脱氢酶测定方法
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脱氢酶测定（比色法）（关松荫）
试剂
1）1% TTC
2）CaCO
3
3) 甲醇
4）甲臢（TPF）的标准溶液：用TTC还原配制。
TTC标准溶液：称取50mg已烘干的TTC于50ml的容量瓶中，加水定容，得1mgTTC/ml的标液（1000ug/ml）。
标准曲线的绘制：将TTC标准溶液配制成2、4、6、8、10、20、30 ug/ml
还原，显色后在分光光度计上于的三苯基四唑氯化物溶液，分别加10mg NaHSO
3
460nm处比色测定并绘制标准曲线。
操作步骤
取20g土壤于50ml三角瓶中，加0.2g碳酸钙。混匀后加2ml1%三苯基四唑氯化物，再加水至最大持水量的90%（5d），在恒温恒湿培养箱中（30℃，相对湿度70%）培养24h。培养结束后，加25ml甲醇，振荡5min，过滤。再用甲醇多次洗涤漏斗上的土壤，直至获得无色滤液。合并滤液和洗液并定容50ml或100ml，在分光光度计上于460nm处比色（以甲醇做空白）。
不加土及TTC做一个空白对照。
结果计算
酶活性表示：根据减去空白对照的光密度值查标准曲线即可求出产生的三苯基甲臢的量，该量（ug/g干土）即表示脱氢酶的活性。
土壤脱氢酶活性（ugTPF/g干土）=C*V/dwt 或根据形成1mg三苯基甲臢需要150.35ul氢，也可以转移氢的体积表示。
X=av*150.35
式中：C——滤液中TPF的量（ug/ml）（由标曲查知）
a——1ml滤液中TPF的毫克数（查标准曲线）
V——滤液体积（ml）
dwt——烘干土的质量（g）
150.35——将TPF量换算成氢的体积（ul）的系数