｎ ｌｇ ，Ｈａ ｇ ｈ ｕ ３ ０ ３ ，Ｃ ｉａ １ Ｃ ｌ ｇ ｆ ａ ｍａ ｙ ｈ ｊ ｎ ｉｅｓｔ ｏ ｈ ｏｏ ｙ ｅ Ｐ ｉ ｙ Ｔｅ ｎ ｚ ｏ １ ０ ２ ｈｎ ；
１ 实 验 部 分
１ １ 仪 器 和 材 料 ．
１ １ １ 仪 器 ． ．
国家标 准 可采用 测定 其溶 胀度来 计算 交联 密度作 为 材料 的表 征方法 ． 胀 度 测 定 一般 分 为体 积法 与 质 溶
量法＿ ， ５ 笔者 采用 质量 法． ］
方 法 ： 密 称取 一 定 量 已达 到 溶胀 平 衡 的交 联 精
ＨＡ， 记为 湿重 ， 装入 透析 袋 中 ， 用无水 乙醇脱 水４ｈ ，
６ ０℃ 真 空 干 燥 到 恒 重 ， 去 袋 重 即为 交 联 ＨＡ 干 扣
ｐ －０ ０实验 室 酸度计 （ ＨＳ３ ０ 成都 全 速科 技有 限公 司 ） 真 空 干 燥 箱 ＤＺ 一０ ０ Ｅ（ 州 精 科 仪 器 仪 ； Ｆ ６ ２ ＭＢ 福 表有 限公 司） 台式高 速离 心机 ＴＧＬ １ Ｇ（ 海安 亭 ； 一６ 上 科学 仪 器 厂 ） 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ＧＯＬ ５ ／ ； ＤＳ ４ ＧＯＬ ５ （ 海棱 光技 术有 限公 司 ） 电子 分 析天 平 ＤＳ ３ 上 ；
得 到具 有较 高机 械强 度和 可 以调控 降解 速度 的交 联
ＨＡ 产 品 ， 使其 在 泌尿科 ， 肤科 及 美容 外科 中用 作 皮
软组 织填 充 的生 物材 料［３ ２３ －． 交联 ＨＡ在 国内研究 较 少 ， 者 采用 １ ４丁 二 笔 ，一 醇 二 缩 水 甘 油 醚 （ ＵＤ ） 为 交 联 剂 ， 接 ＨＡ Ｂ ＧＥ 作 连 的羟 基形 成空 间 网状 结 构 ， 作 为 新 型 医疗 器 械用 可 生物 材料 ． 为判 定 其 是 否 满足 国家 三 类 医 疗 器 械所 必须 满足 的 医 用 要 求 ， 们 参 照 ＧＢ Ｔ１ ８ ６国家 我 ／ ６８ 标准＿ 对本 实验 室 自制 的交联 透 明质酸 凝胶 进 行初 ４
收 稿 日期 ：０ ００ —７ ２ １—７０
性能 ， 能很好 地弥 补 天然 ＨＡ 在组 织 中易扩 散 和 降 解 ， 内存 留时 间短等 缺点 ［ ． 体 １ 通过 控制 交联 强度 可 ］
基金项 目： 浙江省科技计划项 目（０ ８ ２ ０ ８ ； ２ ０ Ｃ ３ ５ ） 浙江省重大科技专项（ ０ ７ １ ００ ２０Ｃ２ ７）
为 １． ， ３８ 干物质 质量保 持 率为 ５． ； Ｏ １ 其体 外细胞 毒性 与 阴性 对照 物 （ Ｐ ） 近。 ＨＤ Ｅ 接 结果 显 示交
联 ＨＡ 的 生物安 全性较 好 ， 进一 步验证 后 ， 在 可作 为植入 性 生物 医学材料使 用．
关键 词 ： 交联 透 明质酸 ； 体外 降解 ， 细胞毒 性 ； 生物材 料
中图分 类号 ： ３ ． Ｘ１ １ ２ 文 献标识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ６４ ０ （０ １ ０ — ６ ００ １ ０ — ３ ３ ２ １ ） ６０ ３ —５
Ｒ， ￣ｍｒ ｈ ｏ ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ ａ ｄ ｃ ｔ ｔ ｘｃｔ ｆｃ ｏ ｓ ｌ ｋ ｄ ｈ ａｕ ｏ ｉ ｃｄ ｉ ｉｒ ｅ ｎ ｄ ｇ ａ ａ ｉ ｎ ｙ ｏ ｏ ｉｉ ｏ ｒ ｓ －ｉ ｅ ｙ ｌｒ ｎ ｃ ａ ｉ ｎ ｖｔｏ ｏ ｙ ｎ
ｐ Ｈ一６ ８ 的 Ｐ Ｓ溶 液 中终 止 反 应 ， 去 离 子 水 反 ．６ Ｂ 用 复 冲洗去 除残 留在 表 面的 Ｂ ＧＥ， ＵＤ 低温 干燥 ５ｈ后 再加 入无 水 乙醇 ５ ０ｍＬ以去 除其 内部残 留交联 剂 ， 粉碎 过 ６ ０目筛 得 到细粒 状交 联 ＨＡ．
１ ２ ２ 交 联 ＨＡ 溶 胀 度 测 定 ． ．
ＡＰ １ ８ 美 国 ＯＨＡＵＳ ； １０ （ ） ＴＨＺ Ｃ恒 温 振 荡 器 （ 苏 — 江
重． 其湿 重 与干重 的比例 即为溶胀 度． 以实验 天数 为
横 坐标 ， 溶胀 度 为 纵 坐标 绘制 溶 胀 度一 时 间变化 以
曲线． １ ２ ３ 交联 ＨＡ 体 外 降解 实验 ． ．
冯 海 黄 。 鑫 苏 ， 李 张惠成 胡 勇平。 。 。
（． 江 工 业 大 学 药 学 院 ， 江 杭 州 ３ ０ ３ ；． 州市 第 一 人 民 医院 ， 江 杭 州 ３ Ｏ ０ ） １浙 浙 １０２２杭 浙 １０ ６
摘要 ： 究交联 透 明质酸体 外 降 解特 性 和 细胞 毒 性 ， 评 价其 作 为 医用 生物 材 料 的 安全 性 提 供依 研 为
ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｓｉ ｓ ｉ ｉｒ ｒ ｔ ｄ ｅ ｎ ｔ ｙ ｏ ｏ ｉｉｙ ｗａ ｅ ｅ ｍｉ ｅ ｙ Ｍ ＴＴ ｅ ｈ ｄ Ｔｈ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉ ｔ ｖ ｔ ｏ ｗｅ ｅ ｓ ｕ ｉ ｄ ａ ｄ ｉｓ ｃ ｔ ｔ ｘ ｃｔ ｓ ｄ ｔ ｒ ｎ ｄ ｂ ｃ ｎ ｍ ｔｏ ． ｅ
第３ ９卷 第 ６期
２１ ０ １年 １ ２月
浙 江 工 业 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＺＨＥ Ｉ ＪＡＮＧ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ ＯＦ ＴＥＣＨＮ０ＬＯＧＹ
Ｖｏ Ｉ ９ Ｎｏ ６ ｌ３ ．
Ｄｅ． ２ １ ｃ Ｏ１
交联透 明质酸体外 降解 和细胞毒性研究
步 的生 物 安 全 性 评 价 ， 果 基 本 符 合 医 用 材 料 的 结
要 求．
本实 验所 得交 联 ＨＡ 为 网状 交 联 高分 子 材 料 ，
不溶 于水 和有机 溶剂 ， 无法 测 定粘度 和分子 量． 交联 ＨＡ作 为生 物 医用 高 分子 聚 合 物 ， 据 ＧＢ ＴＩ ８ ６ 根 ／ ６ ８
２ Ｈａ ｇ ｈ ｕ Ｆｉｓ ｅ ｐｅｓＨｏ ｐｔｌ ． ｎ ｚ ｏ ｒｔＰ ｏ ｌ’ ｓ ｉａ 。Ｈａ ｇ ｈ ｕ ３ ０ ０ ｎ ｚ ｏ １ ０ ６，Ｃｈｉａ ｎ）
Ａｂ ｔａ ｔ Ｉ ｏ ｄ ｒ ｏ ｔ ｄ ｔ ｅ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ｃ ａ ａ ｔ ｒｓｉｓ ｎ ｃ ｔ ｔ ｘｃｔ ｏ ｃ ｏ ｓｌ ｋ ｄ ｓｒ ｃ ： ｎ ｒ ｅ ｔ ｓ ｕ ｙ ｈ ｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ｈ ｒ ｃｅ ｉｔｃ ａ ｄ ｙ ｏ ｏ ｉｉ ｙ ｆ ｒ ｓ —ｉ ｅ ｎ ｈ ａｕ ｏ ｉ ｃｄ ｉ ｉｒ ， ｃ ｏ ｓｌ ｋ ｄ Ｈ Ａ ｓ ｒ ｐ ｒ ｄ ｂ ｈ ｍｉａ ｅｈ ｄ Ｉｓ ｄ ｇ ａ ａｉｎ ｙ ｌｒ ｎｃ ａ ｉ ｎ ｖｔｏ ｒ ｓ —ｉ ｅ ｎ ｗａ ｐ ｅ ａ ｅ ｙ ｃ ｅ ｃ ｌｍ ｔ ｏ ． ｔ ｅ ｒ ｄ ｔ ｏ
酰氨 基葡 萄糖 的双 糖 单位 反 复 交 替 连接 而 成 ， 其 与 它 天然粘 多糖 不 同 ， ＨＡ分 子 内不 含 硫 酸基 团 ， 也不
Байду номын сангаас
并 发症 ， 促进 伤 口愈合 的作用 ． 经化 学修饰 后得 到交 联 ＨＡ 作 为 一 种 非 水 溶 性 ， 注 射 ， 移 植 的 ＨＡ 可 可
浓 度为 ５ 的 ＨＡ 钠 溶液 １ ０ｍＬ， ｍ（ ０ 按 ＨＡ）：ｍ （ ＵＤＧ 一１：１将 交联 剂 Ｂ Ｇ 和 ５ ＨＡ 混 Ｂ Ｅ） ＵＤ Ｅ 合 均 匀 ， 拌 ３ｍｉ ， 入 ０ １ｍｏ／ ０Ｈ 溶 液 搅 ｎ加 ． ｌＬ Ｎａ
１ｍＬ， 联 反 应 ２ ． ４ ｈ后 将 交 联 ＨＡ 置 于 交 ４ ｈ ２
作者筒介 ： 冯 海 （９ ３ ） 男 ， 江 杭 州 人 ， １７ 一 ， 浙 副教 授 ， 士 ， 究 方 向为 药 物新 剂 型与 新 技 术 ， — ｉ ｆｎ ｈ ｉ８ ２ ９ １３ ｃｒ． 博 研 Ｅ ｍａ ： ｇ ａ２ ９ ８ ＠ ６ ．ｏ ｌｅ ｎ
第 ６ 期
冯 海 ， ： 联 透 明质 酸体 外 降 解 和 细 胞 毒 性 研 究 等 交
据． 通过化 学 交联 法制备 交联 ＨＡ， 用 ＭＴ 法测 定材 料 的 细胞 毒 性 并研 究 其 降 解特 性． 得 交 采 Ｔ 测
联 ＨＡ 的溶胀 度 为 ６ ． ７ ． ２ 在 ｐ Ｏ ６ ±０ １ ； Ｈ一７ ０的 生理 盐 水 中 ， 材料 在 ３ ． 该 ７℃ ， ０ｄ内凝胶 失重 率 ６
ｓ ｌ ｎ ｅ ｒ ｅｏ ｒ ｓ—ｉ ｋ ｄ ＨＡ ｓ ａ ｏ ｔ ６ ．６ ｗｅｌ ｇｄ ｇ ｅ ｆｃ ｏ ｓｌ ｅ ｉ ｎ ｗａ ｂ ｕ ０ ７± ０ ２；ａ Ｈ 一 ７ ０， ３ ℃ ，ａ ｔｒ ｔ ．１ ｔｐ ． ７ ｆｅ ｗｏ ｍｏ ｔ ｓｔｓｉ ｇ，ｔ ｅ ｃｏ ｓｉｋ ｄ Ｈ Ａ ｅ ｅ ｒ ａ ｅ ｙ １ ．８ ， ａ ｄ ｔ ｅ ｄ ｉｄ ｃ ｏ ｓｉｋ ｄ ｎｈ ｅｔ ｎ ｈ ｒ ｓｌ ｅ ｎ ｇ ｌｄ ｃ ｅ ｓ ｄ ｂ ３ ｎ ｈ ｒｅ ｒ ｓ ｌ ｅ ＨＡ ｎ ｒ ｍａｎ ｄ ５ ． ； ｔ ｅ ｙ ｏ ｏ ｉｉｙ ｆ ｒ ｓ —ｉｋ ｄ ＨＡ ｗａ ｓｍ ｉ ｒ ｅ ｉｅ Ｏ １ ｈ ｃ ｔ ｔ ｘｃｔ ｏ ｃｏ ｓｌ ｅ ｎ ｓ ｉ ｌ ｗｉｈ ｈ ｔ ｆ ＨＤＰ ａ ｔ ｔ ａ ｏ Ｅ． Ｃｒ ｓ ｌ ｋ ｄ Ｈ Ａ ｓ ｏ ｄ ｏ ｄ ｉｌ ｇｃ ｌ ａ ｅｙ ｎ ｏ ｌ ｂ ｕ ｅ ａ ｉ ｐａ ｔｂ ｅ ｂｏ ｄｃ ｌ ｏ ｓｉ ｅ ｎ ｈ ｗｅ ｇ ｏ ｂｏｏ ｉａ ｓ ｆｔ ａ ｄ ｃ ｕ ｄ ｅ ｓ ｄ ｓ ｍ ｌｎ ａ ｌ ｉｍｅ ｉａ ｍａ ｅ ｉｌ ｙ ｐ ｒｏ ｍｉ ｇ ｓ ｍｅ ｆ ｒｈ ｒｔｓｉ ｇ ｔｒ ｓｂ ｅ ｆ ｒ ｎ ｏ ｕ ｔ ｅ ｅ ｔ ． ａ ｎ
精密称取一 定量 已达 到溶胀 平衡 的交联 Ｈ 按 Ａ， （ 交联 Ｈ Ａ）： （ 降解溶液） ＝１： ０ 放入恒温振荡器 ２０ 中， 设置（７ ）℃ ， ３ ±１ 振荡频率 １０ ｒｉ 降解 溶液是 ０ 次／ ｎ ａ ． 由质 量 分数 为 ０ ９／ Ｎａ １０ ０ 对 羟基 苯 甲酸 乙 ． Ｃ ， ． ４， ９ ６ ９ ６ 酯 的水溶 液 构 成 ， 用 磷 酸 氢 二 钠 调 至 ｐ ＝７ ０ 并 Ｈ＝ ． ． ＝ 按 照试 验期进 行取 样 ， ３ 用 ７℃生理 盐水透 析 ２ｈ以 置换 袋 中的分 析液 ， 无水 乙醇 脱水 ４ｈ ６ ，０℃真 空干 燥 到恒重 ， 测定 质 量保持 率 ： 质量 保持 率 一 ×１ ０／ ０ ９ ６
太仓 市 实 验 设 备 厂 ） 垂 直 流 超 净 台 （ Ｓ Ｏ， Ｃ 一 ； Ｅ Ｃ Ｓ Ｖ ４ ） Ｃ ２培 养 箱 （ ｅｍｏＥ ｅｔｏ ｏｐ ｒｔ ｎ Ａ１ ； Ｏ Ｔｈ ｒ ｌｃｒ ｎＣ ｒ ｏ ａｉ ， ｏ
Ｆ ｎ １ １ ； 置 显 微 镜 （ ｋ ｎ Ｅ ｌ ｓ ， 号 ｏ ｍａ３ １ ） 倒 Ｎｉｏ ｃｉ ｅ 型 ｐ
Ｋｅ ｏ ｄ ：ｃ ｏ ｓ ｌ ｋ ｄ ｈ ａ ｕ ｏ ｉ ｃ ｄ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ｎ ｖ ｔ ｏ；ｃ ｔ ｔ ｘ ｃｔ ｙ ｗ ｒ ｓ ｒ ｓ —ｉ ｅ ｙ ｌ ｒ ｎ ｃ ａ ｉ ；ｄ ｇ ａ ａ ｉ ｎ ｉ ｉｒ ｎ ｙ ｏ ｏ ｉｉ ｙ；ｂ ｏ ｔ ｒａ ｓ ｉ ｍａ ｅ ｉ ｌ