生物化学实验习题及参考答案

生物化学实验习题及解答

一、名词解释

1、pI；

2、层析；

3、透析；

4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳；

5、蛋白质变性；

6、复性；

7、Tm 值；

8、同工酶；9、Km值；10、DNA变性；11、退火；12、增色效应

二、基础理论单项选择题

1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键？（）

A、双缩脲反应

B、凯氏定氮

C、紫外吸收

D、羧肽酶法

2、下列哪组反应是错误的？（）

A、葡萄糖——Molish反应

B、胆固醇——Libermann-Burchard反应

C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反应

D、氨基酸——茚三酮反应

3、Sanger试剂是（）

A、苯异硫氰酸

B、2，4-二硝基氟苯

C、丹磺酰氯

D、 -巯基乙醇

4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？（）

A、215nm

B、260nm

C、280nm

D、340nm

5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收？（）

A、色氨酸的吲哚基

B、酪氨酸的酚环

C、苯丙氨酸的苯环

D、半胱氨酸的硫原子

6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（）

A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同

B、分子大小不同

C、分子极性不同

D、溶解度不同

7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查？（）

A、茚三酮试剂

B、奈氏试剂

C、双缩脲试剂

D、Folin-酚试剂

8、蛋白质变性是由于（）

A、一级结构改变

B、亚基解聚

C、空间构象破坏

D、辅基脱落

9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（）

A、胶体性

B、粘性

C、变性作用

D、沉淀作用

10、有关变性的错误描述为（）

A、蛋白质变性后，其一级结构和空间结构改变

B、蛋白质变性后，其理化性质和生物学活性

改变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加，易被酶水解，易沉淀

11、双链DNA热变性后（）

A、黏度下降

B、沉降系数下降

C、浮力密度下降

D、紫外吸收下降

12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？（）

A、天冬氨酸

B、脯氨酸

C、赖氨酸

D、丝氨酸

13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H+的受体，也可以作为H+的供体？（）

A、His的咪唑基

B、Arg的胍基

C、Cys的巯基

D、Trp的吲哚基

三、填空

1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（）色物质，而其他氨基酸与茚三酮产生（）色的

物质。

2、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的（）、（）、（）三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。

3、移液枪在每次实验后应将刻度调至（），让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取（）。

4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时，应立即（），并且离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管，则另外一支要用（）代替。

5、测定蛋白质浓度的方法主要有（）、（）、（）。

6、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有（）和（）等。

7、核酸在260nm附近有强吸收，这是由于（）。

8、双键DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260（），同样条件下，单键DNA 的OD260（）。

9、硝酸纤维素膜可结合（）链核酸。将RNA变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称（）印迹法。

10、常用二苯胺法测定（）含量，用苔黑酚法测定（）含量。

11、变性DNA的复性与许多因素有关，包括（）、（）、（）、（）、（）。

12、温度对酶活力影响有以下两方面：一方面（），另一方面（）。

13、维生素C是（）酶的辅酶，另外还具有（）作用。

14、在分光光度计的使用或检定中，（）的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。（）的误差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。

四、问答

1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。

2、蛋白质变性与沉淀的关系。

3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。

4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。

5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？

6、体液血糖测定有哪些方法？

7、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素？

8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？

9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？

10、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？

11、蛋白质分离和纯化的一般方法？

12、如何正确选择核酸电泳指示剂？

参考答案

一、名词解释

1、指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。

2、按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。

3、通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯

化技术。

4、在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不

是根据分子所带的电荷大小分离的。

5、生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照，热，有机溶济

以及一些变性济的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。

6、在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。

7、核酸分子变性过程中，紫外吸收达到最大增量一半时的溶解温度。

8、能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。

9、反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。是酶的特征物理学常数之一。近似表示酶与底物的

亲和力。

10、DNA双链解链，分离成两条单链的现象。

11、既DNA由单链复性、变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双链结构的过程，同源DNA之间`DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。

12、当双螺旋DNA熔解（解链）时，260nm处紫外吸收增加的现象。

二、基础理论单项选择题

1、A；

2、C；

3、B；

4、A；

5、A；

6、B；

7、B；

8、C；

9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；

三、填空

1、黄、紫