微生物培养基的选择
微生物培养基选择指南
微生物培养基选择指南•介绍•微生物培养基的类型•FAQ•微生物培养基选择指南微生物培养基简介微生物学研究需要能在实验室提供各种不同种类的细菌、酵母或病毒。
诸如发酵、蛋白质和疫苗生产的大规模过程需要大量处于生理活性状态的细菌。
因此，针对各种应用需要有能提供适当的生化环境并保持微生物所有特征的合适的营养培养基。
任何微生物培养基都应包括营养素、能量、必需矿物质、缓冲剂和pH指示剂。
有时它们还包括选择剂和固化剂。
专性寄生虫，如噬菌体，也可在含有宿主细菌的营养培养基中进行培养。
以下是默克典型微生物培养基的基本成分：•营养来源–蛋白质、维生素、矿物质和碳水化合物的来源；主要是蛋白胨和肉提取物的混合物•能量源–碳水化合物的来源；主要是葡萄糖•基本矿物质–微量和大量矿物质的来源；主要存在于蛋白胨和肉提取物中•缓冲剂–保持最佳pH值的试剂；主要是特定的氨基酸、磷酸盐、柠檬酸盐和两性离子•pH指示剂–通过颜色变化指示培养基pH值变化的试剂；主要是酚红•选择剂–仅允许特定细菌生长的试剂；例如抗生素、亚碲酸盐、叠氮化物和胆汁盐•固化剂–在需要时可将培养基保持在固态或半固态的试剂；广泛使用的是琼脂，尽管有时使用的是明胶•特定的物质，如生长因子、酶，也可被掺入至特定的细菌培养基中微生物培养基的类型•简单或基础培养基：包括营养肉汤和蛋白胨水；在分子生物学研究实验室通常用于分离和培养各种细菌•复杂培养基：含有多种营养成分的混合物；氨基酸来源的确切组成并不明确。
例如巧克力琼脂、MacConkey琼脂、Lowenstein-Jensen培养基•明确培养基：含有某些细菌所需的已知和明确的碳和氮源•特定培养基：含有会刺激难养菌繁殖、阻止有害细菌繁殖的特定物质，或能区分不同类型细菌的指示剂•细菌培养基LB培养基溶菌肉汤或LB是培养大肠杆菌最为常用的培养基。
它最初是由BertaniG创建以用于培养志贺氏菌指示菌。
LB是一种富含蛋白胨、酵母提取物、NaCl和琼脂（用于固体培养基）的丰富培养基。
选用和设计培养基的原则
一、选用和设计培养基的原则和方法（一）配制培养基的4个原则1.目的明确培养不同的微生物必须采用不同的培养条件；培养目的不同，原料的选择和配比不同；例如枯草芽孢杆菌：一般培养：肉汤培养基或LB培养基；自然转化：基础培养基；观察芽孢：生孢子培养基；产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基；根据不同的工作目的，微生物不同的营养需要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来配制最佳的培养基。
2.营养协调微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计培养基时的重要参考依据。
微生物细胞内各种成分间有一较稳定的比例。
在大多数化能异养菌的培养基中，各营养要素间在量上的比例大体符合以下十倍序列的递减规律：要素：H2O＞C源+能源＞N 源＞P、S＞K、Mg＞生长因子含量：(～10-1) (～10-2) (～10-3) (～10-4) (～10-5) (～10-6)A.选择适宜的营养物质,实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；实验室一般培养：普通常用培养基；遗传研究：成分清楚的合成培养基；生理、代谢研究：选用相应的培养基配方；B.营养物质浓度及配比合适营养物质的浓度适宜, 营养物质之间的配比适宜；高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀菌作用。
培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累，其中碳氮比（C／N）的影响较大。
真菌需C／N比较高的培养基；（素食）细菌（动物病原菌）需C／N比较低的培养基；（荤食）发酵生产谷氨酸时：碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
NH3 ＞ CO(NH2)2 ＞ NH4NO3 ＞ (NH4)2CO3 ＞ (NH4)2SO4含氮量（82％）（46％）（35％）（29.2％）（21％）这说明在同样重量时，在以上各氮源中含氮量以氨为最高，尿素次之，硝酸铵和碳酸铵更次之，而硫酸铵则最低。
微生物的选择培养和计数-高中生物人教版选择性必修3
➢ 测细菌数：一般用104、105、106稀释液
➢ 测放线菌：一般用103、104、105稀释液
➢ 测真菌数：一般用102、103、104稀释液
思N考o
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在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数 在30～300的平板进行计数？
选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平 板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数
四、实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.培养基的制备
①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。
利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
②配方：
葡萄糖
尿素
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O
琼脂
10.0g 1.0g 1.4g 2.1g 0.2g 15.0g
1、方法 对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基 上。
2、方法步骤 ①铲取图样，将样品装入纸袋中
二、微生物的选择培养
2、方法步骤
②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇 匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等 比稀释。
1 mL
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。
பைடு நூலகம்
No 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前
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都需要灭菌。 操作完成后，一定要洗手。
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四、实践：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
2.实验设计
高中生物第1章发酵工程第2节第2课时微生物的选择培养和计数教案选择性3
第2课时微生物的选择培养和计数课标内容要求核心素养对接1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。
2．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。
1。
生命观念：各类微生物都能适应其生活环境。
2．科学思维:根据微生物的代谢类型配制选择培养基。
3．科学探究:讨论土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的方法。
一、选择培养基1．水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在70～80 ℃的高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
2．选择培养基：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
二、微生物的选择培养1．分解尿素的细菌的分离分解尿素的细菌能合成脲酶,该酶能催化尿素分解产生NH3，以此作为细菌生长的氮源.要将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方设计思路是培养基中除含有细菌必需的碳源、水、无机盐外，只含有尿素一种氮源.2．稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上,操作过程如下：采集土样→将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀.取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释→取0。
1 mL菌液,滴加到培养基表面→将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中→将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布→用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
涂布时可转动培养皿，使涂布均匀→涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30~37 ℃的恒温箱中培养1～2 d。
三、微生物的数量测定1．稀释涂布平板法（1)原理:当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。
微生物学实验常用培养基的
牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。
121℃灭菌30min。
7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）113℃灭菌30min。
8、半固体肉膏蛋白胨培养基121℃灭菌20min。
9、合成培养基加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。
121℃灭菌20min。
10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。
用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。
微生物培养基
线虫：如蛔虫、钩虫等
培养目的
微生物生长：提供微生物生长所需的营养物质
01
微生物鉴定：鉴定微生物的种类和特性
03
微生物分离：分离特定微生物，如细菌、真菌等
02
微生物保存：保存微生物，以便后续研究或应用
04
培养条件
营养成分：选择适合微生物生长的营养成分
1
酸碱度：选择适合微生物生长的酸碱度
2
温度：选择适合微生物生长的温度
按照用途分类：选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基
按照培养方式分类：固体培养基、液体培养基、半固体培养基
按照微生物种类分类：细菌培养基、真菌培养基、病毒培养基
01
03
02
04
培养基的类型
固体培养基
B
D
A
C
特点：含有凝固剂，使培养基呈固体状态
成分：包括营养物质、凝固剂、指示剂等
应用：常用于微生物的分离、鉴定和计数
优点：便于观察和计数，可长期保存
液体培养基
1
特点：液体状态，易于混合和分散
2
应用：微生物培养、发酵、生物制药等领域
3
成分：营养物质、缓冲剂、pH调节剂等
4
优点：操作简便，易于控制微生物生长条件
5
缺点：易受污染，需要严格无菌操作
6
实例：LB培养基、M9培养基等
半固体培养基
特点：半固体状态，既有液体的流动性，又有固体的支撑性
避光保存
避光保存可以防止微生物培养基中的成分发生光化学反应，影响实验结果。
04
避光保存可以延长微生物培养基的保质期，降低成本。
03
避光保存可以防止微生物培养基中的成分受到光照的影响，保持其稳定性。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同，因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基（Nutrient Broth）营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，高压灭菌，分装，即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基（MacConkey Agar）大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基，用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为：蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基（Sabouraud Dextrose Agar）Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为：脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基（Vogel-Johnson Agar）VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属（如克雷伯菌）的培养基。
其配方为：葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸，冷却至55-60°C，加入胆盐酯高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
微生物培养基的选择
中国蓝琼脂平板用途：用于肠道菌的培养，分离和鉴定。
成分中通常含有玫瑰红酸，对革兰氏阳性菌有一定。
的抑制作用。
弱选择培养基。
判断：大肠埃希氏菌生长良好，呈蓝色菌落。
沙门氏菌生长良好，呈无色菌落。
志贺氏菌生长良好，呈无色菌落。
金黄色葡萄球菌不生长或呈抑制性生长。
哥伦比亚血琼脂平板用途：用于培养和分离不同代谢类型微生物，促进苛氧微生物的生长，各种样本均可使用。
判断：大肠杆菌菌落灰白色，有时呈黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环。
葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用。
链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓链球菌产生β-溶血环。
脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带蓝灰色，不溶血。
肺炎链球菌菌落圆形，脐窝状，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环。
产气荚膜梭菌菌落呈灰白色，圆形，多数都是菌株有双层溶血环。
B群链球菌显色平板用途：除基础培养基外还添加了特异性的酶底物，经B群链球菌的酶解作用释放出显色原从而使细菌呈现出不同的颜色，以此进行培养，分离，鉴定。
判断：淡红色到深红色是B群链球菌。
蓝色，绿色，无色或被抑制是其他细菌。
MH琼脂平板用途：用于细菌的抗生素敏感试验。
MH琼脂平板是WHO推荐的适用于K-B法测定细菌对抗菌药物敏感性的培养基，。
判断：对于同种细菌不同药敏纸片，抑菌环越大，表示抗生素对此细菌抑制能力越强。
反之越弱。
巧克力色血琼脂平板用途：除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，并根据具体的要求经过特殊处理使成巧克力色，补加嗜血杆菌生长所须的各种生长因子，以适应营养要求苛刻的微生物的特殊营养要求。
判断：流感嗜血杆菌菌落微小，无色、透明、光滑整齐、似露滴状，48小时后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离到的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心凹陷；淋球菌菌落较小，菌落呈灰白色。
《培养基对微生物的选择作用》 讲义
《培养基对微生物的选择作用》讲义在微生物学的广袤世界里，培养基就如同是微生物生长的“舞台”。
这个舞台不仅为微生物提供了生存和繁衍的环境，还发挥着至关重要的选择作用。
就像是一场精心策划的选秀比赛，只有那些适应培养基条件的微生物才能在这个舞台上大放异彩，而不适应的则只能黯然离场。
一、培养基的基本概念要理解培养基对微生物的选择作用，首先得清楚什么是培养基。
培养基，简单来说，就是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
它就像是为微生物准备的“营养餐”，包含了微生物生长所需的各种营养成分，如水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
不同类型的微生物对营养的需求各不相同，因此培养基的成分和配方也千差万别。
比如，细菌通常需要较为丰富的营养，而真菌则可能对某些特定的碳源有特殊的需求。
二、培养基的分类为了满足不同微生物的生长需求以及实验研究的目的，培养基有着多种分类方式。
1、按物理状态分（1）液体培养基：营养物质均匀分布在溶液中，微生物能充分接触营养，生长速度快，但不便于观察和分离单个菌落。
（2）固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂），使其成为固体状态。
固体培养基常用于微生物的分离、纯化和鉴定，能形成肉眼可见的菌落。
（3）半固体培养基：凝固剂含量较低，呈半固体状态，可用于观察微生物的运动、保存菌种等。
2、按化学成分分（1）天然培养基：利用动植物组织或微生物的提取物制成，成分不明确但营养丰富，常用于工业生产。
（2）合成培养基：成分明确且精确，常用于科学研究，能准确控制实验条件。
（3）半合成培养基：则是两者的结合，既有天然成分又有合成成分。
3、按用途分（1）基础培养基：含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质。
（2）加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质，以满足对营养要求苛刻的微生物的生长。
（3）选择培养基：通过添加或去除某些成分，使特定的微生物得以生长，而其他微生物受到抑制。
（4）鉴别培养基：根据微生物代谢产物与培养基中特定试剂的反应，产生明显的特征性变化，从而鉴别不同种类的微生物。
微生物培养基的类型及配制
微生物培养基的类型及配制微生物培养基是供给微生物生长发育所需营养物质的天然或人造的混合培养基质的总称。
它是一类具有特定性质和功能的营养环境，其作用是刺激微生物快速生长繁殖，产生一些代谢产物以及使微生物的遗传特性得以表达。
微生物培养基的种类繁多，根据其来源、成分及用途可分为多种类型。
一、按培养基来源分1、天然培养基：由动物、植物或微生物组织分离而来的培养基。
如分离土壤微生物的培养基中就使用了牛肉膏、蛋白胨等天然物质。
2、合成培养基：根据微生物的代谢规律，用已知的化学物质配制而成的培养基。
3、半合成培养基：在天然物质的基础上，根据微生物的代谢规律，加入或不加一些已知的化学物质配制而成的培养基。
二、按培养基的物理状态分1、固体培养基：在培养基中加入凝固剂琼脂而成为凝固状态的培养基，多用于菌种分离、鉴定、保藏等。
2、液体培养基：不添加琼脂等凝固剂的培养基，一般用于工业生产。
三、按培养目的分1、选择培养基：根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来，如鉴别培养基。
2、鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同菌种的分析方法。
鉴别不同种类的微生物，是利用不同微生物间某些化学或生理上的特征进行鉴别。
常用的鉴别培养基有伊红美蓝平板（EMB）、SS琼脂平板等。
四、按用途分1、菌种保存用培养基：这种培养基的成分非常简单，仅仅能维持生命，所以也称为维持培养基。
它可用来保存菌种。
2、菌种扩大用培养基：这种培养基既要满足菌种的营养需求又要满足产量需求，所以也称为扩大培养基。
3、发酵用培养基：发酵用培养基是供菌种发酵用，它既要考虑菌种的营养需求又要考虑菌种对氧气的需求，所以也称为发酵培养基或摇瓶培养基。
发酵用培养基由于加入了比较多的营养物质，往往粘度比较大，在摇瓶的时候不容易混匀。
为了解决这个问题往往需要加入一定量的缓凝剂（例如硅藻土）。
【课后集训】第1章 发酵工程 第2节 2微生物的选择培养和计数(含答案详解)
2019版生物选择性必修3 课后集训第1章发酵工程第2节 2微生物的选择培养和计数题组一微生物的选择培养1．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。
利用这样培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。
为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()A．伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基D．含青霉素培养基、伊红美蓝培养基2．某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。
以下说法错误的是()A．土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶B．能分解尿素的细菌也能以尿素的分解产物CO2作为碳源C．为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择尿素作为唯一氮源D．筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4的作用是提供无机盐和维持pH题组二微生物的数量测定方法3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是()A．菌落中的细菌数目是固定的B．平板上的一个菌落就是一个细菌C．通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同D．平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌4．下列关于统计统计数目的方法的叙述，不正确的是()A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值为统计结果题组三能分解尿素的细菌的分离与计数5．培养基是微生物生长、分离、鉴别的营养基础，下列有关微生物培养及培养基的描述错误的是()A．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落B．不论何种培养基，在各成分溶化后都要进行灭菌操作，灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌C．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离D．微生物培养基的配方中必须包含的成分有碳源、氮源、水、无机盐、特殊营养物质及琼脂6．某生物兴趣小组欲配制培养基从土壤中选择能分解尿素的细菌，下列相关叙述正确的是()A．配制以尿素为唯一氮源的液体培养基可用于选择和观察尿素分解菌B．实验中设置对照，同时培养一个空白培养基可检验培养基灭菌是否彻底C．为获取1×102倍稀释的稀释液可将90 mL无菌水加入10 g土壤样品中D．实验中若需要统计能尿素分解菌的菌落数目，接种时只能用平板划线法7．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是() A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取1×104、1×105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上C．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数D．将培养皿倒置，37 ℃恒温培养24～48小时8．下列有关土壤中能分解尿素的细菌的分离和计数的实验操作，错误的是()A．取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌B．测定土壤中细菌的数量一般选用1×102、1×103、1×104倍的稀释液进行平板培养C．鉴定能分解尿素的细菌，利用了尿素分解成氨，从而使pH升高的原理D．用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性9．如图是从土壤中筛选能产脲酶的细菌的过程，下列叙述不正确的是()A．能产生脲酶的细菌可以分解利用尿素B．图中逐级稀释的程度会直接影响细菌培养基上的菌落数量C．培养基中可添加KH2PO4、Na2HPO4以提供无机盐和作为缓冲剂D．培养基①应以尿素为唯一氮源，培养基②的作用是纯化培养能产脲酶的细菌10．下图是研究人员从红棕壤中筛选能高效分解尿素的细菌的过程示意图，有关叙述错误的是()A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH值后进行高压蒸汽灭菌B．步骤③纯化能分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落C．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素D．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力11．三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液，培养36小时后，计算菌落数，结果如下表，下列选项正确的是()培养皿培养基成分菌落数/个Ⅰ琼脂、葡萄糖35Ⅱ琼脂、葡萄糖、维生素250Ⅲ琼脂、维生素0A．该实验采用的是液体培养基B．该实验采用平板划线法接种C．Ⅰ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长不需要维生素D．Ⅱ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长需要碳源12．尿素是一种重要的农业氮肥，但是尿素不能被农作物直接吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。
微生物培养技术
微生物培养技术
微生物培养技术是一种用来分离、增殖、培养、监测微生物的技术。
它利用微生物的自然生长和繁殖能力，在合适的培养基和环境条件下，增
殖微生物并获得微生物的相关科学信息，如细菌菌种的分离等。
常见的微生物培养技术：
1.培养基选择。
培养基的选择非常重要，以便使微生物获得最佳的生
长和繁殖环境。
特定的培养基能够有效的激发微生物的生长，没有有害的
病原体出现。
2.培养基的灭菌。
为了保护微生物培养系统，培养基必须经过高温灭
菌处理，以确保没有有害的微生物污染现场。
3.催化剂添加。
催化剂是一种有机物，可以促进微生物的生长和繁殖，从而提高微生物的活性。
4.气体添加。
气体是微生物生长过程中不可或缺的组成部分，它可以
帮助微生物保持正常的运作，调节它们的生理活性。
微生物培养技术正在大量应用于生物技术和医药研究领域，是研究微
生物的重要工具。
通过这种技术，可以有效的分离出各种微生物菌株，并
获得相关科学信息，为研究微生物及其生物功能奠定基础。
微生物检验学之培养基
培养基培养基是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。
适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、生化特性，是病原菌分离鉴定的重要环节和必不可少的手段。
一、培养基的组成成分二、培养基种类三、分离培养基的选择一、培养基的组成成分（一）营养物质细菌需要的基础营养物质应含有氮源、碳源、无机盐类和生长因子等，常用的营养物质如下：1.蛋白胨提供氮源。
是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而成。
含胨、多肽和多种氨基酸，为大多数细菌生长所利用，尤其是含大量色氨酸的胰蛋白胨，更适于测靛基质用的蛋白胨。
蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高温而凝固，并对两性电解质有缓冲作用。
但吸水性强，应注意干燥密封保存。
2.肉浸液是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。
其中含有可溶性含氮浸出物（肌酸、黄嘌呤、腺嘌呤、次黄嘌呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐类等）。
还有一些生长因子。
肉浸液提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要，因此在制备培养基时应再加入1%～2%的蛋白胨和0.5%氯化钠。
3.牛肉膏由肉浸液经长时间加热浓缩而制成。
糖类在加热过程中被破坏，所以其营养价值低于肉浸液，但因无糖可用作肠道杆菌鉴别培养基的基础成分。
由于使用方便，常用于制备培养基。
4.糖类、醇类提供碳源和能源。
制备培养基所用的糖类、醇类有多种，常用的糖类有单糖（葡萄糖、阿拉伯糖等）、双糖（乳糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、菊糖等）；常用的醇类有甘露醇、卫茅醇等。
除葡萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的基本成分外，其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反应。
6.无机盐类提供细菌生长的各种元素，如：钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。
用于制备培养基的无机盐类有多种，其中最常用的有氯化钠和磷酸盐，前者对维持酶的活性、调节菌体内外的渗透压非常重要，后者是细菌良好的磷源，并在培养基中具有缓冲作用。
微生物培养基的选择依据
微生物培养基的选择依据
微生物培养基的选择依据一般包括以下几点：
1. 细菌菌种的特性：不同菌株对培养基的需求不同，如有的菌株需要较高的营养因子，有的菌株则比较简单，对营养需求不高。
2. 培养的环境因素：包括温度、pH值、氧气要求、湿度等，不同菌株对这些环境因素的要求也不同，因此在选择培养基时要考虑菌株的生长环境。
3. 实验目的：根据实验的目的选择合适的培养基，如选择含有特定成分的培养基，可用于特定菌株的筛选。
4. 经济性：不同的培养基成本不同，要根据实验需要选择经济适用的培养基，并尽可能减少废弃。
一般常用的培养基有：LB培养基、MRS培养基、TBX培养基等。
微生物常用培养基介绍
微生物常用培养基介绍微生物培养基是为了满足微生物生长和繁殖的营养和生理需求而制备的一种复杂的化学和物理组合。
培养基的选择是微生物实验室工作中非常重要的一步，因为不同微生物对于营养物质的需求是不同的。
下面将介绍几种常用的微生物培养基。
1.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种基础的培养基，用于培养常见的微生物。
它主要由肉汤、胰蛋白胨、琼脂、盐类等组成。
营养琼脂培养基可以满足绝大多数微生物的生长需求，是最常见的培养基之一2.马尿培养基马尿培养基主要用于分离和鉴定大肠杆菌等大肠埃希菌科细菌。
它由酵素消化的马肉精制的冻干物和一些特殊的肥料和盐类组成。
马尿培养基中含有氧和无氧生长所需的营养物质，因此非常适合于肠道细菌的生长。
3.血琼脂培养基血琼脂培养基是一种含有血液的琼脂培养基。
它可以促进细菌和真菌的生长，并可以区分不同微生物的产生溶解酶的能力。
血琼脂培养基常用于耐药性的细菌和分离和鉴定病原微生物。
4.马尿西杰林培养基马尿西杰林培养基是一种用于分离和鉴定大肠杆菌的选择性培养基。
它主要由马尿、氯化钠、柠檬酸钠、琼脂、培养基和蔗糖组成。
马尿西杰林培养基通过选择性抑制其他细菌的生长，提供了大肠杆菌生长的有利条件。
5.大肠埃希菌选择性琼脂培养基大肠埃希菌选择性琼脂培养基是一种含有红松籽酸、氯化碱、鹽、柠檬酸钠、亚硝酸钠等抑制非大肠杆菌的选择性琼脂培养基。
它主要用于大肠埃希菌的分离和鉴定。
6.牛肉浸提液琼脂培养基牛肉浸提液琼脂培养基是一种富含氨基酸和其他有机营养物质的培养基。
它主要用于快速生长和温和微生物的培养。
以上是几种常用的微生物培养基介绍，每种培养基都有其特殊的适应细菌生长和分离鉴定的功能。
在微生物实验室中，选择适当的培养基对于微生物的研究和应用具有重要的意义。
同时，在培养过程中还应注意操作规范，采取严格的无菌措施，以保证实验结果的准确性。
微生物发酵制药技术基础—培养基的选择
发酵培养基选择
提供合成微生物细胞和发酵产物的基本成分 利于减少培养基原料的单耗 利于提高培养基和产物的浓度以提高生产能力 利于提高产物合成的速度，缩短发酵周期 减少副产物的形成便于分离纯化 原料低廉，质量稳定，取材容易 原料减少对通气搅拌的影响，提高氧利用率，降能耗 利于产品分离纯化，减少产生三废物质
一次升温液化法过程如下：用纯碱溶液将30％～35％淀粉乳（13 ～14°Bé）调整pH至6.2～6.4，然后加入Ca2+和α-淀粉酶，搅匀 后泵入密闭的液化锅内，加热到88～90℃，保温15～20min。液 化完毕，用碘液检查，合格后，即升温至100℃，加热使酶失活 。α-淀粉酶用量为8～10U/g淀粉。反应液中Ca2+浓度为 0.01mol/L。
0.8％，在70℃及酸性条件下搅拌后过滤。 6.过滤除杂
酸解法
评价
优点：工艺简单，水解时间短，生产效率高，设备周 转快。 缺点： •要求设备耐腐蚀、耐高温和耐压。 •副产物多，影响糖液纯度，一般DE值只有90％左右。 •对淀粉原料要求严格，不能用粗淀粉，只能用纯度较 高的精制淀粉。
DE值
DE值：dextrose equivalent value （葡萄糖当量值）
根据微生物的特点选择培养基
用于大规模培养的微生物主要有细菌、酵母菌、 霉菌和放线菌等四大类。它们对营养物质的要 求不尽相同，要依据微生物的不同特性，来考 虑培养基的组成。
液体和固体培养基的选择
• 发酵工业中大多采用液体培养基培养种子和进行发 酵，并根据微生物对氧的需求，分别作静止或通风 培养。
• 固体培养基则常用于微生物菌种的保藏、分离、菌 落特征鉴定、活细胞数测定等方面。
• 选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需 要菌的生长，而促进某种需要菌的生长。
生物培养基
微生物培养基一、培养基的定义培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
广义上说，凡是支持微生物生长和繁殖的介质或材料均可作为微生物的培养基。
二、培养基配制的原则1.营养物质应满足微生物的需要2.营养物的浓度及配比应恰当3.物理化学条件适宜4.根据培养的目的三、培养基的类型1．按纯度分类（1）合成培养基优点是：成分已知、精确、重复性好。
但价格较贵，培养的微生物生长较慢。
适用于实验室进行微生物生理、遗传育种及高产菌种性能的研究。
（2）天然培养基优点是配制方便、经济、营养丰富，但是，它的化学成分不清楚或不稳定(受产地、品种、保存加工方法等因素影响)。
常见的天然培养基成分有：麦芽汁、肉浸汁、鱼粉、麸皮、玉米粉、花生饼粉、玉米浆及马铃薯等。
实验室常用牛肉膏、蛋白胨及酵母膏等。
（3）半合成培养基由部分天然材料和部分已知的纯化学药品组成。
特点是配制方便，成本低，微生物生长良好。
发酵生产和实验室中应用的大多数培养基都属于半合成培养基。
2.按状态分类（1）固体培养基固体培养基一般是指液体培养基中加入一定量的凝固剂配制而成的固体状态的培养基。
此外，固体营养物(如麸皮、米糠、木屑、土豆块、玉米粉)与水和盐等混合构成的疏松状培养基也属于固体培养基。
固体培养基在科学研究和生产实践中具有很多用途，例如它可用于菌种分离、鉴定、菌落计数、检测杂菌、选种、育种、菌种保藏、抗生素等生物活性物质的效价测定及获取孢子等。
在发酵工业中常用固体培养基进行固体发酵（2）液体培养基各营养成分按一定比例配制而成的水溶液或液体状态的培养基称为液体培养基。
工业上绝大多数发酵都采用液体培养基。
实验室中微生物的生理、代谢研究和获取大量菌体是也常利用液体培养基。
（3）半固体培养基半固体培养基是指琼脂加入量为0.2-0.5%而配制的固体状态的培养基。
半固体培养基有许多特殊的用途，如可以通过穿刺培养观察细菌的运动能力，进行厌氧菌的培养及菌种保藏等。
1.2 微生物的培养技术及应用-知识点填空
第2节微生物的培养技术及应用（一）培养基的配制1．培养基概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质。
2.培养基作用：用以、、、微生物或积累其代谢物。
（1）选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。
用途：。
青霉素能抑制生长，对无作用不添加氮源培养基可用来培养微生物。
添加培养基用来培养微生物。
（2）鉴别培养基：加入培养基，鉴别的细菌。
加入，鉴别分解菌。
4.怎样将液体培养基制成固体培养基？。
6.菌落指：7.培养基的基本成分：各种培养基一般都含有、、和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对、特殊营养物质以及的需求。
自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于。
一般情况下添加无机碳源培养基用来培养微生物；添加有机碳源培养基用来培养微生物。
主要提供碳源的是，主要提供氮源的是。
11.含C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的、、。
15.无机盐可以调节、维持。
16.在提供主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对、质以及的需求。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加；②培养霉菌时，需要将培养基调至；③培养细菌时，需要将培养基调至。
④培养厌氧微生物时，需要提供的条件。
17.是否所有培养基中都必须添加碳源、氮源？。
（二）无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止。
3.无菌技术主要包括和。
4.无菌技术工作两个方面(1)对操作的空间、操作者的和进行和。
(2)对用于微生物培养的、和培养基等进行灭菌。
5.做好消毒灭菌工作后，要注意：实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与接触。
6.为避免周围环境中微生物的污染，应如何操作？。
7.无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外。
8.消毒:(1)概念：是指使用较为的、或等方法杀死物体表面或内部微生物。
(2)方法:煮沸消毒法：；巴氏消毒法，；化学药物消毒：用擦拭双手、用消毒水源等；9.灭菌:（1）概念：是指使用的方法杀死物所有的微生物，包括和。
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中国蓝琼脂平板
用途：用于肠道菌的培养，分离和鉴定。
成分中通常含有玫瑰红酸，对革兰氏阳性菌有一定。
的抑制作用。
弱选择培养基。
判断：大肠埃希氏菌生长良好，呈蓝色菌落。
沙门氏菌生长良好，呈无色菌落。
志贺氏菌生长良好，呈无色菌落。
金黄色葡萄球菌不生长或呈抑制性生长。
哥伦比亚血琼脂平板
用途：用于培养和分离不同代谢类型微生物，促进苛氧微生物的生长，各种样本均可使用。
判断：大肠杆菌菌落灰白色，有时呈黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环。
葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和
腐生葡萄球菌无溶血作用。
链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓链球菌
产生β-溶血环。
脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带蓝灰色，不溶血。
肺炎链球菌菌落圆形，脐窝状，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环。
产气荚膜梭菌菌落呈灰白色，圆形，多数都是菌株有双层溶血环。
B群链球菌显色平板
用途：除基础培养基外还添加了特异性的酶底物，经B群链球菌的酶解作用释放出显色原从
而使细菌呈现出不同的颜色，以此进行培养，分离，鉴定。
判断：淡红色到深红色是B群链球菌。
蓝色，绿色，无色或被抑制是其他细菌。
MH琼脂平板
用途：用于细菌的抗生素敏感试验。
MH琼脂平板是WHO推荐的适用于K-B法测定细菌对
抗菌药物敏感性的培养基，。
判断：对于同种细菌不同药敏纸片，抑菌环越大，表示抗生素对此细菌抑制能力越强。
反之
越弱。
巧克力色血琼脂平板
用途：除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，并根据具体的要求经过
特殊处理使成巧克力色，补加嗜血杆菌生长所须的各种生长因子，以适应营养要求苛刻的微
生物的特殊营养要求。
判断：流感嗜血杆菌菌落微小，无色、透明、光滑整齐、似露滴状，48小时后达1.5mm，
从血液或脑脊液中分离到的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心凹陷；淋球菌
菌落较小，菌落呈灰白色。
麦康凯平板
用途：胨提供碳氮源，维生素，生长因子。
牛胆盐可一直革兰阳性菌的生长。
氯化钠维持渗透压。
琼脂是培养基的凝固剂。
乳糖为可发酵的糖类。
中性红是PH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。
判断：大肠埃希菌生长良好，菌落呈粉红色，周围有胆盐沉淀圈。
弗氏柠檬酸杆菌生长良好，菌落呈粉红色，周围有胆盐沉淀圈。
鼠伤寒沙门氏菌，生长良好，无色半透明。
SS琼脂
有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。
因选择性过强，可影响检出率，所以，使用时最好加一种弱选择平板以配对互补。
碱性琼脂或TCBS琼脂
用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。
（七）血液增菌培养基
用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。