绿原酸测定方法

绿原酸测定方法

检验方法：

仪器、试剂和材料

CS-930型双波长薄层扫描仪（日本岛津）；薄层板自动涂布器PBQ-Ⅰ型（四川省中药研究所）；微量定量毛细管（美国Drummond）；紫外线检测器（瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ）。中国药品保健食品绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所）；硅胶H（青岛海洋化工厂）；所用试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层层析及扫描条件取硅胶H-0.5 % 羧甲基纤维素钠（1∶3），用自动涂布器湿法铺板，厚0.4 mm，室温干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中备用；展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液；紫外光灯（365 nm）下定位；扫描条件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法锯齿扫描,狭缝1.2 mm × 1.2 mm；灵敏度：中，线性化参数SX=3。2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成0.545 mg。mL-1的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备精密称取本品5 g，加甲醇超声提取30 min，滤过，滤器及滤渣用甲醇15 mL分次洗涤，合并滤液与洗液，水浴蒸干，残渣加水20 mL 微热溶解，加枸橼酸调pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2 mL 量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4线性关系的考察精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，4，6，8 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定。结果，绿原酸点样量（X）在0.545～4.36 μg范围内与峰面积的积分值（Y）呈良好的线性关系，回归方程为：

Y=39 745.6 X - 2 276.4r=0.998 3

2.5精密度试验精密吸取绿原酸对照品溶液2 μL，5份，分别点于同一薄层板上，依法测定峰面积积分值。结果RSD=2.07 %（n=5）。

2.6稳定性试验取层析后的薄层板立即进行测定和室温下放置不同时间进行测定。结果，斑点峰面积积分值在3 h内稳定，RSD=1.67%（n=5）。

2.7重复性试验取同一批号样品（批号为980714）5份，按“样品测定”项下的方法，测定样品中绿原酸的含量，结果RSD=2.16%（n=5）。

2.8干扰试验按处方量取除金银花外的其余各药味按相同工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，置紫外光灯（365 nm）下检视，阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上无相应特征斑点显示。

2.9回收率试验精密称取已测知含量的样品5 g，6份，分别精密加入绿原酸对照品溶液（1.536 mg。mL-1）各1 mL，依法提取测定，平均回收率为97.45%，RSD为2.30%（n=6）。

2.10样品测定精密吸取供试品溶液2 μL，对照品溶液1 μL和3 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定，用外标两点法计算，结果980714，981201，980728批号样品中绿原酸含量分别为0.015 8%，0.018 7%，0.028 2%，n=3。

3讨论

样品中绿原酸的提取实验曾比较了用甲醇超声提取和加热回流提取2种方法，结果无显著差别，以选择甲醇超声提取较方便。另外，考虑到绿原酸为弱酸，为增加其在醋酸乙酯中的溶解度，还比较了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸橼酸调不同的pH与不调pH，结果以调pH=3，绿原酸含量最高。薄层层析条件的选择曾试用硅胶G板，醋酸乙酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液、醋酸丁酯-甲酸-水（8.5∶5.5∶2.5）的上层溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶1∶1∶1）等多种展开剂，所得色谱均不理想，或大部分斑点推至前沿，或斑点分离不好，有拖尾现象，经筛选的拟定方法并于展开前预饱和30 min，克服了上述缺点，展开斑点较圆整，易于扫描。

该制剂中几个批号样品绿原酸含量有一定差异，作者认为与金银花原料的产地、采收季节有关。