霉菌鉴定结果
苹果霉菌培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 探究苹果表面霉菌的生长情况。
2. 学习霉菌的培养、分离和纯化方法。
3. 观察霉菌的形态特征，并进行初步鉴定。
二、实验材料与试剂1. 实验材料：- 新鲜苹果若干个- 无菌水- 无菌棉签- 灭菌的培养基（如沙堡琼脂培养基）- 灭菌的接种环- 灭菌的玻璃器皿（如培养皿、试管等）2. 实验试剂：- 酒精- 碘酒- 水合氯醛- 水解乳糖三、实验方法与步骤1. 样品处理：- 取新鲜苹果，用无菌水清洗表面，用无菌棉签擦拭表面，收集擦拭液。
- 将擦拭液进行梯度稀释，以便后续分离和纯化。
2. 霉菌分离：- 将稀释后的样品分别接种于沙堡琼脂培养基上。
- 将接种后的培养基置于恒温培养箱中，37℃培养2-3天。
3. 霉菌纯化：- 观察培养基上生长的菌落，选取单菌落进行纯化。
- 使用接种环挑取单菌落，接种于新的沙堡琼脂培养基上。
- 重复上述步骤，直至获得纯化的霉菌菌株。
4. 霉菌形态特征观察：- 将纯化的霉菌菌株接种于沙堡琼脂培养基上，37℃培养2-3天。
- 观察菌落形态，包括菌落大小、颜色、边缘、表面等特征。
5. 霉菌鉴定：- 对纯化的霉菌菌株进行形态学观察，包括菌丝形态、孢子形态等。
- 根据形态特征，对霉菌进行初步鉴定。
四、实验结果与分析1. 霉菌分离：- 在沙堡琼脂培养基上，观察到多种形态的菌落，表明苹果表面存在多种霉菌。
2. 霉菌纯化：- 通过纯化操作，获得纯化的霉菌菌株。
3. 霉菌形态特征观察：- 纯化的霉菌菌株在沙堡琼脂培养基上形成圆形、表面光滑、边缘整齐的菌落。
- 菌丝呈白色，有横隔，无色或略带黄色。
- 孢子呈椭圆形，无色。
4. 霉菌鉴定：- 根据形态特征，初步鉴定纯化的霉菌菌株为青霉属。
五、实验结论1. 苹果表面存在多种霉菌，其中青霉属较为常见。
2. 通过培养、分离和纯化操作，可以有效地从苹果表面分离出霉菌。
3. 霉菌的形态特征可以用于初步鉴定霉菌种类。
六、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，避免污染。
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
六霉菌的形态观察与鉴定
4. 操作程序
载玻片培养观察法 1.无菌培养皿的准备
在一洁净干燥的培养皿内，放一铝丝制载玻片架，
再放人分别用纸包好的洁净载玻片1-2片及盖玻片 1-2片，然后盖上皿盖，包扎后灭菌备用。
2.霉菌载玻片培养物的制备 （ 1 ）取约 3ml 经灭菌后的察氏培养基试管，标上
青(毛、根或曲)霉字样。
（2）以无菌操作方式取出无菌培养皿中的载玻片 和盖玻片，打开备用。 （3）取一标好字样的试管培养基，于酒精灯上以 微火融化。
在幼小而活力旺盛时，菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶 囊，一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗)。最 上层小梗瓶状，顶端着生成串的球形分生孢子。以上几部分结构合称为“孢子穗”。 孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色。 ------ 曲霉孢子穗的形态，包括分生孢子梗的长度、顶囊的形状、小梗着生是单轮还 是双轮，分生孢子的形状、大小、表面结构及颜色等，都是菌种鉴定的依据。
Black Mold, Aspergillus variecolor. (SEM x2,315)
曲霉Aspergillus 的分生孢子
毛霉
1.形态特征：菌丝发达，白 色无隔多核。 2.繁殖：孢囊孢子、厚垣孢 子、接合孢子。 3.应用：腐乳：蛋白酶
Mucor sp.
毛霉属（Mucor）：孢囊梗直接从菌丝上长出，孢
四 思考题
青霉、曲霉、根霉、毛霉的形态有哪些异同？ 比较显微镜下放线菌和霉菌的细胞形态和菌落的特 征？
接合孢子
Bread Mold Spores on Fungal Fruiting Structure, Rhizopus sp. (SEM x2,990)
2. 培养基: 马铃薯琼脂平板培养物.
霉菌的形态观察
图3 青霉菌观察结果示意图
图4 毛霉菌观察结果示意图
2. 表格总结：
菌种
形态特征
根霉
菌丝无隔的单细胞，生长迅速。有匍匐菌丝和假根，假根着生处有直立的向上孢子囊梗，其顶端膨大成孢子束（囊），孢子束（囊）底部有半球形囊轴。
毛霉
菌丝无隔、多核，无假根或匍匐菌丝，分枝少或不分枝。
曲霉菌丝有隔膜，为多细胞霉菌。在幼小而活力旺盛时，菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶囊，一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗)。最上层小梗瓶状，顶端着生成串的球形分生孢子。以上几部分结构合称为"孢子穗"。
孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色。这些都是菌种鉴定的依据。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。曲霉孢子穗的形态，包括分生孢子梗的长度、顶囊的形状、小梗着生是单轮还是双轮，分生孢子的形状、大小、表面结构及颜色等，都是菌种鉴定的依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。
毛霉是接合菌亚门接合菌纲毛霉目毛霉科真菌中的一个大属。以孢囊孢子和接合孢子繁殖。菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。不产生定形菌落。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，内有形状各异的囊轴，但无囊托。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。有性生殖借异宗配合或同宗配合，形成一个接合孢子。
2.培养基及装置的灭菌
a)灭菌准备
制作八个平皿，在每个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和四块盖玻片，盖上皿盖、再与两个空平皿一起用牛皮纸包好；在100mL锥形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取10mL移液管两支用牛皮纸包好。
霉菌与其他微生物的培养与检测实验报告
霉菌与其他微生物的培养与检测实验报告
实验目的：掌握霉菌与其他微生物的培养与检测方法，了解其特性与影响因素。
实验步骤：
1. 准备培养基和相应的培养器材。
2. 采集不同环境中的样品，使用无菌技术将其分离到不同的培养基上。
3. 将培养基与分离的样品混匀后，倒入培养皿中。
4. 标记培养皿，放入恰当的条件下培养，如适宜的温度和湿度。
5. 在培养过程中观察并记录微生物的生长情况，包括菌落的形态、颜色等。
6. 根据观察和记录结果，进行初步鉴定或进一步筛选。
7. 对不同微生物进行镜检或其他特定检测方法，如PCR等。
实验结果：
根据观察和记录，可以得到不同微生物在不同培养基上的生长情况和特征。
如霉菌的菌落呈现出不规则的形状和颜色，而细菌则呈现出均匀的圆形或长条形的菌落。
此外，对于分离菌落较多的培养皿，可以进一步进行筛选和鉴定，确定其中的主要微生物种类。
实验结论：
通过这次实验，我们可以得到多种不同微生物的分离培养，了解其特性和影响因素，可以为后续的微生物鉴定和研究提供基本数据和参考依据。
同时，我们还可
以通过这些基本实验方法，对环境中的微生物进行可行的检测和分析。
国标食品微生物学检验 霉菌酵母菌计数
1、检验食品中的霉菌、酵母菌有何意义？试举例食品中产毒素的霉菌、酵母菌？酵母菌是人类较早应用于制作面包、酿酒等的一类微生物。
近年来的应用越来越广，酵母菌体可供食用和作饲料，并可提取核酸、辅酶A、细胞色素C、凝血质等贵重药品；利用其代谢产物，制取维生素、有机酸和酶制剂等；同时，也可用于石油发酵和石油脱蜡等；霉菌除用于传统的酿酒、制酱和做其他发酵食品外，近年来在发酵工业中广泛用来生产酒精、柠檬酸、青霉素、灰黄霉素、赤霉素、淀粉酶、发酵饲料等。
腐生型酵母能使食物、纺织品和其他原料腐败变质；少数嗜高渗压酵母菌如鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜、果酱败坏；有的是发酵工业的污染菌，它们消耗酒精，降低产量或产生不良气味，影响产品质量。
面包内含有淀粉，容易滋生霉菌，霉菌会分解淀粉，产生有毒黄曲霉素，是强致癌物质。
根霉经常出现在淀粉质食品上，引起食品霉烂变质，有些曲霉菌能产生对人体有害的物质，如黄曲霉毒素。
2、如何在菌落形态上鉴定霉菌、细菌、酵母菌？细菌：小而突起，大而平坦，透明或半透明，易挑取，粘稠，有臭味，质地均匀菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致，圆形菌落，颜色有白色、黄色等。
放线菌：正面有白点而且正背面颜色不同，干燥，小而紧密，与培养基结合牢固（难以挑取），不透明，泥香味，菌落背面有同心圆形纹路。
这点可以和细菌菌落区分。
酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。
霉菌：有菌丝，干燥，大而疏松，有霉味而且透明，菌落大型，肉眼可见许多毛状物，如绒毛状或棉絮状，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。
菌落最初往往是浅色或白色，当菌落上长出各种颜色的孢子后，由于孢子有不同形状、构造和色素，菌落表面常出现肉眼可见的不同的结构和色泽，如黄、绿、青、黑、橙等各色。
有的霉菌由于产生的色素能扩散到培养基内，使培养基正面和反面显示出不同颜色，故菌落特征也是鉴定霉菌的主要依据之一。
3、该实验只进行霉菌总数的测定而如何进行霉菌的分离与鉴定？(在土壤中，将10-2、10-3各1ml稀释液接于马丁氏培养基)一、配制培养基（根据试剂瓶上的配比）每个培养皿装15~20ml，有7个培养皿，每组近似配150ml(20*7=140ml取最大范围)；二、取两个100或150ml的三角瓶，其中一个用于装90ml的蒸馏水，使用硅胶塞（用于配样品），另一个用于装50~60ml蒸馏水（五根试管，5*9=45ml）,用报纸包扎；三、包扎枪头（10个），将培养基放置于一个铁笼子，再将枪头和两瓶水放置于另一个铁笼子，进行湿热灭菌。
霉菌及其酵母菌
1、样品的稀释培养
（1）以无菌操作将检样25mL(或25g)放于含
有225mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，振摇30min，
即为1：10稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，
沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌蒸馏水的试管内，
振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，
制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换
用1支1mL灭菌吸管。
（4）根据标准要求或对污染情况的估计，选
择3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的
同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液
于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
及时将15mL～20mL 冷却至46℃的马铃薯-葡 萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转 动平皿使其混合均匀。 待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养 5d，观察并记录。
制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊 呈烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着 生，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。 制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊呈 烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着生 ，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。
二、黄曲霉毒素检测方法
可归纳为化学方法、生物学方法和免疫学方法 三大类。 1、生物学方法 1. 抑菌试验 通过平皿中抑菌圈大小来衡量AFT含量 2. 荧光测定法 将待检菌株接种于培养基中，28—30 ℃培养48 ～72h，产生的毒素便浸入培养基中，在紫外灯光 下照射培养基会呈现出特异的荧光。此法操作简便 对AFT最低检出量为5pg/mL(拷贝数/毫升)。 3. 动物试验 大白鼠试验法、鸡胚试验、鸭雏试验
常见产毒霉菌的形态学鉴定
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
• 1.3 杂色曲霉 呈辐射形,直径(25~)75~125μm;分生孢梗茎直接生自基质 者(45~)150~300(~500)μm×4~8μm,生自气生菌丝者大都 很短,无色或稍带黄色,壁较厚,光滑;顶囊半球形、稍长形或 稍呈椭圆形,直径9~20μm,约3/4的表面可育,小顶囊仅分生 孢梗茎顶部稍加膨大而不明显;产孢结构双层:梗基一般 5~8μm×2~3μm,瓶梗6~8μm×1.5~2.5μm;分生孢子球形 或近球形,绿色,直径(2~)2.5~3.5(~4)μm,壁粗糙,具小刺;壳 细胞球形或近球形,直径11μm~20μm,大量形成时聚成淡黄 色的团块,见图4。杂色曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素。常见产毒霉菌的ຫໍສະໝຸດ 态学鉴定2017年6月2日
一、常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序 检验程序
图1 常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程 序
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
1、曲霉属 本属的产毒真菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构 巢曲霉、赭曲霉、黑曲霉、炭黑曲霉和棒曲霉等。这些真菌可 能产生黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等次生 代谢产物。曲霉属的菌丝体无色透明或呈明亮的颜色 ,但不呈 暗污色 ;可育的分生孢梗茎以大体垂直的方向从特化的厚壁的 足细胞生出 ,光滑或粗糙 ,通常无横隔 ;顶端膨大形成顶囊 ,具不 同形状 ,从其表面形成瓶梗,或先产生梗基 ,再从梗基上形成瓶 梗 ,最后由瓶梗产生分生孢子。分生孢子单胞 ,具不同形状和各 种颜色 ,光滑或具纹饰 ,连接成不分枝的链。由顶囊到分生孢子 链构成不同形状的分生孢子头 ,显现不同颜色。有的种可形成 厚壁的壳细胞 ,形状因种而异 ;有的种则可形成菌核或类菌核结 构 ;还有的种产生有性阶段 ,形成闭囊壳 ,内含子囊和子囊孢子 , 子囊孢子大多透明或具不同颜色、形状和纹饰。
霉菌的分离纯化和鉴定
3、目的菌的充分释放
——使目的菌与样品基质分离：加入活化剂或乳化剂；震荡及超 声波处理，DDC技术；酶法或研磨等组织破碎法；
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三、初筛
设计选择性培养基，稀释涂布，挑选目标菌株。
1、培养基设计原则
合适的营养物质及浓度配比，如不同的C/N源；各无机盐比例适 当；合适的渗透压或水分活度；适宜的pH等；
1、培养基设计原则；
初筛 2、分离方法介绍；
1、获得纯培养； 2、选择目的菌株；
复筛
3、培养条件； 1、霉菌简介；
形态学观察 2、菌落形态；
1、真菌的系统发育谱；
2、微生物快速鉴定技术； 生理生化实验
3、霉菌制片观察；
18SrRNA
分子生物学方法
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一、微生物资源的分布及样本的采集
土壤环境：
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⑵分类
目前，真菌学仍然是微生物学的薄弱环节，还有待进一步深 入研究。在系统学方面，受到公认的分类体系不多。
真菌的类群：
接合菌纲：代表种—毛霉、根霉 子囊菌纲：代表种—酵母菌、羊肚菌 担子菌纲：代表种—鹅膏菌、伞菌 卵菌纲：代表种—异水霉属 半知菌纲：代表种—青霉属、曲霉属、假丝酵母
烧试管口及棉塞； 应斜持试管呈45度角，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养
基表面，造成污染；
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3、霉菌的制片观察
⑴培养方法
①插片法 ②搭片法 ③玻璃纸法 ④印片法 ⑤小室培养
((11))制开平槽板及、接接种种：用无菌打孔器在凝 (子表留(涂接(小块(盖插1培(及稀◆征固将(放培(置中放成◆然察◆以自◆定晾1232323/)))将面气布种滴，2))))直玻入养盖疏可，后孢一养于的在水用后菌注防然反，干插培搭水玻涂长已，泡在平蒸移接片培3片,观且的子无3载盖载封镊用的意载形转用；片养片封璃布度～且～灭用，铺板馏至玻，养上察便平划菌玻玻玻片子此平将玻态有石及后及片纸菌。7易7菌无每有倒水载璃在基。到于板线盖片片片，取微皿载片；印炭dd培的培观前液将产；；的菌个玻置玻，纸已内在菌观培接玻中取上用洁热上玻水痕酸养菌养察期及插生涂平璃于片小将观接，缺体察养种片央出，高净载，片平的复：丝：：准培片抱布板纸上块2含察种 插 少 自 不 基 至 ， ， ， 浸 倍 载 玻 轻 垂移 载 红用体在取备养8平子棒可的，玻菌℃：平人营然同上洞平将将在镜玻片轻直动玻染无生接一：：板,铺平并璃将玻，于板深养生生打内板搭染观片压而片有盖放色便菌长种滴以取倒板使纸玻5璃培载上度长长洞边倒片色察并破微的菌在一下1于镊在后美无0-置m1培片璃纸有.养玻以约状期数缘置法液，坏微盖面微长下和l镜0子培的蓝菌于imn块养铺纸片菌片占态的个；培中并菌加4片2朝微有；取5检，取养洞染操2l58～孢玻基在压剪面8上盖形，养，绘体热上下下加待出°℃。水无基面色作℃7子璃表培平下向放玻态并皿制图的菌的，热观，固角，d洗菌上液用，悬纸面养，一上；一片。。丝特，斜，镊液；，基不小， 注◆意用不油能镜有观气察泡，。并于绘显图微。镜下观察，先 用低倍镜观察菌的立体生长状况，再用 高◆倍印镜片仔法细主观要察用。于观察孢子形态、 排列及其形状等，方法简便。
霉菌检测
化妆品中霉菌和酵母菌的检验2014年8月26日下载(2008-05-22 15:45:21)转载▼标签：杂谈化妆品中霉菌和酵母菌的检验科学2006-3-5 23:47化妆品中霉菌和酵母菌的检验1 概述1.1 化妆品真菌污染的现状真菌在自然界中分布甚广,化妆品的酸碱度,温度湿度和营养适合其生长繁殖。
目前国内外有资料表明，化妆品中真菌污染是相当严重的。
Wilson对眉目化妆品进行微生物检查，结果真菌污染率为12%，从睫毛油里检出茄病镰刀菌，密封的眼用化妆品染菌率为1.5%,在使用过程中急剧增至60%。
所染真菌中曲霉，念珠菌居首。
我国部分省市化妆品中霉菌染菌率也不低，一般为7～62.7%。
有资料报道在100份化妆品中分离到真菌15个（属14种）。
优势菌为酵母属，其次为青霉属和曲子霉属等。
Kuehne等人对233名妇女眉笔眼影霉菌检查，结果有115人（份）检出不同真菌19属（种），计有草酸青霉、黄曲霉、交链孢霉和致病的白色念珠菌和新型隐球菌等。
1.2 化妆品的真菌病1.2.1 念珠菌病：由白色念珠菌（白色假丝酵母）引起的急性、亚急性或慢性真菌病，可侵犯皮肤、粘膜或指甲，也可侵犯内脏或血行播散引起鹅口疮、唇炎、甲沟炎、泛发性皮肤念珠病、念珠性肉芽肿、支气管及肺念珠病、心内膜炎及脑炎和血行播散性念珠菌病等。
1.2.2 青霉病：由少数青霉菌引起呼吸道及肺部感染，使皮肤暴露部位出现湿疹样改变，还可致敏引起鼻炎及哮喘。
1.2.3 新型隐球菌病:由新型隐球酵母及其变种引起的一种深部真菌病,可侵犯肺、骨骼、皮肤淋巴结及内胖器官，主要侵犯中枢神经系统，引起隐球菌性脑膜炎。
1.2.4 曲霉病:由曲霉菌引起,可侵犯皮肤,指甲、外耳道、鼻窦、眼、气管、肺、心膜、子官、脑膜等器官形成炎性肉芽肿。
1.2.5 眼真菌病:真菌性角膜炎可由曲霉菌、镰刀菌、白色念珠菌等真菌引起角膜溃疡，见表3-2-1。
作者年份倒数菌种及株数Fazakas195520烟曲霉5，黄曲霉2，放线菌4，毛霉2，其他7Gingerich1963125曲霉16，白色念珠菌17，镰刀菌12，其他80Palack197133镰刀菌15，头孢霉11，念珠菌2，弯孢霉21，曲霉2，其他2渡道郁绪197759曲霉21，头孢霉16，白色念珠菌14，其他8齐绪哲、谭玉章1957～196513白色念珠菌7，曲霉3，镰刀菌1，酵母菌1，头孢霉1范德章1978204曲霉123，镰刀菌43，其他391.2.6 真菌毒素中毒：引起皮肤光过敏性皮炎、湿疹及皮肤变态，严重者导致机体中毒。
霉菌试验标准和条件
二、霉菌试验方法:
1、霉菌试验得分类:
♦天然暴露试验:直接暴露在选定得湿热环境中。有室内、室外得暴露试验与埋土试验得方法、
低温与霉菌
低温影响霉菌得生长。在零度以下,霉菌保持在假死状态
霉菌试验得定义
♦霉菌试验就是气候环境试验得一个项目。用于考核产品或材料抵抗霉菌侵袭得能力。它于一般环境试验一样,考虑产品在实际运输、储存或使用中,最易遭受霉菌危害得环境条件,在试验室中用人工模拟创造霉菌生长最适宜环境进行试验、
霉菌试验得目得
8、试验周期
耐霉性很差或生霉迅速得试验7—14天
耐霉或生霉缓慢得试品3—4个星期
对样品外观检查时2８天
对性能检查时84天
9、霉菌试验中得灭菌问题
霉菌试验中得灭菌问题,就是霉菌试验当中得一个关键问题,灭菌得彻底与否,将直接影响试验结果得准确程度,也就就是能否确切反映霉菌试验得真实情况,关系到试验结果得可靠性、目前霉菌试验所用得灭菌方法大致可以分为热力灭菌、化学灭菌及物理方法等三类。
♦试验室人工加速试验:常用有湿室悬挂法与无机盐琼脂平皿法、
2、菌种得选择
♦黑曲霉
♦黄曲霉
♦杂色曲霉
♦绳状青霉
♦球毛壳霉
3、试验样品得准备
♦霉菌试验不得采用经过盐雾、沙尘等试验得试品。
♦试验样品一般不进行清洁处理。
♦试验样品在受试前需要进行外观检查,特别注意污染表面,缺陷及存在得其她任何于霉菌生长得状况,并作详细记录。
♦风速
温度控制
♦对于恒定得霉菌试验,温度控制在29±1°C;
常见曲霉菌鉴定
【转帖】常见曲霉菌鉴定真菌2006-11-25 17:13:51 阅读798 评论2 字号：大中小订阅作者：龙太郎鉴定依据：①菌落：菌落生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。
其中颜色是曲霉菌分类的依据之一②分生孢子头：分生孢子头的形状、颜色和大小。
分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成，为曲霉的特征性结构③分生孢子梗或分生孢子柄：注意分生孢子梗的长短、颜色、表面粗糙或光滑、是否有隔等④具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳：为封闭式的薄壁子囊果，含子囊和子囊孢子；⑤足细胞，也为曲霉的特征性结构。
曲霉菌的结构：1、烟曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，棉花样，开始为白色，2~3天后转为绿色，数日后变为深绿色，呈粉末状。
分生孢子头的顶囊烧瓶状，小梗单层，排列成木栅状，布满顶囊表面3/4，顶端有链形分生孢子，分生孢子球形，有小棘，绿色：烟曲霉菌菌落：下列图片为烟曲霉分生孢子头：2、黄曲霉菌：在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。
分生孢子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子。
黄曲霉菌菌落：黄曲霉菌分生孢子头：3、土曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，小，圆形，淡褐色或褐色。
分生孢子头的顶囊半球形，小梗双层，第一层短，第二层长，呈放射状排列，分布顶囊表面2/3，顶端有链形孢子。
土曲霉菌落：土曲霉分生孢子头：4、黑曲霉菌在SDA培养基上菌落生长快，表面黑色，粉末状。
分生孢子头的顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层粗大，第二层短小，呈放射状排列，布满整个顶囊，黑色，顶端有链形孢子。
黑曲霉菌落：黑曲霉分生孢子头：5、杂色曲霉菌在SDA培养基上菌落生长慢，菌落圆形紧密，绒毛状，羊毛状，颜色有数环，从青绿到红绿。
分生孢子头的顶囊近球形，小梗双层，第一层长，第二层短，呈放射状排列，布满顶囊4/5，顶端有链形孢子。
杂色曲霉菌菌落：杂色曲霉菌分生孢子头：杂色曲霉菌分生孢子头电镜下图片：6、构巢曲霉菌在SDA培养基上菌落暗绿色，中央呈粉末状，边缘绒毛状。
两种酒曲中霉菌的分离与鉴定_李艳
对每种形态类型的霉菌选取一株代表菌株进行 5 d 的观察分析，图 1 至图 5 展示了 5 种形态类型的 霉菌培养至第 1 d、3 d、5 d 时的菌落形态图片结果。
图 1 形态 1 菌落形态
形态 1： 培养 1 d 内中心呈灰色边缘白色棉絮 状，干燥，菌丝体疏松，生长速度较快。
培养到 3 ～ 4 d 内长满培养基表面，后期菌丝体 极发达呈现灰白色。
将固体曲块打碎混匀，取 1 g 曲粉置于加有 100 mL 无菌水的三角瓶中，将三角瓶放入摇床中 150 r / min 震 荡 30 min，对曲粉液进行梯度稀释，对 10 － 2 、10 － 3 、 10 － 4 三个稀释梯度的菌液，分别取 200 μL 涂布于 PDA 培养基上，置于培养箱中 28 ℃ 下培养 2 d，挑取 疑似霉菌菌落划线于 PDA 培养基上 28 ℃ 下培养 2 d 进行分离纯化，纯化完全后采用三点法接种于 PDA 培养基 28 ℃ 下培养 5 d 进行菌落观察与显微形态观 察，从而在形态水平上进行分类。取纯化完全的菌体 接入 25% 甘油水溶液当中，－ 20 ℃ 下进行保藏。 1． 2． 2 霉菌鉴定
常见产毒霉菌的鉴定.
显微镜下的黄曲霉毒素
在低倍显微镜 下观察可见分生 孢子头疏松放射 状、继变为疏松 柱状。分生孢子 梗多从基质生出， 长度一般小于 1mm
菌丝体
有些菌丝产生带褐色的菌核
※下面以黄曲霉为例、介绍有 毒霉菌的鉴定
黄曲霉形态特征：
属于黄曲霉群，在察式琼脂培养基上 菌落生长较快，10-14天直径3-4cm或47cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老 后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面 无色或带褐色
中国农业大学教授何计国说，容易受黄曲霉
毒素污染的食品包括玉米、花生、大米、其次是 大麦小麦等。
黄曲霉毒素危害性有多大呢？据专家介绍， 黄曲霉毒素的毒性是氰化钾的１０倍，砒霜的６ ８倍。误食了黄曲霉毒素污染的食品的患者，轻 则可能出现发热、腹痛、呕吐、食欲减退等症状， 重则可能出现肝区疼痛、下肢浮肿及肝功能异常 等中毒性肝病症状。广州市奶业协会会长王丁棉 说，在自然条件下，即使用１００℃的温度进行 ２０个小时的灭菌，也不一定能将其彻底杀灭或 去除
培养物，置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开
成小块，切记涂抹，以免破坏霉菌结构。然后加盖玻片，
如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接种
罩内操作，以防孢子飞扬。
4.镜检
观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的摆列等，并
做详细记录。
二、鉴别方法
预先将检验中的霉菌或检验中分离出的霉菌孢子培养
后的霉菌进行纯培养。
1.平板菌落观察
﹙1﹚制备平板 准备两个灭菌的察氏琼脂平板。
﹙2﹚接种
用点植法将纯培养基物接种于察氏琼脂
平板，霉菌接种两个平板。
﹙3﹚培养 将接种的平板于25-28摄氏度温箱中培养5-14
天。
霉菌试验标准和条件
霉菌试验标准和条件(总4页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除霉菌试验一、概述二、霉菌的试验方法三、防霉措施四、有关标准概述霉菌的危害霉菌试验的定义霉菌试验的目的霉菌对材料和产品的影响直接危害是霉菌生长食取材料中的有机成分，直接导致结构破坏、强度降低、物理性质变化等。
间接危害是霉菌分泌的新陈代谢排泄物有机酸和其他离子化合物，造成电解或老化效应，某些触媒剂，还促成氧化或分解作用的发生，间接导致材料及部件的损坏。
长霉造成的故障模式：---引起电子或电气设备失灵---减低绝缘材料的电性能---造成燃油系统的腐蚀和堵塞---破坏密封---使金属件腐蚀---使玻璃产生蚀刻低压与霉菌这两个因素的组合不会增大二者本身的影响太阳辐射与霉菌因为太阳辐射产生热，所以这个组合不可能产生影响，和高温与霉菌的组合相同。
此外未经过滤的太阳辐射中的紫外线具有显着的杀菌作用盐雾与霉菌这是一个相容的组合湿度与霉菌湿度有助于霉菌和微生物的生长，但不会增大它们的影响高温与霉菌霉菌和微生物的生长，需要比较高的温度，但是，在71℃（160 ℉）以上，霉菌和微生物就不能生长了低温与霉菌低温影响霉菌的生长。
在零度以下，霉菌保持在假死状态霉菌试验的定义霉菌试验是气候环境试验的一个项目。
用于考核产品或材料抵抗霉菌侵袭的能力。
它于一般环境试验一样，考虑产品在实际运输、储存或使用中，最易遭受霉菌危害的环境条件，在试验室中用人工模拟创造霉菌生长最适宜环境进行试验。
霉菌试验的目的为确定产品抗霉菌侵蚀能力，必须制定一个与实际工作条件相似，能判断霉菌的侵蚀作用和给出正确评价的试验方法。
它将为产品的选材、结构和设计提供依据以保证产品能在有大量霉菌存在的气候环境中安全可靠地运行二、霉菌试验方法：1、霉菌试验的分类：天然暴露试验：直接暴露在选定的湿热环境中。
有室内、室外的暴露试验和埋土试验的方法。
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霉菌的鉴定方法参照微生物学实验手册[118]。
（1）菌落特征的鉴定观察：
观察菌落形状、特征，菌落颜色，培养基颜色是否有变化等。
（2）菌株特征及孢子形态观察：
挑取菌株的少量菌丝于载玻片上，显微镜下观察菌丝的颜色、特点，有无特殊构造，成熟子实体的颜色、形态等。
（3）霉菌的糖化能力测定实验：
配制含有4%淀粉的溶液100ml，加入一定体积菌液并发酵24H后，测定溶液中还原糖的含量，采用DNS法测定溶液中还原糖的含量。
霉菌的糖化能力表示为F。
(1) 原理
碱性条件下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）溶液与还原糖溶液共热被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540 nm 波长下测定棕红色物质的吸光度。
(2) 1mg/ ml葡萄糖标准液
准确称取100 mg分析纯葡萄糖（预先在80 ℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100 ml的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
(3) 3,5-二硝基水杨酸试剂
将6.3 g 3,5-二硝基水杨酸和262 ml 2mol/L NaOH溶液，加到500 ml含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000 ml，贮于棕色瓶中备用。
(4) 制作葡萄糖标准曲线
取7支25 ml刻度试管，编号0～6，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml 葡萄糖标准溶液于7支试管中，并以蒸馏水补至2.0 ml，然后各加入DNS试剂1.5 ml。
摇匀，在沸水浴中加热5 min，取出后立即冷却至室温，再以蒸馏水定容至25 ml刻度处，颠倒混匀。
在540 nm波长下，用0号管调零，分别读取1～6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线(图3-1)。
得到回归方程y＝49.665x+1.3421，其相关系数R2＝0.9951。
(5) 还原糖测定
取上清液0.2ml到试管中，再加入3,5-二硝基水杨酸1.5ml、蒸馏水1.8ml，摇匀后，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容到25ml，混匀后，540nm波长下比色，记录吸光值。
通过标准曲线查
的还原糖含量。
图3-1还原糖含量标准曲线
Fig. 3-1 Standard curve of glucose content
（4）霉菌的适宜生长温度测定：
将菌种接种于相同的培养基上放入不同温度的恒温箱中培养，观察记录生长情况。
温度梯度设置为26℃--38℃，每个梯度至少三个平行实验，实验重复三次。
根据表中所示分离纯化后的菌种鉴定结果中的形态特征和生理生化实验的结果，结合霉菌特征，鉴定分离出的MⅠ、MⅡ、MⅢ三种霉菌分别为黑根霉、鲁毛霉和白地霉。
黑根霉（Rhizopus nigricans）是真菌的一种,属于真菌门接合菌亚门的根霉属，菌丝无隔，常利用它的糖化作用,比如甜酒曲中的主要菌种就是黑根霉.匐枝根霉亦称黑根霉，也叫面包霉，分布广泛，常寄生在面包和日常食品上，或混杂于培养基中，瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关，菌丝体分泌出果胶酶，分解寄主的细胞壁，感染部位很快会腐烂.
表5.2 霉菌的温度试验
Table 5.2 Mildew temperature experiment
菌株26℃28℃30℃32℃34℃36℃38℃MⅠ++ +++ ++ + - - - MⅡ++ +++ ++ + + + + MⅢ+ +++ ++ + + + +
备注：+表示可以生长，-表示不可以生长，++，+++表示生长旺盛
表5.3霉菌的鉴定结果
Table 5.3 The results of mildew identification results
菌株形态特征糖化力(%) 鉴定结果
MⅠ在琥红培养基上呈稠密的棉絮
状，先白后变灰黄至浅黑色，
孢囊梗灰褐至暗褐色，光滑，
2-5 株成，束孢子囊球形或椭圆
形，浅褐色，囊托楔形，大而
明显，假根发达，呈根状，褐色，
一般无厚垣孢子，有时有少量
2.01
毛霉目毛霉科
根霉属中的黑
根霉
MⅡ在琥红培养基上呈絮状，黄色，
菌丛矮，孢囊梗呈短的稀疏的假
轴状分枝，产生 2-3个孢子囊，
孢子囊黄色至黄褐色，球形或长
圆形，孢囊孢子椭圆形，拟椭
圆形，厚垣孢子数量甚多，大
小不一，黄色至褐色
19.87
毛霉目毛霉科
毛霉属中的鲁
毛霉
MⅢ在琥红琼脂上会产生白色的、呈
毛绒状或粉状的膜。
具有真菌丝，
有的分枝，横隔或多或少。
繁殖
方式为裂殖，形成的节孢子单个
或连接成链，孢子呈长筒形、方
形，也有椭圆或圆形，末端钝圆。
<1
丝孢目丛梗孢
科地霉属中的
白地霉。